全 文 ：山苦荬标准提取物的制备与质量控制方法
杨海明，李秀敏，孙宏冉，陈志强* (内蒙古华天制药有限公司，内蒙古赤峰 024070)
摘要 ［目的］制定山苦荬标准提取物的制备工艺并建立其质量控制方法。［方法］采用正交试验设计建立山苦荬标准提取物的制备工
艺;采用紫外分光光度法、TCL、微生物法建立山苦荬提取物的质量控制指标。［结果］制备工艺为原料药材的处方量用 20倍量水连续提
取 3次，100 ℃，每次 1 h，减压浓缩温度与干燥温度均为 65 ℃;山苦荬提取物在 30 ～ 70 μg /mL的浓度与吸光度线性良好，回收率为
98. 4%，ＲSD为 0． 64%。标准提取物溶液在 198与 294 nm紫外波长最大吸光度比值为 4． 1，干燥失重为 0． 4%，灰分为 0． 8%，酸碱度为
5． 2，细菌菌落总数为 12 个 / g，霉菌总数无，大肠杆菌无，沙门氏菌无。［结论］优选溶剂水及相应的温度提取和控制是山苦荬标准提取
物制备的安全有效方法。建立的检测项可以用于山苦荬标准提取物的指标控制。
关键词 山苦荬标准提取物;制备工艺;质量控制方法
中图分类号 S567 文献标识码 A 文章编号 0517 －6611(2016)21 －104 －03
Preparation and Quality Control of Standard Extracts from Ixeris denticulata
YANG Hai-ming，LI Xiu-min，SUN Hong-ran，CHEN Zhi-qiang* (Inner Mongolia Huatian Pharmaceutical Co． Ltd．，Chifeng，Inner
Mongolia 024070)
Abstract ［Objective］The aim was to develop standard extractive preparation technology of Ixeris denticulata and establish its quality control
method． ［Method］The preparation technology of I． denticulata standard extractive was established by orthogonal experiment;quality control
index of I． denticulata extractive was established by ultraviolet spectrophotometric method，TCL，microbial method． ［Ｒesult］The preparation
technology was using 20 times water of raw material medicine to extract 3 times under 100 ℃，1 hour each time，the reduced pressure concen-
tration and drying temperature is 65 ℃;30 － 70 μg /mL I． denticulata extractive had good linearity with absorbance，recovery rate was
98. 4%，ＲSD 0． 64% ． The maximum absorbance ratio of standard extract solution at 198 and 294 nm UV wavelength was 4． 1，dry weight loss
was 0． 4%，ash content was 0． 8%，pH value was 5． 2，the total number of bacterial colonies was 12 ind /g，mould，Escherichia coli and Sal-
monella were not got involved． ［Conclusion］ The optimal solvent water and corresponding temperature are key points of safe and effective
method for I． denticulata standard extractive． The established test items can be used to control the index of I． denticulata standard extractive．
Key words Standard extractive of Ixeris denticulata;Preparation technique;Quality control method
作者简介 杨海明(1988 － ) ，男，内蒙古赤峰人，助理工程师，从事中兽
药研发工作。* 通讯作者，工程师，从事新药研发工作。
收稿日期 2016-06-22
山苦荬［Ixeris chinensis(Thunb．)Nakai］为菊科苦荬菜属
植物，盛产于我国东北、华北等地，具清热解毒、排毒、凉血、
止痛之功效，用于治疗肠黄、痢疾、肺出血、腹痛、疮疔肿
痛［1］。山苦荬的化学成分比较复杂，主要含有倍半萜内酯、
黄酮、三萜、木脂素等各类型化合物［2］。近年来，张垠［3］从乙
醚中分离出 4种化合物，从乙酸乙酯中分离出 3种化合物且
是首次从该植物中得到。兽药国家标准中只是采用薄层色
谱进行山苦荬的定性鉴定，无含量测定方法，部分文献研究
了山苦荬的药用成分及药用价值［4 －5］。药材来源相对复杂，
质量不稳定，为保证中成药生产原料用药的质量均一性，迫
切需要可以体现原药材特定中医功效、具有相对明确药效物
质基础及严格质量标准的提取物作为中间体，替代原生药使
用［6］，使其提取物可能成为未来代替抗生素类［7］药物。该研
究以山苦荬素为控制指标，首次采用紫外分光光度法波峰相
加法、波峰相比法测定了山苦荬提取物的含量和鉴别等方
法，制定了山苦荬标准提取物的制备工艺与质量控制指标。
1 材料与方法
1． 1 仪器 UV － 1800 紫外可见分光光度计(日本岛津公
司) ;DZF －6020真空干燥箱(上海一恒科学仪器有限公司) ;
ＲE52 －99旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂) ;PHS － 3Cph
计(上海仪电科学仪器股份有限公司) ;HH － 6 数字恒温水
浴锅(江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司) ;DH4000 型电
热恒温培养箱(天津泰斯特仪器有限公司) ;BT25S电子分析
天平(sartorius) ;ZY － 300IV 多功能微生物自动测量分析仪
(北京先驱威锋技术开发公司)。
1． 2 试材 山苦荬(内蒙古恒光大现代农业有限公司) ;山
苦荬对照药材(中国兽药监察所) ;山苦荬菜素对照品(中国
生物制品检定研究院)。95%乙醇、三氯化铝、五氧化二磷、
氯化钠、蛋白胨，均是分析纯，购自天津市科密欧化学试剂有
限公司;大肠埃希菌［CVCC1570］、金黄色葡萄球菌
［CVCC1882］、枯草芽孢杆菌［CVCC717］、白色念珠菌
［CMCC98001］、黑曲霉［CMCC98003］，来源于中国兽药监
察所。
1． 3 方法
1． 3． 1 制备工艺。称取净制干燥山苦荬中药材 1 000 g，加
一定倍量纯化水一定温度下进行煎煮，煎煮 3 次，每次 1 h，
合并滤液，减压浓缩至浸膏，减压干燥至恒重。根据山苦荬
提取物的干膏得率为试验指标，选取加水倍数(A)、提取温
度(B)、减压浓缩温度(C)、减压干燥温度(D)为 4 个因素，
每个因素选择 3 个水平，按照 L9(3
4)正交表(表 1)设计试
验，考察各因素对干膏得率的影响，选出山苦荬最优制备
工艺。
1． 3． 2 溶液制备。
1． 3． 2． 1 对照品溶液。分别精密称取芹菜素、山苦荬菜素
对照品，加水配制成含有50 μg /mL的溶液作为对照品溶液。
1． 3． 2． 2 供试品溶液。精密称取山苦荬提取物，加水制成
含有 100 μg /mL的溶液作为供试品储备液。
1． 3． 3 方法学考察。
1． 3． 3． 1 稳定性试验。精密量取供试品储备液制成含有
责任编辑 黄小燕 责任校对 李岩安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 2016，44(21):104 － 106
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2016.21.035
50 μg /mL的溶液，分别于 0、2、4、6、8 h在 198和 294 nm处测
定吸光度。
表 1 正交试验因素水平
Table 1 Factors and levels of orthogonal test
水平
Level
A(加水倍数)
Adding water
multiples
B(提取温度)
Extracting
temperature
℃
C(减压浓缩
温度)
Ｒeduced
pressure
concentration
temperature
℃
D(减压干燥
温度)
Ｒeduced pressure
drying
temperature
℃
1 10 80 75 75
2 15 90 70 70
3 20 100 65 65
1． 3． 3． 2 精密度试验。精密量取供试品储备液制成含有
50 μg /mL的溶液，连续 6次在 198和 294 nm处测定吸光度。
1． 3． 3． 3 重复性试验。精密称取供试品制成含有 50 μg /mL
的溶液，在 198和 294 nm处测定吸光度。
1． 3． 3． 4 线性试验。精密称取山苦荬素对照品制成分别含
有 30、40、50、60、70 μg /mL的溶液，在 198 和 294 nm处测定
吸光度。
1． 3． 3． 5 回收率。按测定浓度的 80%、100%、120%的份
量，各精密称取山苦荬素对照品平行 3 份，分别加入按处方
比例混合均匀的空白辅料，分别加水制成浓度分别为 40、50、
60 μg /mL的供试品溶液，摇匀，过滤，作为供试品溶液;另取
山苦荬素对照品适量，加水超声溶解并稀释制成含
0． 50 μg /mL的溶液作为对照品溶液，在 198 和 294 nm处测
定吸光度。
1． 3． 4 质量控制。
1． 3． 4． 1 紫外分光光度法鉴别。取山苦荬标准提取物、山
苦荬对照品加水稀释成含山苦荬素 50 μg /mL的溶液，按照
紫外 － 可见分光光度法(中国兽药典 2010 版)在 190 ～
450 nm 范围内测定。
1． 3． 4． 2 TLC 鉴别。取山苦荬标准提取物 0． 4 g，加乙醇
10 mL，加热回流 10 min，滤过。取滤液 1 滴，点于聚乙烯胺
薄膜上，喷以 5% 三氯化铝乙醇溶液，晾干，置紫外光灯
(254 nm)下观察。
1． 3． 5 质量控制指标测定。
1． 3． 5． 1 干燥失重。取本品适量，以五氧化二磷为干燥剂
在 65 ℃减压干燥至恒重，减失的重量不得大于 5． 0%［8］。
1． 3． 5． 2 灰分。按照中国兽药典 2010 版灰分测定法［8］测
定总灰分，其量不得超过 2． 0%。
1． 3． 5． 3 酸碱度。取本品加水配成 0． 05 g /mL的溶液，按照
中国药典 2010版一部 pH测定法［8］测定，应为 4． 5 ～7． 5。
1． 3． 5． 4 微生物检查。细菌总数按照中国兽药典 2010版微
生物检查法［8］测定，细菌菌落总数不得过 1 000 个 /g，霉菌总
数不得过 100 个 /g;大肠杆菌应无;沙门氏菌应无。
2 结果与分析
2． 1 山苦荬标准提取物的制备工艺 由表 2 可知，各因素
对山苦荬标准提取物干膏得率的影响从大到小依次为 B、A、
D、C，即提取温度影响最大，其次是加水倍数、减压干燥温度、
减压浓缩温度;最佳工艺条件为 A3B3C3D3。通过方差分析
得出，提取温度和加水量有显著的差异，而加浓缩温度和干
燥温度无显著的差异。
表 2 正交试验结果
Table 2 The orthogonal test results
试验号
Test No． A B C D
干膏得率
Dry extract yield∥%
1 1 1 1 1 45． 69
2 1 2 2 2 46． 56
3 1 3 3 3 47． 88
4 2 1 2 3 46． 85
5 2 2 3 1 47． 68
6 2 3 1 2 48． 68
7 3 1 3 2 46． 87
8 3 2 1 3 47． 88
9 3 3 2 1 48． 52
k1 46． 710 46． 470 47． 417 47． 297
k2 47． 737 47． 373 47． 310 47． 370
k3 47． 757 48． 360 47． 477 47． 537
Ｒ 1． 047 1． 890 0． 167 0． 240
2． 2 方法学考察
2． 2． 1 稳定性试验。按照“1． 3． 3． 1”操作，计算得出 ＲSD为
0． 33%，表明供试品溶液在 8 h内稳定。
2． 2． 2 精密度试验。按照“1． 3． 3． 2”操作，计算得出 ＲSD为
0． 02%，表明供试品进样精密度良好。
2． 2． 3 重复性试验。按照“1． 3． 3． 3”操作，计算得出 ＲSD为
0． 38%，表明重复性好。
2． 2． 4 线性试验。按照“1． 3． 3． 4”操作，计算得出山苦荬提
取物浓度在 30 ～ 70 μg /mL范围内与吸光度线性良好，相关
系数 r为 0． 999 7(图 1)。
图 1 山苦荬提取物溶液线性关系
Fig． 1 The linear relationship of I． denticulata extracts solution
2． 2． 5 回收率。由表 3 可见，平均回收率为 98． 4%，ＲSD =
0． 64%，表明试验结果良好。通过该方法测定山苦荬提取物
中山苦荬素的含量为 35． 6%。
2． 3 质量鉴别
2． 3． 1 紫外 －可见分光光度法鉴别。由图 2 可见，供试品
与对照品在 198与 290 nm的吸光度比值约为 4． 1。由于对
照品和对照药材均能够在198与290 nm处产生吸收，可以作
为含量测定的方法。
50144 卷 21 期 杨海明等 山苦荬标准提取物的制备与质量控制方法
表 3 山苦荬提取物回收率试验结果
Table 3 The results of recovery rate test of I． denticulata extracts
测得量
Measured
quantity
%
加入量
Added
amount A
mg
实测量
Actual
measured
quantity∥mg
回收率
Ｒecovery
rate
%
平均回收率
Average
recovery
rate∥%
ＲSD
%
80 12． 6 12． 3 97． 6 98． 4 0． 64
12． 8 12． 7 99． 2
12． 9 12． 7 98． 4
100 15． 7 15． 5 98． 7
15． 5 15． 3 98． 7
15． 9 15． 5 97． 5
120 18． 2 17． 8 97． 8
18． 3 18． 1 98． 9
18． 8 18． 6 98． 9
注:1为山苦荬素 A;2为山苦荬素 B。
Note:1． I． denticulata A;2． I． denticulata B．
图 2 山苦荬对照品溶液紫外波长鉴别
Fig． 2 Ultraviolet wavelength identification of I． denticulata con-
trol solution
2． 3． 2 TLC鉴别。通过薄层色谱鉴别(图 3) ，山苦荬提取物
斑点与对照药材斑点均显黄绿色荧光。
2． 4 质量控制指标 经试验测定，干燥失重为 0． 4%，灰分
为 0． 8%，酸碱度为 5． 2;细菌菌落总数为 12 个 /g，霉菌总数
为 0，无大肠杆菌和沙门氏菌。
3 小结
该研究采用正交试验设计建立山苦荬标准提取物的制
备工艺，采用紫外分光光度法、TCL、微生物法建立山苦荬提
取物的质量控制指标。结果表明，制备工艺为原料药材的处
方量用20倍量水连续提取3次，100 ℃，每次 1 h，减压浓缩
注:左边为对照药材斑点;中间为山苦荬提取物斑点;右边为空白
溶剂斑点。
Note:On the left is the spot of the control medicine;in the middle is
the spot of I． denticulata extracts;on the right is the spot of blank
solvent．
图 3 TLC鉴别图谱
Fig． 3 TLC identification map
温度与干燥温度均为 65 ℃;山苦荬提取物浓度在 30 ～
70 μg /mL 范围内与吸光度线性良好，回收率为 98． 4%，ＲSD
为 0． 64%。标准提取物溶液在 198与 294 nm紫外波长最大
吸光度比值为 4． 1，干燥失重为 0． 4%，灰分为 0． 8%，酸碱度
为 5． 2，细菌菌落总数为 12 个 /g，霉菌总数无，大肠杆菌无，
沙门氏菌无。由此可见，优选溶剂水及相应的温度提取和控
制是山苦荬标准提取物制备的安全有效方法。建立的检测
项可以用于山苦荬标准提取物的指标控制。
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