全 文 ：２０１２年
第３期　　　　　　　
青海师范大学学报（自然科学版）
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｑｉｎｇｈａｉ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ）　　　　　　　　
２０１２
Ｎｏ．３
收稿日期：２０１２－０６－１０
作者简介：陈晓红（１９６８－），女，土族，甘肃天水人，高级实验师，在读研究生，主要从事医用化学和中藏药开发．
＊通讯作者：陈元涛，教授，Ｅｍａｉｌ：ｃｈｅｎｙｔ＠ｑｈｎｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
藏药长毛风毛菊中木犀草素和异鼠李素含量快速测定法的建立
陈晓红１，陈元涛２＊，钱　蔚１，宋青云１
（１．青海大学 医学院药学系，青海 西宁　８１０００１；２．青海师范大学 化学系，青海 西宁　８１０００８）
摘　要：目的　采用 ＨＰＬＣ同时测定长毛风毛菊中木犀草素和异鼠李素的含量．方法　Ｅｃｌｉｐｓｅ　ＸＯＢ－Ｃ１８（１５０×４．６ｍｍ，５μｍ）色
谱柱，甲醇和水（含０．０５％的磷酸）梯度洗脱，流速１ｍＬ·ｍｉｎ－１，检测波长３５０ｎｍ，柱温３５℃．结果　木犀草素和异鼠李素的线性
范围分别为０．１０６～５．８１μｇ（ｒ＝０．９９９６），０．１１３～６．９４μｇ（ｒ＝０．９９９７）；平均回收率分别为９９．１４％（ＲＳＤ＝１．４７％）和９８．９６％
（ＲＳＤ＝０．９９％）．结论　该方法可用于藏药长毛风毛菊中木犀草素和异鼠李素含量的同时快速、准确测定．
关键词：ＨＰＬＣ；长毛风毛菊；木犀草素；异鼠李素；同时；测定
中图分类号：Ｒ９２７．２　　　　文献标识码：Ａ　　　　文章编号：１００１－７５４２（２０１２）０３－００６５－０３
长毛风毛菊Ｓａｕｓｓｕｒｅａ　ｈｉｅｒａｃｉｏｉｄｅｓ　Ｈｏｏｋ．ｆ．为菊科植物，生于４４５０～５２００米的高山草地、碎石山坡
地，分布于西藏各地，青海、四川、云南、甘肃等地也有分布 ［１－２］，可全草入药，为藏医常用草药．味苦，性寒；
清热利湿，治疗各种水肿、膀胱炎、小便不利及腹水等［３］．传统中医药中用于祛风活络、散康止痛和治疗麻
风［４］．木犀草素具有清热、解毒、消炎的作用，是治疗炎症疾病的有效成分［５－７］．异鼠李素具有止咳祛痰，消食
化滞，活血散瘀等作用，是用于治疗咳嗽痰多、消化不良、食积腹痛、跌扑瘀肿、瘀血经闭等疾病的有效成分．
因此，特采用 ＨＰＬＣ法测定长毛风毛菊中２种有效成分的含量，该方法快速、简便、准确、重复性好，可作为
长毛风毛菊的质量控制方法．
１　实验部分
１．１　仪器与试药
１１００高效液相色谱仪（美国Ａｇｉｌｅｎｔ）、Ｅｃｌｉｐｓｅ　ＸＯＢ－Ｃ１８（４．６×１５０ｍｍ，５μｍ）色谱柱、ＫＱ３２００超声波
清洗器（昆山市超声仪器有限公司）、电子天平（赛多利斯 ＭＥ２１５Ｓ）．
图１　样品溶液（Ａ）和对照品溶液（Ｂ）的色谱图
Ｆｉｇ．１　ｓａｍｐｌｅ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ（Ａ）ａｎｄ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ　ｏｆ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ（Ｂ）
１．木犀草素（ｌｕｔｅｏｌｉｎ）　２．异鼠李素（ｌｓｏｒｈａｍｎｅｔｉｎ）
DOI:10.16229/j.cnki.issn1001-7542.2012.03.013
青海师范大学学报（自然科学版） ２０１２年
犀草素（１１１５２０－２００２０１）、异鼠李素（１１０８６０－２００４０６）均购自中国药品生物制品检定所；甲醇 （色谱
纯，山东禹王实业有限公司禹城化工厂）；水为自制三重蒸馏水；磷酸为分析级．长毛风毛菊样品购于藏药市
场．
１．２　方法和结果
１．２．１　色谱条件　色谱柱：为Ｅｃｌｉｐｓｅ　ＸＯＢ－Ｃ１８（１５０×４．６ｍｍ，５μｍ）；流动相：为甲醇和水（含０．０５％的
磷酸）；梯度为：０～２０ｍｉｎ，１９％～２８％；３０～５０ｍｉｎ，３５％～７６％；流速１ｍＬ·ｍｉｎ－１；检测波长３５０ｎｍ；柱温
３５℃．色谱图见图１．
１．２．２　溶液的制备　精密称取１．０ｇ长毛风毛菊粉末，加入２５ｍＬ甲醇，超声提取３５ｍｉｎ，过滤，滤渣重复上
述操作２次，所得滤液与前一次滤液合并，定容至１００ｍＬ．过０．４５μｍ滤膜，既得供试品溶液．分别精密称取
对照品木犀草素和异鼠李素，分别置于５ｍＬ量瓶中，以甲醇溶解并定容，配制成一定浓度的对照品储备液，
使用时稀释成所需浓度．
１．２．３　线性关系的考察　精密量取上述２种对照品储备液，用甲醇稀释成不同浓度，取各浓度分别进样
１０μＬ，以进样量（μｇ）为横坐标，以峰面积积分值为纵坐标，测得木犀草素和异鼠李素的回归方程分别为：ｙ＝
７０２．５ｘ－６９．９３（ｒ＝０．９９９６）和ｙ＝３６１．１２ｘ－１８．２４（ｒ＝０．９９９７）；线性范围分别为：０．１０６～５．８１μｇ；０．１１３～
６．９４μｇ．
１．２．４　重复性试验　精密称取长毛风毛菊样品１．０ｇ共５份，按上述方法处理，按１．２．１项下的色谱条件，
分别测定木犀草素和异鼠李素的含量，计算得ＲＳＤ分别为０．８％、１．３％（ｎ＝５）．
１．２．５　精密度试验　分别取上述２种对照品溶液１０μＬ进样，重复进样５次，记录色谱峰的峰面积，得２种
活性成分的ＲＳＤ分别为０．９８％和１．２４％（ｎ＝５），表明仪器精密度良好．
１．２．６　稳定性试验　精密称取长毛风毛菊样品１．０ｇ，按１．２．１和１．２．２项下的方法处理，分别在４、８、１６、
３２、４８ｈ时分别进样，测定２种有效成分的峰面积，计算得ＲＳＤ 分别为１．２％、０．９１％、１．０８％、０．９８％、
１．０７％（ｎ＝５）．表明样品溶液在４８ｈ内稳定．
１．２．７　回收率试验　精密称取５份已测知含量的长毛风毛菊样品各１．０ｇ，添加各对照品溶液适量，按１．２．
２和１．２．１项下方法操作，测得木犀草素和异鼠李素平均回收率（ｎ＝５）分别为９９．１４％和９８．９６％；ＲＳＤ分
别为１．４７％和０．９９％．
表２　回收率试验结果（ｎ＝５）
化合物／％ 称样量／ｇ 样品含量／ｍｇ 加标量／ｍｇ 测得总量／ｍｇ 回收率／％ 平均回收率／％ ＲＳＤ
１．００１３　 ２．２０３６　 １．５６　 ３．７７０９　 １００．４７
１．００５８　 ２．２０４５　 １．６３　 ３．８３２６　 ９９．８８
木犀草素 １．００６１　 ２．２０８１　 １．６４　 ３．８４９５　 １００．０９　 ９９．１４　 １．４７
１．００２９　 ２．２０４２　 １．５３　 ３．７０７８　 ９８．２７
１．００４７　 ２．２０３９　 １．４９　 ３．６４９４　 ９７．０１
１．００１３　 ３．８０２５　 ２．８５　 ６．６５３６　 １００．０４
１．００５８　 ３．８０４３　 ２．９０　 ６．６８２２　 ９９．２４
异鼠李素 １．００６１　 ３．８０４７　 ２．７９　 ６．５５６８　 ９８．６４　 ９８．９６　 ０．９９
１．００２９　 ３．８０３３　 ２．８２　 ６．５５１４　 ９７．４５
１．００４７　 ３．８０３９　 ２．８８　 ６．６６７９　 ９９．４４
１．２．８　含量的测定　取１．２．２项下制备的样品溶液，按１．２．１色谱条件进行分析，经ＤＡＤ检测器检测上述
２种待测组分的峰纯度且其紫外光谱与对照品一致后，按外标法以峰面积积分值计算，得木犀草素和异鼠李
素的含量（每个样品重复进样３次，取平均值）分别为：０．２２％和０．３８％．
２　讨论
将样品溶液在紫外区域用ＤＡＤ检测器进行扫描观察其吸收光谱，结果发现样品在其他检测波长的吸
收峰干扰较多，而３５０ｎｍ处的紫外吸收的干扰较小，故此实验的检测波长选择３５０ｎｍ．在实验过程中尝试着
６６
第３期 陈晓红：藏药长毛风毛菊中木犀草素和异鼠李素含量快速测定法的建立
用纯净水作为流动相，发现样品的紫外吸收峰拖尾较为严重，经试验，当在水中加入０．０１％～０．１０％磷酸时
可改善样品的峰形．最终选择甲醇和含０．０５％的磷酸水溶液为流动相．文中所建方法的专属性较强，结果准
确可靠、操作简便、适用于长毛风毛菊的质量控制．
参考文献：
［１］　国家中医药管理局．中华本草［Ｍ］．上海：上海科学技术出版社，２００２：１０５－１０６．
［２］　中国科学院中国植物志编辑委员会．中国植物志［Ｍ］．（第七十八卷、第二分册）．北京：科学出版社，１９９９．０８．
［３］　中国科学院西北高原生物研究所．藏药志［Ｍ］．青海：青海人民出版社，１９９６：２４５．
［４］　江苏新医学院．中药大辞典［Ｍ］．上海：上海人民出版社，１９７７：２３．
［５］　王丹．药用植物野菊花的研究现状及发展前景［Ｊ］．现代中药研究与实践，２００７，２１（４）：５９．
［６］　张健，李友宾，钱大玮，等．菊花化学成分及药理作用研究进展［Ｊ］．时珍国医国药，２００６，１７（１０）：１９４１．
［７］　张艳，赵磊．风毛菊属植物黄酮类化学成分的研究进展［Ｊ］．甘肃中医学院学报，２０１０，２７（４）：６５．
Ｔｈｅ　ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｌｓｏｒｈａｍｎｅｔｉｎ　ａｎｄ　ｌｕｔｅｏｌｉｎ
ｏｆ　Ｒａｄｉｘ　Ｉｎｕｌａｅ　Ｈｅｌｅｎｉ　ｉｎ　Ｓａｕｓｓｕｒｅａ　ｈｉｅｒａｃｉｏｉｄｅｓ　Ｈｏｏｋｂｙ　ｇａｓ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ
ＣＨＥＮ　Ｘｉａｏ－ｈｏｎｇ１，ＱＩＡＮ　Ｗｅｉ１，ＳＯＮＧ　Ｑｉｎｇ－ｙｕｎ１
（１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｑｉｎｇｈａｉ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｃｏｌｅｇｅ，Ｘｉｎｉｎｇ　８１０００１，Ｃｈｉｎａ；
２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｑｉｎｇｈａｉ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉｎｉｎｇ　８１０００８，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ａ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｌｕｔｅｏｌｉｎ　ａｎｄ
ｌｓｏｒｈａｍｎｅｔｉｎ　ｉｎ　Ｓａｕｓｓｕｒｅａ　ｈｉｅｒａｃｉｏｉｄｅｓ　Ｈｏｏｋ．ｆｂｙ　ＨＰＬＣ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅ　ｓａｍｐｌｅ　ｗａｓ　ｓｅｐａｒａｔｅｄ　ｏｎ　ｃｏｌｕｍｎ
ｏｆ　Ｅｃｌｉｐｓｅ　ＸＯＢ－Ｃ１８（１５０×４．６ｍｍ，５μｍ）ｗｉｔｈ　ｇｒａｄｉｅｎｔ　ｅｌｕｔｉｏｎ，ｔｈｅ　ｍｏｂｉｌｅ　ｐｈａｓｅ　ｗａｓ　ｃｏｍｐｒｉｓｅｄ　ｏｆ　ｍｅｔｈ－
ａｎｏｌ　ａｎｄ　ｗａｔｅｒ（０．０５％ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ　ａｃｉｄ）．Ｔｈｅ　ｆｌｏｗ　ｒａｔｅ　ｗａｓ　１ｍＬ·ｍｉｎ－１．Ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ　ｗａｓ
ａｔ　３５０ｎｍ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃｏｌｕｍｎ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｗａｓ　３５℃．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ｌｉｎｅａｒ　ｒａｎｇｅｓ　ｏｆ　ｌｕｔｅｏｌｉｎ　ａｎｄ　ｌｓｏｒｈａｍｎｅｔｉｎ
ｗｅｒｅ　０．１０６～５．８１μｇ（ｒ＝０．９９９６），０．１１３～６．９４μｇ（ｒ＝０．９９９７）ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ；Ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ　ｗｅｒｅ
９９．１４％（ＲＳＤ＝１．４７％）ａｎｄ　９８．９６％（ＲＳＤ＝０．９９％），ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ　Ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ｒａｐｉｄ　ａｎｄ
ｐｒｅｃｉｓｅ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ＨＰＬＣ；ｓａｕｓｓｕｒｅａ　ｈｉｅｒａｃｉｏｉｄｅｓ　ｈｏｏｋ；ｌｓｏｒｈａｍｎｅｔｉｎ；ｌｕｔｅｏｌｉｎ；ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ；ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
７６