全 文 ：·生物技术· 北方园艺２０１４（１３）：１０２～１０５
第一作者简介：张建瑛（１９８０－），女，吉林松原人，助理研究员，现主
要从事林木种苗培育工作。Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｈａｎｇｊｉａｎｙｉｎｇ１１２４＠１２６．ｃｏｍ．
基金项目：国家公益性行业科研资助项目（２０１００４０６８）；黑龙江省
财政厅自拟资助项目（２０１０－１）。
收稿日期：２０１４－０３－１１
不同产地花楸树愈伤组织诱导和体胚发生比较分析
张 建 瑛１，许 传 玲２，沈 海 龙３，杨 玲３，李 京１，田 新 华１
（１．黑龙江林业科学研究所，黑龙江 哈尔滨１５００８０；２．敦化市林业局，吉林 敦化１３３７００；３．东北林业大学 林学院，黑龙江 哈尔滨１５００４０）
摘 要：以花楸树离体成熟和未成熟合子胚为外植体，研究了不同产地、不同发育时间及不
同植物生长调节剂组合对花楸树愈伤组织诱导和体胚发生的影响。结果表明：以成熟合子胚为
外植体，ＭＳ＋２．０ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋１．５ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ对诱导愈伤组织和体胚发生效果好；不同产地合
子胚的体胚诱导率排序为敦化＞哈尔滨＞五营＞山河。以未成熟合子胚为外植体，ＭＳ＋
０．０５ｍｇ／Ｌ ２，４－Ｄ＋１．０ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ愈伤诱导率高，体胚发生在ＭＳ＋０．２ｍｇ／Ｌ ２，４－Ｄ＋１．０ｍｇ／Ｌ
６－ＢＡ最适宜；不同产地合子胚的体胚诱导率排序为延吉＞哈尔滨＞伊春。
关键词：花楸树；愈伤组织诱导；体胚发生；产地；植物生长调节剂
中图分类号：Ｓ ７１８．４３ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００１－０００９（２０１４）１３－０１０２－０４
花楸树（Ｓｏｒｂｕｓ ｐｏｈｕａｓｈａｎｅｓｉｓ Ｈｅｄｌ．）属蔷薇科苹果
亚科花楸树属落叶小乔木，主要分布在东北、华北地区。
其生长性能良好，对环境要求不高，用途极广［１－３］。在育
苗过程中发现花楸树出种率低（仅为１％），后代变异大，
生长周期长、成型慢等问题［４－５］。体胚发生因具有高效
转化为完整植株的能力、高度的遗传稳定性和用于基础
研究（如植物的生长、分化和发育问题）的巨大潜力而受
到广泛重视［６］。因此，建立花楸树体胚发生途径的植株
再生技术可为花楸树无性繁殖开辟一条崭新的途径，实
现其优良无性系的快繁，为园林绿化提供大量优质苗
木。同时还可实现对花楸树的品种改良和优良种质资
源的长期保存。现研究了外植体来源、外植体类型和植
物生长调节剂对花楸树愈伤组织诱导和体胚发生的影
响，以期为建立完善的花楸树体胚发生体系奠定基础。
１ 材料与方法
１．１ 试验材料
花楸树成熟种子分别于２００５年９月下旬采自黑龙
江省森林植物园（在哈尔滨市，简称ＨＲＢ）、五常市山河
林业局（简称山河，ＳＨ）、黑龙江省伊春五营森林公园（简
称五营，ＷＹ）、吉林省敦化市林业局（简称敦化，ＤＨ），果
实经过调制获得的纯净种子密封保存在０～５℃冰箱里
备用。未成熟种子分别于２００６年７月上、中、下旬取自
吉林省延吉市林业局（简称延吉，ＹＪ）、黑龙江省森林植
物园（在哈尔滨市，简称哈尔滨、ＨＲＢ）、黑龙江省伊春市
植物园（简称伊春，ＹＣ），果实经过调制获得的纯净种子
密封保存在０～５℃冰箱里备用。
接种前将种子用水泡２～３ｄ后进行灭菌消毒，用
７０％（ｖ／ｖ）酒精３０ｓ搅拌消毒２次，之后用３％（ｗ／ｖ）
ＮａＣｌＯ溶液灭菌１０ｍｉｎ，无菌水冲洗４～５次后放在无
菌滤纸上吸干水分。用解剖刀从子叶端切去部分种皮
后，将完整的合子胚挤出作为外植体平行放置在灭菌后
的诱导培养基表面。
１．２ 试验方法
以ＭＳ为基本培养基，培养基中分别添加不同浓度
ＮＡＡ（成熟合子胚为外植体）或不同浓度２，４－Ｄ（未成熟
合子胚为外植体）与不同浓度６－ＢＡ的组合。其它添加
物质为６０ｇ／Ｌ蔗糖，５００ｍｇ／Ｌ水解酪蛋白（ＣＨ）和６ｇ／Ｌ
琼脂粉。培养基ｐＨ值在灭菌前调制为５．８。每培养皿
接种１０个外植体，每处理重复５个培养皿。将培养皿置
于暗中培养，温度为２２～２５℃。培养３０ｄ时将培养物继
代到新配制的培养基上（同初代培养基）直到有体胚形
成。将形成球形体胚的培养物转移到分化培养基上继
续培养。分化培养基：ＭＳ＋６０ｇ／Ｌ蔗糖＋５００ｍｇ／Ｌ
ＣＨ＋６ｇ／Ｌ琼脂粉（ｐＨ ５．８）。其余条件同诱导培养。
１．３ 数据分析
试验数据采用Ｅｘｃｅｌ ２００３处理，ＳＰＳＳ １３．０软件进行
方差分析和多重比较分析。愈伤组织诱导率（％）＝产生
愈伤组织的外植体数／接种外植体总数×１００；体胚诱导率
（％）＝产生体胚的外植体数／接种外植体总数×１００。
２ 结果与分析
２．１ 成熟合子胚的愈伤组织诱导结果
从表１可以看出，不同产地的花楸愈伤组织诱导情
况随ＮＡＡ、６－ＢＡ浓度的变化有所不同。哈尔滨、敦化产
２０１
北方园艺２０１４（１３）：１０２～１０５ ·生物技术·
地花楸愈伤组织诱导率在培养基ＭＳ＋２．０ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋
１．５ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ、ＭＳ＋２．０ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋１．０ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ
中显著高于其它激素组合，分别为４３．３％、９１．７％，五营产
地的花楸愈伤组织在ＮＡＡ浓度为２．０ｍｇ／Ｌ下诱导率高
于其它。山河产地合子胚在 ＭＳ＋２．０ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋
１．５ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ显著高于其它激素组合，为６６．４％。
表１ 不同植物生长调节剂对
花楸树愈伤组织诱导的影响
Ｔａｂｌｅ １ Ｅｆｅｃｔ ｏｆ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｈｏｒｍｏｎｅ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｏｎ
ｃａｌｕｓ ｉｎｄｕｃｔｉｎ ｆｏｒｍｉｎｇ ｉｎ Ｓ．ｐｏｈｕａｓｈａｎｅｎｓｉｓ ｆｒｏｍ ｉｍｍａｔｕｒｅ ｚｙｇｏｔｉｃ ｅｍｂｒｙｏｓ
ＮＡＡ浓度
ＮＡＡ
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
／ｍｇ·Ｌ－１
ＢＡ浓度
ＢＡ
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
／ｍｇ·Ｌ－１
不同产地合子胚的愈伤诱导率
Ｉｎｄｕｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｃａｌｕｓ ｆｒｏｍ ｚｙｇｏｔｉｃ ｅｍｂｒｙｏｓ ｃｏｌｅｃｔｅｄ ｉｎ
ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｐｒｏｖｅｎａｎｃｅｓ／％
ＨＲＢ ＳＨ ＤＨ ＷＹ
０
１．０
１．５
２．０
０
０．５
１．０
１．５
０
０．５
１．０
１．５
０
０．５
１．０
１．５
０
０．５
１．０
１．５
０ｆ
０ｆ
０ｆ
１４．０ｃ
０ｆ
１４．８ｃ
８．０ｄ
４．０ｄｅ
４．０ｄｅ
４．４ｄｅ
１４．４ｃ
１４．２ｃ
３０．０ｂ
３５．０ｂ
３３．２ｂ
４３．３ａ
０ｆ
０ｆ
２０．５ｄ
２８．８ｄ
４．０ｅ
３２．５ｄ
５５．２ｂ
５６．６ｂ
１７．２ｄ
３４．５ｄ
４７．３ｂｃ
４６．４ｂｃ
５２．７ｂｃ
１１．１ｄｅ
５３．９ｂ
６６．４ａ
０ｆ
７．３ｅ
６．７ｅ
０ｆ
０ｆ
５６．５ｂｃ
４９．３ｂｃ
４５．７ｂｃ
０ｆ
６０．０ｂ
２５．０ｄ
４６．８ｂｃ
０ｆ
２２．５ｄ
９１．７ａ
２０．７ｄ
０ｄ
０ｄ
０ｄ
０ｄ
０ｄ
０ｄ
０ｄ
０ｄ
３７．５ｃ
３２．５ｃ
４４．２ｂ
４１．０ｂｃ
５８．５ａ
４５．０ｂ
４６．７ｂ
４１．６ｂｃ
注：数字后的同列小写字母表示５％水平上的显著性差异。下同。
Ｎｏｔｅ：Ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｌｏｗｅｒｃａｓｅ ｌｅｔｔｅｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｃｏｌｕｍｎ ａｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ａｔ ５％ｌｅｖｅｌ．
Ｔｈｅ ｓａｍｅ ｂｅｌｏｗ．
２．２ 成熟合子胚的体胚诱导结果
由表２可知，不同生长调节剂组合下的成熟合子胚
体胚诱导率具有明显差异。在只添加ＮＡＡ或６－ＢＡ培
养基上没有体胚发生。不同产地中，哈尔滨和敦化产地
花楸树的体胚诱导率在２．０ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋１．０ｍｇ／Ｌ
６－ＢＡ中最高（分别为１３．３％和３０．７％），五营产地花楸
树的体胚诱导率在１．５ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋１．５ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ
中最高（２４．４％），山河产地花楸树的体胚诱导率在
１．０ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋０．５ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ中最高（２４．３％）。
２．３ 未成熟合子胚的愈伤组织诱导结果
表３表明，不同产地的花楸未成熟合子胚诱导情况
也不相同。哈尔滨产地７月上旬合子胚０．０５ｍｇ／Ｌ
２，４－Ｄ＋１．０ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ组合时愈伤诱导率高（７８．９％），
高于中旬、下旬（４３．１％、５５．５％）。延吉产地７月上旬合
子胚在ＭＳ＋０．５ｍｇ／Ｌ ２，４－Ｄ＋１．５ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ上愈伤
诱导率最高，为６２．０％，与其它处理相比差异显著
（Ｐ＜０．０５），７月中旬、下旬的合子胚在 ＭＳ＋０．２ｍｇ／Ｌ
２，４－Ｄ＋１．５ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ上体胚诱导率最高，分别为
８６．５％、４８．５％，与其它处理相比差异显著（Ｐ＜０．０５）。
表２ 不同植物生长调节剂对
花楸树成熟体胚发生的影响
Ｔａｂｌｅ ２ Ｅｆｅｃｔ ｏｆ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｐｌａｎｔ ｇｒｏｗｔｈ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ
ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ ｏｎ ｓｏｍａｔｉｃ ｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ Ｓ．ｐｏｈｕａｓｈａｎｅｎｓｉｓ ｆｒｏｍ
ｍａｔｕｒｅ ｚｙｇｏｔｉｃ ｅｍｂｒｙｏｓ
ＮＡＡ浓度
ＮＡＡ
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
／ｍｇ·Ｌ－１
ＢＡ浓度
ＢＡ
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
／ｍｇ·Ｌ－１
不同产地合子胚的体胚诱导率
Ｉｎｄｕｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｓｏｍａｔｉｃ ｅｍｂｒｙｏ ｆｒｏｍ ｚｙｇｏｔｉｃ ｅｍｂｒｙｏｓ
ｃｏｌｅｃｔｅｄ ｉｎ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｐｒｏｖｅｎａｎｃｅｓ／％
ＨＲＢ ＳＨ ＤＨ ＷＹ
０
１．０
１．５
２．０
０
０．５
１．０
１．５
０
０．５
１．０
１．５
０
０．５
１．０
１．５
０
０．５
１．０
１．５
０ｃ
０ｃ
０ｃ
０ｃ
０ｃ
３．３ｂ
４．２ｂ
０ｃ
０ｃ
０ｃ
０ｃ
２．８ｂ
０ｃ
５．３ｂ
１３．３ａ
０ｃ
０ｅ
０ｅ
０ｅ
０ｅ
０ｅ
２４．３ａ
０ｅ
０ｅ
０ｅ
０ｅ
８．２ｃ
６．０ｃ
３．３３ｃｄ
１０．０ｂ
６．０ｃ
６．０ｃ
０ｃ
０ｃ
０ｃ
０ｃ
０ｃ
１．８ｂｃ
０ｃ
０ｃ
０ｃ
８．８ｂ
５．０ｂ
０ｃ
０ｃ
８．３ｂ
３０．７ａ
７．５ｂ
０ｄ
０ｄ
０ｄ
０ｄ
０ｄ
１３．３ｂ
１２．９ｂ
０ｄ
０ｄ
０ｄ
５．４ｂｃ
２４．４ａ
０ｄ
０ｄ
１２．７ｂ
３．１ｃ
２．４ 未成熟合子胚的体胚诱导结果
２．４．１ 外植体发育时期和产地对体胚发生的影响 由
表４可看出，将不同产地和发育时期的未成熟合子胚接
种到２０种不同生长调节剂组合的培养基上。培养３０ｄ
时发现，相同培养条件下不同产地外植体的启动时间和
体胚诱导率存在较大差别。延吉和哈尔滨２个产地、７
月初取材的合子胚启动时间相对较快，而且在４周培养
时间内开始出现体细胞胚，在外植体表面可观察到大量
的早期球形胚，体胚白色半透明，体胚诱导率较高（延吉
产地为３２．０％，哈尔滨产地为２１．５％）。７月中旬采集
的外植体则启动较慢，但在培养４周时２个产地的合子
胚均有少量愈伤组织和不同时期的体胚产生（延吉产地
为４６．５％，哈尔滨产地为３１．３％）。７月下旬采集的外植
体培养４周后，２个产地均为个别外植体出现少量胚性愈
伤或少量的球形胚（延吉产地为３０．７％，哈尔滨产地为
１６．０％）。伊春产地在７月上旬和中旬采集的外植体，培
养过程中无明显变化，７月下旬采集的外植体在培养４周
时个别子叶张开，仅出现少量愈伤组织，无体胚产生。
２．４．２ 生长调节剂对体胚发生的影响 表４表明，哈
尔滨产地、７月上旬的合子胚在０．１ｍｇ／Ｌ ２，４－Ｄ＋
１．５ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ组合时的体胚诱导率最高，与其它处理
相比差异显著（Ｐ＜０．０５）。７月中旬的外植体，在
０．０５ｍｇ／Ｌ ２，４－Ｄ＋１．０ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ组合中的体胚诱导
率最高，与其它处理相比差异显著（Ｐ＜０．０５）。７月下旬
的外植体在０．２ｍｇ／Ｌ ２，４－Ｄ＋０．５ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ组合中的
体胚诱导率最高，与其它处理相比差异显著（Ｐ＜０．０５）。
３０１
·生物技术· 北方园艺２０１４（１３）：１０２～１０５
表３ 不同植物生长调节剂对哈尔滨和延吉产地愈伤组织诱导的影响
Ｔａｂｌｅ ３ Ｅｆｅｃｔ ｏｆ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｐｌａｎｔ ｇｒｏｗｔｈ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ ｏｎ ｉｎｄｕｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｃａｌｕｓ ｆｒｏｍ ｚｙｇｏｔｉｃ ｅｍｂｒｙｏｓ ｏｆ
Ｓ．ｐｏｈｕａｓｈａｎｅｎｓｉｓ ｃｏｌｅｃｔｅｄ ｉｎ Ｈａｒｂｉｎ ａｎｄ Ｙａｎｊｉ ％
２，４－Ｄ
／ｍｇ·Ｌ－１
６－ＢＡ
／ｍｇ·Ｌ－１
哈尔滨产地合子胚的愈伤诱导率
Ｉｎｄｕｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｃａｌｕｓ ｆｒｏｍ ｚｙｇｏｔｉｃ ｅｍｂｒｙｏｓ ｃｏｌｅｃｔｅｄ ｉｎ Ｈａｒｂｉｎ
延吉产地合子胚的愈伤诱导率
Ｉｎｄｕｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｃａｌｕｓ ｆｒｏｍ ｚｙｇｏｔｉｃ ｅｍｂｒｙｏｓ ｃｏｌｅｃｔｅｄ ｉｎ Ｙａｎｊｉ
７月上旬
Ｉｎ ｅａｒｌｙ Ｊｕｌｙ
７月中旬
Ｉｎ ｍｉｄ Ｊｕｌｙ
７月下旬
Ｉｎ ｌａｔｅ Ｊｕｌｙ
７月上旬
Ｉｎ ｅａｒｌｙ Ｊｕｌｙ
７月中旬
Ｉｎ ｍｉｄ Ｊｕｌｙ
７月下旬
Ｉｎ ｌａｔｅ Ｊｕｌｙ
０ ０ ０ｆ ０ｅ ０ｅ ０ｅ ０ｆ ０ｄ
０ ０．５ ０ｆ ０ｅ ０ｅ ０ｅ ０ｆ ０ｄ
０ １．０ ０ｆ ０ｅ ０ｅ ０ｅ ０ｆ ０ｄ
０ １．５ ０ｆ ０ｅ ０ｅ ０ｅ ０ｆ ０ｄ
０．０５ ０ ４４．６±４．７ｃｄ １９．４±１２．３ｃｄ ２１．１±１５．３ｃ ３４．０±８．４ｃ １４．９±２．４ｄ ２３．０±１３．０ｃ
０．０５ ０．５ ４４．６±６．９ｃｄ ２４．０±１７．９ｃ ２１．５±１３．１ｃ ３３．０±９．５ｃ ２０．６±２．４ｃｄ ２３．３±１１．２ｃ
０．０５ １．０ ７８．９±２４．６ａ ２６．８±２．５ｃ ３２．０±８．８ｂ ３８．３±１２．０ｂｃ １９．７±１７．９ｃｄ ０ｄ
０．０５ １．５ ４８．７±１８．１ｃｄ ２５．４±５．１ｃ １７．５±１５．８ｃｄ ４０．０±１４．５ｂｃ ７．４±６．９ｅ ０ｄ
０．１ ０ ３９．１±１２．５ｃｄｅ １７．２±４．１ｄ ２０．６±１５．２ｃ ３１．６±１２．０ｃ １１．０±３．４ａｂ ０ｄ
０．１ ０．５ ５７．０±１１．２ｂ ２４．８±１５．８ｃ ３３．１±７．４ｂ ３４．０±１６．８ｃ ３．３±２．５ｅｆ ０ｄ
０．１ １．０ ４２．５±５．８ｃｄ ２９．５±５．７ｃ ２５．３±１２．１ｃ ４４．０±５．４ｂ ２．５±２．５ｅｆ ０ｄ
０．１ １．５ ３５．７±８．１ｄｅ ４３．１±１０．３ａ ２３．６±１２．５ｃ ４８．０±８．７ｂ ３．３±２．５ｅｆ ０ｄ
０．２ ０ ３５．１±１２．８ｄｅ ２５．８±１４．１ｃ ２２．１±１６．６ｃ ４６．０±１０．０ｂ １９．９±４．４ｃｄ ２７．３±１３．７ｃ
０．２ ０．５ ３４．９±２４．３ｄｅ ３９．６±１１．４ｂ ５５．５±９．６ａ ４４．０±１５．１ｂ ８．０±２．１ｅ ２２．５±１５．２ｃ
０．２ １．０ ４５．９±６．５ｃｄ １９．０±５．４ｄ ２２．７±１５．１ｃ ４２．２±１３．７ｂ ２４．０±１４．７ｃ ２２．５±１０．１ｃ
０．２ １．５ ２１．０±７．１ｅ １６．５±１１．０ｄ ２７．５±１１．０ｂｃ １４．０±４．０ｄ ８６．５±１８．０ａ ４８．５±２１．５ａ
０．５ ０ ２３．７±５．９ｅ １８．３±２．３ｄ ５２．８±１６．２ａ ４８．６±２５．１ｂ ２６．９±１５．８ｃ ２２．０±１２．４ｃ
０．５ ０．５ ２１．９±１０．９ｅ ２０．８±１０．６ｃｄ ２９．１±１７．７ｂｃ １４．４±５．２ｄ ４４．６±２４．８ｂ ３２．０±１６．６ｂ
０．５ １．０ １８．９±３．１ｅ ２０．０±２６．５ｃｄ ２９．４±８．９ｂｃ ２２．０±２．０ｄ ３９．５±３１．８ｂ ２２．５±２０．５ｃ
０．５ １．５ １５．７±４．４ｅ ２１．３±１２．３ｃｄ ２９．１±１４．５ｂｃ ６２．０±３．７ａ １９．３±１２．３ｄ ３３．３±１５．４ｂ
表４ 不同生长调节剂对哈尔滨和延吉产地合子胚体胚发生的影响
Ｔａｂｌｅ ４ Ｅｆｅｃｔ ｏｆ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｐｌａｎｔ ｇｒｏｗｔｈ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ ｏｎ ｓｏｍａｔｉｃ ｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓ ｆｒｏｍ
ｚｙｇｏｔｉｃ ｅｍｂｒｙｏｓ ｏｆ Ｓ．ｐｏｈｕａｓｈａｎｅｎｓｉｓ ｃｏｌｅｃｔｅｄ ｉｎ Ｈａｒｂｉｎ ａｎｄ Ｙａｎｊｉ ％
２，４－Ｄ
／ｍｇ·Ｌ－１
６－ＢＡ
／ｍｇ·Ｌ－１
哈尔滨产地合子胚的体胚诱导率
Ｉｎｄｕｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｓｏｍａｔｉｃ ｅｍｂｒｙｏ ｆｒｏｍ ｚｙｇｏｔｉｃ ｅｍｂｒｙｏｓ ｃｏｌｅｃｔｅｄ ｉｎ Ｈａｒｂｉｎ
延吉产地合子胚的体胚诱导率
Ｉｎｄｕｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｓｏｍａｔｉｃ ｅｍｂｒｙｏ ｆｒｏｍ ｚｙｇｏｔｉｃ ｅｍｂｒｙｏｓ ｃｏｌｅｃｔｅｄ ｉｎ Ｙａｎｊｉ
７月上旬
Ｉｎ ｅａｒｌｙ Ｊｕｌｙ
７月中旬
Ｉｎ ｍｉｄ Ｊｕｌｙ
７月下旬
Ｉｎ ｌａｔｅ Ｊｕｌｙ
７月上旬
Ｉｎ ｅａｒｌｙ Ｊｕｌｙ
７月中旬
Ｉｎ ｍｉｄ Ｊｕｌｙ
７月下旬
Ｉｎ ｌａｔｅ Ｊｕｌｙ
０ ０ ０ｄ ０ｄ ０ｅ ０ｅ ０ｅ ０ｄ
０ ０．５ ０ｄ ０ｄ ２．０±２．０ｃｄ ０ｅ ０ｅ ０ｄ
０ １．０ ０ｄ ０ｄ ２．０±２．０ｃｄ ０ｅ ０ｅ ０ｄ
０ １．５ ０ｄ ７．５±７．５ｂ ０ｅ ０ｅ ０ｅ ０ｄ
０．０５ ０ ０ｄ １０．０±１０．０ｂ ０ｅ ４．０±２．４ｄ ６．０±２．４ｄ ０ｄ
０．０５ ０．５ ０ｄ ０ｄ ２．０±２．０ｃｄ １０．０±４．５ｃｄ ６．０±２．４ｄ ０ｄ
０．０５ １．０ ０ｄ ３１．３±１１．２ａ ０ｅ ８．０±２．０ｃｄ １０．０±４．４ｄ ０ｄ
０．０５ １．５ ０ｄ １３．３±８．１ｂ ０ｅ １０．０±４．５ｃｄ ０ｅ ０ｄ
０．１ ０ ０ｄ １２．５±１２．５ｂ ０ｅ ２．０±２．０ｄ １２．０±３．７ｃｄ ０ｄ
０．１ ０．５ ０ｄ １３．３±８．１ｂ ０ｅ １４．０±６．８ｃ ０ｅ ０ｄ
０．１ １．０ ０ｄ ０ｄ ０ｅ ４．０±２．４ｄ ０ｅ ０ｄ
０．１ １．５ ２１．５±５．５ａ ０ｄ ２．２±２．２ｃｄ ８．０±３．７ｃｄ １４．４±６．１ｃ ０ｄ
０．２ ０ ０ｄ ３．１±３．１ｃ ０ｅ ６．０±４．０ｃｄ １０．０±４．４ｃ ０ｄ
０．２ ０．５ ０ｄ ０ｄ １６．０±５．１ａ ２４．０±５．１ｂ ８．０±５．８ｄ ２２．５±２．５ｂ
０．２ １．０ １２．０±９．７ｂ ６．３±６．３ｃ １０．０±４．５ｂ １２．２±３．７ｃｄ １０．０±４．４ｃ ３０．７±３．１ａ
０．２ １．５ ０ｄ ０ｄ ２．０±２．０ｃｄ １４．０±４．０ｃ ０ａ ７．５±２．５ｃ
０．５ ０ ０ｄ ４．２±４．２ｃ ０ｅ ０ｅ １２．０±５．８ｃ ０ｄ
０．５ ０．５ ０ｄ ０ｄ １０．０±３．２ｂ １４．４±５．２ｃ １２．０±４．９ｃ ０ｄ
０．５ １．０ ６．６±６．６ｂｃ ０ｄ ６．０±２．４ｃ ２．０±２．０ｄ ２８．７±３．９ｂ ２．５±２．５ｃ
０．５ １．５ ８．０±３．７ｂｃ ８．３±２．８ｂｃ ２．０±２．０ｃｄ ３２．０±３．７ａ ４６．５±１．００ａ ２０．０±４．１ｂ
哈尔滨产地的合子胚，以７月中旬采集并培养在 ＭＳ＋
０．０５ｍｇ／Ｌ ２，４－Ｄ＋１．０ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ上的体胚发生率最
高，为３１．３％。延吉产地、７月上旬和中旬的合子胚均在
ＭＳ＋０．５ｍｇ／Ｌ ２，４－Ｄ＋１．５ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ上体胚诱导率
最高，为３２．０％和４６．５％，与其它处理相比差异显著
（Ｐ＜０．０５）。７月下旬的合子胚在ＭＳ＋０．２ｍｇ／Ｌ ２，４－Ｄ＋
１．０ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ上体胚诱导率最高为３０．７％，与其它处
理相比差异显著（Ｐ＜０．０５）。
３ 讨论
花楸树种子非常小，远远小于乔木树种种子的平均
千粒重，各产地花楸树饱满种子的比例都不高［７－８］。该
研究中不同产地花楸树种子大小、质量及含水量均存在
４０１
北方园艺２０１４（１３）：１０２～１０５ ·生物技术·
显著差异，其中延吉、敦化的产地的种子千粒重最大、种
子质量最好、饱满种子的比例高，而五营产地种子质量
差且发芽率极低。以不同母树来源为影响因素展开细
致研究，以期获得优良的花楸树体胚诱导方案来建立花
楸树体胚发生体系是至关重要的。Ｐｒｅｅｃｅ等［９］研究的
美国白蜡３个母树来源中，１０７８０－２种子的器官发生率最
低，体胚发生率最高，可达１０％左右；１０７０４－２０种子具有
最高的器官发生率，而体胚发生率则最低，仅有４．５％；
１０８１０－１种源的介于二者之间。该研究结果表明，母树
来源对体胚发生的影响不尽相同。以花楸树成熟合子
胚为外植体诱导体胚发生，不同母树来源体胚发生差异
为敦化＞哈尔滨＞五营＞山河。以花楸树未成熟合子
胚为外植体诱导体胚发生，不同母树来源差异为延吉＞
哈尔滨＞伊春。表明气候越适宜花楸树生长的地方体
胚发生率越高。
大多数植物组织培养中，外源生长素和细胞分裂素
是细胞离体培养所必需的激素，二者不同浓度和比例能
够控制细胞分化和形态建成［１０－１１］。大量试验证实，细胞
分裂素配合２，４－Ｄ使用对愈伤组织体细胞胚形成有明
显的促进作用［１２－１４］。花楸树体胚诱导过程中分别使用
了２，４－Ｄ和ＮＡＡ ２种生长素类调节剂，结果发现在成熟
合子胚的体胚诱导过程中使用ＮＡＡ的效果比２，４－Ｄ
好，而在未成熟合子胚的体胚诱导过程中２，４－Ｄ效果好
于ＮＡＡ。２，４－Ｄ显著促进了花楸树未成熟合子胚胚性
愈伤组织的形成，并且２，４－Ｄ的这种促进效应是不可取
代的，即在体胚诱导阶段用ＮＡＡ代替２，４－Ｄ，则体胚诱
导率较低。同时生长素（ＮＡＡ或２，４－Ｄ）和细胞分裂素
（６－ＢＡ）组合时，不但有利于从花楸树合子胚愈伤组织的
诱导，而且可以提高花楸树体胚诱导数量，这与杨玲
等［１５］的研究结果相一致。
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Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｓｏｍａｔｉｃ Ｅｍｂｒｙｏ ｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ Ｏｒｉｇｉｎ ｉｎ
Ｓｏｒｂｕｓ ｐｏｈｕａｓｈａｎｅｓｉｓ Ｈｅｄｌ．
ＺＨＡＮＧ Ｊｉａｎ－ｙｉｎｇ１，ＸＵ Ｃｈｕａｎ－ｌｉｎｇ２，ＳＨＥＮ Ｈａｉ－ｌｏｎｇ３，ＹＡＮＧ Ｌｉｎｇ３，ＬＩ Ｊｉｎｇ１，ＴＩＡＮ Ｘｉｎ－ｈｕａ１
（１．Ｆｏｒｅｓｔｒｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｈａｒｂｉｎ，Ｈｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇ １５００８０；２．Ｄｕｎｈｕａ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ Ｂｕｒｅａｕ，Ｄｕｎｈｕａ，Ｊｉｌｉｎ １３３７００；
３．Ｃｏｌｅｇｅ ｏｆ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ，Ｎｏｒｔｈｅａｓｔ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｒｂｉｎ，Ｈｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇ １５００４０）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔａｋｉｎｇ ｔｈｅ ｍａｔｕｒｅ ａｎｄ ｉｍｍａｔｕｒｅ ｚｙｇｏｔｉｃ ｅｍｂｒｙｏｓ ｏｆ Ｓｏｒｂｕｓ ｐｏｈｕａｓｈａｎｅｎｓｉｓ Ｈｅｄｌ．ａｓ ｅｘｐｌａｎｔｓ，ｔｈｅ ｅｆｅｃｔ ｏｆ
ａｒｅａｓ，ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｔｉｍｅ ａｎｄ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｐｌａｎｔ ｇｒｏｗｔｈ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ ｏｎ ｔｈｅ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｓｏｍａｔｉｃ ｅｍｂｒｙｏｓ ａｎｄ ｃａｌｕｓ
ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｍａｔｕｒｅ ｚｙｇｏｔｉｃ ｅｍｂｒｙｏｓ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ａｓ ｅｘｐｌａｎｔｓ，ｔｈｅ ｅｆｅｃｔ ｏｆ ＭＳ＋
２．０ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋１．５ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ ｏｎ ｃａｌｕｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｏｍａｔｉｃ ｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓ ｗａｓ ｇｏｏｄ．Ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｏｒｉｇｉｎ ｏｆ ｓｏｍａｔｉｃ
ｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓ ｄｉｆｅｒｅｎｃｅｓ ｆｏｒ Ｄｕｎｈｕａ＞Ｈａｒｂｉｎ＞Ｗｕｙｉｎｇ＞Ｓｈａｎｈｅ．Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｉｍｍａｔｕｒｅ ｚｙｇｏｔｉｃ ｅｍｂｒｙｏｓ ａｓ ｅｘｐｌａｎｔｓ，
ＭＳ＋０．０５ｍｇ／Ｌ ２，４－Ｄ＋１．０ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ ｃａｌｕｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｗａｓ ｈｉｇｈ，ｓｏｍａｔｉｃ ｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎ ＭＳ＋２，４－Ｄ
０．２ｍｇ／Ｌ＋１．０ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ ｗａｓ ｔｈｅ ｍｏｓｔ ｓｕｉｔａｂｌｅ．Ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｏｒｉｇｉｎ ｏｆ ｓｏｍａｔｉｃ ｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓ ｄｉｆｅｒｅｎｃｅｓ ｆｏｒ Ｙａｎｊｉ＞
Ｈａｒｂｉｎ＞Ｙｉｃｈｕｎ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｓｏｒｂｕｓ ｐｏｈｕａｓｈａｎｅｓｉｓ；ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｃａｌｕｓ；ｓｏｍａｔｉｃ ｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓ；ｏｒｉｇｉｎ；ｐｌａｎｔ ｇｒｏｗｔｈ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ
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