全 文 ：基金项目:国家自然科学基金资助项目(30270157)
作者简介:张朝凤 ,女 ,博士 ,副教授 Tel:(025)85391245 E-mail:njchaofeng@126.com
阿勒泰橐吾的倍半萜类成分研究
张朝凤 , 王琼 , 张勉 (中国药科大学现代中药教育部重点实验室 , 生药学研究室 , 南京 210038)
摘要:目的 对菊科橐吾属植物阿勒泰橐吾 (LigulariaaltaicaDC.)的萜类成分进行研究并进行抗白血病细胞 K562的活性
筛选。方法 采用硅胶 、 凝胶柱色谱和重结晶等技术进行分离纯化 , 根据理化性质和波谱数据并参考文献确定化合物结
构 , 采用 MTT法进行抗 K562细胞增殖的活性筛选。结果 分离鉴定了 9个倍半萜化合物:furaneremophilan-14β, 6α-olide
(1), 8β-hydroxyl-7 (11)-eremophilen-12, 8α-olide(2), 7 (11)-eremophilen-12, 8α-olide(3), 8β-hydroxyl-eremophil-7
(11)-en-12, 8α(14β, 6α)-diolide(4), 6β-hydroxyl-7 (11)-eremophilen-12, 8α-olide(5), 6β, 8β-dihydroxyl-7 (11)-en-
12β, 8α-olide(6), 7-acetyl-6 (7)-en-noreremophil-13β-carboxylicacid(7), 8β-hydroeremophil-7 (11)-eremophilen-12, 8α
(14β, 6α)-diolide(8)和 2-hydroxyl-plaryphilide(9)。结论 以上化合物均为首次从该种植物中分离得到 , eremophilane
型降倍半萜化合物 7和 9对 K562细胞生长显示弱的抑制活性。
关键词:菊科;阿勒泰橐吾;eremophilane型倍半萜
中图分类号:R284 文献标识码:A 文章编号:1001-2494 (2008)22-1697-04
StudyonSesquiterpeneComponentsofLigulariaaltaicaDC.
ZHANGChao-feng, WANGQiong, ZHANGMian(KeyLaboratoryofModernChineseMedicinesofMinistryofEducation,
ResearchDepartmentofPharmacognosy, ChinaPharmaceuticalUniversity, Nanjing210038, China)
ABSTRACT:OBJECTIVE TostudythesesquiterpenesoftheundergroundpartofLigulariaaltaicaDC.andtheircytotoxicity
activityagainstK562celllines.METHODS Nineeremophilanesesquiterpeneswereobtainedas:furaneremophilan-14β, 6α-olide
(1), 8β-hydroxyl-7(11)-eremophilen-12, 8α-olide(2), 7 (11)-eremophilen-12, 8α-olide(3), 8β-hydroxyl-eremophil-7(11)-en-
12, 8α(14β, 6α)-diolide(4), 6β-hydroxyl-7(11)-eremophilen-12, 8α-olide(5), 6β, 8β-dihydroxyl-7(11)-eremophilen-12, 8α-
olide(6), 7-acetyl-6(7)-en-noreremophil-13β-carboxylicacid(7), 8β-hydroeremophil-7(11)-en-12β, 8α(14β, 6α)-diolide(8)and
2-hydroxyl-plaryphillide(9).CONCLUSION Allcompoundswereobtainedfromthisplantfirstly, compound7 and9 showed
relativeweakinhibitoryactivitiesagainstK562 cellineswithIC50 as65.27 and54.71 mg· L-1 , respectively.
KEYWORDS:Composetae;LigulariaaltaicaDC.;eremophilanesesquiterpenes
橐吾属 (Ligularia)隶属于菊科千里光族 。本
属约有 40种植物的根和根茎作为民间药物使用 。
阿勒泰橐吾 (L.altaicaDC.)为橐吾属蓝灰组植
物 , 其根 、 茎叶入药 , 具有润肺下气 、止咳祛痰的
作用 , 茎叶可用于治疗神经衰弱 , 失眠等症状 。目
前已报道了本属蓝灰组 植物网脉橐吾 (L.
dictyoneura), 侧茎橐吾 (L.pleurocaulis)等植物
中均含有 eremophilane倍半萜类成分 , 已有研究报
道 eremophilane型倍半萜具有抗肿瘤 、抗菌等生物
活性[ 1] 。为了研究橐吾属化学成分与系统分类的
相关性 , 本室已对多种橐吾属植物进行了化学成分
研究。本实验对阿勒泰橐吾中倍半萜类成分及其对
K562的抑制活性进行报道 , 从阿勒泰的根及根茎中
分离鉴定了 9 个 eremophilane倍半萜类物质:
furaneremophilan-14β, 6α-olide(1), 8β-hydroxyl-7
(11)-eremophilen-12, 8α- olide(2), 7 (11)-
eremophilen-12, 8α-olide (3 ), 8β-hydroxyl-
eremophil-7 (11)-en-12, 8α(14β, 6α)-diolide
(4), 6β-hydroxyl-7 (11)-eremophilen-12 , 8α-olide
(5), 6β, 8β-dihydroxyl-7 (11)-eremophilen-12,
8α-olide(6), 7-acetyl-6 (7)-en-noreremophil-13β-
carboxylicacid(7), 8β-hydroeremophil-7 (11)-en-
12β, 8α(14β, 6α)-diolide(8)and2-hydroxyl-
plaryphilide(9)。 MTT法活性筛选结果表明 , 化
合物 7和 9具有中等程度的抑制活性。结果式见
图 1。
·1697·中国药学杂志 2008年 11月第 43卷第 22期 ChinPharmJ, 2008 November, Vol.43No.22
图 1 化合物 1 ～ 9的结构
Fig.1 Structuresofcompound1 ～ 9
1 实验仪器与材料
熔点用 X-4型显微熔点测定仪 (温度计未经
校正), NMR图谱用 BruckerACF-300, 500型核
磁共振仪测定 , TMS为内标 。质谱用 Agilent1100
系列 LC/MSDTrap
柱色谱和薄层色谱用硅胶为青岛海洋化工厂产
品 , 所用试剂均为分析纯 。药材采于新疆阿勒泰地
区 , 经中国药科大学生药学研究室张勉教授鉴定原
植物为 LigulariaaltaicaDC., 凭证标本 (LS295)
存放于本研究室 。
2 提取与分离
阿勒泰橐吾根茎粗粉 2.1 kg, 用体积分数
80%乙醇提取 3次 , 每次 2 h, 合并乙醇提取液后
减压浓缩至干 , 得浸膏 430 g。通过硅胶柱色谱 ,
以石油醚-乙酸乙酯 (100∶0 ～ 0∶100), 混合溶剂系
统为洗脱剂 , 石油醚 -乙酸乙酯 (50∶1)溶剂系统
洗脱得 4个流分 , 其中 Fr.2经硅胶柱色谱 , 以石
油醚-乙酸乙酯 (10∶1 ～ 3∶1)溶剂系统洗脱得化合
物 2 (2 mg), 3 (20 mg), 和 4 (200 mg);石油
醚 -乙酸乙酯 (20∶1)溶剂系统洗脱得 4个流分 ,
得化合物 1的粗结晶 , 再经重结晶得到单体化合物
1 (2 g), 其余部分经硅胶柱色谱和凝胶色谱 (氯
仿 -甲醇)纯化得化合物 7 (20 mg);石油醚-乙酸
乙酯 (4∶1)溶剂系统洗脱部分 , 经硅胶柱色谱
(石油醚 -乙酸乙酯 20∶1 ～ 5∶1)得化合物 5 (80
mg), 6 (8mg), 8 (8 mg)和 9 (3 mg)。
3 结构鉴定
化合物 1:白色针晶 (石油醚 -乙酸乙酯),
ESI-MSm/z:247.1 [ M+H] + , mp136 ～ 137℃。1
H-NMR(300 MHz, CDCl3)δ:5.10 (brs, H-6),
7.08 (1H, d, J=1.3 Hz, H-12), 2.68 (1H,
brd, J=11.2 Hz, H-9a), 2.65 (1H, brd, J=
6.0 Hz, H-9b), 2.04 (1H, m), 2.03 (3H, d,
J= 1.3 Hz, H-13), 1.27 (3H, s, H-14),
13C-NMR见表 1。参考文 献[ 2] 确定化合 物为
furaneremophilan-14β, 6α-olide。
化合物 2:无色片晶 (石油醚-乙酸乙酯 ),
ESI-Msm/z:251 [ M+H] + , 1 H-NMR(300 MHz,
CDCl3)δ:0.78 (3H, d, J=5.0 Hz, H-15),
1.05 (3H, s, H-14), 1.81 (3H, d, J=1.6 Hz,
H-13), 2.78 (1H, brd, J=12.0 Hz, H-9a),
2.12 (1H, brd, J=12.0 Hz, H-9b), 13C-NMR数
据见表 1。参考文献 [ 3]确定化合物 2为 8β-hydroxy-
7 (11)-eremophilen-12, 8α-olide。
化合物 3:无色片晶 (石油醚-乙酸乙酯 ),
ESI-MSm/z:235 [ M+H] +, 1H-NMR(300 MHz,
CDCl3)δ:4.64 (1H, dd, J=8.0, 7.0 Hz, H-
8), 2.09 (1H, m, H-9a), 1.75 (1H, dd, J=
13.5, 10.8 Hz, H-9b), 1.69 (1H, m, H-10),
1.82 (3H, brs, H-13), 1.02 (3H, s, H-14),
0.80 (1H, d, J=6.0 Hz, H-15), 13 C-NMR数据
见表 1, 参考文献[ 4] 确定化合物 3为 7 (11)-
eremophilen-12, 8α-olide。
化合物 4:黄白色针晶 (氯仿 -甲醇), ESI-MS
m/z: 279 [ M +H] +, 1 H-NMR (300 MHz,
CDCl3)δ:1.89 (1H, m, H-1a), 1.76 (1H, m,
H-1b), 1.43 (1H, m, H-2a), 1.38 (1H, m,
H-2b), 1.42 (1H, m, H-3a), 1.84 (1H, m,
H-3b), 2.27(2H, dd, J=12.2, 3.2 Hz, H-2),
5.00 (1H, q, J=2.0Hz, H-6), 1.77 (1H, dd,
J=13.2, 13.2 Hz, H-9a), 2.28 (1H, dd, J=
13.2, 5.0 Hz, H-9b), 2.18 (1H, m, H-10),
2.03 (3H, d, J=2.0Hz, H-13), 1.30 (3H, s,
H-14), 13C-NMR数据见表 1。参考文献 [ 5]确定化合
物 4 为 8β-hydroxyl-eremophilen-7 (11)-en-12β,
8α(14β, 6α)-diolide。
化合物 5:白色针晶 (石油醚-乙酸乙酯 ),
ESI-MSm/z:251 [ M+H] +, 1H-NMR(300 MHz,
CDCl3)δ:5.05 (1H, m, H-8β), 4.70 (1H, s,
H-6α), 1.85 (3H, d, J=2.0 Hz, H-13), 1.12
(3H, s, H-14), 0.79 (3H, d, J=6.6 Hz, H-
15), 13C-NMR数据见表 1。参考文献 [ 6]确定化合物
5为 6β-hydroxy-7(11)-eremophilen-12, 8α-olide。
化合物 6:无色方晶 (丙酮), mp217 ～ 218
℃, ESI-MSm/z:267 [ M+H] +, 1 H-NMR (300
·1698· ChinPharmJ, 2008November, Vol.43No.22 中国药学杂志 2008年 11月第 43卷第 22期
MHz, acetone-d6)δ:6.30 (1H, s, OH), 4.63
(1H, d, J=7.6 Hz, H-6), 2.17 (1H, m, H-
3a), 2.13 (1H, d, J=13.1 Hz, H-9a), 2.02
(1H, dd, J=13.1, 3.6 Hz, H-9b), 1.83 (3H,
s, H-13), 1.11 (3H, s, H-14), 0.82 (3H, d,
J=6.4 Hz, H-15), 1.97 (1H, m, H-3b), 1.84
(2H, m, H-2), 1.43 (2H, mH-1), 1.52 (1H,
m, H-9), 13C-NMR数据见表 1。参考文献[ 7]确定
化 合 物 6 为 6β, 8β- dihydroxyl-7 (11)-
eremophilen-12, 8α-olide。
化合物 7:白色针晶 (石油醚 -乙酸乙酯), mp
142 ～ 144℃, 红外图谱显示 2个较强的羰基信号
峰:1 727 , 1 636 cm -1, HR-ESIMSm/z:
245.115 0 [ M +Na] + (C13 H18 O3 Na, calcd,
245.114 8), 1H-NMR(300 MHz, CDCl3)δ:1.63
(1H, m, H-1a), 1.38 (1H, m, H-1b), 1.48
(1H, m, H-2a), 1.62 (1H, m, H-2b), 1.75
(2H, m, H-3), 2.37 (1H, dd, J=13.0, 4.0
Hz), 6.84 (1H, d, J=1.6 Hz, H-6), 2.43
(1H, ddd, J=16.0, 8.0, 1.6 Hz, H-8a), 2.50
(1H, dd, J=16.0, 8.0 Hz, H-8β), 2.02 (1H,
m, H-9), 2.33 (3H, s, H-11), 1.11 (3H, s,
H-13)。13C-NMR数据见表 1, 参考文献[ 8]确定化合
物 7 为 7- acetyl-6 (7)-en-noreremophil-13α -
carboxylicacid。
化合物 8:白色针晶 (石油醚-乙酸乙酯 ),
ESI-MSm/z:263.1 [ M +H] + , 1 H-NMR (300
MHz, acetone-d6)δ:5.12 (1H, q, J=1.9 Hz,
H-6), 1.97 (3H, d, J=2.0 Hz, H-13), 1.27
(3H, s, H-14), 1.88 (1H, m, H-1a), 1.75
(1H, m, H-2a), 1.50 (1H, m, H-1b), 1.35
(1H, m, H-2b), 1.45 (1H, m, H-3a), 1.95
(1H, m, H-3b), 2.30 (1H, dd, J=12.0, 3.0
Hz, H-4), 1.60 (1H, dd, J=13.0, 13.0 Hz,
H-9a), 2.30 (1H, dd, J=13.0, 5.0 Hz, H-
9b), 2.04(1H, m, H-10)。13C-NMR波谱数据见
表 1, 参 考 文 献[ 9] 确 定 化 合 物 8 为 8β-
hydroeremophil-7 (11)-en-12β , 8α(14β, 6α)-
diolide。
化合物 9:无色方晶 (乙酸乙酯), mp241 ～
215 ℃, ESI-MSm/z:482.9 [ 2M+Na] + , 1H-NMR
(300 MHz, acetone-d6)δ:6.99 (1H, d, J=2.0
Hz, H-3), 6.97 (1H, dd, J=2.0, 1.1 Hz, H-
1), 5.28 (1H, d, J=9.4 Hz, H-6), 4.99 (2H,
m, H-12, ), 1.87 (3H, t, J=1.1 Hz, H-13),
3.06 (1H, dd, J=17.4, 6.4 Hz, H-9a), 2.80
(1H, dd, J=17.4 , 5.6 Hz, H-9b), 2.07 (1H,
m, H-8a), 1.94 (1H, m, H-8β), 2.10 (1H,
m, H-7)。13C-NMR波谱数据见表 1, 参考文献 [ 8, 10]
确定化合物 9为 2-hydroxyl-plaryphilide。
表 1 化合物 1 ～ 9的 13C-NMR波谱数据
Tab.1 13C-NMRdataofcompound1 ～ 9
Compound 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15
1 20.8 18.8 23.2 41.4 41.5 81.7 120.1 150.8 25.3 37.1 114.7 138.7 8.2 20.1 176.6
2 20.5 26.1 30.5 29.6 40.4 35.0 159.0 103.1 38.9 39.5 122.5 172.5 8.2 21.4 16.0
3 20.7 26.7 20.7 30.1 40.3 36.5 161.9 80.4 35.1 40.5 120.7 174.8 8.2 21.6 16.0
4 20.0 21.0 24.3 40.8 44.6 82.5 152.9 103.1 36.6 35.0 127.6 171.0 9.0 19.3 175.7
5 25.0 19.9 30.5 29.4 42.9 69.9 161.4 78.3 35.0 33.8 121.7 174.7 8.7 16.3 16.2
6 21.5 27.2 32.9 40.8 44.7 71.6 157.2 105.4 40.6 35.5 125.5 172.4 9.2 17.3 17.2
7 20.69 23.0 23.8 46.4 48.5 154.2 142.7 33.1 48.7 197.8 26.4 174.8 19.2 - -
8 19.3 20.8 24.7 40.7 44.7 82.1 154.6 77.5 33.0 35.2 126.0 173.5 9.2 20.1 174.5
9 120.8 160.4 108.7 126.8 141.7 80.8 47.9 27.7 26.7 136.4 146.1 115.0 20.7 170.8 -
4 抗癌活性
利用噻唑蓝 MTT法测试降 eremophilane倍半萜
化合物 7和 9对人白血病细胞 K562的抑制活性 , 选
用 10-羟基喜树碱为阳性对照药物 , 通过比较抑制
浓度 IC50的大小 , 发现化合物 7和 9对 K562细胞有
弱的抑制作用 , IC50 =65.27和 54.71 mg·L-1。
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·1699·中国药学杂志 2008年 11月第 43卷第 22期 ChinPharmJ, 2008 November, Vol.43No.22
基金项目:国家重点基础研究发展规划项目课题(G1999054405)
作者简介:刘剑刚 ,男 ,副研究员 Tel:(010)62875599-6407 E-mail:liujiangang2002@sina.com
气血并治方提取物对 ApoE基因缺陷小鼠动脉粥样硬化病理形态和基
质金属蛋白酶 -1及其抑制物表达的影响
刘剑刚 1 , 董国菊 1 , 史大卓 1 , 王永炎 2 , 程翼宇 3 , 栾连军 3 (1.中国中医科学院西苑医院 , 北京 100091;2.中国中医科
学院 , 北京 100700;3.浙江大学药学院 , 杭州 310058)
摘要:目的 观察气血并治方提取物对 ApoE基因缺陷小鼠 (ApoE-小鼠)36周时动脉粥样硬化 (As)的病理形态 、 超微
结构和基质金属蛋白酶-1 (MMP-1)及其抑制物-1 (TIMP-1)表达的影响。方法 采用 6周龄 ApoE-小鼠 40只 , 给予高
脂饲料。并从 24周起连续给药 , 中药组分为大剂量组 360 mg· kg-1体重 (下同)和小剂量组 72 mg· kg-1 , 阳性对照组为
辛伐他汀 0.52 mg· kg-1 , 同时取同周龄的 C57BL/6小鼠做空白对照 , 至 36周麻醉处死 , 利用免疫组织化学检测 As斑块
MMP-1和 TIMP-1表达及观察 As血管弹力纤维和胶原双重染色 、 电子显微镜下的病理变化。结果 与模型组比较 , 气血并
治方大 、 小剂量及辛伐他汀均能降低纤维帽厚度和脂质核心面积比值 , 增加斑块的纤维帽厚度等 (P<0.05, P<0.01)。
气血并治方大剂量组和辛伐他汀组还能减少 MMP-1在 As血管中的表达 , 增强 TIMP-1的表达 (P<0.05)。 结论 气血并
治方提取物可以改善 ApoE-小鼠晚期 As的形成 , 具有保护血管内皮 、 抑制 MMP-1的表达 , 改善斑块构成 , 稳定斑块的
作用。
关键词:气血并治方;血府逐瘀汤;ApoE基因缺陷小鼠;动脉粥样硬化;超微结构;金属蛋白酶 -1
中图分类号:R285.5 文献标识码:A 文章编号:1001-2494 (2008)22-1700-06
EfectofWaterExtractivesofQixueBingzhiFangonAtheroscleroticUnstablePlaquePathologyand
MMP-1andTIMP-1 inApolipoproteinE-DeficientMice
LIUJian-gang1 , DONGGuo-ju1 , SHIDa-zhuo1 , WANGYong-yan2 , CHENGYi-yu3 , LUANLian-jun3(1.Xiyuan
Hospital, ChinaAcademyofTraditionalChineseMedicine, Beijing100091, China;2.ChinaAcademyofTraditionalChineseMedicine,
Beijing100700, China;3.ColegeofPharmacy, ZhejiangUniversity, Hangzhou310058, China)
ABSTRACT:OBJECTIVE ToinvestigatetheefectofwaterextractivesofQixueBingzhiFang(CWQB)onatherosclerotic
labilizationplaquepathologyandultrastructure(36 weeks), MMP-1 andTIMP-1 activityinapolipoproteinE-deficientmice(ApoE-
mice).METHODS 40 Micegivenwithfatdietfor24 weeks, wererandomlydividedinto4 groups, whichwerehighdoseandlow
doseofCWQB, simvastatinandmodelgroup, 10 miceineachgroup.Themedicineswereadministeredfrom24 to36 weeks, andthe
miceweresacrificedat36 weeks.TheC57BL/6miceascontrolwerealsosacrificed.RESULTS LowandhighdoseofCWQBand
simvastatinreducedlipidcontent/plaque.highdoseofRQXPandsimvastatinincreasedfibrouscapthicknessanddecreasedplaque
area/vascularsizeandlipidcontent/fibercontent(P<0.05, P<0.01).HighdoseofWQXPandsimvastatincouldreduce
macrophagenumberinplaque(P<0.05).HighdoseofCWQBandsimvastatinincreasedTIMP-1numberandrestrianMMP-1activity
inplaque(P<0.05).CONCLUSION CWQBcouldintervenelabilizationplaqueandultrastructureofApoE-mice, attenuateand
stabilizeplaqueinsomeextent.ThemechanismsmayincludeincreasingactivityofTIMP-1adjustingMMP-1 content.
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(收稿日期: 2008-06-12)
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