全 文 ：［收稿日期］ 20130921(008)
［基金项目］ 国家自然科学基金项目(81373968)
［第一作者］ 李转梅，在读硕士，从事中药新药研发与中药炮制原理研究，Tel:15275172822，E-mail:1058794709@ qq． com
［通讯作者］ * 张学兰，硕士生导师，教授，从事中药新药研发与中药炮制原理研究，Tel:13406062766，E-mail:zhang8832440@ sina． com
女贞子酒蒸过程中新女贞苷、
木樨榄苷-11-甲酯和女贞酸的动态变化
李转梅，张学兰* ，李慧芬，崔伟亮
( 山东中医药大学，济南 250355)
［摘要］ 目的:分析女贞子酒蒸过程中 3 种裂环环烯醚萜苷类成分的动态变化规律。方法:采用 HPLC同时测定女贞子
生品及酒蒸不同时间(4，8，12，16，20，24 h)炮制品中新女贞苷、木樨榄苷-11-甲酯和女贞酸含量，流动相乙腈(A)-0. 1%甲酸
溶液(B)梯度洗脱(0 ～ 19 min，12% ～25%A)，检测波长 235 nm。结果:新女贞苷、木樨榄苷-11-甲酯、女贞酸的线性范围分别
为 0. 034 5 ～ 3. 450，0. 005 86 ～ 0. 586，0. 028 6 ～ 2. 860 μg，平均加样回收率分别为 99. 49%，99. 02%，97. 80%。女贞子酒蒸后
新女贞苷、木樨榄苷-11-甲酯含量显著降低，而女贞酸含量显著升高;在 24 h 内，随着蒸制时间的延长，新女贞苷、木樨榄苷-
11-甲酯含量逐渐降低，而女贞酸含量逐渐升高后达稳定状态。结论:女贞子酒蒸后新女贞苷、木樨榄苷-11-甲酯产生质变，女
贞酸发生量变，为科学阐释女贞子炮制机制及其饮片的规范化管理提供实验依据。
［关键词］ 女贞子;酒蒸;新女贞苷;木樨榄苷-11-甲酯;女贞酸
［中图分类号］ Ｒ283. 6 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2014)12-0014-04
［doi］ 10． 13422 / j． cnki． syfjx． 2014120014
［网络出版地址］ http:/ /www． cnki． net /kcms /detail /11． 3495． Ｒ． 20140409． 1448． 002． html
［网络出版时间］ 2014-04-09 14:48
Dynamic Changes of Neonuezhenide，Oleoside-11-methyl Ester and
Nuezhenidic Acid in Wine Steaming Process of Ligustri Lucidi Fructus
LI Zhuan-mei，ZHANG Xue-lan* ，LI Hui-fen，CUI Wei-liang
(Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250355，China)
［Abstract］ Objective: To analyze dynamic changes of three kinds of secoiridoid glycosides
(neonuezhenide，oleoside-11-methyl ester and nuezhenidic acid) in wine steaming process of Ligustri Lucidi
Fructus． Method:Contents of neonuezhenide，oleoside-11-methyl ester and nuezhenidic acid in crude and
processed products of Ligustri Lucidi Fructus were determined by HPLC under processing time span in 4，8，12，
16，20，24 h，mobile phase was acetonitrile (A)-0. 1% formic acid (B)with gradient elution (0-19 min，
12% -25%A)，detection wavelength was set at 235 nm． Ｒesult:Linear range of neonuezhenide，oleoside-11-
methyl ester，nuezhenidic acid were 0. 034 5-3. 450，0. 005 86-0. 586，0. 028 6-2. 860 μg，average recoveries
were 99. 49%，99. 02% and 97. 80%，respectively． After steamed with wine，contents of neonuezhenide and
oleoside-11-methyl ester in Ligustri Lucidi Fructus decreased significantly，but the content of nuezhenidic acid
increased markedly;with extension of steaming time，contents of neonuezhenide and oleoside-11-methyl ester
decreased gradually and the content of nuezhenidic acid increased gradually up to a steady state in 24 h．
Conclusion:After Ligustri Lucidi Fructus been steamed with wine，neonuezhenide and oleoside-11-methyl ester
took qualitative changes while nuezhenidic acid took quantitative changes，this study could provide experimental
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第 20 卷第 12 期
2014 年 6 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 20，No． 12
Jun．，2014
basis to explain processing mechanism and standardized management of Ligustri Lucidi Fructus．
［Key words］ Ligustri Lucidi Fructus;steaming with wine;neonuezhenide;oleoside-11-methyl ester;
nuezhenidic acid
女贞子为中医临床常用的扶正固本中药，具有
滋补肝肾、明目乌发的功效。目前已从女贞子中分
离出近 30 种环烯醚萜苷类化合物，包括裂环环烯醚
萜苷类和环烯醚萜苷类，主要有特女贞苷、女贞苷、
新女贞苷等［1］。环烯醚萜苷类成分为女贞子的主
要活性成分，其中特女贞苷具有免疫促进作用［2］，
橄榄苦苷具有抗氧化、抗炎、降血糖、抗癌作用［3-4］，
女贞苷和 G13 可促进胰岛素抵抗 HepG2 细胞的葡
萄糖消耗［5］。2010 年版《中国药典》规定女贞子中
特女贞苷含量应≥0. 70%［6］。黄雯等［7］测得不同
来源该药材中女贞苷质量分数 0. 24% ～ 3. 06%。
酒蒸女贞子可缓和其凉滑之性，增强滋补肝肾作用，
但炮制机制尚不明确。前期研究表明女贞子经酒蒸
和清蒸后，特女贞苷含量显著降低［8］，但未考察炮制
对该药材中其他环烯醚萜苷类成分的影响。本实验
在对女贞子生品、炮制品中化学成分进行 HPLC-MS
鉴别的基础上，采用 HPLC 比较生品及不同时间酒
蒸炮制品中 3 种裂环环烯醚萜苷类成分(新女贞
苷、木樨榄苷-11-甲酯和女贞酸)的含量，探讨女贞
子酒蒸过程中这 3 种成分的动态变化，为揭示女贞
子的炮制机制及其饮片的质量控制提供参考。
1 材料
L-2000 型高效液相色谱仪(日本日立公司)，
UV-2501PC型紫外-可见分光光度计(日本岛津公
司)。女贞子药材购自亳州市成源中药饮片有限公
司，经本校中药鉴定教研室周凤琴教授鉴定为木犀
科植物女贞 Ligustrum lucidum Ait．的干燥成熟果实;
女贞酸、木樨榄苷-11-甲酯、新女贞苷对照品(上海
一林生物科技有限公司，批号分别为 20120102，
2012121，20120806，纯度均 ＞ 98%)，黄酒(山东即
墨黄酒厂)，乙腈为色谱纯，水为娃哈哈纯净水，其
余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 女贞子炮制品的制备
2. 1. 1 生品 取原药材，除去杂质，洗净，50 ℃
烘干。
2. 1. 2 酒蒸品 取净女贞子 100 g，共 6 份，分别加
入黄酒 20 g，各加水稀释至 40 g，置不锈钢饭盒中，
闷润 4 h，密闭，置蒸锅中分别隔水蒸制 4，8，12，16，
20，24 h，取出，50 ℃烘干。取各炮制品分别粉碎过
60 目筛，备用。按《中国药典》2010 年版一部附录
Ⅸ H水分测定法(烘干法)测定各炮制品中含水量，
结果生品 5. 99%，6 种酒蒸品依次为 5. 91%，
5. 80%，5. 37%，5. 74%，5. 99%，6. 12%，按干燥品
计算样品中各指标成分的含量。
2. 2 色谱条件［9］ Kromasil C18色谱柱(4. 6 mm ×
250 mm，5 μm)，流动相乙腈(A)-0. 1%甲酸溶液
(B)梯度洗脱 (0 ～ 19 min，12% ～ 25% A)，柱温 30
℃，检测波长 235 nm，流速 1. 0 mL·min －1，见图 1。
A．对照品;B．供试品;
1. 女贞酸;2. 木樨榄苷-11-甲酯;3. 新女贞苷
图 1 女贞子生品 HPLC
2. 3 对照品溶液的制备 精密称取女贞酸、木樨榄
苷-11-甲酯、新女贞苷对照品适量，加甲醇制成
0. 345，0. 059，0. 286 g·L －1的混合对照品溶液，备用。
2. 4 供试品溶液的制备 精密称取女贞子各炮制品
粉末(过 60目筛)约 0. 2 g，置具塞锥形瓶中，分别精
密加入 50%甲醇 20 mL，称定质量，超声提取 0. 5 h，
放冷，密塞，称定质量，用 50%甲醇补足减失的质量，
摇匀，滤过，经 0. 45 μm微孔滤膜滤过，即得。
2. 5 线性关系考察 精密吸取混合对照品溶液
0. 01，0. 1，0. 2，0. 5，1 mL，分别置于 1 mL量瓶中，加
甲醇稀释至刻度，摇匀，按 2. 2 项下色谱条件测定，
以进样量为横坐标，峰面积值为纵坐标，得女贞酸、
木樨榄苷-11-甲酯、新女贞苷回归方程分别为 Y =
465 810X + 2 457(r = 0. 999 8)，Y = 950 770 X +
1 427(r =0. 999 7)，Y =232 715 X +1 296(r =0. 999 9)，
线性范围依次为 0. 034 5 ～ 3. 450，0. 005 86 ～
0. 586，0. 028 6 ～ 2. 860 μg。
2. 6 精密度试验 称取适量女贞子生品，按 2. 4 项
下方法制备供试品溶液，按 2. 2 项下色谱条件连续
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李转梅，等:女贞子酒蒸过程中新女贞苷、木樨榄苷-11-甲酯和女贞酸的动态变化
进样 6 次，结果女贞酸、木樨榄苷-11-甲酯和新女贞
苷峰面积的 ＲSD分别为 0. 78%，0. 69%，0. 59%，表
明仪器精密度良好。
2. 7 稳定性试验 取女贞子生品供试品溶液，于室
温下进行自然放置，分别在 0，2，4，6，8，12 h 按 2. 2
项下色谱条件测定，结果女贞酸、木樨榄苷-11-甲
酯、新女贞苷峰面积的 ＲSD依次为 1. 25%，1. 56%，
1. 37%，表明供试品溶液在 12 h内稳定。
2. 8 重复性试验 精密称取女贞子生品粉末(过
60 目筛)0. 2 g，共 6 份，按 2. 4 项下方法制备供试品
溶液，按 2. 2 项下色谱条件测定，计算女贞酸、木樨
榄苷-11-甲酯、新女贞苷的平均质量分数分别为
0. 187%，0. 062 3%，0. 498%，ＲSD 分别为 2. 35%，
1. 67%，2. 12%，表明该方法重复性较好。
2. 9 加样回收率试验 取已知含量的女贞子生品
粉末(过 60 目筛)共 5 份，每份 0. 2 g，精密称定，分
别加入女贞酸(0. 347 g·L －1)、木樨榄苷-11-甲酯
(0. 139 g·L －1)、新女贞苷(1. 076 g·L －1)对照品溶
液各 1 mL，加 50%甲醇补足至 20 mL，按 2. 4 项下
方法制备供试液，按 2. 2 项下色谱条件测定，计算回
收率，结果见表 1。
表 1 女贞子中 3 种裂环环烯醚萜苷类成分含量测定的
加样回收率试验
成分
样品中
质量
/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均
回收率
/%
ＲSD
/%
女贞酸 0. 376 0. 347 0. 727 101. 15 98. 31 2. 04
0. 365 0. 347 0. 709 99. 14
0. 382 0. 347 0. 715 95. 97
0. 371 0. 347 0. 709 97. 41
0. 369 0. 347 0. 715 99. 71
0. 391 0. 347 0. 726 96. 54
木樨榄苷-11-甲酯 0. 122 0. 139 0. 264 102. 15 98. 08 2. 21
0. 114 0. 139 0. 248 96. 40
0. 127 0. 139 0. 263 97. 84
0. 131 0. 139 0. 266 97. 12
0. 142 0. 139 0. 279 98. 56
0. 135 0. 139 0. 269 96. 40
新女贞苷 1. 063 1. 076 2. 131 99. 26 99. 43 1. 06
1. 104 1. 076 2. 176 99. 63
1. 096 1. 076 2. 154 98. 33
1. 045 1. 076 2. 134 101. 21
1. 116 1. 076 2. 189 99. 72
1. 045 1. 076 2. 104 98. 42
2. 10 样品测定 分别精密吸取混合对照品溶液与
各供试品溶液 10 μL，按 2. 2 项下色谱条件测定，结
果见表 2。
表 2 女贞酸、木樨榄苷-11-甲酯、新女贞苷含量测定(n = 2) %
样品
女贞酸 木樨榄苷-11-甲酯 新女贞苷
质量
分数
增加率
质量
分数
降低率
质量
分数
降低率
生品 0. 189 0 0. 060 9 0 0. 533 0
酒蒸 4 h 0. 517 173. 5 0. 034 7 43. 0 0. 145 72. 8
酒蒸 8 h 0. 536 183. 6 0. 022 9 62. 4 0. 091 82. 9
酒蒸 12 h 0. 576 204. 8 0. 013 1 78. 5 0. 070 86. 9
酒蒸 16 h 0. 601 218. 0 0. 004 6 92. 5 0. 031 94. 2
酒蒸 20 h 0. 616 225. 9 0. 002 5 95. 9 0. 020 96. 2
酒蒸 24 h 0. 615 225. 4 － 100. 0 － 100. 0
注:“ －”表示含量甚低，未进行测定，降低率按 100%计。
3 讨论
本文建立了采用 HPLC同时测定女贞子中新女
贞苷、木樨榄苷-11-甲酯和女贞酸含量的方法。预
试验对提取溶剂甲醇、乙醇、50%甲醇进行比较，结
果以 50%甲醇为最佳;对超声法和冷浸法进行比
较，结果显示 50%甲醇超声提取 0. 5 h含量最高;同
时对检测波长、流动相等进行了考察，结果表明该方
法灵敏可靠、重复性好，适用于女贞子炮制品的含量
测定。
6 种酒蒸品中新女贞苷、木樨榄苷-11-甲酯含量
均较生品显著降低，而女贞酸含量显著升高;且在
24 h 内，随蒸制时间的延长，新女贞苷、木樨榄苷-
11-甲酯含量逐渐降低，而女贞酸含量先逐渐增加后
达到稳定状态。说明新女贞苷、木樨榄苷-11-甲酯
在酒蒸过程中性质不稳定而发生转化，且前者较后
者稳定性更差，在酒蒸过程中转化速度更快;而女贞
酸对黄酒和加热性质稳定，不易被转化。
环烯醚萜苷类成分性质不稳定，易被水解［10］。
女贞子酒蒸后特女贞苷含量降低，而其次级苷红景
天苷含量显著升高［11］。女贞子酒蒸后新女贞苷、木
樨榄苷-11-甲酯含量降低，分析是由于其分子中酰
苷键及(或)环烯醚萜部分的 O-苷键发生水解所致。
橄榄苦苷酸、女贞苷酸分子中裂环部分均含有不饱
和羧基，不饱和羧酸性质活泼，可与水发生加成反
应。女贞子酒蒸后女贞酸含量显著升高，可能是由
于女贞苷酸、橄榄苦苷酸等分子中酰苷键水解及裂
环上不饱和双键与水发生加成反应生成女贞酸的缘
故。中药炮制后药性和药效的变化，根源为内在物
质基础发生变化，女贞子酒蒸后凉滑之性缓和、补肝
肾作用增强与女贞子中部分环烯醚萜苷类成分在酒
蒸过程中发生水解转化密切相关。
2010年版《中国药典》中女贞子和酒女贞子饮
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第 20 卷第 12 期
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中国实验方剂学杂志
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檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶
片的质量评价方法完全相同，且规定二者的特女贞
苷含量均应≥0. 70%［6］，这种评价方法不能反映女
贞子生品和炮制品内在质量和药效的差异，忽视了
女贞子在炮制过程中特女贞苷向红景天苷的转化及
新女贞苷、女贞酸等环烯醚萜苷类成分的变化，难以
有效区分和控制女贞子生、熟饮片的质量，进而影响
其临床疗效。
［参考文献］
［1］ Huang X J，Wang Y，Yin Z Q，et al． Two new dimeric
secoiridoid glycosides from the fruits of Ligustrum
lucidum［J］． J Asian Nat Prod Ｒes，2010，12(8):685.
［2］ 蔡溱，石力夫，胡晋红，等．特女贞甙体外对小鼠脾淋
巴细胞转化和自然杀伤细胞活性的影响［J］．第二军
医大学学报，1998，19(1):76.
［3］ Han J，Talorete T P N，Yamada P，et al． Anti-
proliferative and apoptotic effects of oleuropein and
hydroxytyrosol on human breast cancer MCF-7 cells［J］．
Cytotech，2009，59(1) :45.
［4］ Al-Azzawie H F，Alhamdani M S． Hypoglycemic and
antioxidant effect of oleuropein in alloxan-diabetic
rabbits［J］． Life Sci，2006，78(12) :1371.
［5］ 姜斐，姚楠，钱士辉，等．女贞子中 8 个化合物对胰岛
素抵抗 HepG2 细胞葡萄糖消耗的影响［J］． 海峡药
学，2010，22(1):164.
［6］ 国家药典委员会．中华人民共和国药典．一部［S］．北
京:中国医药科技出版社，2010:43.
［7］ 黄雯，苏子仁，毕文川，等． HPLC 法测定女贞子药材
中女贞苷的含量［J］． 药物分析杂志，2009，29
(5):824.
［8］ 张学兰，侯杰，李慧芬，等．炮制对女贞子中特女贞苷
含量的影响［J］．中药材，2009，32(4):498.
［9］ 李阳，孙文基．女贞子中 2 种主要裂环环烯醚萜苷类
成分的含量考察［J］． 中国中药杂志，2008，33
(18):2099．
［10］ 吴立军．天然药物化学［M］．北京:人民卫生出版社，
2003:229.
［11］ 王瑞芳，张学兰，鹿栋尧，等．女贞子不同工艺炮制品
中红景天苷和酪醇含量比较［J］． 中成药，2009，31
(1):85.
［责任编辑 刘德文］
［收稿日期］ 20130917(005)
［基金项目］ 青海大学中青年基金项目(2012-QYY-1);青海大学医学院大学生科技创新基金项目
［通讯作者］ * 胡春晖，硕士，助教，从事中药制剂学研究，Tel:0971-5310410，E-mail:chunhuihu@ hotmail． com
正交试验优选猫爪草中小毛茛内酯的提取工艺
胡春晖1* ，邱祥建2，袁庆1
( 1. 青海大学医学院，西宁 810001; 2. 青海省西宁市南川东路社区卫生服务中心，西宁 810000)
［摘要］ 目的:建立小毛茛内酯的含量测定方法，优选猫爪草中小毛茛内酯的提取工艺。方法:采用 HPLC 测定小毛茛
内酯含量，流动相甲醇-乙腈-水(40∶ 40∶ 20)，检测波长 254 nm。在单因素试验基础上，以小毛茛内酯质量分数为指标，采用
L9(3
4)正交试验考察提取时间、料液比、乙醇体积分数及粉碎粒度对提取工艺的影响。结果:最佳提取工艺为粉碎粒度 80 目，
加 3 倍量 70%乙醇提取 3 次，每次 2 h;小毛茛内酯质量分数(1. 24 ± 0. 22)%。结论:优选的工艺稳定可行且提取率高，为猫
瓜草的开发与利用提供参考。
［关键词］ 猫爪草;小毛茛内酯;正交试验;提取工艺
［中图分类号］ Ｒ283. 6 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2014)12-0017-03
［doi］ 10． 13422 / j． cnki． syfjx． 2014120017
［网络出版地址］ http:/ /www． cnki． net /kcms /detail /11． 3495． Ｒ． 20140409． 1450． 004． html
［网络出版时间］ 2014-04-09 14:50
Optimization of Extraction Technology for Ternatolide from
Ｒanunculi Ternati Ｒadix by Orthogonal Test
·71·
第 20 卷第 12 期
2014 年 6 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 20，No． 12
Jun．，2014