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河南不同蒲公英药材 HPLC指纹图谱分析
李喜凤1 ,师绘敏 2 ,许 闽 1 ,孟 璐1
(1.河南中医学院药学院 ,河南郑州 450008;2.河南商业高等专科学院 ,河南郑州 450008)
摘要 目的:对河南不同蒲公英药材的 HPLC指纹图谱进行全面分析。方法:采用 RP-HPLC法 , 测定不同种 、
不同产地 、不同采收期 、不同部位蒲公英样品 ,用相似度软件对图谱进行评价 。结果:不同种之间成分没有差异 ,可
互相替代;不同产地各成分含量差异很大 , 以土质肥沃的平原地区为好;不同采收期以春季花果期最好 ,不同部位
成分含量都不一致。结论:此方法可用于蒲公英药材的质量控制。
关键词 蒲公英;HPLC;指纹图谱;分析
中图分类号:R282.71 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2008)10-1470-04
HPLCFingerprintChromatogramAnalysisofSomeTaraxacuminHenanProvince
LIXi-feng1 , SHIHui-min2 , XUMin1 , MENGLu1
(1.DepartmentofPharmacy, HenanUniversityofTraditionalChineseMedicine, Zhengzhou450008, China;2.Departmentofmarket-
ing, HenanBusinessColege, Zhengzhou450008, China)
Abstract Objective:ToanalyzetheHPLCfingerprintchromatogramofsomeTaraxacuminHenan.Methods:Samplesofdiferent
species, producingareas, harvestseasonsandmedicinalpartsweredeterminedbyRP-HPLC.Thechromatogramwasevaluatedbysoft-
wareofevaluatingsimilarity.Results:ThecomponentsofdifferentspeciesinTaraxacumwerethesameandcouldbesubstitutedforeach
other.Thecontentsofcofeicacidandchlorogenicacidindiferentproducingareaswereverydiferent, whichinfecundsoilwasbet-
ter.TheperiodoffloweringandfruitinginSpringwasthebestgatherperiod, andthecomponentsindiferentpartswere
different.Conclusion:ThequalityofmedicinalmateralwithinTaraxacumshouldbecontrolledbeterbythismethod.
Keywords Taraxacum;HPLC;Fingerprintchromatogram;Analysis
基金项目:河南省科技厅重点科技攻关项目(062306100)作者简介:李喜凤(1952-),女,河南郑州人 ,教授 ,硕士生导师 ,研究方向:中药新药及质量标准;Tel:0371-65575823, E-mail:shihuimin2005@ 126.com。
蒲公英药材为蒲公英 Taraxacummongolicum
Hand.-Mazz.、碱地蒲公英 TaraxacumsinicumKitag.
或同属数种植物的干燥全草〔1〕。不同种 、不同产
地 、不同采收期的蒲公英药材的外观形态 、组织构
造 、化学成分很相似。目前市场上都作为蒲公英入
药 ,未考虑种间差别 〔2, 3〕 ,也没有统一的药材质量标
准 。本研究利用 HPLC色谱法对河南省不同产地 、
不同采收期 、不同部位的 54批蒲公英样品进行了测
定分析 ,以期找出不同蒲公英药材的成分差异 。
1 仪器与试药
LC-20AT(日本岛津)高效液相色谱仪 ,紫外检
测器 , CBM-102色谱工作站;色谱甲醇(天津四友),
其他试剂均为分析纯 。指纹图谱相似度评价软件为
“中药色谱指纹图谱相似度评价系统 ”(中国药典委
员会 2004A)。咖啡酸对照品 (中国药品生物制品
检定所 ,批号:110885-200102),绿原酸对照品(中国
药品生物制品检定所 ,批号:110753-200212)。蒲公
英对照药材购买于河南省药品检验所 , 批号:
121195-200401。 54批蒲公英药材均在河南省各地
采集及郑州市药材市场购买 ,经本院生药教研室董
诚明副教授鉴定为:黄黄苗 T.mongolicumHand.-
Mazz.、药用蒲公英 T.oficinaleF.H.Wigg.、白缘蒲
公英(热河蒲公英)T.platypecidumDiels3个种 。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱:大连依利特 Hypersil
ODS2分析柱(200mm×4.6 mm, 5 μm);检测波长:
323 nm;柱温:35℃;流动相:甲醇 (A)-0.02M磷酸
二氢钠缓冲盐溶液(B)(磷酸二氢钠 3.12 g,加水使
溶解成 1000ml,再加 1%磷酸溶液 , pH=3.8),梯度
洗脱(0 ～ 18 min, B%:95※88;18 ～ 35 min, B%:88
※86;35 ～ 55min, B%:86※65;55 ～ 70 min, B%:65
※45;70 ～ 80min, B%:45※45);流速:1.0 ml/min,
记录色谱图 80 min。
2.2 对照品溶液制备 分别取咖啡酸 、绿原酸对
照品适量 ,加甲醇配成 60 μg/ml、200 μg/ml的对照
品溶液 ,过 0.45 μm微孔滤膜 。
2.3 供试品溶液制备 取蒲公英样品适量 ,自然
干燥后粉碎 ,过 50目筛 ,精密称取 1.0 g,用移液管
·1470· 中药材 JournalofChineseMedicinalMaterials 第 31卷第 10期 2008年 10月DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2008.10.011
加入 5%甲醇溶液 50 ml,称定重量 ,超声提取(功率
250W,频率 40 kHz)30 min,取出 ,放至室温 ,加 5%
甲醇溶液补足减失重量 , 过滤 ,取续滤液 ,用 0.45
μm微孔滤膜过滤 ,即得。
2.4 测定方法 分别精密量取对照品溶液 、供试
品溶液 、对照药材溶液各 5 μl,注入高效液相色谱
仪 ,记录色谱图 ,分别见图 1、图 2、图 3、图 4。
图 1 咖啡酸对照品色谱图
图 2 绿原酸对照品色谱图
图 3 样品色谱图
图 4 对照药材色谱图
2.5 稳定性考察 取 A-002号样品供试溶液 ,分
别在 0、2、4、6、8、10、24 h进样 ,各色谱峰相对峰面
积 RSD值小于 3%,表明样品在 24 h内稳定。
2.6 精密度考察 取 “2.2”项下的对照品溶液 ,连
续进样 5次 , RSD值均小于 3%,表明精密度良好。
2.7 重复性考察 取 A-003样品共 5份 ,制成供
试溶液 ,分别进样 , RSD值小于 3%,表明该方法重
现性良好 。
3 蒲公英样品综合指纹图谱分析
3.1 不同种 、不同产地蒲公英指纹图谱分析 所
得 43批样品图谱导入指纹图谱相似度评价软件 ,以
蒲公英对照药材图谱为参照 ,生成对照图谱见图 5,
样品指纹图谱见图 6,相似度见表 1。
图 5 不同种 、不同产地样品对照图谱
不同种蒲公英外观上有差异 ,其指纹图谱却没
有显著差异 ,表明所含成分一致 ,但成分的量有差
异。蒲公英 T.mongolicum在河南各地均很常见 ,产
量很大 ,易于采集 ,药用蒲公英 T.oficinale、白缘蒲
公英 T.platypecidum已不常见 ,可用蒲公英代替 。
不同产地蒲公英除了新乡长垣 1批 、安阳瓦店
2批 、河南中医学院院内 3批相似度低于 0.99以
外 ,其它 37个样品相似度均在 0.99以上 ,占所有样
品的 86.05%, 且 6个相似度低的药材最低也在
0.91以上 ,高于指纹图谱相似度评价软件规定要
求。
3.2 不同采收期蒲公英综合指纹图谱分析 将 8
批不同采收期图谱导入指纹图谱相似度评价软件 ,
以蒲公英对照药材图谱为参照图谱 ,生成对照图谱
见图 7 ,样品指纹图谱见图 8,相似度结果见表 2。
从图 8和表 2的相似度可以得出以下结论:春
季未开花前及花果期所采蒲公英比秋季花果期采集
的相似度高;春季随着花开放 ,咖啡酸 、绿原酸含量
呈逐渐上升趋势 ,花果期采集的样品咖啡酸 、绿原酸
含量最高 ,而秋季样品各成分相对含量都变低。因
此 ,蒲公英最好在春季花果期采集 ,质量最好 ,且春
季资源丰富 ,易于采集。
3.3 样品不同部位指纹图谱分析 不同部位蒲公
英(尉氏-1)指纹色谱图(图 9、10、11)显示:有些成
分大量存在于茎叶 ,有些成分大量存在于根;茎叶花
所含的咖啡酸 、绿原酸含量均较高 ,而根则较低 ,所
以采集蒲公英时应采集全草 ,不能只取地上部分 。
·1471·中药材 JournalofChineseMedicinalMaterials 第 31卷第 10期 2008年 10月
图 6 不同种 、不同产地样品指纹图谱
表 1 不同种 、不同产地蒲公英样品相似度
色谱图号 药材产地 种名 相似度 色谱图号 药材产地 种名 相似度
S1 对照药材 未知 0.998
S2 尉氏 -1 蒲公英 0.999
S3 济源王屋山-1 蒲公英 0.998
S4 焦作温县 蒲公英 0.996
S5 孟津 蒲公英 0.997
S6 兰考黄河滩-1 蒲公英 0.998
S7 兰考黄河滩-2 蒲公英 0.998
S8 兰考黄河滩-3 蒲公英 0.999
S9 新乡长垣 蒲公英 0.988
S10 尉氏 -2 蒲公英 0.998
S11 尉氏 -3 蒲公英 0.999
S12 尉氏 -4 蒲公英 0.999
S13 原阳师寨 蒲公英 0.999
S14 兰考城关乡 蒲公英 0.994
S15 安阳瓦店-1 蒲公英 0.957
S16 安阳瓦店-2 蒲公英 0.961
S17 禹州 蒲公英 0.999
S18 济源王屋山-2 蒲公英 0.998
S19 兰考仪封乡-1 蒲公英 0.998
S20 周口太康 蒲公英 0.993
S21 中牟 蒲公英 0.999
S22 安阳瓦店-3 蒲公英 0.992
S23 郑州邙山 蒲公英 0.994
S24 兰考仪封乡-2 蒲公英 0.996
S25 郑州花园口-1 蒲公英 0.994
S26 洛阳栾川-1 蒲公英 0.998
S27 洛阳栾川-2 蒲公英 0.998
S28 安阳瓦店-4 蒲公英 0.997
S29 郑州花园口-2 蒲公英 0.998
S30 洛阳栾川-1 药用蒲公英 0.998
S31 中医学院院内-1 药用蒲公英 0.919
S32 中医学院院内-2 药用蒲公英 0.958
S33 中医学院院内-3 药用蒲公英 0.954
S34 洛阳栾川-2 药用蒲公英 0.998
S35 洛阳栾川-3 药用蒲公英 0.995
S36 洛阳栾川-4 药用蒲公英 0.999
S37 洛阳栾川-5 药用蒲公英 0.998
S38 洛阳栾川-6 药用蒲公英 0.998
S39 洛阳栾川-7 药用蒲公英 0.997
S40 南阳内乡-4 白缘蒲公英 0.994
S41 南阳内乡-1 白缘蒲公英 0.998
S42 南阳内乡-2 白缘蒲公英 0.998
S43 南阳内乡-3 白缘蒲公英 0.998
S44 南阳内乡-5 白缘蒲公英 0.996
·1472· 中药材 JournalofChineseMedicinalMaterials 第 31卷第 10期 2008年 10月
图 7 不同采收期样品对照图谱
图 8 不同采收期样品指纹图谱
表 2 不同采收期样品相似度
色谱图号 样品产地 采收期 相似度
S1 对照药材 - 0.998
S2 三门峡 春季未开花 0.998
S3 中牟 春季花果期 0.994
S4 郑州仲景堂大药房 春季花果期 0.997
S5 三门峡 春季花果期 0.989
S6 三门峡 秋季花果期 0.964
S7 禹州 春季花果期 0.997
S8 中牟 秋季花果期 0.974
4 结论
不同种蒲公英虽然外观上有差异 ,但其指纹图
谱没有显著差异 ,所含成分一致 ,可互相替代。不同
样品以尉氏 、中牟 、原阳等地土质肥沃的平原地区质
量较优 。不同采收期以春季花果期采集为最好 ,且
要全草采集 。
图 9 样品全草色谱图
图 10 样品茎叶色谱图
图 11 样品根色谱图
参 考 文 献
[ 1] 卫生部药典委员会 .中华人民共和国药典 .一部 .北
京:化学工业出版社 , 2005:244-245.
[ 2] 翟颖 ,张保斌 .对实施中药注射剂指纹图谱检测标准的
思考与对策 .中国中医药信息杂志 , 2001, 8(6):37-39.
[ 3] 凌云 , 鲍燕燕 ,朱莉莉 , 等.蒲公英化学成分的研究.中
国药学杂志 , 1997, 32(10):584-586.
(2008-03-04收稿)
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·1473·中药材 JournalofChineseMedicinalMaterials 第 31卷第 10期 2008年 10月