全 文 ：第6期
HPLC测定滇紫草及其两个近缘种中乙酰紫草素的含量
张 超 1，何宝丰 1，陈世友 1，张庆芝 2△
（1.铜梁县中医院，重庆铜梁402560；2.云南中医学院，云南昆明650500）
摘要：目的 建立滇紫草、密花滇紫草和昆明滇紫草中乙酰紫草素的含量测定方法。方法 采用 HPLC法测定
滇紫草、密花滇紫草和昆明滇紫草中乙酰紫草素的含量。结果 乙酰紫草素在 0.0952～1.9030 μg范围内呈良好的线
性关系。精密度、稳定性、重复性和加样回收率均达到要求。结论 该方法简便、准确、重现性好，可用于滇紫草及其
两个近缘种中乙酰紫草素含量的测定。
关键词：HPLC；滇紫草；乙酰紫草素
中图分类号：R284 文献标志码：A 文章编号：1000-2723（2014）06-0017-03
收稿日期：2013-12-26
作者简介：张超（1984-），女，山东齐河人，药师，研究方向：药用植物资源开发与利用。
△通信作者：张庆芝，E-mail：zhangqingzhi99@tom.com
JournalofYunnanUniversityofTraditionalChineseMedicine
云南中医学院学报第37卷第6期
2014年12月
Vol. 37 No. 6
12. 2014
滇紫草（Onosma paniculatum Bur. et Franch.）始
载于《滇南本草》[1]，为紫草科（Boraginaceae）滇紫草
属（Onosma）多年生草本植物，本属植物的根入药，
性寒，味甘、咸、微酸，用于清热凉血、解毒透疹。密
花滇紫草和昆明滇紫草是滇紫草的 2个近缘种，对
于滇紫草和密花滇紫草的化学成分及含量的研究，
已有报道[2-5]，其化学成分主要为萘醌类，滇紫草中
还含有黄酮和鞣质[6]。昆明滇紫草已经进行了生药
学和质量标准的初步研究[7-8]，但是迄今为止尚未见
对昆明滇紫草化学成分含量研究的报道，我们利用
HPLC 法对紫草科滇紫草属植物滇紫草 Onosma
paniculatum Bur. et Fr.、密花滇紫草 O. confertum W.
W. Smith 及昆明滇紫草 O.cingulatum W.W.smith et
J.E.Jeffrey的主要化学成分进行含量测定的比较，从
而为扩大滇紫草的药源提供基础数据。
1 实验材料（表1）
2 仪器与试药
2.1 仪器
色谱仪：岛津 LC-2010AHT高效液相色谱仪；
XS-125A电子天平（瑞士）；BUCHI-R-200旋转蒸
发仪（瑞士）；SK3300LH超声波清洗器（上海隆拓仪
器设备有限公司）。
2.2 试药
甲醇；乙腈；0.1%磷酸，均为色谱纯。蒸馏水。乙
酰紫草素对照品，自制（已通过结构鉴定，通过
HPLC检测，纯度为 100%）。
3 实验方法与结果
3.1 色谱分析条件
检测器：UV检测器；色谱软件：CLASS VP 6.12
工作站；色谱柱：Agilent Eclipse XDB（4.6×250
mm），5 μm；检测波长：516 nm；流速：1.0 mL/min，
柱温为 35℃；流动相：乙腈-0.1%磷酸（75 ∶25），进
样量：10 μL。
3.2 检测波长的确定
《中国药典》（2010年版），紫草中总萘醌吸收波
长为 516 nm处，同时以 β，β′-二甲基丙烯酰阿卡宁
和乙酰紫草素 2种成分为对照品，故选择 516 nm
为检测波长。
3.3 提取时间的考察
取滇紫草样品粉末（过 40目筛）1 g，精密称定，
加入 25 mL 甲醇超声提取，分别超声 30 min，45
表 1 实验材料来源
注：实验材料由云南中医学院张庆芝教授鉴定。
学名 药材名 产地 采收时间
Onosma paniculatum Bur.
et Fr. 滇紫草 云南昆明 2009.10
Onosma confertum W.W.
Smith 密花滇紫草 云南丽江 2008.9
Onosma cingulatum W.W.
Smith et J.E.Jeffrey 昆明滇紫草 云南昆明 2008.10
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2014年 云南中医学院学报 第37卷
min，60 min。超声 45 min，药材中的乙酰紫草素提取
效果最好（见表 2）。
3.4 供试品溶液的制备
取 3 种样品粉末（过 40 目筛）各 1 g，精密称
定，加入 25 mL甲醇超声提取 45 min，定容至 25
mL容量瓶中，摇匀，用 0.45 μm的微孔滤膜滤过，
得到供试品溶液。
3.5 对照品溶液的制备
精密称定乙酰紫草素 19.03 mg，分别加入甲醇
定容于 100 mL 容量瓶中。制成含含乙酰紫草素
190.3 μg/mL的溶液，作为对照品溶液，备用。
3.6 乙酰紫草素线性关系的考察
取乙酰紫草素对照品，精密称定，分别配置成
浓度为 9.52，19.03，38.06，76.12，114.18，152.24，
190.30 μg/mL的溶液，分别进样 10 μL，对该标准品
溶液进行测定，记录乙酰紫草素的峰面积（见表 3），
以峰面积为纵坐标，其进样量为横坐标，绘制标准
曲线，从标准曲线回归方程为：Y=6955.1X+4141.3，
r=0.9999，表明对照品乙酰紫草素溶液在 0.0952～
1.9030 μg范围内呈良好的线性关系（见图 1）。
3.7 精密度考察
取已配好的乙酰紫草素的对照品溶液，平行测定
6次，记录乙酰紫草素的峰面积，计算含量，其 RSD值
分别为 1.81%，表明仪器精密度良好（见表 4）。
3.8 稳定性考察
称取滇紫草粉末，按供试品溶液的制备方法处
理成 6份，在 0，2，4，6，8，10 h进样 10 μL。记录乙
酰紫草素的峰面积，计算其含量，RSD为 1.30%（见
表 5）。显示乙酰紫草素在 10 h内较稳定。
3.9 重复性考察
取滇紫草粉末，按供试品溶液的制备方法处理
成 6份，依次进样每次 10 μL，平行测定 6次并计算
乙酰紫草素的含量，RSD为 0.99%（见表 6）。表明该
方法重复性很好。
表 2 乙酰紫草素提取时间考察
平均值
70215.5
1324132.5
133503.0
272354.0
529130.0
803945.5
1064921.5
序号
浓度（X）
/μg
峰面积（Y）
1 2
1 0.0952 69991 70440
7 1.9030 1323064 1325201
2 0.1903 134080 132926
3 0.3806 272832 271876
4 0.7612 528763 529497
5 1.1418 804770 803121
6 1.5224 1066604 1063239
编号
1
2
3
提取时间/min 乙酰紫草素含量/‰
30 1.476
45 1.638
60 1.615
图 1 乙酰紫草素标准曲线
表 3 乙酰紫草素标准曲线测定结果
表 4 乙酰紫草素精密度实验结果
序号 进样量/μL 峰面积 含量/‰ 平均含量/‰ RSD/%
1 10 450460.0 1.79
6 10 436114.0 1.74
2 10 457460.0 1.79
3 10 464116.5 1.75
1.75 1.81
4 10 452300.0 1.74
5 10 434958.5 1.71
表 5 乙酰紫草素稳定性实验结果
RSD
/%
1.30
序号
时间
/h
保留时间
/min 峰面积
含量
/‰
平均含量
/‰
1 0 6.87 483756 1.64
6 10 6.89 461480 1.59
2 2 6.88 478594 1.64
3 4 6.88 473447 1.62
1.62
4 6 6.89 470073 1.61
5 8 6.90 464545 1.60
表 6 乙酰紫草素重复性实验结果
序号
保留时间
/min 峰面积
含量
/‰
平均含量
/‰
RSD
/%
1 7.06 455353 1.56
6 7.06 453270 1.55
2 7.06 455941 1.56
3 7.06 453901 1.56
4 7.05 454333 1.56
5 7.06 452173 1.55
1.57 0.99
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第6期
3.10 加样回收率实验
取滇紫草粉末（过 40目筛）0.45 g，精密称定，
置 100 mL 三角瓶中，加入 25 mL 甲醇，超声提取
45 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足损失的重
量，摇匀，加入 10 mL，15 mL，20 mL的乙酰紫草素
对照品溶液，经 0.45 μm微孔滤膜过滤，即得。平
行制备 3份供试品溶液，各取 10 μL注入液相色
谱仪，进行测定。测得乙酰紫草素的平均加样回收
率为 96.95%，RSD为 1.21%（见表 7）；表明该方法
准确可靠。
3.11 样品测定
称取滇紫草、密花滇紫草和昆明滇紫草，按供
试品溶液的制备方法各处理成 3份，采用上述色谱
条件，对滇紫草及其近缘种密花滇紫草和昆明滇紫
草的药材进行 HPLC分析（见图 2），实验结果见表
8。实验结果表明，不同品种的滇紫草中乙酰紫草素
含量也有差别。
表 7 乙酰紫草素加样回收率
序
号
药材
量/g
检测
量/μg
药材含
量/μg
加入
量/μg
回收率
/%
平均回
收率/%
RSD
/%
1 0.4708 1464.21 728.10 751.00 98.02
9 0.4058 2065.66 627.57 1502.00 95.74
2 0.4798 1476.60 742.02 751.00 97.81
3 0.4678 1457.12 723.46 751.00 97.69
4 0.4412 1761.60 682.32 1126.50 95.81
5 0.4401 1794.06 680.62 1126.50 98.84 96.95 1.21
6 0.4386 1767.01 678.30 1126.50 96.65
7 0.4012 2056.13 620.46 1502.00 95.58
8 0.4023 2069.84 622.16 1502.00 96.38
图 2 对照品和不同种滇紫草药材的色谱图
A.对照品色谱图；B.滇紫草药材色谱图；C.密花滇紫草药材色谱图；D.昆明滇紫草药材色谱图 1、乙酰紫草素
表 8 滇紫草及其近缘种中乙酰紫草素含量测定结果
样品
乙酰紫草素含量/‰ 平均含量
/‰
RSD
/%1 2 3
滇紫草 1.636 1.647 1.622 1.635 0.77
密花滇紫草 0.122 0.121 0.117 0.120 2.21
昆明滇紫草 0.114 0.113 0.113 0.113 0.63
4 讨论
对滇紫草、密花滇紫草和昆明滇紫草中乙酰紫
草素的含量测定研究中，高效液相色谱法简便、准
确、快速、分离效果好。
通过本实验建立了高效液相色谱法测定滇紫
草及其近缘种中乙酰紫草素含量的方法。实验研究
发现密花滇紫草和昆明滇紫草中乙酰紫草素的含
量明显比滇紫草低，能否作为滇紫草（下转第 22 页）
张 超等：HPLC测定滇紫草及其两个近缘种中乙酰紫草素的含量
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2014年 云南中医学院学报 第37卷
Content Determination of Acetylshikonin in Onosma Paniculatum
and Its Two Closely Related Species by HPLC
ZHANG Chao1，HE Bao-feng1，CHEN Shi-you1，ZHANG Qing-zhi2
（1. TCM Hospital of Tongliang，Tongliang，Chongqing 402560，China；
2. Yunnan University of TCM，Kunming 650200，China）
ABSTRACT：Objective To establish the determination method of acetylshikonin in three species，Onosma paniculatum Bur. et
Fr. ，O. cingulatum W. W. smith et J. E. Jeffrey and O. confertum W. W. Smith.. Methods Using HPLC as quantitative analysis
means and acetylshikonin as the detection of targets，the quality standards of above three species were studied. Results The
acetylshikonin had good linear relationship in the range of 0.0952 ～1.9030μg. Precision，stability，repeatability and recovery are
achieved. Conclusion The method is simple，accurate，reproducible and suitable for determining the acetylshikonin in Onosma
paniculatum and its two closely related species.
KEY WORDS：HPLC；Onosma paniculatum Bur. et Fr. ；acetylshikonin
（上接第 19页）药材资源开发利用仍需要进一步深入
研究。
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