全 文 ：２９卷０６期
Ｖｏｌ．２９，Ｎｏ．０６
草　业　科　学
ＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＬ　ＳＣＩＥＮＣＥ
９３７－９４２
０６／２０１２
青藏高原老芒麦和垂穗披碱草
ＳＳＲ分子标记鉴别
雷云霆１，２，窦全文１
（１．中国科学院西北高原生物研究所，青海 西宁８１０００１；２．中国科学院研究生院，北京１０００４９）
摘要：垂穗披碱草（Ｅｌｙｍｕｓ　ｎｕｔａｎｓ）和老芒麦（Ｅ．ｓｉｂｉｒｉｃｕｓ）是青藏高原高寒区广泛种植的优质牧草草种，由于生态
适应性变异，在对一些野生种质资源鉴定中，二者常易混淆。为了区别鉴定垂穗披碱草和老芒麦，本研究结合细
胞学鉴定，利用不同来源的老芒麦和垂穗披碱草种质材料，对源于普通小麦（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ　ａｅｓｔｉｖｕｍ）的４２对ＳＳＲ引
物进行筛选。结果表明，筛选出的小麦ＥＳＴ－ＳＳＲ引物Ｘｃｗｅｍ３８ｃ在垂穗披碱草中的多态性标记可以有效区分垂
穗披碱草和老芒麦。
关键词：垂穗披碱草；老芒麦；ＳＳＲ分子标记
中图分类号：Ｓ５４３＋．９０１；Ｑ９４３．２　　　文献标识码：Ａ　　　文章编号：１００１－０６２９（２０１２）０６－０９３７－０６＊
　　老芒麦（Ｅｌｙｍｕｓ　ｓｉｂｉｒｉｃｕｓ）和垂穗披碱草（Ｅ．
ｎｕｔａｎｓ）是禾本科小麦族披碱草属多年生疏丛草本
植物，是青藏高原高寒区具有广泛分布的野生资源。
老芒麦和垂穗披碱草对该地区极端寒冷干旱的生态
环境具有良好的适应性和广泛的生态可塑性［１－２］，且
高产优质，故已经成为该地区栽培利用的最为广泛
的当家牧草草种［３－４］。目前生产中，主要栽培利用的
老芒麦和垂穗披碱草品种都是在搜集当地野生种质
资源的基础上，通过筛选、鉴定、选育而来的应用面
积较广的品种有同德老芒麦、青牧１号、川草１号
等［５－７］。青藏高原分布的老芒麦和垂穗披碱草野生种
质资源，是对这两个草种进行进一步遗传改良的重要
物质基础，该地区生长的这两个物种野生种质资源的
采集、鉴定对于高寒牧草育种具有重要意义。
老芒麦和垂穗披碱草皆为花序下垂类披碱草属
物种，在经典的分类学上，通过一些形态学特征可将
这两个物种进行很好地区分。但是，在实际野外种
质资源采集中，由于形态学特征受到生长环境的影
响，对二者进行准确地区分比较困难。卢红双等［８］
对于来源于不同地区的４９份穗型下垂类披碱草进
行形态学鉴定和聚类分析研究后认为，老芒麦和垂
穗披碱草在长期适应进化过程中，两个种不同的生
态型在形态性状上具有较多的性状交叉，使得分类
学的鉴定很困难。在对从美国国家植物种质资源库
（ＮＰＧＳ）引进的１０多份垂穗披碱草种质利用细胞
学进行鉴定时，发现其中有部分种质实际上是老芒
麦。由此可见，在野外种质资源搜集中，将老芒麦和
垂穗披碱草混淆是一个比较常见的问题。
在细胞学水平上，老芒麦是异源四倍体物种，染
色体数为２８，染色体组组成为ＳｔＳｔＨＨ［９］；垂穗披碱
草为异源六倍体物种，染色体数为４２，染色体组组
成为ＳｔＳｔＨＨＹＹ［１０］，其中Ｓｔ组来自拟鹅冠草属
（Ｐｓｅｕｄｏｒｏｅｇｎｅｒｉａ）［１１］，Ｈ 组 来 自 大 麦 属 （Ｈｏｒ－
ｄｅｕｍ）［１２］，Ｙ组的来源尚不清楚［１３］。显然，通过细
胞学观察，可以将这两个物种很清楚地区分开来。
但实际工作中，染色体的准确鉴定一般需要具有一
定细胞学研究经验的研究者，而且操作过程相对费
时、费力。ＤＮＡ分子标记具有多态性高，无组织、器
官及发育时期的特异性，不受环境条件的影响等优
点，分子标记技术已经应用于植物遗传育种的各个
领域，尤其是基于ＰＣＲ反应的分子标记技术，由于
操作简便、快速，现已成为众多实验室的常规技术手
段。在众多分子标记类型中，ＳＳＲ（Ｓｉｍｐｌｅ　Ｓｅｑｕｅｎｃｅ
Ｒｅｐｅａｔ）分子标记具有共显性、重复性好、稳定性高
等优点，尤其受到遗传育种工作者的青睐。
本研究首先利用细胞学技术对老芒麦和垂穗披
＊ 收稿日期：２０１１－０９－１８　　接受日期：２０１１－１２－０２
基金项目：国家科技支撑计划项目（２００９ＢＡＣ６１Ｂ０３－６）；青海省重点科技攻关项目（２００８－Ｎ－１６１）
作者简介：雷云霆（１９８５－），男，四川阆中人，在读硕士生，研究方向为植物遗传育种。Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｅｉｙｕｎｔｉｎｇ＠１６３．ｃｏｍ
通信作者：窦全文　Ｅ－ｍａｉｌ：ｄｏｕｑｗ＠ｎｗｉｐｂ．ｃａｓ．ｃｎ
ＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＬ　ＳＣＩＥＮＣＥ（Ｖｏｌ．２９，Ｎｏ．０６） ０６／２０１２
碱草种质进行鉴定，然后利用普通小麦（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ
ａｅｓｔｉｖｕｍ）中开发出的ＳＳＲ分子标记对老芒麦和垂
穗披碱草进行多态性筛选，并对筛选出的多态性标
记进行广泛性验证，在此基础上，筛选出能够鉴别老
芒麦和垂穗披碱草种质的ＳＳＲ分子标记。
１　材料与方法
１．１材料　研究材料由两部分组成，一部分材料由
美国国家植物种质库（ＮＰＧＳ）引进（表１），这部分材
料被原始搜集者鉴定为垂穗披碱草，因此均被当作
垂穗披碱草种质引进；另一部分材料在青海当地搜
集（表２），其中多叶老芒麦（Ｑｉｎｇｍｕ　Ｎｏ．１）和同德
老芒麦（Ｔｏｎｇｄｅ）是高寒牧区广泛种植的品种，其他
为野外采集材料，这些材料种名鉴定由中国科学院
西北高原生物研究所专门从事小麦族分类学研究的
专家完成。青海当地材料和野外采集材料均为种子
成熟期采集的种子，干燥环境保存备用。
１．２方法
１．２．１细胞学鉴定　经过低温破除休眠处理的披碱
草种子在室温下发芽，剪取１～２ｃｍ胚根，冰水预处
理２４ｈ，卡诺液室温固定２ｈ以上，切取根尖分生区
用４５％醋酸压片。制片首先在Ｌｅｉｃａ显微系统相差
装置下进行观察，选取中期分裂相良好的制片在
－８０℃冰箱冰冻处理１ｈ后揭片，然后利用ＤＡＰＩ
进行套染，利用Ｌｅｉｃａ显微系统荧光装置进行观察
和照相。
表１　引进的垂穗披碱草材料
Ｔａｂｌｅ　１　Ｅｌｙｍｕｓ　ｎｕｔａｎｓ　ｉｎｔｒｏｄｕｃｅｄ　ｆｒｏｍ　ＮＰＧＳ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｓｔｕｄｙ
序号
Ｎｏ．
保存号
Ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ　ｃｏｄｅ
采集地
Ｏｒｉｇｉｎｓ
１ ＰＩ　４９９４５０ 内蒙Ｉｎｎｅｒ　Ｍｏｎｇｏｌｉａ
２ ＰＩ　４９９４５１ 甘肃Ｇａｎｓｕ
３ ＰＩ　４９９６１１ 甘肃Ｇａｎｓｕ
４ ＰＩ　５０４４５９ 内蒙Ｉｎｎｅｒ　Ｍｏｎｇｏｌｉａ
５ ＰＩ　５３１６４３ 四川Ｓｉｃｈｕａｎ
６ ＰＩ　５３１６４４ 甘肃Ｇａｎｓｕ
７ ＰＩ　５３１６４５ 青海Ｑｉｎｇｈａｉ
８ ＰＩ　５４７３９４ 内蒙Ｉｎｎｅｒ　Ｍｏｎｇｏｌｉａ
９ ＰＩ　６１９５１６ 四川Ｓｉｃｈｕａｎ
１０ ＰＩ　６１９５７５ 新疆Ｘｉｎｊｉａｎｇ
１１ ＰＩ　６１９５９０ 西藏Ｔｉｂｅｔ
１２ ＰＩ　６２８６７５ 新疆Ｘｉｎｊｉａｎｇ
１３ ＰＩ　６２８６９８ 甘肃Ｇａｎｓｕ
１４ ＰＩ　６５５１８６ 甘肃Ｇａｎｓｕ
表２　在青海地区搜集的披碱草属野生材料和品种
Ｔａｂｌｅ　２　Ｗｉｌｄ　Ｅｌｙｍｕｓ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｃｏｌｅｃｔｅｄ　ｉｎ　Ｑｉｎｇｈａｉ
序号
Ｎｏ．
保存号
Ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ
ｃｏｄｅ
物种
Ｓｐｅｃｉｅｓ
采集地
Ｏｒｉｇｉｎｓ
１５ Ｔｏｎｇｄｅ 老芒麦Ｅｌｙｍｕｓ　ｓｉｂｉｒｉｃｕｓ 同德Ｔｏｎｇｄｅ
１６
Ｑｉｎｇｍｕ
Ｎｏ．１
老芒麦Ｅｌｙｍｕｓ　ｓｉｂｉｒｉｃｕｓ 同德Ｔｏｎｇｄｅ
１７ Ｅ１ 垂穗披碱草Ｅｌｙｍｕｓ　ｎｕｔａｎｓ 果洛Ｇｕｏｌｕｏ
１８ Ｅ２ 垂穗披碱草Ｅｌｙｍｕｓ　ｎｕｔａｎｓ 西宁Ｘｉｎｉｎｇ
１９ Ｅ３ 垂穗披碱草Ｅｌｙｍｕｓ　ｎｕｔａｎｓ 西宁Ｘｉｎｉｎｇ
２０ Ｅ４ 垂穗披碱草Ｅｌｙｍｕｓ　ｎｕｔａｎｓ 西宁Ｘｉｎｉｎｇ
２１ Ｅ５ 老芒麦Ｅｌｙｍｕｓ　ｓｉｂｉｒｉｃｕｓ 西宁Ｘｉｎｉｎｇ
２２ Ｅ６ 老芒麦Ｅｌｙｍｕｓ　ｓｉｂｉｒｉｃｕｓ 西宁Ｘｉｎｉｎｇ
２３ Ｅ７ 老芒麦Ｅｌｙｍｕｓ　ｓｉｂｉｒｉｃｕｓ 西宁Ｘｉｎｉｎｇ
１．２．２引物筛选与ＰＣＲ扩增　从公布在国际小麦
族协作网（ｗｗｗ．ｗｈｅａｔ．ｐｗ．ｕｓｄａ．ｇｏｖ／）的小麦基
因组ＳＳＲ和ＥＳＴ－ＳＳＲ引物中挑选４２对引物（引物
由上海生工生物工程公司合成）。参考李景环等［１４］
的ＣＴＡＢ法提取所需披碱草属材料总ＤＮＡ。ＰＣＲ
反应体系和程序参照Ｒｄｅｒ等［１５］的方法，通过优化
调整最终优化的２５μＬ　ＰＣＲ扩增体系：模板ＤＮＡ
１．５μＬ （５０ｎｇ·μＬ
－１），１０×ＰＣＲ　Ｂｕｆｆｅｒ　２．５μＬ
（含 Ｍｇ２＋），ｄＮＴＰ　２μＬ（２．５ｍｍｏｌ·μＬ
－１），Ｔａｑ
ＤＮＡ聚合酶０．２μＬ（５Ｕ·μＬ
－１），上下游引物均为
１．０μＬ（１０μｍｏｌ·μＬ
－１）；ｄｄＨ２Ｏ补足体积。ＰＣＲ
扩增条件：９４℃预变性５ｍｉｎ，９４℃变性３０ｓ，５５℃
退火３０ｓ，７２℃延伸３０ｓ，共３５个循环；最后７２℃
延伸１０ｍｉｎ，４℃保存。所有反应在 Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏ－
ｓｙｓｔｅｍｓ　ＰＣＲ仪上进行。
１．２．３　ＳＳＲ引物ＰＣＲ产物的检测　扩增产物在８％
聚丙烯酰胺凝胶上用１×ＴＢＥ缓冲液进行电泳分
离，经溴化乙锭稀释液染色后，用 Ｖｉｌｂｅｒ　Ｌｅｕｒｍａｔ
自动成像系统照相。
２　结果与分析
２．１细胞学鉴定　观察根尖细胞有丝分裂中期分
裂相，可以很清楚地将四倍体（图１）和六倍体（图２）
区分开来。
　　对引进的所有垂穗披碱草种质进行细胞学鉴定
结果表明，１４份材料中有５份材料染色体数为２８，
与预期染色体数４２不符（表３）。因此，这５份材
料，虽然当初被采集者据形态学鉴定为垂穗披碱草，
８３９
０６／２０１２ 草　业　科　学 （第２９卷０６期）
图１　６号材料（ＰＩ　５３１６４４）有丝分裂中期
Ｆｉｇ．１　Ｍｉｔｏｓｉｓ　ｍｅｔａｐｈａｓｅ　ｏｆ
ＰＩ　５３１６４４
图２　１号材料（ＰＩ　４９９４５０）有丝分裂中期
Ｆｉｇ．２　Ｍｉｔｏｓｉｓ　ｍｅｔａｐｈａｓｅ　ｏｆ
ＰＩ　４９９４５０
表３　引进垂穗披碱草材料细胞学鉴定结果
Ｔａｂｌｅ　３　Ｃｙｔｏｌｏｇｉｃａｌ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ
ｉｎｔｒｏｄｕｃｅｄ　Ｅｌｙｍｕｓ　ｎｕｔａｎｓ
序号
Ｎｏ．
保存号
Ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ　ｃｏｄｅ
染色体数
Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ　ｎｕｍｂｅｒｓ
１ ＰＩ　４９９４５０　 ４２
２ ＰＩ　４９９４５１　 ４２
３ ＰＩ　４９９６１１　 ４２
４ ＰＩ　５０４４５９　 ２８
５ ＰＩ　５３１６４３　 ４２
６ ＰＩ　５３１６４４　 ２８
７ ＰＩ　５３１６４５　 ２８
８ ＰＩ　５４７３９４　 ２８
９ ＰＩ　６１９５１６　 ４２
１０ ＰＩ　６１９５７５　 ２８
１１ ＰＩ　６１９５９０　 ４２
１２ ＰＩ　６２８６７５　 ４２
１３ ＰＩ　６２８６９８　 ４２
１４ ＰＩ　６５５１８６　 ４２
并被归类为垂穗披碱草种质，但实际上为老芒麦。
这些材料的采集地分布在四川、内蒙、青海、甘肃、新
疆等不同地点，并由不同采集者鉴定。由此可见，由
于老芒麦和垂穗披碱草形态上的相似性及在不同生
态环境下的变异性，其种质在形态鉴定上很容易混
淆。
对在青海采集的披碱草材料进行细胞学鉴定结
果表明，所有材料染色体数与预期相符，即同德老芒
麦、多叶老芒麦及其他３种野生老芒麦材料的染色
体数为２８；而垂穗类披碱草材料的染色体数为４２。
２．２　ＥＳＴ－ＳＳＲ多态性初步筛选　考虑到六倍
体垂穗披碱草（染色体组为ＳｔＨＹ）比四倍体老芒麦
（染色体组为ＳｔＨ）多一组染色体Ｙ，因此对老芒麦
和垂穗披碱草多态性引物筛选中，能稳定地在垂穗
披碱草材料中扩增出可能来自 Ｙ染色体组的额外
遗传位点的产物，以区别于老芒麦，有可能作为区别
老芒麦和垂穗披碱草较理想的分子标记。以经过细
胞学鉴定的１５号材料同德老芒麦和１６号材料多叶
老芒麦为老芒麦代表，１１号和１２号材料为垂穗披
碱草代表，利用已经过前期研究在披碱草中具有扩
增产物的４２对小麦的ＳＳＲ引物对这两类材料进行
多态性筛选，结果表明，４２对 ＳＳＲ 引物中，Ｘｃ－
ｗｅｍ３８ｃ可能稳定、重复地将这两类材料区分开，
Ｘｃｗｅｍ３８ｃ在垂穗披碱草材料中扩增出的在１３０～
１８０ｂｐ的多态性条带在老芒麦材料中缺乏（图３），
说明其能够较好地区分老芒麦和垂穗披碱草。
２．３　ＥＳＴ－ＳＳＲ多态性标记的进一步验证　在
对多态性标记初步筛选中仅用了两对老芒麦和垂穗
披碱草材料。对引进的垂穗披碱草种质的细胞学鉴
定结果表明，这些材料中既有垂穗披碱草又有老芒
麦，由于这些材料来自于四川、内蒙、新疆、西藏、青
海、甘肃等地，在生态环境分布上跨距较大。为了进
一步验证筛选出的标记的有效性，利用Ｘｃｗｅｍ３８ｃ
对这些材料进行了扩增，结果表明，在１５号同德老
芒麦和１６号多叶老芒麦以及４、６、７、８和１０号材料
中没有多态性条带的扩增产物出现，其余材料中（除
１２号外）均在１５０ｂｐ左右有两条多态性条带，而１２
号材料在约１１０和１６０ｂｐ有多态性条带，以区别于
老芒麦（图４）。
　　对１～１４号材料的细胞学鉴定表明，４、６、７、８
和１０号材料为四倍体２８条染色体，在本研究中这
５个材料中都没有多态性扩增产物，利用Ｘｃｗｅｍ３８ｃ
９３９
ＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＬ　ＳＣＩＥＮＣＥ（Ｖｏｌ．２９，Ｎｏ．０６） ０６／２０１２
图３　部分ＳＳＲ引物扩增结果
Ｆｉｇ．３　Ｔｈｅ　ｐａｒｔｉａｌ　ＰＣＲ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ＳＳＲ　ｐｒｉｍｅｒｓ
注：１５为同德老芒麦；１６为多叶老芒麦；１１为ＰＩ　６１９５９０；１２为ＰＩ　６２８６７５；Ｍ为 Ｍａｋｅｒ。
Ｎｏｔｅ：１５，Ｅ．ｓｉｂｉｒｉｃｕｓ‘Ｔｏｎｇｄｅ’；１６，Ｅ．ｓｉｂｉｒｉｃｕｓ‘Ｑｉｎｇｍｕ　Ｎｏ．１’；１１，ＰＩ　６１９５９０；１２，ＰＩ　６２８６７５；Ｍ，Ｍａｋｅｒ．
图４　引物Ｘｃｗｅｍ３８ｃ在１４份引进材料上的扩增结果
Ｆｉｇ．４　Ｔｈｅ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｐｒｉｍｅｒ　Ｘｃｗｅｍ３８ｃｉｎ　１４ｉｎｔｒｏｄｕｃｅｄ　ｍａｔｅｒｉａｌ
注：１５为同德老芒麦；１６为多叶老芒麦；１～１４同表１；Ｍ为 Ｍａｒｋｅｒ。
Ｎｏｔｅ：１５，Ｅ．ｓｉｂｉｒｉｃｕｓ‘Ｔｏｎｇｄｅ’；１６，Ｅ．ｓｉｂｉｒｉｃｕｓ‘Ｑｉｎｇｍｕ　Ｎｏ．１’；１～１４，ｓａｍｅ　ａｓ　Ｔａｂｌｅ１；Ｍ，ｍａｒｋｅｒ．
引物对这些材料的鉴定结果与细胞学鉴定的结果非
常一致。１２号材料多态性条带分子量大小有别于
其他六倍体垂穗披碱草材料，表明这个材料可能与
其他种质具有较大的遗传分化。由于这些材料生境
分布上距离比较远，而利用Ｘｃｗｅｍ３８ｃ扩增出的多
态性分子标记能稳定地将这些材料辨别，表明筛选
到的ＳＳＲ引物Ｘｃｗｅｍ３８ｃ能够准确地在分子水平
上将老芒麦和垂穗披碱草区分开来。
２．４　ＥＳＴ－ＳＳＲ多态性标记在青藏高原野生材
料中的广泛性验证　利用Ｘｃｗｅｍ３８ｃ对不同来
源的老芒麦和垂穗披碱草材料进行扩增时，无论是
老芒麦还是垂穗披碱草中都会在１００ｂｐ左右有一
条带在两个物种中稳定扩增出现，而在其他试验材
料中１５０ｂｐ左右大多有两条多态性条带。为了进
一步验证ＳＳＲ引物Ｘｃｗｅｍ３８ｃ的稳定性、可靠性和
广泛性，选取具有代表性的青藏高原野生老芒麦和
垂穗披碱草材料，进行ＰＣＲ扩增反应（图５）。１７～
２０号和２１～２３号材料都是经过形态学和细胞学鉴
定的野生垂穗披碱草和老芒麦材料，Ｘｃｗｅｍ３８ｃ在
这些野生材料中的ＰＣＲ扩增结果和细胞学鉴定结
果相吻合。结果表明，ＳＳＲ引物Ｘｃｗｅｍ３８ｃ可以在
这些材料中进行稳定性扩增，进一步验证筛选到的
ＥＳＴ－ＳＳＲ引物Ｘｃｗｅｍ３８ｃ能够准确可靠地在分子
水平上将老芒麦和垂穗披碱草区分开来。
３　讨论与结论
垂穗披碱草和老芒麦都是披碱草属的常见种，
分类学家常常根据外部形态学性状进行区分，垂穗
披碱草形态学性状主要表现为，穗状花序紧密、小穗
排列多偏向于穗轴一侧等特征，而老芒麦则表现为
穗状花序疏松、小穗排列不偏于穗轴一侧的特
征［１６－１７］。对从美国引进的垂穗披碱草种质的鉴定以
及有关研究［４］的结果来看，在不同生态环境中老芒
０４９
０６／２０１２ 草　业　科　学 （第２９卷０６期）
图５　引物Ｘｃｗｅｍ３８ｃ在野生材料上的扩增结果
Ｆｉｇ．５　Ｔｈｅ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｐｒｉｍｅｒ　Ｘｃｗｅｍ３８ｃｉｎ　１２ｗｉｌｄ　ｍａｔｅｒｉａｌ
注：１１为ＰＩ　６１９５９０；１２为ＰＩ　６２８６７５；１５为同德老芒麦；１６为多叶老芒麦；１７～２３同表２；Ｍ为 Ｍａｒｋｅｒ。
Ｎｏｔｅ：１１，ＰＩ　６１９５９０；１２，ＰＩ　６２８６７５；１５，Ｅ．ｓｉｂｉｒｉｃｕｓ‘Ｔｏｎｇｄｅ’；１６，Ｅ．ｓｉｂｉｒｉｃｕｓ‘Ｑｉｎｇｍｕ　Ｎｏ．１’；１７～２３，ｓａｍｅ　ａｓ　Ｔａｂｌｅ　２；Ｍ，
ｍａｒｋｅｒ．
麦和垂穗披碱草种质，由于对环境的适应性，形态学
上的某些变异常会对这两种草种的鉴定造成干扰。
ＤＮＡ分子标记是一类不依赖于形态学的遗传标记，
由于分子标记鉴定是对生物体遗传物质的直接鉴
定，相对于形态学标记鉴定，分子标记鉴定更为直
接、客观、准确。垂穗披碱草和老芒麦在细胞学上倍
性不同，在本研究中，通过细胞学鉴定以及在广泛筛
选出的小麦ＥＳＴ－ＳＳＲ引物Ｘｃｗｅｍ３８ｃ扩增出的多
态性标记可以对垂穗披碱草和老芒麦进行有效辨
别。
本研究利用在小麦中开发出的ＳＳＲ标记，进行
了可区分老芒麦和垂穗披碱草的多态性标记筛选。
结果表明，一些ＳＳＲ标记尤其是ＥＳＴ－ＳＳＲ标记在
不同物种之间具有良好的通用性。对披碱草属
ＳＳＲ标记研究较早的Ｓｕｎ等［１８］，曾经成功地利用小
麦ＳＳＲ引物对披碱草属物种进行了种群遗传多样
性分析；ＭａｃＲｉｔｃｈｉｅ和Ｓｕｎ［１９］也曾经利用来自小麦
和大麦（Ｈｏｒｄｅｕｍ　ｖｕｌｇａｒｅ）的ＳＳＲ引物对细茎披
碱草（Ｅ．ｔｒａｃｈｙｃａｕｌｕｓ）的遗传多样性分析，并指出，
麦类ＳＳＲ引物在小麦族近缘物种中具有一定的通
用性；严学兵等［２０］通过对不同来源ＳＳＲ标记在中
国披碱草属植物的通用性和效率评价指出，亲缘关
系较近的小麦以及披碱草属ＳＳＲ引物遗传分析的
效率更高，即亲缘关系越近ＳＳＲ引物通用性越好。
由于目前直接从老芒麦和垂穗披碱草中开发出来可
供利用的ＳＳＲ标记缺乏，因此利用亲缘关系较近物
种中已经开发出来的ＳＳＲ引物也不失为一条较好
的捷径。
老芒麦和垂穗披碱草是青藏高原高寒区重要的
禾本科类牧草，ＤＮＡ分子标记的应用，将有效促进
这两类牧草种质资源的搜集、鉴定以及育种引用。
随着ＳＳＲ分子标记开发技术的改进［２１］，开发老芒
麦和垂穗披碱草自身的ＳＳＲ引物显得更为经济、简
便、可行。本研究从４２对小麦的ＳＳＲ引物中筛选
到了一对可以区分老芒麦和垂穗披碱草的引物，在
今后的研究中，在开发大量老芒麦和垂穗披碱草自
身的ＳＳＲ引物的基础上，可筛选出更多重复、稳定
地进行物种区分的分子标记，并有望能在分子水平
上对老芒麦和垂穗披碱草种质的不同生态型进行准
确区别和鉴定。
参考文献
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［９］　Ｄｅｗｅｙ　Ｄ　Ｒ．Ｔｈｅ　ｇｅｎｏｍｉｃ　ｓｙｓｔｅｍ　ｏｆ　ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｓ　ａ
ｇｕｉｄｅ　ｔｏ　ｉｎｔｅｒｇｅｎｅｒｉｃ　ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｐｅｒｅｎｎｉａｌ
Ｔｒｉｔｉｃｅａｅ［Ａ］．Ｉｎ：Ｇｕｓｔａｆｓｏｎ　Ｐ　Ｊ．Ｇｅｎｅ　Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎ　ｉｎ
Ｐｌａｎｔ　Ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ［Ｍ］．Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ：Ｐｌｅｎｕｍ　Ｐｒｅｓｓ，
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Ｄｉｓｔｉｎｇｕｉｓｈｉｎｇ　Ｅｌｙｍｕｓ　ｎｕｔａｎｓ　ｆｒｏｍＥｌｙｍｕｓ　ｓｉｂｉｒｉｃｕｓ　ｉｎ
Ｑｉｎｇｈａｉ－Ｔｉｂｅｔ　Ｐｌａｔｅａｕ　ｕｓｉｎｇ　ａ　ＳＳＲ　ｍａｒｋｅｒ
ＬＥＩ　Ｙｕｎ－ｔｉｎｇ１，２，ＤＯＵ　Ｑｕａｎ－ｗｅｎ１
（１．Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｐｌａｔｅａｕ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｘｉｎｉｎｇ　８１０００１，Ｃｈｉｎａ；
２．Ｇｒａｄｕａｔｅ　ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ　１０００４９，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｔｒａｃｔ：Ｅｌｙｍｕｓ　ｎｕｔａｎｓ　ａｎｄ　Ｅ．ｓｉｂｉｒｉｃｕｓ，ｗｈｉｃｈ　ｂｅｌｏｎｇ　ｔｏ　Ｅｌｙｍｕｓ　ｇｅｎｕｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｔｒｉｔｉｃｅａｅ，ａｒｅ　ｐｅｒｅｎｎｉａｌ
ｈｅｒｂａｃｅｏｕｓ　ｐｌａｎｔｓ．Ｔｈｅｓｅ　ｔｗｏ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ａｒｅ　ｈｉｇｈ－ｑｕａｌｉｔｙ　ｆｏｒａｇｅ　ｇｒａｓｓｅｓ　ｗｈｉｃｈ　ｗｉｌｄｌｙ　ｐｌａｎｔｅｄ　ｉｎ　Ｃｈｉｎａ，ｅｓｐｅ－
ｃｉａｌｙ　ｉｎ　ａｌｐｉｎｅ　ｚｏｎｅ　ｏｆ　Ｑｉｎｇｈａｉ－Ｔｉｂｅｔ　Ｐｌａｔｅａｕ．Ｄｕｅ　ｔｏ　ｅｃｏ－ａｄａｐｔｉｖｅ　ｖａｒｉａｔｉｏｎ，ｉｔ　ｗａｓ　ｏｆｔｅｎ　ｃｏｎｆｕｓｉｎｇ　ｗｈｉｌｅ　ｉ－
ｄｅｎｔｉｆｙｉｎｇ　ｓｏｍｅ　ｗｉｌｄ　ｇｅｒｍｐｌａｓｍｓ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｈｅｍ．Ｉｎ　ｏｒｄｅｒ　ｔｏ　ｄｉｓｔｉｎｇｕｉｓｈ　Ｅ．ｎｕｔａｎｓ　ｆｒｏｍＥ．ｓｉｂｉｒｉｃｕｓ，ｍａｔｅ－
ｒｉａｌｓ　ｃｏｌｅｃｔｅｄ　ｆｒｏｍ　Ｓｉｃｈｕａｎ，Ｇａｎｓｕ　ａｎｄ　Ｔｉｂｅｔ　ａｎｄ　ｓｏｍｅｗｈｅｒｅ　ｅｌｓｅ　ｗｅｒｅ　ｓｃｒｅｅｎｅｄ　ｕｓｉｎｇ　４２ＳＳＲ　ｐｒｉｍｅｒｓ，ｉｎ－
ｃｌｕｄｉｎｇ　２１ｇｅｎｏｍｉｃ　ＳＳＲ　ａｎｄ　２１ＥＳＴ－ＳＳＲ，ｗｈｉｃｈ　ｌｏｃａｔｅｄ　ｏｎ　ｔｈｅ　２１ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓ　ｏｆ　ｗｈｅａｔ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ
ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ａ　ＥＳＴ－ＳＳＲ　ｐｒｉｍｅｒ　Ｘｃｗｅｍ３８ｃｃｏｕｌｄ　ｐｒｏｄｕｃｅ　３ｂａｎｄｓ　ｉｎ　Ｅ．ｎｕｔａｎｓ　ａｎｄ　１ｂａｎｄ　ｉｎ　Ｅ．ｓｉｂｉｒｉｃｕｓｉｎ
ＰＣＲ　ｓｙｓｔｅｍ．Ｉｔ　ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｂａｎｄ　ｗｉｔｈ　１００ｂｐ　ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ　ｉｎ　ｂｏｔｈ　Ｅ．ｎｕｔａｎｓ　ａｎｄ　Ｅ．ｓｉｂｉｒｉｃｕｓ，ｗｈｉｌｅ　ｔｗｏ
ｃｏｎｔｉｇｕｏｕｓ　ｂａｎｄｓ　ｗｉｔｈ　１５０ｂｐ　ｗｅｒｅ　ｏｎｌｙ　ｅｘｉｓｔｅｄ　ｉｎ　Ｅ．ｎｕｔａｎｓ．Ｔｈｕｓ，ｔｈｅ　ｔｗｏ　ｂａｎｄｓ　ｃｏｕｌｄ　ｂｅ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｄｉｓｔｉｎ－
ｇｕｉｓｈ　Ｅ．ｎｕｔａｎｓ　ｆｒｏｍＥ．ｓｉｂｉｒｉｃｕｓ．Ａｔ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｔｉｍｅ，ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｆｒｏｍ　ｆｕｒｔｈｅｒ　ｃｙｔｏｌｏｇｉｃａｌ　ｉｄｅｎｔｉｆｉ－
ｃａｔｉｏｎ　ｓｔｕｄｙ　ｗｅｒｅ　ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｍｏｌｅｃｕｌｅ　ｍａｒｋｅｒ，ｗｈｉｃｈ　ｓｕｐｐｏｒｔｅｄ　ｔｈｅ　ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ＥＳＴ－ＳＳＲ
ｐｒｉｍｅｒ　Ｘｃｗｅｍ３８ｃｃｏｕｌｄ　ｂｅ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｄｉｓｔｉｎｇｕｉｓｈ　Ｅ．ｎｕｔａｎｓ　ｆｒｏｍＥ．ｓｉｂｉｒｉｃｕｓ　ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｅｌｙｍｕｓ　ｎｕｔａｎｓ；Ｅｌｙｍｕｓ　ｓｉｂｉｒｉｃｕｓ；ＳＳＲ　ｍａｒｋｅｒ
Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　ａｕｔｈｏｒ：ＤＯＵ　Ｑｕａｎ－ｗｅｎ　Ｅ－ｍａｉｌ：ｄｏｕｑｗ＠ｎｗｉｐｂ．ｃａｓ．ｃｎ
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