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陕西荚蒾叶挥发油化学成分GC-MS分析及抗菌活性研究



全 文 :鉴定化合物 8 为木犀草素-3-甲醚-7-O-β-D-吡喃葡
萄糖醛酸苷。
参 考 文 献
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陕西荚蒾叶挥发油化学成分 GC-MS分析
及抗菌活性研究
李 晨1,黄纪国1,陆泰良1,何瑞杰1,2,李 俊1,2*
(1. 广西师范大学环境与资源学院,广西 桂林 541004;2. 广西植物功能物质研究与利用重点实验室 /广西
植物研究所,广西 桂林 541006)
摘要 目的:分析陕西荚蒾鲜叶挥发油的化学成分,并考察其体外抗菌活性。方法:采用水蒸气蒸馏法提取陕
西荚蒾鲜叶挥发油,应用气质联用法分析挥发油的化学成分,应用峰面积归一化法确定各化学成分的相对质量分
数,采用琼脂稀释法测定陕西荚蒾叶挥发油和环丙沙星对 5 种实验菌株的最小抑制浓度 MIC 值。结果:从陕西荚
蒾叶挥发油中检出 54 种组分,鉴定出 45 种化合物。陕西荚蒾叶挥发油对金黄色葡萄球菌具有较强的抑菌活性,
其 MIC值为 0. 032 mg /mL。结论:陕西荚蒾叶挥发油主要成分为软脂酸(29. 24 %)、4-甲基-1-异丙基-双环[3. 1. 0]
己酮(5. 71 %)、3-甲基-4-异丙苯酚(5. 68 %)和亚麻醇(4. 84 %),其挥发油对金黄色葡萄球菌具有较强的抑菌活
性。
关键词 陕西荚蒾叶;挥发油;化学成分;GC-MS;抗菌活性
中图分类号:R284. 1 /R284. 2 /R285. 5 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2013)12-1962-05
收稿日期:2013-05-27
基金项目:广西植物功能物质研究与利用重点实验室开放基金课题资助(FPRU2011-3);药用资源化学与药物分子工程教育部重点实验室
团队项目(CMEMR2012-A21)
作者简介:李晨(1990-),女,在读硕士研究生,专业方向:天然有机化学;E-mail:13737717015@ 163. com。
* 通讯作者:李俊,Tel:13978372991,E-mail:lijun9593@ 163. com。
GC-MS Analysis of Chemical Components of Volatile Oil from
Viburnm schensianum Leaf and Their Antibacterial Activity
LI Chen1,HUANG Ji-guo1,LU Tai-liang1,HE Rui-jie1,2,LI Jun1,2
(1. School of Environment and Resource,Guangxi Normal University,Guilin 541004,China;2. Guangxi Key Laboratory of Functional
Phytochemicals Research and Utilization /Guangxi Institute of Botany,Guilin 541006,China)
Abstract Objective:To analyze the chemical constituents of the volatile oil from Viburnm schensianum leaves and investigate their
antibacterial activity in vitro. Methods:The volatile oil from Viburnm schensianum leaves were extracted by steam distillation. The
chemical compositions were separated and analyzed by GC-MS. Their relative percentage content were calculated with peak area nor-
malization method. Agar dilution method was used to determine the minimum inhibitory concentration of the volatile oil and Ciprofloxa-
cin to the five kinds of experimental strains. Results:54 compounds were isolated and 45 compounds were identified. The volatile oil
showed strong antibacterial activity against Staphyloccocus aureus,and the minimum inhibitory concentration was 0. 032 mg /mL. Con-
clusion:The main chemical constituents of the volatile oil are n-hexadecanoic acid(29. 24%),4-methyl-1-(1-methylethyl)-bicyclo
[3. 1. 0]hex-3-en-2-one(5. 71%) ,3-methyl-4-isopropylphenol(5. 68%)and linolenyl alcohol(4. 84%). The volatile oil has strong
antibacterial activity against Staphyloccocus aureus.
Key words Viburnm schensianum Maxim. leaves;Volatile oil;Chemical components;GC-MS;Antibacterial activity
·2691· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 36 卷第 12 期 2013 年 12 月
DOI:10.13863/j.issn1001-4454.2013.12.030
陕西荚蒾 Viburnm schensianum Maxim. 为忍冬
科荚蒾属植物,又名土兰条、鸡骨头,落叶灌木,高可
达 3 m〔1〕。产于江苏、山东、河南、河北、山西、陕西
南部、甘肃南部、四川北部〔2〕。荚蒾属植物具有抗
氧化、抗菌等生物活性,可用于抗肿瘤、抗高血糖和
保护肝脏等〔3〕。
本文用水蒸气蒸馏法提取陕西荚蒾鲜叶的挥发
性成分,用 GC-MS 进行测定,并用峰面积归一化法
确定各化学成分的相对质量分数。通过测定陕西荚
蒾叶挥发油对金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、绿脓杆
菌、大肠杆菌、枯草杆菌的 MIC 值,探究其抗菌活
性,以期为合理开发陕西荚蒾资源提供科学依据。
1 仪器与材料
7890A /5975C 型 GC-MS 联用仪(美国 Agilent
公司);挥发油提取器(常规玻璃仪器);LRH-250-A
生化培养箱(广东省医疗器械厂);YXQ-LS-50SIL立
式高压灭菌器(上海博迅实业有限公司医疗设备
厂)。
陕西荚蒾叶采集于 2012 年 7 月广西钦州市,经
由广西师范大学生命科学学院谢强副教授鉴定为忍
冬科荚蒾属植物陕西荚蒾 Viburnm schensianum Max-
im. 的新鲜叶,标本保存在广西师范大学环境与资
源学院天然产物研究与开发实验室。乙醚、无水硫
酸钠、氯化钠、氢氧化钠均为分析纯,购自广东省汕
头市西陇化工厂;环丙沙星(CIP,中国食品药品检
定研究院,批号:130451-200302);牛肉浸膏、蛋白胨
购自北京陆桥技术有限责任公司;琼脂为分析纯,购
自福建省石狮市宝湖联合琼脂厂。
实验菌种:金黄色葡萄球菌(Staphyloccocus au-
reus)、白色念珠菌(Canidia albicans)、绿脓杆菌
(Pseudomonas aeruginosa)、大肠杆菌(Escherichia co-
li)、枯草杆菌(Bacillus subtilis)。供试菌种均由广西
师范大学生命科学学院邓业成教授提供。
2 方法与结果
2. 1 挥发油的提取 称取 1 kg陕西荚蒾鲜叶经粉
碎机粉碎后,放入圆底蒸馏烧瓶中,用水浸泡至烧瓶
2 /3 处,套上冷凝管,连接好冷凝装置,用电热套加
热,蒸馏至馏出液没有油珠为止,收集馏出液,得到
挥发油 5. 0 g。将所得馏出液用无水乙醚萃取,萃取
液用适量的无水硫酸钠干燥 24 h。
2. 2 挥发油的 GC-MS条件与结果
2. 2. 1 气相色谱条件:色谱柱为 HP-5MS 5 %
Phenyl Methyl Siloxane(30 m × 0. 25 mm,0. 25 μm)
弹性石英毛细管柱;柱温:80 ℃,保持 3 min,以 5
℃ /min速率升温至 170 ℃,又以 3 ℃ /min速率升温
至 250 ℃,保持 2 min,汽化室温度 250 ℃,FID检测
器加热器 290 ℃;载气:体积分数 99. 999 %的高纯
氦气;载气流量:1. 0 mL /min;进样方式:GC 自动进
样器;进样量:1. 0 μL,分流进样;分流比:10∶ 1。
2. 2. 2 质谱条件:EI离子源温度:280 ℃;MS 四极
杆温度:150 ℃;电子能量:70 eV;接口温度:280 ℃;
溶剂延迟:4 min;质量范围 m/z:20 ~ 400。
按上述气质条件对陕西荚蒾叶挥发油进行分离
鉴定,其总离子流图见图 1。通过 NIST05a. L 质谱
数据库计算机检索和查对有关文献资料,并用面积
归一化法测得挥发油各组分相对百分含量,共检出
54 个化合物,其中相似度 80 %以上的化合物有 45
个(表 1),占挥发油总含量的 89. 13 %。其中包含
脂肪酸、烷烃、酚、醇、酮、酯类等多种化合物,主要成
分为 软 脂 酸 (29. 24%)、4-甲 基-1-异 丙 基-双 环
[3. 1. 0]己酮(5. 71%)、3-甲基-4-异丙苯酚(5. 68%)
和亚麻醇(4. 84%)。
2. 3 体外抗菌试验 分别制备浓度为 2、1、0. 5、
0. 25、0. 125、0. 064、0. 032、0. 016 mg /mL 陕西荚蒾
叶挥发油和环丙沙星(Ciprofloxacin,CIP)的肉膏琼
脂平板培养基。在培养基上分别接种金黄色葡萄球
菌(Staphyloccocus aureus)、白色念珠菌(Canidia al-
bicans)、绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)、大肠杆
菌(Escherichia coli)、枯草杆菌(Bacillus subtilis),放
入 37 ℃ 孵箱内培养 24 h取出。观察各菌种在不同
浓度平板上的生长情况,得出陕西荚蒾叶挥发油和
环丙沙星对各菌种的最低抑菌浓度 MIC(表 2)。结
果显示陕西荚蒾叶挥发油对金黄色葡萄球菌有较强
的抑菌活性,其 MIC值为 0. 032 mg /mL。
3 讨论
3. 1 陕西荚蒾叶挥发油分析 陕西荚蒾叶挥发油
成分中,脂肪酸类化合物占 29. 93%,烷烃类化合物
占 20. 16%,酚类化合物占 9. 49%,醇类化合物占
7. 46%,酮类化合物占 6. 5%,酯类化合物占
5. 69%,此外,还有少量醛类、芳烃类、烯烃类、萘的
衍生物及其他化合物。陕西荚蒾叶挥发油成分中含
量最多的化合物是软脂酸,其相对百分含量高达
29. 24%,其次是 4-甲基-1-异丙基-双环[3. 1. 0]己
酮、3-甲基-4-异丙苯酚和亚麻醇,这些化合物的相对
百分含量分别为 5. 71%、5. 68%和 4. 84%。
软脂酸具有特殊香气和滋味,可用于配制各种
·3691·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 36 卷第 12 期 2013 年 12 月
图 1 陕西荚蒾叶挥发油成分总离子流图
表 1 陕西荚蒾叶中挥发油化学成分及相对百分含量
编号 保留时间 /min 化合物名称 化学式 相对百分含量 /%
1 5. 26 苯酚 phenol C6H6O 1. 34
2 5. 45 2,2,4,6,6-五甲基庚烷 2,2,4,6,6-pentamethyl-heptane C12H26 2. 50
3 6. 27 苯甲醇 benzyl alcohol C7H8O 0. 45
4 6. 55 1,3-二乙基苯 1,3-diethyl-benzene C10H14 0. 88
5 6. 68 1,4-二乙基苯 1,4-diethyl-benzene C10H14 0. 89
6 6. 82 1,2-二乙基苯 1,2-diethyl-benzene C10H14 0. 37
7 7. 34 顺-氧化芳樟醇 cis-linaloloxide C10H18O2 0. 57
8 9. 31 4-甲基-1-异丙基-双环[3. 1. 0]己酮
4-methyl-1-(1-methylethyl)-bicyclo[3. 1. 0]hex-3-en-2-one
C10H14O 5. 71
9 11. 22 4-(2-丙烯基)-苯酚 4-(2-propenyl)-phenol C9H10O 0. 13
10 11. 56 2,2-二甲基-3-亚甲基二环[2,2,1]庚烷
2,2-dimethyl-3-methylene-(1S)-bicyclo[2. 2. 1]heptane
C10H16 0. 75
11 12. 16 3-甲基-4-异丙苯酚 3-methyl-4-isopropylphenol C10H14O 5. 68
12 12. 36 1-甲基萘 1-methyl-naphthalene C11H10 0. 59
13 13. 81 2-甲氧基-3-(2-丙烯基)-苯酚 2-methoxy-3-(2-propenyl)-phenol C10H12O2 2. 34
14 14. 66 正十四烷 tetradecane C14H30 0. 33
15 15. 09 2,7-二甲基萘 2,7-dimethyl-naphthalene C12H12 0. 56
16 15. 46 2,3-二甲基萘 2,3-dimethyl-naphthalene C12H12 0. 35
17 15. 94 1,8-二甲基萘 1,8-dimethyl-naphthalene C12H12 0. 29
18 16. 99 3-甲基联苯 3-phenyltoluene C13H12 0. 31
19 18. 14 反-2-己烯酸丁酯 trans-2-hexenyl butyrate C10H18O2 1. 01
20 18. 75 S-(Z)-3,7,11-三甲基-1,6,10-十二烷三烯-3-醇
[S-(Z)]3,7,11-trimethyl,-1,6,10-dodecatrien-3-ol
C15H26O 0. 80
21 18. 87 正十二酸 dodecanoic acid C12H24O2 0. 68
22 19. 51 正十六烷 hexadecane C16H34 1. 33
23 20. 65 甲氧基乙酸-2-十四基酯 methoxyacetic acid 2-tetradecyl ester C17H34O3 0. 55
24 20. 95 1-十六烯 1-hexadecene C16H32 1. 28
25 21. 09 Tau-杉木醇 taumuurolol C15H26O 0. 39
26 22. 07 十七烷 heptadecane C17H36 3. 26
27 22. 21 2,6,10-三甲基-十二烷 2,6,10-trimethyl-dodecane C15H32 1. 19
28 22. 51 十四醛 tetradecanal C14H28O 2. 21
29 22. 61 (Z)-9-十四碳烯醛 Z-9-tetradecenal C14H26O 0. 53
·4691· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 36 卷第 12 期 2013 年 12 月
续表 1
编号 保留时间 /min 化合物名称 化学式 相对百分含量 /%
30 22. 71 1-(1,5-二甲基-4-己烯基)-4-甲基苯
1-(1,5-dimethyl-4-hexenyl)-4-methyl-benzene
C15H22 0. 54
31 23. 21 1-氯-二十七烷 1-chloro-heptacosane C27H55Cl 0. 69
32 23. 72 正十五烷 pentadecane C15H32 0. 48
33 23. 96 正十三烷 tridecane C13H28 1. 35
34 24. 76 正十八烷 octadecane C18H38 3. 30
35 25. 00 2,6,10,14-四甲基-十六烷 2,6,10,14-tetramethyl-hexadecane C20H42 1. 15
36 25. 89 硫磺酸十五基-2-丙基酯 sulfurous acid pentadecyl 2-propyl ester C18H38OS 0. 72
37 26. 48 1-十八烯 1-octadecene C18H36 0. 43
38 26. 80 邻苯二甲酸癸异丁酯 phthalic acid decyl isobutyl ester C22H34O4 1. 60
39 27. 53 十九烷 nonadecane C19H40 2. 39
40 28. 14 法尼基丙酮
(5E,9E)-6,10,14-trimethylpentadeca-5,9,13-trien-2-one
C18H30O 0. 79
41 29. 43 邻苯二甲酸二丁酯 dibutyl phthalate C16H22O4 1. 81
42 30. 09 软脂酸 n-hexadecanoic acid C16H32O2 29. 24
43 30. 35 二十烷 eicosane C20H42 1. 44
44 33. 65 叶绿醇 phytol C20H40O 0. 80
45 34. 70 亚麻醇 linolenyl alcohol C18H32O 4. 84
表 2 陕西荚蒾叶挥发油及 CIP
对实验菌株的MIC值(mg/mL)
实验菌株
陕西荚蒾叶
挥发油
CIP
金黄色葡萄球菌(S. aureus) 0. 032 0. 032
白色念珠菌(C. albicans) 0. 125 0. 032
绿脓杆菌(P. aeruginose) 0. 250 0. 125
大肠杆菌(E. coli) 0. 125 0. 032
枯草杆菌(B. subtilis) 0. 064 0. 032
食用香料,也用作消泡剂和其他食品添加剂的原料。
软脂酸具有某些潜在的生理功能,对人成骨肉瘤细
胞 MG63 有抑制作用,能引起成骨肉瘤细胞的凋亡,
具有抗肿瘤的功效〔4〕;能通过 p38 and JNK MAPKs
途径促进内皮祖细胞凋亡〔5〕;能激活 ROS-p38
MAPK /ERK-Akt,促进肝细胞周期进程,加快细胞增
殖〔6〕;能激活 c-JNK加快神经干细胞的凋亡〔7〕。
3-甲基-4-异丙苯酚,俗名对百里香酚,是白色针
状结晶,具有防腐杀菌等作用〔8〕,常用作膏霜类化妆
品的防腐、杀菌剂;具有抗氧化作用,可用作抗氧化
剂。
2. 2 陕西荚蒾叶挥发油体外抗菌活性分析 陕西荚
蒾叶挥发油和环丙沙星对 5 种菌株的 MIC值可以看
出,陕西荚蒾叶挥发油对 5种实验菌株均有不同程度
的抑制作用,表明陕西荚蒾叶挥发油具有一定的抑菌
活性。
在中药抑菌效果中,一般 MIC 值小于 7. 81 mg /
mL为高度敏感药物,介于 7. 81 ~ 250 mg /mL为中度
敏感药物,大于 250 mg /mL 为不敏感药物〔9〕。陕西
荚蒾叶挥发油对 5种实验菌种的 MIC值都小于 7. 81
mg /mL,均为高度敏感药物。陕西荚蒾叶挥发油对白
色念珠菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、枯草杆菌的MIC值均
高于环丙沙星对这5种菌株的MIC值,而对金黄色葡
萄球菌的 MIC值则与环丙沙星所测值相等,为 0. 032
mg /mL,说明陕西荚蒾叶挥发油对金黄色葡萄球菌具
有较强的抑菌活性。由于陕西荚蒾叶挥发油中所含
的软脂酸存在显著的抑菌活性,3-甲基-4-异丙苯酚也
具有杀菌效果,所以陕西荚蒾叶挥发油的抑菌效果可
能与其所含的上述这两种物质有关。
参 考 文 献
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收稿日期:2013-06-24
作者简介:郭胜男(1989-),女,在读硕士研究生,专业方向:中药及其天然产物活性成分研究。
* 通讯作者:卢金清,Tel:027-68890101,E-mail:ljq59169@ sohu. com。
HS-SPME-GC-MS联用分析沙苑子中挥发性成分
郭胜男,卢金清* ,蔡君龙,黎 强,梁 欢
(湖北中医药大学 /湖北省药用植物研发中心,湖北 武汉 430065)
摘要 目的:分析沙苑子中挥发性成分的化学组成。方法:采用顶空固相微萃取法(HS-SPME)萃取沙苑子中
挥发性成分,并用气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术对沙苑子的挥发性成分进行分析。结果:从沙苑子中共分离出
51 个色谱峰,鉴定出其中 25 种化合物,占总量的 78. 85%。其中主要成分为 L-乙酸龙脑酯(14. 10%)、樟脑
(5. 98%)、右旋龙脑(4. 27%)等。结论:首次采用 HS-SPME-GC-MS联用技术分析沙苑子挥发性成分,为沙苑子的
进一步开发利用提供了科学依据。
关键词 沙苑子;顶空-固相微萃取;气相色谱-质谱联用;挥发性成分
中图分类号:R284. 1 /R284. 2 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2013)12-1966-03
Analysis of Volatile Constituents of Astragali Complanati Semen by HS-SPME Combined with GC-MS
GUO Sheng-nan,LU Jin-qing,CAI Jun-long,LI Qiang,LIANG Huan
(Hubei University of Chinese Medicine /Research and Development Center of Medicinal Plant in Hubei Province,Wuhan 430065,China)
Abstract Objective:To analyze the compositions of volatile constituents in Astragali Complanati Semen. Methods:The volatile
constituents were extracted with headspace solid phase micro extraction(HS-SPME),and identified by GC-MS. Results:51 compounds
were separated from Astragali Complanati Semen and 25 of them were identified,which made up 78. 85% of the total amount. The main
components obtained from Astragali Complanati Semen were L-Bornyl acetate(14. 1%) ,Camphor(5. 98%)and L(- )-Borneol
(4. 27%). Conclusion:The compounds in Astragali Complanati Semen are firstly confirmed,which provides scientific evidence for the
development of Astragali Complanati Semen.
Key words Astragali Complanati Semen;HS-SPME;GC-MS;Volatile components
沙苑子为豆科植物扁茎黄芪 Astragalus com-
planatus R. Br. 的干燥成熟种子,其味甘,性温,归
肝、肾经。具有补肾助阳、固精、缩尿、养肝明目的功
能。用于治疗肾虚腰痛、遗精早泄、遗尿尿频、白浊
带下、眩晕、目暗昏花〔1〕。沙苑子具有丰富的挥发
性成分,本文首次采用顶空固相微萃取-气相-质谱
联用技术对沙苑子的挥发性化学成分进行分析,以
期为沙苑子的进一步开发利用提供参考。
1 仪器与试药
1. 1 仪器 6890 /5973 型气相-质谱-计算机联用仪
(美国 Hewlett-Packard公司);手动固相微萃取装置
(德国 IKA 公司);65 μm PDMS /DVB 萃取纤维头
(美国 Supelco公司);顶空瓶(5 mL,德国 IKA公司)。
1. 2 试药 沙苑子购于武汉龙泰药业有限责任公
司,经湖北中医药大学陈科力教授鉴定为豆科植物
扁茎黄芪 Astragalus complanatus R. Br. 的干燥成熟
种子。
2 方法与结果
2. 1 固相微萃取条件 称取沙苑子粗粉 0. 5 g,置
5 mL 固相微萃取仪专用顶空瓶中,用带有 65 μm
PDMS /DVB萃取纤维头的手动进样器插入瓶内,
100 ℃下平衡 15 min,再顶空萃取 25 min,取出,立
即插入气相色谱仪进样口(温度 230 ℃)中,解吸
3 min。
2. 2 气相色谱-质谱分析条件 色谱条件:色谱柱
HP-5MS石英毛细管柱(50 m × 0. 2 mm,0. 33 μm);
程序升温为初始温度 40 ℃,以 8 ℃ /min 升温至
80 ℃,再以 5 ℃ /min 升至 130 ℃,再以 15 ℃ /min
·6691· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 36 卷第 12 期 2013 年 12 月