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聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴别女贞子与日本女贞子



全 文 :山东中医杂志 2010 年 5 月第 29 卷第 5 期
而且所引多种食药用法体现出“因病而异”的思想,
给我们当今的食药乃至中药的应用带来很多启发。
因为药性药用各不相同,用法理应不同,应根据药性
和药物不同而变化,即食药或中药的用法能直接影
响药效的发挥。 我国自古便有“药食同源”之说,《食
疗本草》一书中所引食药很多都是我们传统中药材,
所以进一步研究和探讨书中食药用法,同时也可以
不断补充和完善中药用法,逐渐增强临床疗效。 此
书不但包括传统中药各种用药方法,而且根据食疗
特点,记录了很多膳食治疗方法,如粥、膏、各种面
食,制作和服用都很贴近人们的生活,容易为人们接
受,而且本书治疗皮肤(如疮、痈等)、筋骨肌肉方面
的疾患时,非常注重外用法,使药物直达病所。 此
外,该书中反映的食药用法“因病而异”的思想,更
加完善了个体化治疗方案,借助药物不同用法提高
了药效,可指导我们继续研究食药的用法,对中药剂
型和中医食疗学都是非常有益的补充。
女贞子(Fructus Ligustri Lucidi)为木犀科植物
女贞(Ligustrum iucidum Ait.)的果实[1]。 主产江苏、
浙江、湖南、福建、广西、江西、四川。 果实卵形、椭圆
形或肾形,长 6~8.5 mm,直径 3.5~5.5 mm。 表面黑
紫色或灰黑色,皱缩,基部有果梗痕或具宿萼及短
梗,体轻。 外果皮薄,中果皮较松软,易剥离,内果皮
木质,黄棕色具纵棱,种子 1~2粒,肾形,紫黑色,油
性。无臭,味甘而微苦涩。 女贞子化学成分含女贞子
苷(nuzhenide)、洋橄榄苦苷(oleuropein)、齐墩果酸
(oleanolic acid)、4- 羟基 -B- 苯乙基 -B-D- 葡萄糖
苷、桦木醇(betulin)。日本女贞来源为木犀科植物日
本女贞(Ligustrum japonicum Thumb.)的果实。 原产
地:日本、韩国、中国。 果实核果状,长椭圆形,细而
圆,直径约 0.5 cm,成熟时紫黑色。 用途:观赏用庭园
树、绿篱、盆栽。种子为强壮剂;叶捣烂可敷肿毒。 有
毒部位:树皮、叶和果实有毒。 中毒症状:家畜误食枝
叶及树皮后,会四肢无力、瞳孔放大、黏膜轻度瘀血,
2~3 d后死亡,误食果实会下痢、全身不适。 近年来,
日本女贞作为行道树、绿化树种在城市、乡村中越来
越多,其果实作为女贞子误采误用的情况多有发生。
二者果实外形相似,大小相近,仅凭传统的性状、显
微鉴别等方法较难区分。 笔者用聚丙烯酰胺凝胶电
泳方法鉴别二者[2],方法简便,结果可靠,报道如下。
1 材料
1. 1 材料 1 号:女贞子 2007 年 10 月采集于山东
济南;2 号:日本女贞的果实 2008 年 3 月采集于山
东中医药大学长清校区;3号:日本女贞的果实 2007
年 10 月采集于山东济南经十路;4 号:日本女贞的
果实 2008年 4月采集于山东济南经十路。
1. 2 仪器与试剂 DYY-8B 稳流稳压电泳仪(北京
六一仪器厂)、DYCZ-24D 双垂直电泳槽(北京六一
仪器厂)、凝胶成像紫外分析仪(北京新技术研究
所)、台式高速冷冻离心机(长沙维尔康湘鹰离心机
厂)、电子天平(上海精密科学仪器有限公司)、微量
进样器(北京青云卓力精密设备有限公司)、大培养
皿、研钵等。 分离胶缓冲液、分离胶贮液、浓缩胶缓
冲液、浓缩胶贮液、40%蔗糖溶液、四甲基乙二铵、电
极缓冲液、考马斯亮蓝染色液、脱色液、固定液。 所
用化学试剂、药品均为分析纯。
2 方法
2. 1 样品制备 称取四种样品各 0.2 g,各加入稀释
四倍的浓缩胶缓冲液 3 ml,研磨至匀浆,离心 10 min
(9 000 r/min),取上清液加入等体积的 40%蔗糖溶
液,作为供试样品溶液,置冰箱内冷藏保存备用。
2. 2 电泳操作 [3] 用微量上样器吸取供试样品
30 μl,缓缓的注入样品槽的底部,加入样品后在电
泳槽中加入电极缓冲液,液面要高出矮玻璃板顶部,
在负极槽的电极缓冲液中加入 1~2 滴溴酚蓝指示
剂。 接上正负极,按电泳的条件开始电泳,电泳开始
阶段的电流控制在 30 mA,待样品进入分离胶后将
聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴别女贞子与日本女贞子
刘 杨,李 峰,谭 颖,曹旭峰
(山东中医药大学,山东 济南 250355)
[摘要] 目的:利用聚丙烯酰胺凝胶电泳对女贞果实及日本女贞果实进行鉴定。 方法:采用聚丙烯酰胺凝胶电泳对女贞的果
实及日本女贞的果实进行分析。 结果:实验结果显示出两种果实的明显不同,因此可以确定两者之间有明显差别。 结论:该电泳
方法可作为女贞和日本女贞优质种质资源的鉴别依据之一。
[关键词] 女贞子;日本女贞;果实;聚丙烯酰胺凝胶电泳
[中图分类号] R284.1 [文献标识码] A [文章编号] 0257-358X(2010)05-0339-02
[收稿日期] 2009-12-28
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山东中医杂志 2010 年 5 月第 29 卷第 5 期
电流调至 70 mA,待指示剂行至距离底部 0.5~1 cm
处时,关闭电源,停止电泳。
2. 3 染色与脱色 [4] 电泳结束后,打开电泳槽,取
出胶板,切去浓缩胶。 保留分离胶并标记溴酚蓝前
沿。 将胶板浸于考马斯亮蓝 R250染色液中,在恒温
箱中 37℃染色 1~2 h,至谱带清晰。 染色后用水冲
去凝胶表面附着的染料,用脱色液脱色,经常更换脱
色液,直至背景清晰为止。 脱色后至固定液中长久
保存。
2. 4 结果与分析
胶板经脱色后显示出清晰的谱带,胶板照相处
理后,见图 1。 根据谱带色深者为一级谱带,色浅者
为二级谱带,色极浅者为三级谱带,扩散带为四级谱
带的原则,可以发现 2,3,4 号样品各有一条一级谱
带,二级谱带一条,三级谱带二条,1 号样品有一级
谱带一条,二级谱带一条,三级谱带一条。 直观上 1
号样品与 2,3,4 号样品有明显的差别。 经过凝胶成
像紫外分析仪扫描处理后各谱带的分析结果可以发
现 2,3,4 号样品的有 4 条谱带,1 号样品有 3 条谱
带,具有明显的差异[5]。
2. 4. 1 泳动率 根据泳动率公式 RF= 样品谱带泳
动距离∕溴酚蓝前沿泳动距离 [6]。 可求得实验四种
样品的泳动率,并根据泳动率小于 0.3 为 A 区,大于
0.3 小于 0.74 为 B 区,大于 0.74 为 C 区的原则对谱
带进行分区,得到的结果见表 1。
2. 4. 2 重现性 重复实验 10 次得到样品的泳动率
和峰面积的 RSD 分别小于 1.3%和 7.5%,对于同样
的条件下重复试验 10 次,泳动率和峰面积的 RSD
分别小于 1.1%和 7.2%,基本满足稳定性的要求。
3 讨论
由图谱可以发现四种样品显现相同的谱带,如
A2、B1 和 B2 处,符合女贞与日本女贞同属木犀科
植物的亲缘关系。 但同时区别也很明显,女贞子的
电泳图谱上在 A1 区没有谱带,而日本女贞子的电
泳谱带在 A1 处则有明显的谱带。 可以利用谱带数
目上的明显差异来鉴别女贞子与日本女贞子。
[参考文献]
[1] 张贵君. 常用中药生物鉴定[M]. 北京:化学工业出版社,2006:
63.
[2] 夏其昌,张祥民,周仲驹,等. 蛋白质电泳技术指南[M]. 北京:
化学工业出版社,2007:22.
[3] 赵华英,陈永林. 苋科六种种子类药材的蛋白电泳鉴别[J]. 中
国中药杂志,2000,25(1):52.
[4] 宋贤丽,郭宝林,刘克武,等. 6 种决明属药用植物种子毛细管电
泳法鉴别[J]. 中国中药杂志,2003,28(6):491.
[5] 王天松. 毛细管电泳与中草药指纹图谱[J]. 中草药,2000,22(6):
397.
[6] 何忠效,张树政. 电泳[M]. 2 版. 北京:科学出版社,1999:37-
39,133-137.
我国中成药品种繁多,使用方便,然而由于中成
药品种繁多,配方各异,剂型多样,疗效不同,每一中
成药各有它的一定疗效特点和适用范围,所以临床
存在着中成药处方不合理的问题 [1]。 中成药用之得
当,可迅速奏效,反之,轻者浪费药品和贻误病情,严
重者出现不良反应,甚至危及生命,对此决不可轻
视。 下面就临床常见辨证运用的中成药举例说明如
下。
合理使用中成药
丁彬彬
(天津中医药大学 2003年级七年制,天津 300193)
[关键词] 中成药;合理使用;证候
[中图分类号] R286 [文献标识码] B [文章编号] 0257-358X(2010)05-0340-02
[收稿日期] 2009-12-17
表 1 四种样品的泳动率
编号
A 区 B 区
A1 A2 B1 B2
1 0.19 0.335 0.46
2 0.13 0.19 0.325 0.455
3 0.125 0.19 0.325 0.45
4 0.135 0.20 0.34 0.46
图 1 电泳图谱
由左至右依次为 1 号样品,2 号样品,3 号样品,4 号样品。
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