全 文 ：书麦类作物学报　２０１３，３３（３）：４０９－４１５
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｔｒｉｔｉｃｅａｅ　Ｃｒｏｐｓ
网络出版时间：２０１３－０４－２６
网络出版地址：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／６１．１３５９．Ｓ．２０１３０４２６．０９４８．０１２．ｈｔｍｌ
粗穗披碱草１ＨｔＳ染色体的蛋白质
二硫键异构酶基因ＣＡＰＳ标记
收稿日期：２０１２－１２－１６　　　修回日期：２０１３－０２－０３
基金项目：国家自然科学基金项目（３１１７１５４２，３１２０１２０３）；中国博士后科学基金项目（Ｙ０２００６０２３６０１２６１）；中央高校基本科研业务
费项目（ＺＹＧＸ２０１１Ｊ０９５）。
作者简介：宫文萍（１９８８－），女，在读硕士，从事植物分子遗传学研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｇｏｎｇｗｅｎｐｉｎｇ９１１＠１２６．ｃｏｍ
通讯作者：杨足君（１９７１－），教授，从事小麦分子细胞生物学研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｙａｎｇｚｕｊｕｎ＠ｕｅｓｔｃ．ｅｄｕ．ｃｎ
宫文萍，刘 成，李光蓉，周建平，杨足君
（电子科技大学生命科学与技术学院，成都６１００５４）
摘　要：中国春－粗穗披碱草罗伯逊１Ｈｔ　Ｓ·１ＢＬ易位系高抗小麦条锈病、叶锈病和白粉病。为了获得抗
病小片段易位系，用中国春ｐｈ１ｂ基因缺失突变体对１Ｈｔ　Ｓ·１ＢＬ进行了诱导，获得了大量诱导后代。本研究
用位于小麦１ＤＳ染色体的８７个ＥＳＴ－ＳＴＳ标记对中国春、粗穗披碱草和１Ｈｔ　Ｓ·１ＢＬ易位系进行分析，未发现
多态性标记。对其中扩增较好的引物ＢＥ４４４８５９的ＰＣＲ产物进行随机克隆测序，获得了１４个序列，与已发表
的小麦蛋白质二硫键异构酶基因序列具有９７％以上的同源性，１４个序列均包含３个外显子和２个内含子。
限制性酶切位点分析表明，仅２个序列含有ＨａｅＩＩＩ酶切位点。验证实验结果表明，ＢＥ４４４８５９／ＨａｅＩＩＩ组合可
以在供试材料中获得多态性。进而用ＢＥ４４４８５９／ＨａｅＩＩＩ对一套中国春－粗穗披碱草附加系和１５１株诱导后代
材料进行分析，结果显示，特异多态性条带仅出现在含１Ｈｔ　Ｓ的材料中；６８株后代材料均可扩增出多态性带。
因此，ＢＥ４４４８５９／ＨａｅＩＩＩ可以作为粗穗披碱草蛋白质二硫键异构酶基因ＣＡＰＳ标记，用于检测小麦背景中的
１Ｈｔ　Ｓ染色体。本研究揭示当杂交亲本间无直接ＰＣＲ多态性而又需要建立标记时，发展ＣＡＰＳ标记是行之有
效的方法。
关键词：粗穗披碱草；分子标记；蛋白质二硫键异构酶基因
中图分类号：Ｓ５４３＋９；Ｓ３３０　　　　文献标识码：Ａ　　　　文章编号：１００９－１０４１（２０１３）０３－０４０９－０７
Ｃｌｅａｖｅｄ　Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ　Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ　Ｓｅｑｕｅｎｃｅ（ＣＡＰＳ）Ｍａｒｋｅｒ　ｆｏｒ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ
Ｉｓｏｍｅｒａｓｅ　Ｇｅｎｅ　Ｌｏｃａｔｅｄ　ｏｎ　Ｅｌｙｍｕｓ　ｔｒａｃｈｙｃａｕｌｕｓ　１ＨｔＳ　Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ
ＧＯＮＧ　Ｗｅｎ－ｐｉｎｇ，ＬＩＵ　Ｃｈｅｎｇ，ＬＩ　Ｇｕａｎｇ－ｒｏｎｇ，ＺＨＯＵ　Ｊｉａｎ－ｐｉｎｇ，ＹＡＮＧ　Ｚｕ－ｊｕｎ
（Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ｏｆ　Ｃｈｉｎａ，Ｃｈｅｎｇｄｕ　６１００５４，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｓｐｒｉｎｇ－Ｅｌｙｍｕｓ　ｔｒａｃｈｙｃａｕｌｓ　Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎｉａｎ　１ＨｔＳ·１ＢＬ　ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ　ｌｉｎｅ　ｉｓ　ｈｉｇｈｌｙ　ｒｅ－
ｓｉｓｔａｎｔ　ｔｏ　ｗｈｅａｔ　ｙｅｌｏｗ　ｒｕｓｔ，ｌｅａｆ　ｒｕｓｔ　ａｎｄ　ｐｏｗｄｅｒｙ　ｍｉｌｄｅｗ．Ｉｎ　ｏｒｄｅｒ　ｔｏ　ｏｂｔａｉｎ　ｄｉｓｅａｓｅ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ　ｓｍａｌ
ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ　ｓｅｇｍｅｎｔ　ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ，１ＨｔＳ·１ＢＬ　ｗａｓ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｓｐｒｉｎｇ　ｐｈ１ｂｇｅｎｅ　ｍｕｔａｎｔ，
ａｎｄ　ａ　ｐｌｅｎｔｙ　ｏｆ　ｏｆｆｓｐｒｉｎｇ　ａｒｅ　ｏｂｔａｉｎｅｄ．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｍａｒｋｅｒ　ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｆｏｒ　ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ
１ＨｔＳ　ｗｉｌ　ｂｅ　ｈｅｌｐｆｕｌ　ｆｏｒ　ｏｆｆｓｐｒｉｎｇ　ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ．Ｉｎ　ｏｒｄｅｒ　ｔｏ　ａｃｈｉｅｖｅ　ｔｈｉｓ　ｇｏａｌ，ＰＣＲ　ｗｅｒｅ　ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ　ｏｎ
Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｓｐｒｉｎｇ，Ｅ．ｔｒａｃｈｙｃａｕｌｕｓ　ａｎｄ　１ＨｔＳ·１ＢＬ　ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ　ｕｓｉｎｇ　８７ｐａｉｒｓ　ｏｆ　ＥＳＴ－ＳＴＳ　ｐｒｉｍｅｒｓ
ｆｒｏｍ　ＥＳＴ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｏｎ　ｗｈｅａｔ　１ＤＳ　ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ，ｈｏｗｅｖｅｒ，ｎｏ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ　ｗａｓ　ｆｏｕｎｄ．ＰＣＲ　ｐｒｏｄ－
ｕｃｔｓ　ｆｒｏｍ　ｍａｒｋｅｒ　ＢＥ４４４８５９ｗｅｒｅ　ｒａｎｄｏｍｌｙ　ｃｌｏｎｅｄ　ａｎｄ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｄ．Ａｓ　ａ　ｒｅｓｕｌｔ，１４ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ，ｉｎｃｌｕ－
ｄｉｎｇ　ｔｗｏ　ｉｎｔｒｏｎｓ　ａｎｄ　ｔｈｅｒｅ　ｅｘｏｎｓ　ｅａｃｈ，ｗｅｒｅ　ｏｂｔａｉｎｅｄ．Ｔｈｅ　ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｈｅｓｅ　１４ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ａｎｄ
ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ　ｗｈｅａｔ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ　ｉｓｏｍｅｒａｓｅ　ｇｅｎｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｉｓ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　９７％．Ｖｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＰＣＲ　ｕ－
ｓｉｎｇ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｓｐｒｉｎｇ，Ｅ．ｔｒａｃｈｙｃａｕｌｕｓ，１ＨｔＳ·１ＢＬ　ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ，ａ　ｓｅｔ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｓｐｒｉｎｇ－Ｅ．ｔｒａｃｈｙ－
ｃａｕｌｕｓ　ａｄｄｉｔｉｏｎｓ　ａｎｄ１５１ｉｎｄｕｃｅｄ　ｏｆｆｓｐｒｉｎｇｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ（１）ｔｈｅ　ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｂａｎｄ　ｏｎｌｙ　ｅｘｉｓｔｅｄ　ｉｎ　ｍａｔｅｒｉａｌ
ｐｏｓｓｅｓｓｉｎｇ　１ＨｔＳ　ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ，ａｎｄ（２）ｔｈｅ　ｔａｒｇｅｔ　ｂａｎｄ　ｗａｓ　ａｍｐｌｉｆｉｅｄ　ｉｎ　６８ｏｆｆｓｐｒｉｎｇｓ．Ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ，
ＢＥ４４４８５９／ＨａｅＩＩＩ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ　ｃｏｕｌｄ　ｂｅ　ｕｓｅｄ　ａｓ　ａ　ＣＡＰＳ　ｍａｒｋｅｒ　ｏｆ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ　ｉｓｏｍｅｒａｓｅ　ｇｅｎｅ　ｆｏｒ
ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ　Ｅ．ｔｒａｃｈｙｃａｕｌｕｓ　１ＨｔＳ　ｃｈｒｏｍａｔｉｎ　ｉｎ　ｗｈｅａｔ　ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　ｔｈａｔ　ｄｅｖｅｌｏｐ－
ｍｅｎｔ　ｏｆ　ＣＡＰＳ　ｍａｒｋｅｒ　ｉｓ　ｕｓｅｆｕｌ　ｗｈｅｎ　ｎｏ　ｄｉｒｅｃｔ　ＰＣＲ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ　ｉｓ　ｐｒｅｓｅｎｔ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｃｒｏｓｓ　ｐａｒｅｎｔｓ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｅｌｙｍｕｓ　ｔｒａｃｈｙｃａｕｌｕｓ；ＣＡＰＳ　ｍａｒｋｅｒ；Ｐｒｏｔｅｉｎ　ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ　ｉｓｏｍｅｒａｓｅ　ｇｅｎｅ
　　小麦锈病和白粉病是小麦生产的主要病害，
其发病面积大、常常造成小麦严重减产甚至绝
收［１］。小麦族近缘物种通常具有对小麦病害的优
异抗性，因此，从这些物种中挖掘抗病新基因并将
其导入小麦背景中，从而增强我国栽培小麦的抗
病性，对小麦生产乃至国家粮食安全具有重要意
义［２］。粗穗披碱草（Ｅｌｙｍｕｓ　ｔｒａｃｈｙｃａｕｌｕｓ，２ｎ＝
２ｘ＝２８，基因组为ＳｔＳｔ　Ｈｔ　Ｈｔ），是披碱草属一个具
有优异抗性的物种，其高抗大麦黄矮病和小麦梭
条花叶病［３］、小麦白粉病［３］、叶锈病［３－５］和秆锈
病［３］，开展该物种的优异基因向小麦中转移将有
助于小麦抗病育种。
Ｓｍｉｔｈ［６］于１９４２年开始将粗穗披碱草染色体
向小麦的导入工作，但是之后的报道称这些杂交
并没有成功［７］。１９８３年，Ｓｈａｒｍａ［８］开始了同样的
导入工作，通过胚拯救技术获得了一批小麦－粗穗
披碱草杂交后代材料。之后，Ｇｉｌ 等［３］、Ｍｏｒｒｉｓ
等［９］和Ｊｉａｎｇ等［１０］分别从这批珍贵材料中筛选并
鉴定出了小麦－粗穗披碱草附加系、代换系、易位
系和端体系等材料。随后，Ｆｒｉｅｂｅ等［４－５］又对这批
材料进行了抗叶锈病鉴定，结果发现罗伯逊易位
系１ＨｔＳ·１ＢＬ中含有一个抗美国堪萨斯州叶锈
菌生理小种的新基因，被命名为Ｌｒ５５。
笔者等对小麦－粗穗披碱草１ＨｔＳ·１ＢＬ易位
系进行了多种病害的抗病性鉴定，发现该材料不
仅对美国堪萨斯叶锈菌生理小种表现近免疫，而
且对我国当前流行的５个叶锈菌生理小种０９－９－
１４４１－１、０９－９－１４２６－１、０９－７－９２２－１、０９－７－９４９－１ 和
０９－９－１５０５－１也表现近免疫（待发表资料）。此外，
该易位系还对四川省条锈菌混合生理小种和白粉
菌混合生理小种均表现优异抗性（近免疫），因而，
其基因组可能还含有抗叶锈病和白粉病新基因，
是不可多得的珍贵资源，值得利用染色体工程方
法对该易位系进行诱导，获得抗病的小片段易位
系应用于我国小麦育种中。笔者等以该易位系与
中国春ｐｈ１ｂ基因缺失突变体杂交回交，获得大量
后代材料，需要利用分子标记进行筛选。因此，本
研究拟开发粗穗披碱草１ＨｔＳ分子标记，用于后
代的筛选和鉴定工作。
１　材料与方法
１．１　材 料
供试材料全部列于表１。序号为１～２１的供
试材料均由美国堪萨斯州立大学Ｂｅｒｎｄ　Ｆｒｉｅｂｅ教
授惠赠。小麦绵阳１１（ＭＹ１１）、安岳排灯麦（ＡＹ－
ＰＤＭ）和光头小麦 （Ｊ－１１）由 本 实 验 室 保 存。
ＴＡ５０７２／ＣＳｐｈ１ｂ／／ＣＳｐｈ１ｂ　ＢＣ１Ｆ１ 材料为中国
春－粗穗 披 碱 草 １ＨｔＳ·１ＢＬ 罗 伯 逊 易 位 系
ＴＡ５０７２（以下简称１ＨｔＳ·１ＢＬ）和中国春ｐｈ１ｂ基
因缺失突变体杂交后的回交Ｆ１ 代。
１．２　实验方法
１．２．１　ＤＮＡ的提取
ＤＮＡ的提取参照文献［１１］。
１．２．２　ＰＣＲ条件和酶切反应
根据已经登录的小麦 ＥＳＴ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．
ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｇｅｎｂａｎｋ／）设计引物。ＰＣＲ
反应条件和酶切反应条件参照文献［１２］。
１．２．３　扩增产物的克隆、测序以及序列比对
扩增产物的克隆、测定及序列比对方法参照
文献［１１］。
２　结果与分析
２．１　引物的设计与ＰＣＲ筛选结果
根据已发表的小麦１ＤＳ染色体ＥＳＴ设计合
成了８７对ＥＳＴ－ＳＴＳ引物，对中国春、粗穗披碱草
和１ＨｔＳ·１ＢＬ进行ＰＣＲ分析，结果显示，８７对
引物中，２３对引物没有在供试材料中获得扩增，
原因可能是设计的引物不特异或退火温度不适合
等造成的。其余６４对引物均在供试材料中分别
扩增出单条ＤＮＡ带，且同一引物在供试材料中
扩增分子量一致，因而，无法直接获得多态性。６４
对引物中，３７对扩增效果较好，即可以在供试材
·０１４· 麦　类　作　物　学　报　　　　　　　　　　　　　　　　　　第３３卷
料中扩增出明显的条带，剩余２７对引物扩增效果
相对较差。扩增较好的３７对引物及其染色体定
位情况列于表２。
表１　研究所用的供试材料
Ｔａｂｌｅ　１　Ｔｈｅ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ　ｕｓｅｄ　ｉｎ　ｔｈｉｓ　ｓｔｕｄｙ
序号 编号 物种 序号 编号 物种
１ ＰＩ　５３１６９０ 粗穗披碱草 １４ ＴＡ７５８１ 中国春－粗穗披碱草５ＳｔＳ单体附加系
２ ＣＳ 中国春 １５ ＴＡ７５８２ 中国春－粗穗披碱草５Ｓｔ　Ｌ单体附加系
３ ＴＡ７５５２ 中国春－粗穗披碱草１Ｈｔ附加系 １６ ＴＡ７５５８ 中国春－粗穗披碱草６Ｈｔ附加系
４ ＴＡ５０７２ 中国春－粗穗披碱草１ＨｔＳ·１ＢＬ易位系 １７ ＴＡ７５５９ 中国春－粗穗披碱草７Ｈｔ附加系
５ ＴＡ７５５３ 中国春－粗穗披碱草１ＨｔＳ端体附加系 １８ ＴＡ７５６０ 中国春－粗穗披碱草７ＨｔＳ端体附加系
６ ＴＡ７５５４ 中国春－粗穗披碱草１Ｈｔ　Ｌ端体附加系 １９ ＴＡ７５６１ 中国春－粗穗披碱草７Ｓｔ　Ｌ端体附加系
７ ＴＡ７５５６ 中国春－粗穗披碱草１Ｓｔ附加系 ２０ ＴＡ１３６ 一粒小麦
８ ＴＡ７５７７ 中国春－粗穗披碱草１Ｓｔ　Ｌ端体附加系 ２１ ＴＡ１０５４３ 圆锥小麦
９ ＴＡ５５３２ 中国春－粗穗披碱草Ｔ２ＨｔＳ．５Ｈｔ　Ｌ附加系 ２２ ＭＹ１１ 绵阳１１
１０ ＴＡ７５５７ 中国春－粗穗披碱草５Ｈｔ附加系 ２３ ＡＹＰＤＭ 安岳排灯麦
１１ ＴＡ７５７８ 中国春－粗穗披碱草５ＨｔＳ端体附加系 ２４ Ｊ－１１ 光头小麦Ｊ－１１
１２ ＴＡ７５７９ 中国春－粗穗披碱草５Ｈｔ　Ｌ端体附加系 ２５ Ｌ１－Ｌ１５１ ＴＡ５０７２／ＣＳｐｈ１ｂ／／ＣＳｐｈ１ｂＢＣ１Ｆ１材料
１３ ＴＡ７５８０ 中国春－粗穗披碱草５Ｓｔ单体附加系
２．２　序列的克隆与分析
为了对１ＨｔＳ·１ＢＬ／ＣＳｐｈ１ｂ／／ＣＳｐｈ１ｂ杂交
后代进行筛选，必须建立粗穗披碱草１ＨｔＳ染色
体分子标记。而利用常规ＰＣＲ无法直接达到目
标。因此，必须考虑其他方法来发掘１ＨｔＳ染色
体分子标记。我们对扩增较好的引物ＢＥ４４４８５９
的ＰＣＲ产物进行随机克隆测序，获得了１４个序
列，ＮＣＢＩ登录号分别为ＫＣ３３０２０２～ＫＣ３３０２１５。
ＫＣ３３０２１４和ＫＣ３３０２１５来自中国春小麦，ＫＣ３３０２０２
～ＫＣ３３０２１３来自１ＨｔＳ·１ＢＬ。其中，ＫＣ３３０２０２、
ＫＣ３３０２０３、ＫＣ３３０２０６、ＫＣ３３０２０８、ＫＣ３３０２０９、ＫＣ
３３０２１１～ＫＣ３３０２１３和ＫＣ３３０２１５的长度为６８２ｂｐ；
ＫＣ３３０２０７、ＫＣ３３０２１０和ＫＣ３３０２１４的长度为６８４ｂｐ；
ＫＣ３３０２０４和 ＫＣ３３０２０５的长度为６５８ｂｐ。将这１４
个序列逐一输入ＮＣＢＩ进行ＢＬＡＳＴ，结果发现，它
们均与已发表的小麦蛋白质二硫键异构酶基因一
段包含３个外显子和２个内含子的序列具有
９７％以上的同源性。这１４个序列编码的氨基酸
序列完全相同，与已发表的小麦蛋白质二硫键异
构酶基因编码的部分氨基酸序列１００％同源。因
此，本研究克隆到的序列属于小麦或粗穗披碱草
蛋白质二硫键异构酶基因序列。
将这１４个序列输入ＤＮＡＭＡＮ进行序列比
对，结果发现，它们之间的同源性高达９７．２４％。
其中，ＫＣ３３０２０３ 和 ＫＣ３３０２０６ 序列同源性为
１００％（记为第一类）；ＫＣ３３０２１４、ＫＣ３３０２０７和
ＫＣ３３０２１０序 列 同 源 性 为 １００％ （第 二 类）；
ＫＣ３３０２０２、ＫＣ３３０２０８、ＫＣ３３０２０９、ＫＣ３３０２１１－
ＫＣ３３０２１３和ＫＣ３３０２１５序列同源性为１００％（第
三类）；ＫＣ３３０２０４和 ＫＣ３３０２０５序列同源性为
１００％（第四类）。第一类和第三类序列之间的同
源性为９９．９８％，仅存在一个核苷酸差异，即第
２７４位核苷酸分别为 Ａ或Ｇ（图１）；第二类和第
三类序列之间的同源性为９５．９３％，有２４个核苷
酸差异，这些差异多为单核苷酸差异（图１）；第四
类与前三类之间的同源性为９５．９７％，有２０多个
核苷酸多态性位点。与前三类序列相比，第四类
序列在其内含子区１７１～１９５位核苷酸处有一个
长度为２４ｂｐ的序列缺失（图１）。
２．３　粗穗披碱草１ＨｔＳ染色体序列的推测依据与
验证
将四类序列分别输入 Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｔｏｏｋｉｔ网站
（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｖｉｖｏ．ｃｏｌｏｓｔａｔｅ．ｅｄｕ／ｍｏｌｋｉｔ／）进
行限制性酶切位点分析，将分析结果输入到Ｅｘ－
ｃｅｌ，对其酶切位点进行比对分析，屏蔽相同的酶
切位点，最终发现，仅ＫＣ３３０２０４和ＫＣ３３０２０５在
核苷酸４１０～４１４位含有 ＨａｅＩＩＩ酶切位点（图１
中箭头所示）。
本研究克隆了四类序列。因为中国春是含有
Ａ、Ｂ、Ｄ染色体组的六倍体小麦，而中国春－粗穗
披碱草１ＨｔＳ·１ＢＬ罗伯逊易位系中又含有１ＨｔＳ
染色体，因此，这四类序列可能分别来自小麦
１ＡＳ、１ＢＳ、１ＤＳ和粗穗披碱草１ＨｔＳ染色体。因
为小麦１Ａ、１Ｂ、１Ｄ染色体组具有较１Ｈｔ染色体
·１１４·第３期　　　　　　　宫文萍等：粗穗披碱草１Ｈｔ　Ｓ染色体的蛋白质二硫键异构酶基因ＣＡＰＳ标记
表２　本研究中在供试物种中扩增较好的３７对引物及其相关信息
Ｔａｂｌｅ　２　Ｒｅｌｅｖａｎｔ　ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｏｆ　３７ｐａｉｒ　ｏｆ　ｐｒｉｍｅｒｓ　ｗｈｉｃｈ　ｈａｓ　ｂｅｔｔｅｒ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｍａｔｅｒｉａｌ
ｔｅｓｔｅｄ　ｔｈａｎ　ｏｔｈｅｒ　ｐｒｉｍｅｒｓ　ｔｅｓｔｅｄ　ｉｎ　ｔｈｉｓ　ｓｔｕｄｙ
ＥＳＴ序列 引物序列 染色体位置 ＥＳＴ序列 引物序列 染色体位置
ＢＥ５９１６０１ Ｆ
：ＧＧＧＣＡＴＴＡＴＧＧＴＴＧＧＡＣＡＴＣ
Ｒ：ＧＣＡＧＴＡＧＧＧＣＣＴＧＴＧＴＴＡＧＣ Ｃ－１ＤＳ３－０．４８ ＢＥ４４２７２１
Ｆ：ＴＡＴＣＴＴＧＣＡＡＴＧＧＧＴＧＧＴＣＴ
Ｒ：ＧＡＴＧＧＴＧＡＴＧＡＧＧＡＧＧＣＡＣＴ １ＤＳ５－０．７０－１．００
ＢＥ４４６６４２ Ｆ
：ＣＧＧＧＡＧＧＡＡＧＡＧＧＴＡＣＴＧＧＴ
Ｒ：ＧＣＣＣＡＴＧＧＡＴＧＡＴＡＧＡＡＡＧＧ Ｃ－１ＤＳ３－０．４８ ＢＥ５８６１４０
Ｆ：ＧＡＴＣＣＴＣＧＴＧＡＴＧＣＴＧＡＴＧＡ
Ｒ：ＧＣＣＣＡＡＴＧＡＣＣＡＴＣＡＡＴＡＣＣ １ＤＳ５－０．７０－１．００
ＢＥ４４４８５９ Ｆ
：ＴＴＴＣＴＧＧＣＴＡＣＣＣＣＡＣＡＡＴＣ
Ｒ：ＧＴＣＡＡＡＧＧＴＴＴＣＣＴＣＧＧＴＣＡ Ｃ－１ＤＳ３－０．４８ ＢＥ５００５７０
Ｆ：ＧＣＡＡＣＴＴＣＣＴＧＧＴＡＴＡＡＣＣＡ
Ｒ：ＧＡＧＧＣＣＡＣＡＴＴＴＴＧＡＣＣＴＧＴ １ＤＳ５－０．７０－１．００
ＢＥ４８９６９２ Ｆ
：ＧＣＣＴＴＧＧＡＣＴＧＧＧＡＣＡＧＴＡＡ
Ｒ：ＡＣＡＧＧＴＧＴＣＴＴＴＧＣＡＴＧＣＴＧ Ｃ－１ＤＳ３－０．４８ ＢＦ２９１８９１
Ｆ：ＣＡＴＧＧＡＣＡＴＣＧＡＣＡＡＧＡＴＣＧ
Ｒ：ＧＡＧＣＴＣＣＧＴＣＧＡＴＡＴＧＡＡＧＣ １ＤＳ５－０．７０－１．００
ＢＥ４４３０７１ Ｆ
：ＧＡＡＧＡＧＡＡＧＧＣＡＡＣＧＡＣＣＴＧ
Ｒ：ＧＣＣＣＴＣＴＣＣＴＴＴＧＡＡＴＴＴＣＣ Ｃ－１ＤＳ３－０．４８ ＢＥ４２２９８０
Ｆ：ＴＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＴＧＡＣＣＴＧＡＴ
Ｒ：ＣＡＧＴＧＴＧＣＡＧＣＣＡＴＣＣＡＴＡＣ １ＤＳ５－０．７０－１．００
ＢＧ２６２４１０ Ｆ
：ＴＣＡＧＣＴＧＧＴＴＧＴＧＴＴＣＴＴＧＣ
Ｒ：ＧＧＡＧＧＣＡＴＴＴＴＣＴＴＧＴＧＧＡＡ Ｃ－１ＤＳ３－０．４８ ＢＥ５００８２７
Ｆ：ＡＣＧＴＧＴＡＣＡＡＧＧＣＣＡＡＧＡＣＣ
Ｒ：ＣＣＴＴＡＧＡＴＧＣＴＧＣＴＣＧＧＧＴＡ １ＤＳ５－０．７０－１．００
ＢＥ３９９９２９ Ｆ
：ＴＡＴＧＧＴＧＣＡＡＧＧＣＡＣＡＧＧＴＡ
Ｒ：ＧＧＣＡＣＡＧＣＣＡＴＧＡＧＡＣＡＡＴＡ Ｃ－１ＤＳ３－０．４８ ＢＧ２６２８７０
Ｆ：ＣＣＴＧＣＴＧＣＴＡＧＣＡＣＡＴＧＡＡＧ
Ｒ：ＧＣＴＴＣＴＡＧＣＧＴＴＣＡＧＣＴＴＣＣ １ＤＳ５－０．７０－１．００
ＢＥ４２５３５４ Ｆ
：ＣＡＡＡＣＣＣＴＡＡＡＴＣＧＣＣＡＧＴＣ
Ｒ：ＡＴＧＣＡＡＧＣＣＡＡＴＴＣＴＴＣＣＴＧ Ｃ－１ＤＳ３－０．４８ ＢＧ３１３３５０
Ｆ：ＧＡＡＧＧＣＡＴＣＣＧＴＡＴＣＣＡＡＡＡ
Ｒ：ＣＧＡＧＧＡＧＡＧＣＡＡＣＡＡＣＡＡＣＡ １ＤＳ５－０．７０－１．００
ＢＥ４０３５５３ Ｆ
：ＣＣＡＣＧＡＣＴＧＣＴＴＴＣＣＴＣＡＧ
Ｒ：ＧＣＧＧＣＡＧＧＴＣＧＴＡＧＡＡＧＴＡＧ Ｃ－１ＤＳ３－０．４８ ＢＥ６０６９２６
Ｆ：ＣＡＧＣＣＡＡＴＡＡＣＧＡＴＣＧＡＣＡＧ
Ｒ：ＣＣＴＧＧＣＣＴＴＣＣＴＣＡＣＴＧＴＴ １ＤＳ５－０．７０－１．００
ＢＥ４２６７０１ Ｆ
：ＧＡＣＣＡＡＡＡＴＧＧＣＧＡＴＧＡＧＡＴ
Ｒ：ＧＣＡＴＣＣＴＴＣＴＣＣＴＧＴＴＣＧＡＧ １ＤＳ１－０．５９－０．７０ ＢＥ５００５４１
Ｆ：ＧＴＣＡＴＣＣＣＣＣＴＣＣＴＣＡＡＧＡＴ
Ｒ：ＴＣＡＡＣＣＴＣＡＡＣＡＴＴＧＴＣＡＣＣＡ １ＤＳ５－０．７０－１．００
ＢＦ２０１７０４ Ｆ
：ＴＣＡＴＣＡＧＣＡＡＡＧＣＡＣＴＧＧＡＣ
Ｒ：ＴＡＣＣＡＣＧＡＧＧＡＴＣＡＣＣＡＴＧＡ １ＤＳ１－０．５９－０．７０ ＢＥ４４５５２５
Ｆ：ＧＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＡＡＡＧＣＡＧＴ
Ｒ：ＧＴＡＡＣＣＣＡＧＧＡＣＣＴＴＧＣＧＣＡ １ＤＳ１－０．５９－０．７０
ＢＥ４９４０７６ Ｆ
：ＴＡＴＣＧＧＣＧＣＴＴＡＴＣＴＣＴＧＣＴ
Ｒ：ＡＡＧＧＴＧＣＣＴＧＡＣＴＴＧＡＣＣＡＣ １ＤＳ１－０．５９－０．７０ ＢＧ６０４７６８
Ｆ：ＴＣＴＣＡＡＣＴＣＣＣＡＡＡＣＧＴＴＣＣ
Ｒ：ＣＣＡＴＧＧＴＣＡＴＴＧＡＣＡＡＣＣＴＧ １ＤＳ１－０．５９－０．７０
ＢＥ４２３９０５ Ｆ
：ＴＡＣＡＧＧＣＡＣＡＧＴＣＧＴＧＣＡＴＡ
Ｒ：ＣＧＡＡＧＴＴＣＴＴＣＡＡＧＧＧＣＡＡＧ １ＤＳ３－０．４８－０．５９ ＢＧ２６３５７５
Ｆ：ＧＡＴＧＧＣＣＡＧＴＧＡＴＧＡＧＧＡＴＴ
Ｒ：ＣＴＧＣＴＴＴＴＴＧＴＧＧＧＴＧＡＴＧＡ １ＤＳ１－０．５９－０．７０
ＢＧ２６２２４７ Ｆ
：ＧＣＡＡＧＣＴＧＡＣＴＣＧＡＣＣＣＴＡＣ
Ｒ：ＡＴＧＧＣＡＣＴＧＧＣＴＣＣＡＡＴＡＡＣ １ＤＳ３－０．４８－０．５９ ＢＥ５９０６７４
Ｆ：ＡＡＧＧＴＡＴＴＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＡ
Ｒ：ＧＡＧＧＴＴＧＧＴＴＣＡＡＡＣＣＣＴＧＡ １ＤＳ５－０．７０－１．００
ＢＧ６０７５０３ Ｆ
：ＡＡＡＣＡＴＴＧＣＧＣＣＣＴＡＴＡＡＣＧ
Ｒ：ＴＣＣＣＡＡＴＴＣＣＴＣＴＣＣＡＡＣＴＧ １ＤＳ３－０．４８－０．５９ ＢＥ４０４７４０
Ｆ：ＡＴＧＴＧＡＣＡＣＣＡＧＡＣＧＴＧＧＡＡ
Ｒ：ＴＧＣＴＣＣＡＧＡＡＴＧＡＡＴＧＣＡＡＧ １ＤＳ５－０．７０－１．００
ＢＧ２６３２６３ Ｆ
：ＴＧＡＡＣＡＴＧＡＴＴＧＣＴＧＣＴＧＧＴ
Ｒ：ＣＡＣＣＡＴＣＴＴＣＴＣＴＣＣＣＴＣＣＡ １ＤＳ３－０．４８－０．５９ ＢＦ４８２６６３
Ｆ：ＧＡＣＡＴＣＣＴＣＴＣＣＴＣＧＣＡＣＴＣ
Ｒ：ＣＴＴＧＴＴＣＴＣＣＧＧＧＴＴＧＴＴＧＴ １ＤＳ５－０．７０－１．００
ＢＥ４４３００７ Ｆ
：ＡＡＣＧＴＧＣＴＣＣＴＣＡＣＴＣＧＴＴＴ
Ｒ：ＧＧＡＴＧＧＴＣＴＧＣＡＡＧＧＡＡＡＡＡ １ＤＳ５－０．７０－１．００ ＢＥ４９９７１１
Ｆ：ＧＧＡＧＣＴＣＧＧＴＧＴＡＧＣＡＧＡＡＣ
Ｒ：ＴＴＣＧＡＧＡＡＧＣＣＣＧＴＡＧＡＴＧＴ １ＤＳ５－０．７０－１．００
ＢＥ４４４８９０ Ｆ
：ＧＴＣＧＣＴＧＡＴＧＧＧＴＡＣＡＣＴＧＡ
Ｒ：ＧＡＡＣＡＡＡＧＡＡＣＣＣＣＣＡＴＣＡＡ １ＤＳ５－０．７０－１．００ ＢＥ４８９５６５
Ｆ：：ＣＡＣＡＣＡＡＣＣＣＡＣＡＡＡＣＣＡＣＴＣ
Ｒ：ＣＡＧＣＧＧＣＡＡＡＡＴＧＡＣＴＴＧＴＡ １ＤＳ５－０．７０－１．００
ＢＥ４０４３９６ Ｆ
：ＧＣＣＴＡＧＧＣＣＣＴＧＧＡＴＴＴＴＡＧ
Ｒ：ＧＴＴＧＣＣＣＧＧＴＴＡＡＴＴＡＧＣＡＡ １ＤＳ５－０．７０－１．００
更近的亲缘关系，而第四类与前三类序列在其
１７１～１９５位核苷酸有一个长度为２４ｂｐ的序列
缺失，明显不同于前三类，因此，推测前三类序列
来自小麦１ＡＳ、１ＢＳ、１ＤＳ染色体组，而第四类序
列来自粗穗披碱草１ＨｔＳ染色体。又因为仅第四
类序列含有ＨａｅＩＩＩ酶切位点，因此，进一步推测，
对引物ＢＥ４４４８５９在含１ＨｔＳ染色体和不含１ＨｔＳ
染色体材料的ＰＣＲ产物进行ＨａｅＩＩＩ酶切后可能
获得多态性。为了验证这两个推测，我们对
ＢＥ４４４８５９在粗穗披碱草、中国春、１Ｈｔ 附加系、
１ＨｔＳ·１ＢＬ易位系、１ＨｔＳ附加系和１Ｈｔ　Ｌ附加系
的ＰＣＲ产物进行酶切后电泳，结果发现，不含
１ＨｔＳ染色体的中国春和１Ｈｔ　Ｌ附加系仅具有１
条分子量约为７００ｂｐ的ＤＮＡ带，而含１ＨｔＳ染
色体的粗穗披碱草、１Ｈｔ 附加系、１ＨｔＳ·１ＢＬ易
位系、１ＨｔＳ附加系具有分子量约为７００ｂｐ、２５０
ｂｐ和３００ｂｐ的３条ＤＮＡ带，其中分子量小的２
条为多态性带（图２），这表明我们的推测是正
确的。
２．４　标记的特异性与实用性验证
为了验证标记ＢＥ４４４８５９／ＨａｅＩＩＩ的特异性，
我们对一套小麦－粗穗披碱草附加系（表１）进行
分析，ＰＣＲ结果显示，引物ＢＥ４４４８５９在全部供试
材料中均扩增出１条分子量约为７００ｂｐ的ＤＮＡ
带，无多态性。利用 ＨａｅＩＩＩ对ＰＣＲ产物进行酶
切后电泳发现，仅含１ＨｔＳ染色体的粗穗披碱草、
１Ｈｔ附加系、１ＨｔＳ·１ＢＬ易位系和１ＨｔＳ附加系
中出现了分子量分别为７００ｂｐ、２５０ｂｐ和３００ｂｐ
的三条ＤＮＡ带，而其不含１ＨｔＳ染色体材料，如
５Ｈｔ附加系、５ＳｔＳ和５Ｓｔ　Ｌ单体附加系等材料没
有被酶切，仅具有１条分子量约为７００ｂｐ的
ＤＮＡ带（图２）。这表明，标记ＢＥ４４４８５９／ＨａｅＩＩＩ
·２１４· 麦　类　作　物　学　报　　　　　　　　　　　　　　　　　　第３３卷
仅存在于１ＨｔＳ染色体而不存在于粗穗披碱草其
它染色体上，是１ＨｔＳ特异的。
　　为了验证标记的可用性，利用 ＢＥ４４４８５９／
ＨａｅＩＩＩ对１５１株１ＨｔＳ·１ＢＬ／ＣＳｐｈ１ｂ／／ＣＳｐｈ１ｂ
后代材料Ｌ１～Ｌ１５１进行筛选，结果表明，１５１株
后代材料中，Ｌ３、Ｌ２０、Ｌ３５等６８株后代材料具有
多态性条带（图３箭头所示），说明 ＢＥ４４４８５９／
ＨａｅＩＩＩ可以对这些材料进行有效筛选，因此
ＢＥ４４４８５９／ＨａｅＩＩＩ可以应用于Ｌ３、Ｌ２０、Ｌ３５等植
株自交后代材料的后续筛选与鉴定。ＢＥ４４４８５９／
ＨａｅＩＩＩ不能对绵阳１１、一粒小麦和圆锥小麦等不
同背景小麦的ＰＣＲ酶切出多态性带，说明后续筛
选获得的抗病小片段易位系可以向不同小麦背景
进行转育，并且转育后代也可以用 ＢＥ４４４８５９／
ＨａｅＩＩＩ进行筛选与鉴定。
箭头所示为ＨａｅＩＩＩ酶切位点
图１　所克隆序列的比对结果
Ｆｉｇ．１　Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ　ｒｅｓｕｌｔ　ｏｆ　ｃｌｏｎｅｄ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ，ａｒｒｏｗ　ｓｈｏｗｓ　ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ　ｓｉｔｅ　ｏｆ　ＨａｅＩＩＩ
·３１４·第３期　　　　　　　宫文萍等：粗穗披碱草１Ｈｔ　Ｓ染色体的蛋白质二硫键异构酶基因ＣＡＰＳ标记
Ｍ．Ｍａｒｋｅｒ（ＤＬ２　０００）；１～１９．与表１中的材料１～１９相同
图２　ＢＥ４４４８５９／ＨａｅＩＩＩ组合对供试材料的分析结果
Ｆｉｇ．２　Ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ＢＥ４４４８５９／ＨａｅＩＩＩ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ　ｏｎ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ　ｔｅｓｔｅｄ
　　Ｍ．Ｍａｒｋｅｒ（ＤＬ２　０００）；１．粗穗披碱草；２．中国春；３．绵阳１１；４．一粒小麦；５．圆锥小麦；６．安岳排灯麦；７．光头小麦Ｊ－１１；８．Ｌ３；
９．Ｌ２０；１０．Ｌ３５；１１．Ｌ３７；１２．Ｌ４５；１３．Ｌ１；１４．Ｌ２；１５．Ｌ４；１６．Ｌ５；１７．Ｌ６；１８．Ｌ７；１９．Ｌ８
图３　ＢＥ４４４８５９／ＨａｅＩＩＩ组合对ＴＡ５０７２／ＣＳｐｈ１ｂ／ＣＳｐｈ１ｂ　ＢＣ１Ｆ１ 材料的分析结果
Ｆｉｇ．３　 Ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ＴＡ５０７２／ＣＳｐｈ１ｂ／ＣＳｐｈ１ｂ　ＢＣ１Ｆ１ｍａｔｅｒｉａｌ　ｕｓｉｎｇ　ＢＥ４４４８５９／ＨａｅＩＩＩ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ
３　讨 论
Ｌｅｉ等［１２］建立了黑麦１Ｒ染色体特异ＣＡＰＳ
标记，并用这些标记对小麦－非洲黑麦１Ｒａｆｒ附加
系、１Ｒａｆｒ（１Ｄ）代换系、１ＲａｆｒＳ·１ＢＬ易位系、１Ｒａｆｒ　Ｌ
·１ＤＳ易位系和１Ｒａｆｒ　Ｌ单端体附加系进行了鉴
定。Ｍｉｆｔａｈｕｄｉｎ等［１３］以耐铝与不耐铝黑麦杂交
的Ｆ６ 重组自交系为材料，将一个单显性耐铝基因
Ａｌｔ３定位在黑麦４ＲＬ染色体上，进而用推测的水
稻共线性区域ＢＡＣ序列为基础设计引物，对这批
材料进行分析，获得了距离Ａｌｔ３约０．４ｃＭ 的
ＣＡＰＳ标记，该标记可以用于小麦－黑麦耐铝育种
中。Ｑｉｕ等［１４］以感叶锈病春小麦 Ｔｈａｔｃｈｅｒ及其
抗叶锈近等基因系Ｔｈａｔｃｈｅｒ　Ｌｒ１及作图群体等为
材料，对抗小麦叶锈病基因Ｌｒ１进行精细作图，发
现ＣＡＰＳ标记 ＷＲ００３与Ｌｒ１共分离。Ｓｕ等［１５］以
面包小麦籽粒硬度基因启动子区的一个单核苷酸
多态性位点为基础，建立了能够区分来自两杂交
亲本的ＣＡＰＳ标记，将小麦籽粒硬度基因定位在
近着丝粒一个长度为０．６ｃＭ 的区间内。本研究
发现，供试的引物在供试材料中无法获得直接
ＰＣＲ多态性。为了获得序列多态性，对扩增效果
较好的ＢＥ４４４８５９的ＰＣＲ产物进行克隆测序，对
获得的序列进行分析，找到合适的限制性酶切位
点。我们的验证及实用性试验表明，ＢＥ４４４８５９／
ＨａｅＩＩＩ不但可以用来检测粗穗披碱草、１ＨｔＳ·
１ＢＬ易位系等含１ＨｔＳ染色体的材料外，还可以
用来检测１ＨｔＳ·１ＢＬ／ＣＳｐｈ１ｂ／／ＣＳｐｈ１ｂ后代材
料，所以，ＢＥ４４４８５９／ＨａｅＩＩＩ可以应用于粗穗披
碱草改良小麦的育种工作中。上述研究结果表
明，ＣＡＰＳ标记在小麦育种中具有较高的应用价
值，因此，当杂交亲本间无直接ＰＣＲ多态性而又
需要建立标记时，建议发展ＣＡＰＳ标记。目前，
我们正在以表２中的引物为基础来开发更多的披
碱草１ＨｔＳ染色体ＣＡＰＳ标记。
蛋白质二硫键异构酶在二硫键的正确形成、
蛋白折叠与组装中发挥着重要作用，因此，克隆蛋
白质二硫键异构酶基因对研究面筋强度和加工品
质具有重要意义［１６］。到目前为止，蛋白质二硫键
异构酶基因已经在苜蓿、大麦、玉米、蓖麻、烟草和
拟南芥中克隆出来［１７］。在小麦中，蛋白质二硫键
异构酶最早被Ｒｏｄｅｎ等［１８］证实存在于胚乳细胞
内质网内，而蛋白质二硫键异构酶基因ｃＤＮＡ最
早被 Ｓｈｉｍｏｎｉ等克隆到［１９－２０］，近年，ｄ＇Ａｌｏｉｓｉｏ
等［２１］又从面包小麦中克隆了蛋白质二硫键异构
酶基因家族成员。本研究中，笔者等首次从小麦－
粗穗披碱草１ＨｔＳ·１ＢＬ易位系中克隆到了来自
粗穗披碱草的蛋白质二硫键异构酶基因序列，该
序列与来自小麦的相应序列不仅含有多个单核苷
酸多态性，还在内含子区具有２４ｂｐ的序列删除，
·４１４· 麦　类　作　物　学　报　　　　　　　　　　　　　　　　　　第３３卷
这些序列差异为建立的粗穗披碱草１ＨｔＳ特异
ＣＡＰＳ标记提供了契机。以此为基础，获得了
１ＨｔＳ特异ＣＡＰＳ标记，该标记可以用来检测小
麦背景中的１ＨｔＳ染色质，但是无法区分来自小
麦Ａ、Ｂ、Ｄ染色体，因此，只有通过克隆中国春缺
体四体中的蛋白质二硫键异构酶基因，然后再进
行测序比对重叠分析，最终确定本研究克隆到的
前三类基因序列的具体染色体归属。这些基因的
染色体的归属认定对发展小麦１ＡＳ、１ＢＳ、１ＤＳ染
色体特异多态性标记、定位并图位克隆小麦蛋白
质二硫键异构酶基因附近区域的重要功能基因具
有重要意义，也可以对涉及中国春第一同源群短
臂染色体－外源物种的罗伯逊易位系、代换系等材
料的有效鉴定提供新的方法。目前对这些材料的
分子标记结合原位杂交分析工作正在进行中。
参考文献：
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ｅｄ　ｔｏ　ｗｈｅａｔ［Ｊ］．Ｇｅｎｏｍｅ，１９８８，３０：７０－８２．
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ｇｅｎｅ　ｓｙｍｂｏｌｓ　ｆｏｒ　ｗｈｅａｔ［Ｃ］／／Ａｐｐｅｌｓ　Ｒ，Ｅａｓｔｗｏｏｄ　Ｒ，Ｌａｇｕｄａｈ
Ｅ，ｅｔ　ａｌ （ｅｄｓ）Ｐｒｏｃｅｅｄｌｉｎｇｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　１１ｔｈ　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｗｈｅａｔ
Ｇｅｎｅｔ　Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ，Ｓｙｄｎｅｙ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ｐｒｅｓｓ，Ｓｙｄｎｅｙ，Ａｕｓｔｒａｌ－
ｉａ，２００８．
［５］Ｆｒｉｅｂｅ　Ｂ，Ｗｉｌｓｏｎ　Ｄ　Ｌ，Ｒａｕｐｐ　Ｗ　Ｊ，ｅｔ　ａｌ．Ｎｏｔｉｃｅ　ｏｆ　ｒｅｌｅａｓｅ　ｏｆ
ＫＳ０４ＷＧＲＣ４５ｌｅａｆ　ｒｕｓｔ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ　ｈａｒｄ　ｗｈｉｔｅ　ｗｉｎｔｅｒ　ｗｈｅａｔ
ｇｅｒｍｐｌａｓｍ［Ｊ］．Ａｎｎｕａｌ　Ｗｈｅａｔ　Ｎｅｗｓｌｅｔｔｅｒ，２００５，５１：１８８－１８９．
［６］Ｓｍｉｔｈ　Ｄ　Ｃ．Ｉｎｔｅｒｇｅｎｅｒｉｃ　ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｅｒｅａｌｓ　ａｎｄ　ｏｔｈｅｒ
ｇｒａｓｓｅｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９４２，６４：３３－４７．
［７］Ｄｅｗｅｙ　Ｄ　Ｒ．Ｔｈｅ　ｇｅｎｏｍｉｃ　ｓｙｓｔｅｍ　ｏｆ　ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ．Ａ　ｇｕｉｄｅ　ｔｏ
ｉｎｔｅｒｇｅｎｅｒｉｃ　ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｐｅｒｅｎｎｉａｌ　Ｔｒｉｔｉｃｅａｅ［Ｃ］／／
Ｇｕｓｔａｆｓｏｎ　Ｊ　Ｐ（ｅｄ）Ｇｅｎｅ　ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｐｌａｎｔ　ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ
１６ｔｈ　Ｓｔａｄｌｅｒ　Ｇｅｎｅｔｉｃｓ　Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ．Ｐｌｅｎｕｍ　Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ　Ｃｏｒｐ，
Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ，１９８４：２０９－２８０．
［８］Ｓｈａｒｍａ　Ｈ　Ｃ，Ｇｉｌ　Ｂ　Ｓ．Ｎｅｗ　ｈｙｂｒｉｄｓ　ｂｅｔｗｅｅｎ　Ａｇｒｏｐｙｒｏｎ　ａｎｄ
ｗｈｅａｔ．２．Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｓ，ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ，ａｎｄ　ｃｙｔｏｇｅｎｅｔｉｃ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ
Ｆ１ｈｙｂｒｉｄｓ　ａｎｄ　ｂａｃｋｃｒｏｓｓ　ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ［Ｊ］．Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ　ａｎｄ　Ａｐ－
ｐｌｉｅｄ　Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，１９８３，６６：１１１－１２１．
［９］Ｍｏｒｒｉｓ　Ｋ　Ｌ　Ｄ，Ｒａｕｐｐ　Ｗ　Ｊ，Ｇｉｌ　Ｂ　Ｓ．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｈｔ　ｇｅｎｏｍｅ
ａｄｄｉｔｉｏｎｓ　ｆｒｏｍ　ｐｏｌｙｐｌｏｉｄ　Ｅｌｙｍｕｓ　ｔｒａｃｈｙｃａｕｌｕｓ（ＳｔＳｔＨｔＨｔ）ｉｎ－
ｔｏ　ｃｏｍｍｏｎ　ｗｈｅａｔ（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ　ａｅｓｔｉｖｕｍ）［Ｊ］．Ｇｅｎｏｍｅ，１９９０，
３３：１６－２２．
［１０］Ｊｉａｎｇ　Ｊ　Ｍ，Ｍｏｒｒｉｓ　Ｋ　Ｌ　Ｄ，Ｇｉｌ　Ｂ　Ｓ．Ｉｎｔｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｅｌｙｍｕｓ
ｔｒａｃｈｙｃａｕｌｕｓ　ｃｈｒｏｍａｔｉｎ　ｉｎｔｏ　ｃｏｍｍｏｎ　ｗｈｅａｔ［Ｊ］．Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９４，２：３－１３．
［１１］Ｐｅｎｇ　Ｊ　Ｈ，Ｚａｄｅｈ　Ｈ，Ｌａｚｏ　Ｇ　Ｒ，ｅｔ　ａｌ．Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ　ｂｉｎ　ｍａｐ　ｏｆ
ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｔａｇｓ　ｉｎ　ｈｏｍｅｏｌｏｇｏｕｓ　ｈｅｘａｐｌｏｉｄ　ｗｈｅａｔ　ａｎｄ
ｈｏｍｅｏｌｏｇｙ　ｗｉｔｈ　ｒｉｃｅ　ａｎｄ　Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ［Ｊ］．Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，２００４，１６８：
６０９－６２３．
［１２］Ｌｅｉ　Ｍ　Ｐ，Ｌｉ　Ｇ　Ｒ，Ｌｉｕ　Ｃ，ｅｔ　ａｌ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｗｈｅａｔ－Ｓｅ－
ｃａｌｅ　ａｆｒｉｃａｎｕｍ　ｉｎｔｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ　ｌｉｎｅｓ　ｒｅｖｅａｌｓ　ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ　ａｓｐｅｃｔｓ
ｏｆ　ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ　１Ｒｉｎ　ｒｙｅ［Ｊ］．Ｇｅｎｏｍｅ，２０１２，５５：７６５－７７４．
［１３］Ｍｉｆｔａｈｕｄｉｎ，Ｓｃｏｌｅｓ　Ｇ　Ｊ，Ｇｕｓｔａｆｓｏｎ　Ｊ　Ｐ．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　ＰＣＲ－
ｂａｓｅｄ　ｃｏｄｏｍｉｎａｎｔ　ｍａｒｋｅｒｓ　ｆｌａｎｋｉｎｇ　ｔｈｅ　Ａｌｔ３　ｇｅｎｅ　ｉｎ　ｒｙｅ［Ｊ］．
Ｇｅｎｏｍｅ，２００４，４７：２３１－２３８．
［１４］Ｑｉｕ　Ｊ　Ｗ，Ｓｃｈüｒｃｈ　Ａ　Ｃ，Ｙａｈｉａｏｕｉ　Ｎ，ｅｔ　ａｌ．Ｐｈｙｓｉｃａｌ　ｍａｐｐｉｎｇ
ａｎｄ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｃａｎｄｉｄａｔｅ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｌｅａｆ　ｒｕｓｔ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ
ｇｅｎｅ　Ｌｒ１　ｏｆ　ｗｈｅａｔ［Ｊ］．Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ　ａｎｄ　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，
２００７，１１５：１５９－１６８．
［１５］Ｓｕ　Ｚ　Ｑ，Ｈａｏ　Ｃ　Ｙ，Ｗａｎｇ　Ｌ　Ｆ，ｅｔ　ａｌ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｄｅｖｅｌ－
ｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　ａ　ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　ｍａｒｋｅｒ　ｏｆ　ＴａＧＷ２ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ
ｇｒａｉｎ　ｗｅｉｇｈｔ　ｉｎ　ｂｒｅａｄ　ｗｈｅａｔ（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ　ａｅｓｔｉｖｕｍＬ．）［Ｊ］．Ｔｈｅ－
ｏｒｅｔｉｃａｌ　ａｎｄ　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，２０１１，１２２：２１１－２２３．
［１６］Ｃｉａｆｆｉ　Ｍ．Ｐａｏｌａｃｃｉ　Ａ　Ｒ，Ａｌｏｉｓｉｏ　Ｅ　Ｄ，ｅｔ　ａｌ．Ｃｌｏｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｃｈａｒ－
ａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｗｈｅａｔ　ＰＤＩ（ｐｒｏｔｅｉｎ　ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ　ｉｓｏｍｅｒａｓｅ）ｈｏ－
ｍｏｅｏｌｏｇｏｕｓ　ｇｅｎｅｓ　ａｎｄ　ｐｒｏｍｏｔｅｒ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ［Ｊ］．Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，２００６，
３６６：２０９－２１８．
［１７］Ｃｉａｆｆｉ　Ｍ，Ｐａｏｌａｃｃｉ　Ａ　Ｒ，Ｄｏｍｉｎｉｃｉ　Ｌ，ｅｔ　ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｃｈａｒａｃ－
ｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｇｅｎｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｃｏｄｉｎｇ　ｆｏｒ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ
ｉｓｏｍｅｒａｓｅ（ＰＤＩ）ｉｎ　ｄｕｒｕｍ　ｗｈｅａｔ（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ　ｔｕｒｇｉｄｕｍ ｓｓｐ．
ｄｕｒｕｍ）［Ｊ］．Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，２００１，２６５：１４７－１５６．
［１８］Ｒｏｄｅｎ　Ｌ　Ｔ，Ｍｉｆｌｉｎ　Ｂ　Ｊ，Ｆｒｅｅｄｍａｎ　Ｒ　Ｂ．Ｐｒｏｔｅｉｎ　ｄｉｓｕｌｐｈｉｄｅ
ｉｓｏｍｅｒａｓｅ　ｉｓ　ｌｏｃａｔｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃ　ｒｅｔｉｃｕｌｕｍ　ｏｆ　ｄｅｖｅｌｏ－
ｐｉｎｇ　ｗｈｅａｔ　ｅｎｄｏｓｐｅｒｍ［Ｊ］．ＦＥＢＳ　Ｌｅｔｔｅｒｓ，１９８２，１３８：１２１－１２４．
［１９］Ｓｈｉｍｏｎｉ，Ｙ，Ｓｅｇａｌ，Ｇ，Ｚｈｕ　Ｘ，ｅｔ　ａｌ．Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ａ
ｗｈｅａｔ　ｃＤＮＡ　ｅｎｃｏｄｉｎｇ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ　ｉｓｏｍｅｒａｓｅ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ
Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，１９９５，１０７：２８１．
［２０］Ｃｉａｆｆｉ　Ｍ，Ｄｏｍｉｎｉｃｉ　Ｌ，Ｔａｎｚａｒｅｌａ　Ｏ　Ａ，ｅｔ　ａｌ．Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ　ａｓ－
ｓｉｇｎｍｅｎｔ　ｏｆ　ｇｅｎｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｃｏｄｉｎｇ　ｆｏｒ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｄｉｓｕｌｐｈｉｄｅ
ｉｓｏｍｅｒａｓｅ（ＰＤＩ）ｉｎ　ｗｈｅａｔ［Ｊ］．Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ　ａｎｄ　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｇｅｎｅｔ－
ｉｃｓ，１９９９，９８：４０５－４１０．
［２１］ｄ＇Ａｌｏｉｓｉｏ　Ｅ，Ｐａｏｌａｃｃｉ　Ａ　Ｒ ，Ｄｈａｎａｐａｌ　Ａ　Ｐ，ｅｔ　ａｌ．Ｔｈｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ
ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ　ｉｓｏｍｅｒａｓｅ　ｇｅｎｅ　ｆａｍｉｌｙ　ｉｎ　ｂｒｅａｄ　ｗｈｅａｔ（Ｔ．ａｅｓｔｉｖｕｍ
Ｌ．）［Ｊ］．ＢＭＣ　Ｐｌａｎｔ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，２０１０，１０：１０１．
·５１４·第３期　　　　　　　宫文萍等：粗穗披碱草１Ｈｔ　Ｓ染色体的蛋白质二硫键异构酶基因ＣＡＰＳ标记