全 文 ：中国药物警戒第 9卷第 9期 2012年 9月 September, 2012, Vol.9, No.9
摘要：目的探讨丝毛飞廉总黄酮（FGC）对绵羊红细胞（SRBC）诱发迟发型变态反应致小鼠肝损伤的保护作用。方法
以小鼠为实验对象，腹腔注射 SRBC1.0×108·0.1mL-1·10g-1，5天后肝穿刺 SRBC 0.5×108·0.2 L-1·10g-1攻击造模，丝
毛飞廉总黄酮为实验药物进行灌胃，最后测定小鼠脏器指数、血清中丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转
移酶（AST）含量以及小鼠肝组织中超氧化物歧化酶（SOD）活性及丙二醛（MDA）含量。结果模型组脏器指数以及血
清 ALT与 AST与空白组比较均有显著性差异，绵羊红细胞诱发迟发型变态反应致小鼠肝损伤实验模型建立成功；
丝毛飞廉总黄酮给药组与造模组比较，小鼠脏器指数、血清中 AST、ALT含量以及肝组织中超氧化物歧化酶（SOD）活性
及丙二醛（MDA）含量均有显著性差异。结论丝毛飞廉总黄酮对绵羊红细胞诱发迟发型变态反应致小鼠肝损伤具有
很好的保护作用。
关键词：丝毛飞廉总黄酮；丙氨酸氨基转移酶；天门冬氨酸氨基转移酶；超氧化物歧化酶；丙二醛；卡介苗；脂多糖；绵
羊红细胞
Study on the Protective Effect of Total Flavonoids from Garduus Crispus. L for Mice Liver Injury
CAI Wei1 GUO Feng-Xia2,3 (1Qinghai Center for ADR Monitoring, Qinghai Xining 810007, China; 2Life Science
and Geographical Science College of Qinghai Normal University; Qinghai Xining 810008, China; 3Key Laboratory
of Environment and Resources of Qinghai-Tibet Plateau under the National Education Ministry, Qinghai Xining
810008, China)
Abstract: Objective To research the protective effect of total flavonoids from Garduus Crispus. L for mice liver injury
models caused by delayed hypersensitivity induced by SRBC. Methods This experiment used mice as experimental
objects. The model was built by SRBC 1.0×108·0.1mL-1·10g-1 ip followed by SRBC 0.5×108·0.2μL-1·10g-1 liver
puncture attack 5 days later. Using total flavonoids from Garduus Crispus. L ig as experimental drug, the viscera index,
plasma ALT and AST levels as well as liver SOD activity and MDA content were determined at last. Results The
visceral index and plasma ALT and AST in model group were significantly higher than that in placebo group, showing
the autoimmune liver damage test model was built successfully. The viscera index, plasma ALT and AST levels as
well as liver SOD activity and MDA content in each treatment group were significantly superior to that in model
control group (P <0.05). Conclusion Total flavonoids from Garduus Crispus. L can effectively resist the mice liver
damage caused by delayed hypersensitivity induced by SRBC.
Key words：total flavonoids from Garduus Crispus L.; ALT; AST; SOD; MDA; BCG; LPS; SRBC
μ
丝毛飞廉总黄酮肝损伤保护作用的研究
蔡伟 1 郭凤霞 2，3 （1青海省药品不良反应监测中心，青海西宁 810007；2青海师范大学生命与地理科学学院，青海
西宁 810008；3青藏高原环境与资源教育部重点实验室，青海西宁 810008）
中图分类号：R282;R285.5 文章标识码:A 文章编码：1672- 8629（2012）09- 0513- 03
作者简介：蔡伟，男，本科，主治医师，药品不良反应监测。
丝毛飞廉（Garduus nutans L.）为菊科飞廉属植物，一
般全草或根入药，分布全国各地。其性平味苦,具祛风、
清热、利湿、凉血止血、活血消肿、凉风散瘀的功效，主要
用于治疗风热感冒、头风晕眩、皮肤瘙痒、尿路感染、跌
打瘀肿、疔疮肿毒、烫火伤等。现代研究表明飞廉含有生
物碱飞廉碱和去氢飞廉碱，对心血管系统有重要作用[1]，
还具有降压和抗炎的作用[2]。目前国内外学者对飞廉属
植物的黄酮类物质的研究文献报道较少。由于黄酮类有
效成分对治疗冠心病、老年性痴呆、脑血栓、神经系统疾
病和消除自由基、抑菌、抗癌等方面有显著效果，且副作
用低[3]。由绵羊红细胞诱发迟发型变态反应致肝损伤属
典型的细胞免疫性肝损伤模型，其机制与临床慢性活动
性肝炎恶化的关联值得进一步研究。该模型适应于新型
免疫调节剂在肝脏类疾病中治疗用药的开发和机制研
究。本研究提取有效部位丝毛飞廉总黄酮，观察其对绵
羊红细胞诱发迟发型变态反应致小鼠肝损伤的保护作
用，并初步探讨其保肝降酶的作用机制。
1 材料
1.1 药物
丝毛飞廉总黄酮的提取：本实验采用乙醇提取法 [4]
·基础研究·
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提取，精确称取烘干粉碎后的丝毛飞廉种子 1 100g，加
入 6倍量的 95%的乙醇放在恒温震荡器加热震荡提取
3h，抽滤，滤渣再加入 6倍量的 95%的乙醇提取，连续提
取 3～4次[5]，合并滤液，弃去药渣，将所得滤液减压回流
分离出乙醇至无醇味，再将所得的浓缩液用乙酸乙酯进
行萃取 2～3次得乙酸乙酯溶液，减压回收乙酸乙酯，蒸
干浸液得到浅黄色松散粉末，再用 3 倍量的石油醚浸
提 24h，过滤，干燥，得到丝毛飞廉植物中的总黄酮化合
物 14.6g，储存于 4℃冰箱备用。
绵羊红细胞实验室自制，临用时配成红细胞个数为
1×109·mL-1，于 4～8℃条件下储存。FGC由本实验室提
取 [6]，临用时加入蒸馏水配制成 FGC 高、中、低剂量组
（200、100、50mg·mL-1），给药剂量相当于总黄酮含量分
别为 56g·kg-1、14g·kg-1，4℃保存冰箱备用；联苯双酯滴
丸（规格：1.5mg/丸），购自德州德药制药有限公司，批号：
090505；阳性药物联苯双酯给药剂量为 150mg·kg-1。
1.2 试剂
过氧化物歧化酶（SOD）检测试剂盒，南京建成生物
工程研究所，批号：20090526；丙二醛（MDA）检测试剂
盒，南京建成生物工程研究所，批号：20090526；丙氨酸
氨基转移酶（ALT）试剂盒，南京建成生物工程研究所产，
批号：20090526；天门冬氨酸氨基转移酶（AST）试剂盒，
南京建成生物工程研究所，批号：20090526。
1.3 实验动物
昆明种小鼠 60只，雌雄各半，6～8周龄，体重 20±
2g，由青海省地方病研究所提供（批号：青医动字第 01
号）。实验前于动物实验室内正常喂养一周，以适应实验室
环境。试验期间自由饮水、摄食、室内温度控制在 22～25℃。
1.4 仪器
求精微量移液器（热电仪器有限公司），DZKWC仪
表恒温水浴锅（上海申光仪器仪表有限公司），海尔冰箱
（青岛海尔股份有限公司），KQ2200B型超声波清洗器（昆
山市超声仪器有限公司），RE－52B旋转蒸发器（上海亚荣
仪器有限公司），UV- 9100紫外可见分光光度计（北京瑞利
分析仪器公司），奥豪斯AdventurerTM电子天平（奥豪斯国
际贸易有限公司），DL25M低速冷冻离心机（长沙湘仪
离心机仪器有限公司）。
2 方法
2.1 小鼠细胞免疫性肝损伤模型的制备及给药方案
母绵羊颈静脉无菌采血。将 40mL的血与 60mL阿
氏液混匀，冷藏备用。将 10mL阿氏液保存的绵羊血通
过纱布过滤倒入 40mL刻度离心管内，另加 30mL巴比妥
缓冲液（VBS），混匀，在水平转子离心机上离心 10min
（3000rpm·min-1）。吸弃上清液，加 VBS至原来的量，再次
离心，如此离心洗涤 3次，吸弃上清液。每管约加 10mL
VBS，混匀。将悬液倒入 15mL容量的刻度离心管中，离
心 10min（3000 rpm·min-1），采用血球计数板将红细胞配
成 1×109·mL-1，储存于 4～8℃冰箱备用。60只小鼠随
机分为正常组、模型组、联苯双酯组、丝毛飞廉总黄酮高
剂量组、丝毛飞廉总黄酮中剂量组、丝毛飞廉总黄酮低
剂量组。全部小鼠在实验期间均正常饮水、饮食。实验开
始的第 1天，按小鼠体重 0.01mL·g-1致敏和给药。除正
常组腹腔注射（ip）生理盐水 0.01mL·g-1外，各组用 SR-
BC 1.0×108·0.1mL-1·10g-1 ip致敏，致敏的第 1 天经灌
胃（ig）给药，每天 1次，连续 10天。正常组和模型组给予
同体积的生理盐水，5天后再次 SRBC1.0×108·0.1mL-1·
10g- 1，ip致敏，再 5天后用 SRBC 0.5×108·0.2 L-1·10g-1
肝穿刺攻击 [4]，24h后进行称重，眼眶采血，脱颈处死小
鼠，并摘取肝脏、脾脏、胸腺快速称重，计算脏器指数（每
10g体重的肝脏毫克数）。分离血清进行 ALT、AST指标
的测定。取部分肝组织，用冷生理盐水漂洗后制成 1%和
10%的肝匀浆，离心，取上清液，检测 SOD、MDA各项指
标。ALT、AST、MDA、SOD测定均按照试剂盒说明书进行。
2.2 数据统计处理
本实验所有实验数据均采用平均数±标准差（ ±
SD）表示，由计算机用 SPSS 13.0统计软件包中的 ANOVA
法进行单因素方差分析处理，组间比较采用 t 检验处
理，P >0.05认为无显著性差异，P <0.05认为有显著性差
异，P <0.01认为有极显著性差异。
3 结果
3.1 丝毛飞廉总黄酮对绵羊红细胞诱发迟发型变态
反应致肝损伤脏器指数的影响
实验数据经统计分析表明：与正常对照组相比较，
模型组小鼠的肝脏、脾脏指数均显著升高（P <0.05）；与
模型组比较，丝毛飞廉总黄酮各给药组能显著降低肝脏
指数（P <0.05）；胸腺指数与模型组比较，丝毛飞廉总黄
酮高剂量组有显著性差异（P <0.05）；对于肾脏指数和脾
脏指数，丝毛飞廉总黄酮各剂量给药组与模型组比较，
差异均无显著性（表 1）。
3.2 丝毛飞廉总黄酮对绵羊红细胞诱发迟发型变态
反应致肝损伤血清指数的影响
实验数据经统计分析表明：模型组小鼠 ALT、AST
活性较正常对照组明显升高，两者之间比较差异有显著
性（P <0.05），说明造模成功。丝毛飞廉高、低剂量组血清
ALT、AST含量均明显低于模型组，差异有显著性（P<0.05），
说明丝毛飞廉高、低剂量给药组对绵羊红细胞诱发迟发
型变态反应致肝损伤有一定的影响，起到了保肝、降酶
的作用（表 2）。
χ
μ
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表 1 药物对绵羊红细胞诱发迟发型变态反应致肝损伤脏
器指数的影响（ ±SD，n=10）
组别
给药剂量
（g·kg-1）
肝脏指数
（mg·g- 1）
脾脏指数
（mg·kg-1）
胸腺指数
（mg·kg- 1）
空白组 - 51.72±5.58# 4.56±1.47 3.05±0.67#
模型组 - 73.20±4.67* 4.64±0.93 2.23±0.10*
联苯双酯组 0.15 51.18±8.96# 4.70±1.37 2.88±1.10#
丝毛高剂量组 56 55.73±6.41# 4.99±0.97 3.88±1.27*#
丝毛低剂量组 14 57.47±5.53# 4.72±0.81 2.09±1.36
χ
3.3 丝毛飞廉总黄酮对绵羊红细胞诱发迟发型变态
反应致肝损伤小鼠肝组织中超氧化物歧化酶活性及
丙二醛含量的影响
实验数据经统计分析表明：模型组小鼠肝组织中的
SOD含量与空白组小鼠比较有显著降低（P <0.05）；模型
组小鼠的MDA含量与空白组比较有显著升高（P <0.05），
说明造模成功。与模型组比较，丝毛飞廉总黄酮高剂量
给药组 SOD含量有极显著升高（P <0.01）；与模型组比
较，高剂量组 MDA含量有极显著降低（P <0.01）。证明
丝毛飞廉总黄酮对所致绵羊红细胞诱发迟发型变态反
应致肝损伤小鼠肝组织中超氧化物歧化酶 SOD活性及
丙二醛 MDA含量的影响（表 3）。
4 讨论
肝损伤是多种肝脏疾病共有的一种病理变化，其机
制复杂。随着现代医学的发展，对中医防治肝损伤作用
机制的认识也由保护肝细胞膜、降低转氨酶等浅层面逐
渐深入到调节细胞因子的相互作用而减少肝细胞凋亡。
近年来的研究中多数学者认为乙型肝炎病毒感染引起
的肝损伤主要与机体免疫应答有关，机体的免疫应答一
方面导致肝细胞的损伤，另一方面免疫功能调节的失常
又是肝炎慢性化的主要原因。
许多研究表明，免疫反应是引起肝损伤的重要机制
之一。建立细胞免疫机制致肝损伤的动物模型无论对于
阐明肝损伤过程中的免疫学机制及开发新型肝炎免疫
药物均有重要的意义。迟发型变态反应（DTH）是一种典
型的细胞免疫反应，以单核细胞和淋巴细胞等的浸润为
特征的炎症反应。为模拟临床肝炎的细胞免疫病理过
程，将 DTH反应导入肝脏，诱发肝内的炎症反应。即给
事先剔去腹毛的小鼠腹部涂 1%PCI的乙醇溶液 0.1mL致
敏，5d后重复 1次，第二次致敏的 5d后，用 0.2%～0.5%
PCI的橄榄油溶液 10mL肝内注射攻击。18h后与各种对
照组相比，模型组血清 ALT和 AST活力显著上升，肝组
织病理检查肝细胞的凝固性坏死，门管区有大量的炎性
细胞浸润，证实了肝损伤模型的成立。这种肝损伤可因
抗原致敏次数的增加或用环磷酰胺在抗原致敏前 1次
注射来加重，即损伤的程度与免疫反应的强度成正比[4，7]。
这种在肝脏局部诱发的炎症反应所造成的损伤，往往不
局限于抗原注射部位，甚至漫及整个肝脏。这种现象的
发生很可能与 TNF-α和 IFN-α等细胞因子的作用有
关。其机理与临床慢性活动性肝炎恶化的关联值得进一
步研究。该模型适应于新型免疫调节剂在肝脏类疾病中
治疗用药的开发和机制研究[8]。
血清转氨酶的测定目前被认为是反映肝细胞损害
程度的标准试验指标[9]。SOD和 MDA含量的测定也是
细胞氧化损伤的一个重要检测指标[10，11]。SOD是细胞内
主要的防御性抗氧化酶，能够清除自由基，并可抑制自
由基启动的脂质过氧化反应，从而起到保护细胞膜结构
与功能的完整作用。SOD对机体的氧化与抗氧化平衡起
着至关重要的作用，此酶能清除超氧阴离子自由基（O2-）
保护细胞免受损伤。MDA是机体通过酶系统与非酶系
统产生氧自由基，后者能攻击生物膜中的不饱和脂肪
酸，引发脂质过氧化作用，并因此形成脂质过氧化物。
如：醛基、酮基、羟基、羰基，以及新的氧自由基等。MDA
的测定常常与 SOD的测定相互配合，SOD活力的高低
间接反映了机体清除氧自由基的能力，而 MDA的高低
又间接地反映了机体细胞受自由基攻击的严重程度。
在本实验研究中，模型组小鼠的脏器指数，血清ALT、
AST 的含量，肝组织中 SOD、MDA的含量相对空白对
注：*与空白组比较 P <0.05，# 与模型组比较 P <0.05，# # 与模型组比较 P <0.01
表 2 药物对绵羊红细胞诱发迟发型变态反应致肝损伤血清
指数 AST、ALT的影响（ ±SD，n=10）
组别 数量（n）
给药剂量
（g·kg-1）
AST（OD） ALT（OD）
空白组 10 - 0.322±0.023# 0.405±0.040#
模型组 10 - 0.519±0.034* 0.527±0.039*
联苯双酯组 10 0.15 0.391±0.032# 0.415±0.036#
丝毛高剂量组 10 56 0.456±0.068# 0.442±0.034#
丝毛低剂量组 10 14 0.452±0.027# 0.434±0.037#
χ
注：*与空白组比较 P <0.05，# 与模型组比较 P <0.05，# # 与模型组比较 P <0.01
表 3 药物肝组织中超氧化物歧化酶 SOD活性及
丙二醛 MDA含量的影响（ ±SD，n=10）χ
组别 数量（n）
给药剂量
（g·kg-1）
SOD
（U·mg-1pro）
MDA（nmol·
mg-1pro）
空白组 10 - 121.1±6.4# 0.94±0.08#
模型组 10 - 77.8±5.5* 1.62±0.02*
联苯双酯组 10 0.15 99.2±6.3*# 1.12±0.05#
丝毛高剂量组 10 56 105.7±6.8## 0.90±0.03##
丝毛低剂量组 10 14 82.7±4.0* 1.46±0.05*
注：*与空白组比较 P <0.05，# 与模型组比较 P <0.05，# # 与模型组比较 P <0.01
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照组都有显著差异，说明肝损伤造模成功；飞廉总黄酮
给药组与模型组比较，ALT、AST的含量显著降低，SOD、
MDA的含量也有显著差异，说明飞廉总黄酮对绵羊红
细胞诱发的迟发型变态反应所致的免疫性肝损伤有较
好的保肝、降酶作用。本实验结果为临床上进一步了解
丝毛飞廉药理作用奠定基础，为利用丝毛飞廉这一宝贵
植物资源、开发新药及保健品，提供一定的药理学依据。
参考文献：
[1] 王美英.菊科植物飞廉的降压作用研究[J].中医药学刊,2003,21
(9):1591.
[2] 吕惠子,崔兴日,朴光春,等.长白山部分菊科植物中抗炎药物的
筛选[J].2003,26(4):241- 242.
[3] 朱海扬,曾慧兰.黄酮类化合物药理作用的研究进展[J].山东医
药,2009,49(17):114- 115.
[4] 刘淼.中药成分提取分离与制剂加工新技术型工艺新标准[M].
中国教育出版社,北京,2004:776- 770.
[5] 李洪雄,彭志远,邹海英.葛根黄酮的提取与应用[J].吉首大学学
报(自然科学版),2006,27(3):113- 116.
[6] 徐强,王蓉,徐丽华.迟发型变态反应机制致肝损伤动物模型的
建立[J].中国免疫学杂志,1993,9：287.
[7] Xu Q,Wang R,Jiang J,et al. Liver injury model induced in mice by
a cellular immunologicmechanism- Delayed- typehypersensitivity-
induced liver injury to picryl chloride and phenotype of effector
cell[J].Cell Immunol ,1996,167:38.
[8] 周春祥,徐强,曹劲松,等.四逆散改善细胞免疫性肝损伤作用机
理研究[J].中国中医基础医学杂志, 2002,8(5):47- 49.
[9] 聂叔琴,王金华,李兰芳,等.乙肝舒对小鼠细胞免疫功能及白细
胞介素 - 2生成的影响[J].中国实验方剂学杂志,1997,3(2):35.
[10]王明宇,林志彬.灵芝三萜类成分在体内外对小鼠免疫性肝损
伤的影响[J].中国药学杂志,2000,35:809- 812.
[11]王华,沈玉先,魏伟,等.褪黑素对免疫性肝损伤小鼠自由基和细
胞因子的影响[J].中国药理学通报,2002,18:331- 334.
（收稿日期：2012- 03- 26 编辑：郭述金）
摘要：目的以山豆根不同组分的小鼠急毒研究为导向，进行山豆根毒性物质基础生物碱类物质的质量控制方法学
研究。方法用高效液相色谱法测定山豆根全组分、水提组分、醇提组分中苦参碱和氧化苦参碱的含量。色谱条件：色
谱柱用氨基键合硅胶为填充剂（250mm×4.6mm，5μm），流动相：乙腈 - 无水乙醇 - 3%磷酸溶液（80:10:10），流速：
1.0mL/min，检测波长：205nm，柱温：30℃。结果苦参碱进样量在 0.102～2.04 g范围内，氧化苦参碱进样量在 0.156～
3.12 g范围内与峰面积呈良好的线性关系，平均回收率均在 99%以上。对山豆根不同组分中的苦参碱和氧化苦参
碱的含量测定，发现苦参碱的含量大小为：水提组分＞醇提组分＞全组分，氧化苦参碱的含量大小为：全组分＞醇提
组分＞水提组分。结论高效液相色谱法测定山豆根中苦参碱和氧化苦参碱的含量，此方法线性关系良好，精密度、
稳定性、重现性均较好，回收率较高。山豆根不同组分中苦参碱、氧化苦参碱的含量大小与急性毒性间均有一定的关
系，但不完全一致。
关键词：山豆根；苦参碱；氧化苦参碱；急毒
Study on Quality Control Methodology of Alkaloid Substance from Radix et Rhizome Sophorae Tonkinensis
Based on Acute Toxicity
ZHENG Li-na1,2 REN Hai-yong3 LI Su-jun4 SUN Rong1* (1Shandong Academy of Chinese Medicine, Shandong
Jinan 250014, China; 2Tianjin University of Traditio nal Chinese Medicine, Tianjin 300193, China; 3JinanXinglin
BiologyTechnologyLimited Company, Shandong Jinan 250101, China; 4Shandong University of Traditional Chinese
Medicine, Shandong Jinan 250355, China; 5Harbin University of Commerce, Heilongjiang Harbin150000, China)
μ
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基于急毒的山豆根生物碱类物质质量控制方法学研究
郑丽娜 1，2 任海勇 3 李素君 4 谢元璋 5 孙蓉 1* （1山东省中医药研究院，山东济南 250014；2天津中医药大学，天津
300193；3济南杏林生物技术有限公司，山东济南 250101；4山东中医药大学，山东济南 250355，5哈尔滨商业大学，
黑龙江哈尔滨 150000）
中图分类号：R282；R285.5 文献标识码：A 文章编号：1672- 8629（2012）09- 0516- 04
基金项目：国家重点基础研究发展计划（973）中医基础理论专项资助项目（2009CB522802）；山东省科技平台建设项目（2008GG2NS02021）
作者简介：郑丽娜，女，硕士在读，药物分析与中药毒代研究。
*通讯作者：孙蓉，女，研究员，硕士生导师，中药药理与毒理研究。E- mail：sunrong107@163.com
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