全 文 ：蒲公英提取物对急性肺损伤小鼠炎症介质及 SOD含量的影响
刘利本 , 平家奇 , 李佳佳 , 刘妍 , 王韵篪 , 张雪梅＊ (延边大学农学院动物医学系 ,吉林龙井 133400)
摘要 [目的]研究蒲公英水提物对脂多糖LPS诱导小鼠急性肺损伤(ALI)炎症介质及抗氧化能力的影响。 [方法 ] LPS滴鼻建立小鼠
ALI模型 ,设空白组、模型组、蒲公英剂量(2.5、5.0、10.0mg/kg)组和地塞米松(0.5mg/kg)组。测定肺组织中超氧化物岐化酶SOD含
量 ,检测肺泡支气管灌洗液中INF-γ、NO、PGE2含量。 [结果]蒲公英水提物可增强LPS诱导的 ALI小鼠肺组织SOD的释放 ,降低 BALF中炎症介质 INF-γ、NO、PGE2的含量。 [结论 ]为蒲公英的开发利用提供理论依据。
关键词 蒲公英;脂多糖;急性肺损伤;炎症介质;SOD
中图分类号 R285 文献标识码 A 文章编号 0517-6611(2010)17-09007-01
TheEffectsofDandeliononInflammatoryMediatorsandSODinMicewithAcuteLungInjury
LIULi-benetal (DepartmentofAnimalMedicine, AgriculturalCollegeofYanbianUniversity, Longjing,Jilin133400)
Abstrsct [Objective] Theaimewastostudytheefectsofofaqueousextractofdandeliononinflammatorymediatorsandanti-oxidativecapacity
inmicewithacutelunginjuryinducedbylipopolysaccharide.[ Method] ModelsofALIwereestablishedbyintranasalinstilationofLPS, mice
wererandomlydividedintocontrolgroup, modelgroup, dandelion(2.5, 5.0, 10.0mg/kg)groupsanddexamethasone(0.5mg/kg)group.
SODactivityofthelungtissueswasdetermined, INF-γ, NOandPGE2 levelsinbronchoalveolarlavagefluid(BALF)weremeasured.[ Result]TheresultsshowedthatdifferentconcentrationsofaqueousextractofdandelioncouldenhancethereleaseofSODinlungtissues, anddecreased
thecontentofinformationmediaofINF-γ, NOandPGE2 levelsinBALFinALImice.[ Condusion] Thestudyprovidedthetheoveticalbasisfor
thedevelopmentandutilizationofdandelion.
Keywords Dandelion;Lipopolysaccharide;Acutelunginjury;Inflammatorymediators;SOD
基金项目 吉林省教育厅科研项目(吉教科合字 2008第 7号)。
作者简介 刘利本(1986-),男 ,吉林珲春人 ,硕士研究生 ,研究方向:
中药作用机理。 ＊通讯作者。
收稿日期 2010-03-22
急性肺损伤(ALI)是指由心源性以外各种肺内外致病因
素导致的急性进行性缺氧性呼吸衰竭 ,是一种常见的呼吸系
统疾病 [ 1] 。在机体发生 ALI过程中 ,伴有各种炎症介质的大
量表达 [ 2] 。蒲公英作为一种传统的中药 ,具有清热解毒 、消
肿散结 ,利尿通淋等功效。笔者通过脂多糖(LPS)诱导小鼠
建立模型 ,从消炎角度将蒲公英应用于 ALI小鼠 ,研究蒲公
英水提物对小鼠 ALI炎症介质和超氧化物歧化酶(SOD)含
量的影响 ,为蒲公英的开发利用提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 动物 昆明系小鼠 60只 ,雌雄各半(18 ～ 22 g),由延边
大学医学院实验动物中心提供 。
1.2 药品与试剂 蒲公英提取物(延边大学农学院药理室
制备 ,采用水提法);地塞米松注射液(批号:H41020055),郑
州卓峰制药厂生产;脂多糖(Escherichiacoli055:B5),购于
Sigma公司;SOD试剂盒购于南京建成生物工程研究所;小鼠
的 INF-γELISA试剂盒购于美国 Bidegend公司;PGE2 ELISA
试剂盒购于上海西塘生物技术有限公司;Griess试剂盒购于
碧云天生物技术研究所。
1.3 分组与给药 将小鼠随机分为空白组 ,模型组 ,低 、中 、
高剂量组和阳性组 。药物组剂量分别为 2.5、5.0、10.0 g/kg,
连续灌胃 5d,空白和模型组给予等体积蒸馏水 , LPS滴鼻造
模 [ 3] ,阳性组提前 1 h腹腔注射地塞米松 。
1.4 支气管肺泡灌洗液(BALF)的制备 造模后 6 h取小鼠
处死 ,剥离气管 ,用磨平的 15号针头做气管插管 , 0.5mlPBS
缓慢注入肺 ,轻轻按压胸部 ,然后回收 ,如此再重复 2次 ,总灌
洗量为 1.5ml,使其回收率达 80%,合并 3次灌洗液。
1.5 SOD、INF-γ、PGE2、NO含量的测定 制备肺组织匀浆
按试剂盒操作测定 SOD含量 ,取 BALF上清按试剂盒操作检
测 INF-γ、PGE2、NO含量 ,每组 3个重复。
1.6 数据处理 全部数据用平均数 ±标准差( x±SD)表示 ,
应用 SPSS11.5软件对数据进行单因素方差分析 。
2 结果与分析
2.1 蒲公英水提物对 ALI小鼠肺组织中 SOD和 BALF中
INF-γ含量的影响 由表 1可知 ,蒲公英各剂量组与模型组
SOD含量比较有不同程度的增加 ,低剂量组与其比较差异显
著(P<0.05),中 、高剂量组和阳性组与其比较差异极显著
(P<0.01)。蒲公英各剂量组与模型组 INF-γ含量比较有不
同程度的减少 ,低 、中剂量组与其比较差异显著(P<0.05),
高剂量组和阳性组与其比较差异极显著(P<0.01)。
表 1 蒲公英水提物对 ALI小鼠肺组织中 SOD和 BLAF中 INF-γ的
影响
Table1 EffectsofdandelionaqueousextractonSODinlungtissue
andINF-γinBLAFofALImice
组别 Groups SOD∥U/mg INF-γ∥pg/ml
空白组 Controlgroup 102.62±1.53 104.18±3.64模型组 Modelgroup 25.53±1.55 206.37±2.67低剂量组Low-dosegroup 31.74±1.62＊ 195.21±3.48＊中剂量组Medium-dosegroup 43.40±1.69＊＊ 180.28±2.84＊高剂量组High-dosegroup 65.64±1.57＊＊ 152.70±2.59＊＊阳性组 Positivecontrolgroup 92.24±1.70＊＊ 124.41±4.51＊＊
注:药物组与模型组相比 , ＊差异显著(P<0.05), ＊＊差异极显著(P
<0.01)。下同。
Note:DruggroupVSmodelgroup, ＊P<0.05, ＊＊P<0.01, thesameas
folows.
2.2 蒲公英水提物对 ALI小鼠 BALF中 NO和 PGE2含量
的影响 由表 2可知 ,蒲公英各剂量组与模型组 NO含量比
较有不同程度的减少 ,低剂量组与其比较差异显著(P<
0.05),中 、高剂量组和阳性组与其比较差异极显著(P<
0.01)。蒲公英各剂量组与模型组 PGE2含量比较也有不同
程度的减少 ,低剂量组与其比较无显著性差异 ,中 、高剂量组
(下转第 9056页)
安徽农业科学 , JournalofAnhuiAgri.Sci.2010, 38(17):9007, 9056 责任编辑 李占东 责任校对 况玲玲
清 ,建立了可特异性检测 PLPC的 DAS-ELISA方法 [ 6] 。但是
单克隆抗体的得到成本较高 ,免疫以及获得抗血清比较困
难 ,相比之下多克隆抗体成本较低 ,在免疫以及抗血清的获
得上都比较容易。该研究利用棉花黄萎菌菌丝蛋白作为抗
原制备抗体 ,方法简便且特异性 ,完全可以满足棉花黄萎菌
检测的需要;通过进一步的生物素标记和优化极大地增加其
检测灵敏度 ,为今后广泛应用奠定了基础。
(2)棉花抗病品种对于棉花黄萎病的抗病机制可以分为
寄主与病原物的互作 、组织抗性 、生理生化抗性等几方面 ,其
中生理生化抗性起着主导作用 [ 7] 。顾本康等发现了感病品
种泗棉 2号的导管细胞排列比抗病品种冀 328-1松弛 ,且感
病品种植株中棉花黄萎菌菌丝占有细胞数多于抗病品种 [ 8] ,
说明植株体内含菌量多是病症出现的重要因素之一。该研
究证明了抗病品种并不是完全阻止棉花黄萎病菌的侵入 ,而
是显著阻止了病原菌的繁殖和扩展 ,使得棉株外表不显症 ,
因此表现为抗病。对于生理生化抗性是近年来研究最多的。
Mace报道过当棉花黄萎菌侵染棉花后 ,植株体内就能产生
一系列萜醛类化合物 ,而在这些化合物中脱氧半棉酚(dHG)
是这一系列化合物中最有效的一种 ,它能够在较低浓度下即
杀死菌丝体 [ 9] 。对于酶类的作用 Liu等曾用棉花黄萎菌的
诱导子侵染亚洲棉 ,从而使法尼基焦磷酸合酶(FPS)和杜松
稀合成酶(CAD)被诱导表达 ,而这些酶正是合成上述萜醛类
所需要的 [ 10] 。该研究只是初步证明了棉花抗病品种表现为
抑制黄萎菌在体内扩展但不抗其侵入 ,具体是什么物质在抑
制棉花黄萎菌扩展中起主要作用还需进一步研究。
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(上接第 9007页)
和阳性组与其比较差异显著或极显著 (P<0.05或 P<
0.01)。
表 2 蒲公英水提物对 ALI小鼠 BLAF中 NO和PGE2的影响
Table2 EfectsofdandelionaqueousextractonNOandPGE2 in
BLAFofALImice
组别Groups NO∥μmol/ml PGE2∥ng/ml
空白组 Controlgroup 383.60±2.07 1.05±0.11
模型组 Modelgroup 565.40±4.04 2.96±0.27
低剂量组 Low-dosegroup 534.40±4.39＊ 2.66±0.15
中剂量组 Medium-dosegroup 474.20±3.77＊＊ 2.04±0.21＊
高剂量组 High-dosegroup 444.60±5.89＊＊ 1.86±0.23＊＊
阳性组 Positivecontrolgroup 415.20±3.70＊＊ 1.60±0.13＊＊
3 结论与讨论
ALI以肺部炎症病理变化为主 ,以弥散性肺泡损伤 、炎
性细胞浸润及肺泡水肿等为特征 ,大量临床资料表明 , LPS
是引起 ALI并导致死亡的主要原因之一 , LPS通过与相关的
受体结合 ,跨膜后导致单核细胞活化 ,并分泌炎性因子和炎
症介质 ,增加细胞间黏附分子 ,产生级联放大效应 ,形成复杂
的系统炎症效应 ,同时引起机体清除代谢产生的有害物质能
力降低 ,导致大量有害自由基积累 ,最终导致肺组织细胞的
损伤 [ 4] 。
SOD是一种源于生命体的活性物质 ,能消除有害的自由
基 ,是体内抗氧化性的一个主要指标 [ 5] 。当机体发生 ALI
时 , INF-γ、PGE2 、NO等致炎因子高度表达 , INF-γ是由 Th1
细胞分泌的促炎细胞因子 ,引起炎症反应加剧。 PGE2是由
花生四烯酸经环氧合酶 -2(COX-2)催化生成 ,致痛和产热引
起炎症反应 [ 6] 。NO是由诱导型一氧化氮合酶(iNOS)诱导
生成 ,大量的 NO能加快炎症反应进程 [ 7] 。该研究表明 ,蒲
公英各剂量组肺组织中 SOD含量均高于模型组 ,说明蒲公
英能改善 LPS致 ALI小鼠的抗氧化能力。蒲公英各剂量组
INF-γ、PGE2和 NO含量均低于模型组 ,说明蒲公英能通过抑
制促炎介质的释放来改善 LPS所致 ALI小鼠的损伤。提示
蒲公英可以通过抑制炎症反应及抗氧化能力 ,对 ALI起到一
定的保护作用 ,但作用机理需进一步研究 。
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