全 文 ：标。
选择提取溶剂时，发现水对栀子苷的提取效率和甲醇相当，
乙醇、丙酮、乙酸乙酯对栀子苷的提取效率很低，西红花苷 － I 及
西红花苷 － II在甲醇中的溶出率最高，在水中和乙醇中较低，几
乎不溶于丙酮和乙酸乙酯。
通过单因素试验确定考察因素，采用 Box － Behnken 试验并
用响应面法进行分析，预测出响应值为 97． 26%，经过试验验证，
得出最佳工艺条件为甲醇体积分数 88． 8%，提取温度 72℃，提取
时间 36 min，液料比 50∶ 1，超声强度 70%。此条件下得到的实
际值与预测值一致，说明 Box － Behnken 试验设计及响应面分析
法生产实践具有指导意义。
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收稿日期:2012-11-02; 修订日期:2013-04-02
基金项目:国家“十一五”科技支撑计划( No． 2007BAI30B02 － 2)
作者简介:李 敏( 1983-) ，女( 汉族) ，新疆乌鲁木齐人，现任新疆医科大
学药学院讲师，硕士学位，主要从事新疆特色药材物质基础研究工作．
* 通讯作者简介:热娜·卡斯木 ( 1962-) ，女 ( 维吾尔族) ，新疆乌鲁木齐
人，现任新疆医科大学药学院教授，博士学位，主要从事新疆优势资源开
发与利用研究工作．
新疆鼠尾草抗糖尿病并发症有效部位中
丹酚酸 K含量的高效液相色谱法测定
李 敏，王新玲，王晓梅，胡君萍，热娜·卡斯木*
(新疆医科大学药学院，新疆 乌鲁木齐 830011)
摘要:目的 建立高效液相色谱法测定新疆鼠尾草抗糖尿病并发症有效部位中丹酚酸 K 含量的方法。方法 色谱柱为
SHIMADZU SHIM － PACK VP － ODS C18 ( 250 mm ×4． 6 mm，5 μm) ;流动相为 0． 2%磷酸 －甲醇( 65∶ 35，V /V，调 pH值为
3． 0) ;流速为 0． 8 ml·min －1 ;检测波长为 320 nm;柱温为 30℃。结果 丹酚酸 K与其它组分的分离效果良好，且在 0． 1 ～
0． 35 μg范围内呈良好的线性关系( r≥0． 999 9) ，平均加样回收率为 98． 11% ( ＲSD = 1． 87%，n = 9) 。结论 该测定方法简
便、准确、可行，为新疆鼠尾草有效部位质量控制和新药开发提供科学依据。
关键词:新疆鼠尾草; 丹酚酸 K; 高效液相色谱法
DOI标识:doi: 10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2013． 07． 012
中图分类号:Ｒ284． 5 文献标识码:A 文章编号:1008-0805( 2013) 07-1571-02
新疆鼠尾草 Salvia deserta Schang为唇形科(Labiatae)鼠尾草
属(Salvia L)植物，拉丁学名为荒漠鼠尾草，因分布在新疆戈壁荒
原而得名，亦称新疆丹参，它是我国鼠尾草属植物中独特的品种。
在我国新疆和天山山脉中亚诸国有广泛的分布［1］，在民间用于
清热解毒、止咳祛痰、消肿利尿。本课题组的研究表明，新疆鼠尾
草中的水溶性成分均为酚酸类化合物，经体外药效学实验证实具
有较强的抑制醛糖还原酶的活性，其中以丹酚酸 K 含量最高、活
性最强。目前尚无新疆鼠尾草中丹酚酸 K 含量测定方法的报
道。为控制新疆鼠尾草抗糖尿病并发症有效部位［2］的内在质
量，本文首次采用高效液相色谱法测定新疆鼠尾草抗糖尿病并发
症有效部位中丹酚酸 K 的含量，为新疆鼠尾草特征性化合物的
指认提供科学依据，为其进一步开发应用奠定基础［3 ～ 5］。
1 仪器与材料
高效液相色谱仪(SHIMADZU LC － 20A，包括:LC － 20AT泵，
SIL － 20A自动进样器，CTO － 20AC柱温箱，SPD － M20A检测器，
CDM －20A控制器，LC － Solution 色谱工作站) ;紫外光谱测定仪
(SHIMADZU UV － 2550) ;电子天平(万分之一，Sartorius －
BS110S) ;酸度计(上海雷磁 PHS － 3D) ;超声波清洗器(昆山市超
声仪器有限公司 KQ －200KDE)。
对照品:丹酚酸 K(自制，经峰面积归一化法计算纯度为
97． 94%) ;供试品:抗糖尿病并发症有效部位提取物(自制，原植
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2013 VOL． 24 NO． 7 时珍国医国药 2013 年第 24 卷第 7 期
物为新疆鼠尾草地上部分，采自新疆乌拉泊水库附近的平川地
带，品种由新疆医科大学药学院天药 /生药教研室邢文斌鉴定) ;
微孔滤膜(0． 45 μm) ，甲醇(Merk公司，色谱纯) ，双蒸水(自制) ，
其它试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2． 1 色谱条件 色谱柱:SHIMADZU SHIM － PACK VP － ODS C18
柱(250 mm ×4． 6 mm，5 μm) ;流动相:0． 2%磷酸 －甲醇(65 ∶
35，V /V，调 pH值为 3． 0) ;流速:0． 8 ml·min －1;检测波长:320
nm;柱温:30℃。
在上述条件下，丹酚酸 K 和供试品中其它组分色谱峰可达
基线分离，峰形对称，保留时间适宜，丹酚酸 K 与其相邻色谱峰
的分离度大于 1． 5，保留时间适中。对照品和供试品的色谱图见
图 1。
图 1 对照品(上)和供试品(下)的色谱图
如图 1 所示，丹酚酸 K吸收峰的保留时间为 10． 092 min，供
试品中丹酚酸 K吸收峰的保留时间为 10． 253 min，二者基本一
致。
2． 2 对照品溶液的制备 精密称取干燥至恒重的丹酚酸 K 对照
品适量，加 0． 2%磷酸 －甲醇(65∶ 35，V /V，调 pH值为 3． 0)流动
相制成 50 μg·ml －1的对照品溶液，即得。
2． 3 供试品溶液的制备 精密称取新疆鼠尾草有效部位粉末5． 2
mg，置于 50 ml容量瓶中，加适量流动相，超声处理，使之充分溶
解，加流动相定容，摇匀，用微孔滤膜(0． 45 μm)滤过，取续滤液，
即得。
2． 4 线性关系考察 分别精密吸取对照品溶液 2，3，4，5，6，7 μl，
按照“2． 1”项下色谱条件进样，记录色谱峰面积。以色谱峰面积
Y为纵坐标，对照品的进样量 X(μg)为横坐标，进行线性回归，得
回归方程:Y = 399 206． 3X － 2 640． 2，r = 0． 999 9。结果表明丹酚
酸 K的进样量在 0． 1 ～ 0． 35 μg范围内，呈良好的线性关系。
2． 5 精密度试验 精密吸取对照品溶液 6 μl，按照“2． 1”项下色
谱条件，连续进样 5 次，记录丹酚酸 K 的峰面积，计算得 ＲSD 为
1． 18%，表明仪器的精密度良好。
2． 6 重复性试验 精密称取供试品 6 份，按照“2． 3”项下方法平
行制备供试品溶液，按照“2． 1”项下色谱条件，进样 5 μl，记录丹
酚酸 K的峰面积并计算其含量，结果供试品中丹酚酸 K 含量的
ＲSD为 0． 58%，表明本方法重复性符合分析要求。
2． 7 稳定性试验 精密称取供试品 5． 2 mg，按“2． 3”项下方法制
备供试品溶液，在 0，2，4，6，8，12 h 分别精密吸取 5μl 进样测定，
记录丹酚酸 K峰面积。计算得 ＲSD为 1． 48%，表明供试品在 12
h内稳定。
2． 8 加样回收率试验 精密称取同一批供试品粉末 9 份，分别精
密加入定量的对照品，按“2． 3”项下供试品溶液制备方法，制备
加样回收供试品溶液。按“2． 1”项下色谱条件，进样 5 μl，记录
丹酚酸 K峰面积，计算回收率，结果丹酚酸 K的平均加样回收率
为 98． 11 %，表明分析方法准确。结果见表 1。
表 1 回收率试验结果
序号
取样量相当于
对照品量 /mg
加入对照品量
/mg
实测量
/mg
回收率
(%)
平均回收率
(%)
ＲSD
(%)
1 1． 060 5 0． 6 1． 650 5 98． 33
2 0． 994 2 0． 6 1． 605 0 101． 80
3 1． 126 8 0． 6 1． 710 0 97． 20
4 1． 060 5 1． 0 2． 021 0 96． 05
5 1． 060 5 1． 0 2． 029 5 96． 90 98． 11 1． 87
6 1． 060 5 1． 0 2． 021 5 96． 21
7 1． 060 5 1． 5 2． 547 4 99． 13
8 0． 994 2 1． 5 2． 487 1 99． 53
9 1． 060 5 1． 5 2． 528 5 97． 87
2． 9 供试品中丹酚酸 K含量的测定 精密称取 6 批供试品粉末，
按“2． 3”项下方法平行制备供试品溶液，精密吸取 5 μl 进样，记
录丹酚酸 K峰面积，利用标准曲线法计算供试品中丹酚酸 K 的
含量，结果丹酚酸 K的平均含量为 638． 98 mg /g，ＲSD为 0． 87%。
3 讨论
3． 1 检测波长的选择 本实验利用紫外光谱测定仪得到丹酚酸
K的紫外吸收图谱，从图谱上看出，在 285 nm，320 nm 处均有较
大吸收，因本课题组以前的研究表明丹酚酸 K 在 320 nm 附近有
最大吸收，故本实验采用 320 nm作为最大吸收波长。
3． 2 流动相的选择 根据文献和预实验结果表明，以 0． 2%磷酸
∶ 甲醇系统作为流动相时可达到色谱峰的分离，以此为基础进行
进一步比例的筛选，发现 0． 2%磷酸:甲醇(65∶ 35 ，V /V)作为流
动相分离效果较好，保留时间长短适宜，但仍存在峰形拖尾现象，
调 pH值为 3． 0 后拖尾现象基本消失。
3． 3 供试品溶剂的选择 在预实验中考察了不同溶剂(甲醇、水、
流动相)对供试品的溶解能力，结果表明在流动相中供试品的溶
解度最好，可以满足测定需要，因此选择流动相作为溶剂。
3． 4 小结 本实验首次建立了高效液相色谱法测定新疆鼠尾草
抗糖尿病并发症有效部位中丹酚酸 K 含量的方法，具有快速灵
敏、准确可靠、简便易行、重现性好等优点，可用于控制新疆鼠尾
草抗糖尿病并发症有效部位中丹酚酸 K的含量。
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时珍国医国药 2013 年第 24 卷第 7 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2013 VOL． 24 NO． 7