全 文 ：HPLC法同时测定台湾市售女贞子中红景天苷、女贞子苷的含量
李元圆1，3，何玉铃2
* ，张永勋3
(1．浙江医学高等专科学校，杭州 310053;2．弘光科技大学，台中 43302;3．中国医药大学，台中 40402)
摘要 目的:采用反相高效液相色谱法同时测定台湾市售女贞子中红景天苷和女贞子苷的含量。方法:以 Dikma inspire C18色
谱柱(4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ，甲醇 －水为流动相，梯度洗脱，流速 1． 0 mL·m in －1，柱温 30℃，检测波长 220 nm。结果:红景
天苷在 1. 8 ～ 58. 5 mg·mL － 1(r = 0. 9999)、女贞子苷在 13. 2 ～ 423. 5 mg·mL － 1(r = 0. 9999)范围内与峰面积呈良好线性关
系;平均加样回收率(n = 9)分别为 100. 9%和 98. 3%。结论:10 批台湾市售女贞子的含量测定结果表明，该方法简便、快速，
重复性好，为评价女贞子药材质量提供了参考。
关键词:女贞子;红景天苷;女贞子苷;高效液相色谱法;含量测定
中图分类号:R917 文献标志码:A 文章编号:0254 － 1793(2013)02 － 0230 － 04
HPLC simultaneous determination of salidroside，
nuezhenide in Fructus Ligustri Lucidi from Taiwan market
LI Yuan － yuan1，3，HO Yu － ling，2* ，CHANG Yuan － shiun3
(1． Zhejiang Medical College，Hangzhou，Zhejiang 310053，China;2． Hungkuang University，Taichung 43302，China;
3． China Medical University，Taichung 40402，China)
Abstract Objective:To establish a quantitative method for simultaneous determination of salidroside and nu-
ezhenide in Fructus Ligustri lucidi． Method:The separation was performed on a Dikma inspire C18 column(4. 6 mm
×250 mm，5 μm)at 30 ℃ with a gradient elution consisting of mobile phases A(water)and B(methanol)at a flow
rate of 1. 0 mL·min －1 ． The detection wavelength was 220 nm． Result:The linear ranges of salidroside and nu-
ezhenide were 1. 8 － 58. 5 mg·mL － 1(r = 0. 9999)and 13. 2 － 423. 5 mg·mL － 1(r = 0. 9999) ，respectively． The
average recoveries(n = 9)of salidroside and nuezhenide were 100. 9% and 98. 3%，respectively． Conclusion:The
established method was applied for the analysis of ten samples from Taiwan market，and the results indicate that the
method is simple，rapid and reliable for quality evaluation of Fructus Ligustri lucidi．
Key words:Fructus Ligustri Lucidi．;salidroside;nuezhenide;HPLC;assay
女贞子(Fructus Ligustri Lucidi)为木犀科植物女
贞 Ligustrum lucidum Ait．的干燥成熟果实［1］，主产于
浙江、云南、贵州、广东等省。女贞子及其炮制品酒女
贞子具有滋补肝肾、明目乌发的功效，被中医视为养
阴佳品，在大陆及台湾地区广泛使用。现代研究表明
女贞子具有抗氧化、抗炎、保肝、耐缺氧、降血糖、抗肿
瘤等多种药理活性［2 － 8］。其主要活性成分为裂环环
烯醚萜类的女贞子苷(nuezhenide)和苯乙醇苷类的红
景天苷(salidroside)及三萜类的熊果酸等［9］，其中裂
环环烯醚萜苷类成分在酒制后易水解生成次级苷红
景天苷［10］，具有免疫调节、抗衰老、保肝等活性［11］。
近年来已有测定女贞子及其复方“二至丸”中相关成
分的报道［1 2 － 15］。但未见同时测定女贞子药材中红景
天苷及女贞子苷的研究。中国药典 2010 年版一部和
香港中药材标准分别以特女贞苷和红景天苷为指标
成分对女贞子进行质量控制［1，16］，表明红景天苷及裂
环环烯醚萜苷类的含量代表了女贞子药材的内在质
量。本研究同时测定了女贞子药材中红景天苷及女
贞子苷的含量，该方法简便可靠、专属性强，为全面评
价女贞子药材质量提供了依据。
1 仪器与试药
Waters Alliance e2695 系列高效液相色谱仪
—032— 药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2013，33(2)
* 通讯作者 Tel: (+ 886)4 － 22030380;E － mail:elaine@ sunrise． hk． edu． tw
(waters e2695 separations Module、2998 PDA Detec-
tor、HT －220A柱温箱) ;METTLER AT201 型电子天
平(十万分之一) ;Delta DC200H数控超声波清洗器
(功率 200 W，频率 40 kHz)。
对照品红景天苷、女贞子苷由上海中药标准化
研究中心提供，纯度≥98%;甲醇为色谱纯;水为重
蒸水;其余溶剂为分析纯。
女贞子药材分别购于台北、台中、台南，经中国
医药大学吴坤璋博士鉴定为女贞子 Fructus Ligustri
lucidi。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 色谱柱:Dikma Inspire C18(250 mm
× 4. 6 mm，5 μm) ;流动相:以水为 A相，以甲醇为 B
相，梯度洗脱:0 － 16 min，17% B;16 － 25 min，17 －
35% B;25 － 50 min，35% B;流速:1 mL·min －1;柱
温为 30 ℃;检测波长为 220 nm;进样量 10 μL。此
条件下红景天苷和女贞子苷的保留时间分别为
12. 762 min、42. 858 min。
2. 2 对照品溶液的制备 精密称取对照品红景天
苷 1. 17 mg、女贞子苷 8. 47 mg 置 10 mL 量瓶中，以
80%甲醇溶解并稀释至刻度，制得红景天苷、女贞子
苷浓度分别为 0. 117 mg·mL －1、0. 847 mg·mL －1的
混合对照品储备液。
2. 3 供试品溶液的制备 取本品粉末(三号筛)
0. 2 g，精密称定，置 50 mL离心管中，加入 80%甲醇
10 mL，超声提取 30 min，离心 10 min(3000 × g) ，
滤过，滤液转移至 25 mL 量瓶中，重复提取 1 次，残
渣以少量 80%甲醇洗涤，合并滤液。加 80%甲醇至
刻度，摇匀，以 0. 45 mm 微孔滤膜滤过，即得。
2. 4 检测限与定量限 以信噪比为 3∶ 1 确定红景
天苷、女贞子苷的检测限为 0. 0760 mg·mL －1、
0. 225 mg·mL －1。以信噪比为 10:1 确定红景天
苷、女贞子苷的定量限为 0. 457 mg·mL －1、1. 50 mg
·mL －1，RSD分别为 1. 0%、1. 9%。
2. 5 线性关系 精密吸取混合对照品储备液适
量，配成系列浓度的对照品溶液。分别精密吸取
10 mL，按上述色谱条件进样分析。以进样浓度
(X，mg·mL －1)为横坐标，峰面积积分值(Y)为纵
坐标，制作标准曲线，得红景天苷、女贞子苷的回
归方程分别为:
Y = 1. 237 × 104X － 3. 564 × 103 r = 0. 9999
Y = 1. 074 × 104X + 4. 421 × 103 r = 0. 9999
结果表明，红景天苷和女贞子苷分别在浓度 1. 8 ～
58. 5 mg·mL － 1和 13. 2 ～ 423. 5 mg·mL － 1与峰面
积积分值呈良好线性关系(n = 5)。
2. 6 精密度试验
日内精密度(n = 5)准确吸取同一供试品溶液
10 μL连续进样 5 次，求得红景天苷、女贞子苷峰面
积的 RSD分别为 0. 3%、0. 2%。
日间精密度(n = 15)上述供试品分别测定 3 d，
每天测定 5 次，求得红景天苷、女贞子苷峰面积的
RSD分别为 0. 5%、0. 4%。
2. 7 重复性试验 取同一样品(湖南)6 份，精密称
定，按“供试品溶液制备”项下操作，在上述色谱条
件下进样测定，红景天苷、女贞子苷的平均含量分别
为 0. 283%、2. 66%;RSD分别为 1. 4%、0. 6%。
2. 8 稳定性试验 准确吸取同一供试品溶液 10
mL，分别在 0、1、2、4、8、12、24、36、48、72 h 进行测
定，红景天苷、女贞子苷峰面积的 RSD 分别为
0. 6%、0. 4%。表明，样品在 72 h内稳定。
2. 9 加样回收率试验 取已知红景天苷、女贞子苷
含量(0. 291%、2. 64%)的女贞子药材粉末 9 份，每
份约 0. 1 g ，精密称定，分别精密加入高、中、低 3 个
水平的红景天苷、女贞子苷标准品(红景天苷
0. 334、0. 263、0. 215 mg，女贞子苷 3. 388、3. 049、
2. 372 mg) ，每个水平平行 3 份，按“2. 3”项下方法
制备供试品溶液，在上述色谱条件下进样测定，计算
回收率，结果见表 1。红景天苷、女贞子苷的平均回
收率(n = 9)分别为 100. 9%、98. 3%;RSD 分别为
2. 9%、2. 8%。
2. 10 耐用性试验 对同一批样品按“2. 3”项下方
法制备供试品溶液，分别考察了不同流速、柱温、色
谱柱条件下方法的耐用性。在流速分别为 0. 9、
1. 0、1. 1 mL·min －1时，测得红景天苷、女贞子苷含
量的 RSD 分别为 1. 5%、0. 1%。在柱温分别为 25、
30、35 ℃时，测得红景天苷、女贞子苷含量的 RSD分
别为 1. 5%、0. 9%。分别采用 Dikma Inspire C18
(250 mm × 4. 6 mm，5 μm)、Alltech Alltima C18(250
mm ×4. 6 mm，5 μm)、Ascentis C18(250 × 4. 6 mm，5
μm)色谱柱，测得红景天苷、女贞子苷含量的 RSD
分别为 2. 4%、0. 4%。测定结果表明，本文建立的
女贞子药材中红景天苷、女贞子苷的含量测定方法
具有较好的耐用性。
2. 11 样品含量测定 按照本方法的测定条件，分
别测定 10 批女贞子药材样品，每个批次平行 2 份，
每份样品平行进样 2 针，以外标法计算样品中红景
天苷、女贞子苷的含量，结果见表 2。对照品和样品
的色谱图见图 1。
—132—药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2013，33(2)
表 1 加样回收率试验考察结果(n =9)
Tab 1 Recoveries of salidroside and nuezhenide in samples
化合物
(compound)
称样量
(sample weight)/g
含有量
(content of
sample)/mg
加入量
(added)
/mg
测得量(measureed
quantity)/mg
回收率
(recovery)
/%
平均回收率
(average recovery)
/%
RSD
/%
红景天苷
(salidroside)
女贞子苷
(nuezhenide)
0. 1018
0. 1006
0. 1003
0. 1005
0. 1019
0. 0998
0. 1018
0. 1021
0. 1020
0. 1018
0. 1006
0. 1003
0. 1005
0. 1019
0. 0998
0. 1018
0. 1021
0. 1020
0. 296
0. 292
0. 291
0. 292
0. 296
0. 290
0. 296
0. 297
0. 296
2. 69
2. 66
2. 65
2. 65
2. 69
2. 64
2. 69
2. 70
2. 69
0. 215
0. 215
0. 215
0. 263
0. 263
0. 263
0. 334
0. 334
0. 334
2. 37
2. 37
2. 37
3. 05
3. 05
3. 05
3. 39
3. 39
3. 39
0. 515
0. 498
0. 511
0. 548
0. 567
0. 566
0. 629
0. 641
0. 630
4. 95
5. 02
4. 91
5. 72
5. 64
5. 53
6. 12
6. 09
6. 13
101. 9
95. 8
102. 3
97. 3
103. 0
104. 9
99. 7
103. 0
100. 0
95. 4
99. 6
95. 4
100. 7
96. 7
94. 8
101. 2
100. 0
101. 5
100. 9
98. 3
2. 9
2. 8
表 2 各批次女贞子药材中红景天苷和女贞子苷的含量(n =2)
Tab 2 Contents of salidroside and nuezhenide in Fructus Ligustri lucidi．
编号
(sample No．)
采购地
(purchase place)
样品来源
(source)
药材含量(content)/%
红景天苷
(salidroside)
女贞子苷
(nuezhenide)
加 和
(total)
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
平均值(average)
台北(Taibei)
台北(Taibei)
新北(Xinbei)
桃园(Taoyuan)
苗栗(Miaoli)
台中(Taizhong)
台南(Tainan)
高雄(Gaoxiong)
高雄(Gaoxiong)
台东(Taidong)
湖南(Hunan)
湖南(Hunan)
安徽(Anhui)
湖北(Hubei)
广东(Guangdong)
广东(Guangdong)
湖南(Hunan)
江苏(Jiangsu)
广东(Guangdong)
安徽(Anhui)
0. 100
0. 291
0. 190
0. 0530
0. 131
0. 0960
0. 107
0. 0930
0. 0620
0. 242
0. 137
0. 976
2. 62
3. 51
0. 515
2. 27
0. 294
1. 63
1. 60
1. 11
1. 85
1. 64
1. 08
2. 91
3. 70
0. 568
2. 40
0. 390
1. 74
1. 69
1. 17
2. 09
1. 77
图 1 女贞子对照品(A)供试品(B)色谱图
Fig 1 HPLC chromatograms of reference substances(A)and Fructus Li-
gustri lucidi(2 Hunan) (B)
1．红景天苷(salidroside) 2．女贞子苷(nuezhenide)
3 讨论
3. 1 指标成分的选择 近年来对女贞子水溶性化
学成分裂环环烯醚萜类和苯乙醇苷类的研究越来越
受到重视［17 － 18］。研究表明女贞子在酒制后其裂环
环烯醚萜苷类成分易水解生成次级苷红景天苷。而
中国药典 2010 年版一部和香港中药材标准分别以
特女贞苷和红景天苷为指标成分对女贞子进行质量
控制，表明红景天苷及裂环环烯醚萜苷类的含量代
表了女贞子药材的内在质量。本文在研究过程中拟
测定红景天苷、特女贞苷及女贞苷 3 个指标成分，但
仅购买到红景天苷及女贞苷的对照品，因此，选择红
景天苷和裂环环烯醚萜苷类成分女贞子苷作为女贞
子药材的含量测定指标成分，以期全面评价女贞子
药材的质量。
—232— 药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2013，33(2)
3. 2 检测波长的选择 红景天苷、女贞子苷的最大吸
收波长分别为 220 nm和 224 nm。在 220 nm下两者均
有较强的紫外吸收，故选择 220 nm作为检测波长。
3. 3 HPLC色谱条件的优化 分别考察了乙腈 －水
系统、甲醇 －水系统，结果发现甲醇 －水系统有较好
的色谱峰形及分离度。优化梯度洗脱条件后发现，在
本文确定的洗脱条件下待测成分能获得较好的分离
度，且能得到平稳的基线，因此选择此色谱洗脱条件。
3. 4 供试品溶液制备方法考察 分别考察了乙醇、
50%乙醇，甲醇和 50%、60%、70%、80%、90%甲醇
为提取溶剂时红景天苷、女贞子苷的提取效率。结
果表明 80%甲醇的提取效率最高。以此溶剂考察
了溶剂用量及超声提取次数，结果表明超声提取
2 次，每次 10 mL 即可提取完全，此法操作方便，重
现性好。
3. 5 小结 台湾市售女贞子药材主要来源于湖南、
广东、江苏等省，有酒蒸制品和生品两种。10 批药
材中 6 号和 9 号为酒蒸制品，其余各批次为生品。
两批酒蒸制品中，红景天苷的含量较生品未见增加，
可能与炮制工艺有关。10 批药材测定结果显示，
女贞子药材中红景天苷、女贞子苷的含量无明显相
关性，红景天苷、女贞子苷的总含量在 0. 390% ～
3. 70%。不同批次药材间含量差异较大，其中桃源
(湖北)、台中(广东)2 批药材中红景天苷、女贞子
苷的含量偏离平均值较多，其加和量仅为 0. 568%、
0. 390%。因此，为了全面评价女贞子药材的质量，
有必要同时测定红景天苷和女贞子苷的含量。
本文建立的女贞子药材 HPLC含量测定法操作
简便、快速准确、耐用性好，适用于女贞子药材炮制
品和生品，为全面评价女贞子药材质量提供了参考。
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(本文于 2012 年 8 月 20 日收到)
—332—药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2013，33(2)