全 文 ：第 30 卷 第 1 期
2 0 1 2 年 1 月
中 华 中 医 药 学 刊
CHINESE ARCHIVES OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE
Vol． 30 No． 1
Jan． 2 0 1 2
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峨参提取物对肺癌细胞 A549 和 H460
增殖的抑制作用初步观察
涂显琴1，马超英1，徐寅生1，高雅蓉1，牛顺子2，唐静1，耿耘1，蒋合众1
(1．西南交通大学生命科学与工程学院，四川 成都 610031;2．石药集团恩必普药业有限公司，河北 石家庄 100036)
摘 要:目的:观察峨参石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇部位提取物对肺癌细胞 A549 和 H460 增殖的抑制
作用。方法:应用 MTT比色法检测不同部位、不同浓度峨参提取物对肺癌细胞 A549 和 H460 增殖的抑制作用。
结果:10 ～ 1000μg /mL的 4 个部位峨参提取物对体外培养的人肺癌细胞 A549 和 H460 的增殖具有抑制作用，其
中石油醚部位、氯仿部位和乙酸乙酯部位提取物抑制作用更明显。结论:峨参不同部位提取物对肺癌细胞增殖具
有明显的抑制作用。
关键词:峨参提取物;肺癌细胞;细胞凋亡
中图分类号:R285． 5 文献标识码:A 文章编号:1673 － 7717(2012)01 － 0060 － 03
Tentative Study of Anthriscus Extracts Repressing the
Proliferation of Lung Cancer Cell A549 and H460
TU Xian-qin1，MA Chao-ying1，XU Yin-sheng1，GAO Ya-rong1，NIU Shun-zi2，TANG Jing1，GENG Yun1，JIANG He-zhong1
(1． Southwest Jiaotong University，Chengdu 610031，Sichuan，China;
2． Shijiazhuang Pharmaceutical Group NBP Pharmaceutical Co．，Ltd．，Shijiazhuang 100036，Hebei，China)
Abstract:Objective:To observe the inhibition of petroleum ether，chloroform，ethyl acetate and butanol extracts of
Anthriscus sylvestris (L．)Hoffm on the proliferation of lung cancer cell A549 and H460． Methods:To detect the inhibition
effects of different parts with different concentrations Anthriscus extracts on the proliferation of lung cancer cell A549 and
H460 by MTT assay． Result:4 parts of Anthriscus sylvestris extracts have inhibition effect on the proliferation of lung canc-
er cell A549 and H460 when concentrations are from 10 to 1000μg /mL，moreover，the extracts of petroleum ether，chloro-
form and ethyl acetate parts have more obvious evident inhibition． Conclusion:The extracts of different parts of Anthriscus
have evident inhibition effect on the proliferation of lung cancer cell．
Key words:extracts of Anthriscus;lung cancer cell;Apoptosis
收稿日期:2011 － 08 － 21
基金项目:国家自然科学基金资助项目(81073036) ;中央高校基
本科研业务费专项研究资助项目(SWJTU09ZT29)
作者简介:涂显琴(1985 －) ，女，贵州仁怀人，硕士研究生，研究方
向:中药学。
通讯作者:马超英(1958 －) ，男，山西黎城人，教授，研究方向:中药
药理及作用机理研究。
峨参为伞形科植物峨参(Anthriscus sylvestris (L．)
Hoffm)的根，是著名的川产道地药材之一，能补中益气，祛瘀
消肿，补肺平喘［1］。目前，国内外对该药的研究主要在植物
学和化学成分方面，近年来对其药理作用渐有研究，除了其
抗炎、抗过敏、抗氧化、活血化瘀等作用外，近期有人从峨参
根中提取出去氧鬼臼毒素(即峨参内酯) ，对人体子宫颈腺
癌传代细胞系的作用表明具有显著促进细胞凋亡的作用［2］，
但其对肺癌细胞的作用目前尚无文献报道，本文观察了峨参
提取物对体外培养肺癌细胞 A549和 H460增殖的影响。
1 实验材料
1． 1 细胞 人肺癌细胞株 A549 和 H460 购自于四川大学
华西国家重点实验室。
1． 2 药品与试剂 RPMI － 1640 和胰蛋白酶均采用 Gibco
进口分装，MTT购自宝信生物有限公司。峨参饮片购自于
四川省峨眉山市仙山中药饮片公司，经本院宋良科副教授
鉴定为四川峨眉山产伞形科峨参属植物峨参的干燥块根。
其余试剂均采用分析纯。
1． 3 主要仪器 CO2恒温孵箱(3110 型，美国 Thermo 公
司)、细胞培养板、培养瓶(美国 Coster 公司)、酶标仪(Elx
－ 800 型，美国 Bio － Tek公司)、离心机(L420 型，长沙湘仪
离心机有限公司)、倒置相差显微镜(日本索尼公司)、荧光
显微镜(日本奥林巴斯公司)、超净工作台(BSW － 880，江
苏苏净集团有限公司)、闪式提取器(JHBE － 50 型，河南金
鼎科技有限公司)、旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)。
2 实验方法
2． 1 峨参提取物的制备 将峨参切断，粉碎成细小颗粒，
过 20 目筛，烘干，用 8 倍量 80%乙醇浸泡 24h，利用闪式提
取器，分别间断提取共 3min(15000r /min，1800w) ，抽滤，得
到滤液，旋转蒸发仪回收溶剂，得到浸膏。再用石油醚、氯
仿、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取，分别得到石油醚、氯仿、乙
06
DOI：10.13193/j.archtcm.2012.01.62.tuxq.048
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酸乙酯、正丁醇部位提取物，用旋转蒸发仪回收溶剂，得到
各个部位浸膏，使用前用 RPMI 1640 调整至实验所需浓度，
DMSO(浓度 ＜ 0． 05%)助溶。
2． 2 细胞株培养 将肺癌细胞 A549 和 H460 接种于含
10%新生牛血清的 RPMI 1640 培养基的培养瓶中，37℃、
5%CO2、饱和湿度条件下常规培养，每 2 天换液传代培养，
取对数生长期细胞用于实验。
2． 3 峨参提取物对肺癌细胞 A549、H460 增殖抑制作用的
检测 取对数生长期细胞接种于 24 孔培养板内，每孔 2 ×
104个细胞 /mL。细胞贴壁后加入峨参的 4 个部位提取物，
共设 4 个药物浓度梯度，分别为 0． 1% DMSO、10、100 和
1000μg /mL，每个浓度 3 个复孔，每孔体积 500μL，培养 48h
后，每孔加入 1mg /mL MTT 工作液 500μL，37℃放置 4h，弃
上清，每孔加入 500μL 0． 4%酸化异丙醇，220r /min 摇床震
荡 5min溶解结晶，充分震荡后，吸取 200μL至 96 孔酶标板
于全自动酶标仪检测 570nm 波长处的各孔吸光度(OD
值) ，0． 1%DMSO作为阴性对照，根据 0． 1% DMSO 值绘制
曲线，比较不同部位提取物在不同浓度下对 2 个细胞株的
增殖影响。
细胞增殖抑制率(%)=(1 －药物组平均 OD 值 /对照
组平均 OD值)× 100%
2． 4 统计学分析 采用 SPSS 17． 0软件进行数据分析，各组
数据以(珋x ± s)表示，实验组及对照组比较用单因素方差分析。
3 结 果
3． 1 峨参各部位提取物对肺癌细胞 A549 生长的抑制作
用 采用 MTT法检测峨参提取物对肺癌细胞 A549 增殖
的抑制作用，表 1 ～ 4 结果表明，与对照组相比，不同浓度的
不同部位峨参提取物对肺癌细胞 A5 明显 49 增殖具有抑制
作用(P ＜ 0． 01)。
表 1 峨参氯仿部位提取物对肺癌细胞
A549 增殖的抑制作用(MTT法 24h)
复孔
(OD)
系统干扰
CK
(0． 1%DMSO)
峨参氯仿部位提取物(μg /mL)
10 100 1000
1 0． 039512 0． 87868 0． 337657 0． 393089 0． 093917
2 1． 11385 0． 331754 0． 408905 0． 073884
3 0． 998982 0． 379604 0． 435376 0． 096715
t － test P ＜0． 05 P ＜0． 01 P ＜0． 01
注:与 CK组 t － test比较，P ＜ 0． 05 说明有显著性差异，则对细
胞有抑制作用;P ＜ 0． 01 说明有非常显著性差异，对细胞增殖有较
强抑制作用。
表 2 峨参石油醚部位提取物对肺癌细胞
A549 增殖的抑制作用(MTT法 24h)
复孔
(OD)
系统干扰
CK
(0． 1%DMSO)
峨参石油醚部位提取物(μg /mL)
10 100 1000
1 0． 039512 1． 01363 0． 351834 0． 34149 0． 056392
2 0． 955555 0． 367403 0． 442693 0． 059666
3 0． 880284 0． 375559 0． 394863 0． 061424
t － test P ＜0． 05 P ＜0． 01 P ＜0． 01
注:与 CK组 t － test比较，P ＜ 0． 05 说明有显著性差异，则对细
胞有抑制作用;P ＜ 0． 01 说明有非常显著性差异，对细胞增殖有较
强抑制作用。
表 3 峨参正丁醇部位提取物对肺癌细胞
A549 增殖的抑制作用(MTT法 24h)
复孔
(OD)
系统干扰
CK
(0． 1%DMSO)
峨参正丁醇部位提取物(μg /mL)
10 100 1000
1 0． 039512 0． 8832 0． 762622 0． 414139 0． 060798
2 0． 931323 0． 796583 0． 506563 0． 063793
3 0． 917132 0． 936614 0． 576048 0． 075896
t － test P ＜0． 05 P ＜0． 01 P ＜0． 01
注:与 CK组 t － test比较，P ＜ 0． 05 说明有显著性差异，则对细
胞有抑制作用;P ＜ 0． 01 说明有非常显著性差异，对细胞增殖有较
强抑制作用。
表 4 峨参乙酸乙酯部位提取物对肺癌细胞
A549 增殖的抑制作用(MTT法 24h)
复孔
(OD)
系统干扰
CK
(0． 1%DMSO)
峨参乙酸乙酯部位提取物(μg /mL)
10 100 1000
1 0． 039512 0． 866022 0． 252711 0． 26402 0． 055887
2 0． 8976 0． 25402 0． 25985 0． 067437
3 0． 802105 0． 284575 0． 238968 0． 060453
t － test P ＜0． 05 P ＜0． 01 P ＜0． 01
注:与 CK组 t － test比较，P ＜ 0． 05 说明有显著性差异，则对细
胞有抑制作用;P ＜ 0． 01 说明有非常显著性差异，对细胞增殖有较
强抑制作用。
3． 2 峨参各部位提取物对肺癌细胞 H460 生长的抑制作
用 采用 MTT法检测峨参提取物对肺癌细胞 H460 增殖的
抑制作用，表 5 ～ 8 结果表明，与对照组相比，不同浓度的不
同部位峨参提取物对肺癌细胞 H460 增殖具有明显抑制作
用(P ＜ 0． 01)。
表 5 峨参氯仿部位提取物对肺癌细胞
H460 增殖的抑制作用(MTT法 24h)
复孔
(OD)
系统干扰
CK
(0． 1%DMSO)
峨参氯仿部位提取物(μg /mL)
10 100 1000
1 0． 039512 1． 51824 1． 01572 0． 431476 0． 099813
2 1． 57616 0． 876335 0． 394229 0． 137182
3 1． 75184 0． 849143 0． 436356 0． 058463
t － test P ＜0． 05 P ＜0． 01 P ＜0． 01
注:与 CK组 t － test比较，P ＜ 0． 05 说明有显著性差异，对细胞
有抑制作用;P ＜ 0． 01 说明有非常显著性差异，对细胞增殖有较强
抑制作用。
表 6 峨参石油醚部位提取物对肺癌细胞
H460 增殖的抑制作用(MTT法 24h)
复孔
(OD)
系统干扰
CK
(0． 1%DMSO)
峨参石油醚部位提取物(μg /mL)
10 100 1000
1 0． 039512 2． 00328 0． 832101 0． 763362 0． 051889
2 1． 79723 0． 787871 0． 845385 0． 058346
3 1． 58562 0． 773605 0． 817565 0． 052437
t － test P ＜0． 05 P ＜0． 01 P ＜0． 01
注:与 CK组 t － test比较，P ＜ 0． 05 说明有显著性差异，对细胞
有抑制作用;P ＜ 0． 01 说明有非常显著性差异，对细胞增殖有较强
抑制作用。
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收稿日期:2011 － 08 － 20
基金项目:国家“十五”科技攻关资助项目(2001BA701A11)
作者简介:杜伟锋(1984 －) ，男，河北任县人，实习研究员，研究方
向:中药分析及质量标准研究。
表 7 峨参正丁醇部位提取物对肺癌细胞
H460 增殖的抑制作用(MTT法 24h)
复孔
(OD)
系统干扰
CK
(0． 1%DMSO)
峨参正丁醇部位提取物(μg /mL)
10 100 1000
1 0． 039512 1． 44944 1． 47569 1． 14764 0． 060142
2 1． 78568 1． 72309 1． 24984 0． 063118
3 1． 75017 1． 59738 1． 42039 0． 071459
t － test P ＜0． 05 P ＜0． 01 P ＜0． 01
注:与 CK组 t － test比较，P ＜ 0． 05 说明有显著性差异，对细胞
有抑制作用;P ＜ 0． 01 说明有非常显著性差异，对细胞增殖有较强
抑制作用。
4 讨 论
中药治疗肿瘤是我国在肿瘤治疗上的一大特色，由于
中药不良反应小而备受关注，本实验中 MTT 法结果表明，
10 ～ 1000μg /mL的峨参石油醚提取物、氯仿提取物、乙酸乙
酯提取物和正丁醇提取物对人肺癌细胞 A549 和 H460 都
表 8 峨参乙酸乙酯部位提取物对肺癌细胞
A549 增殖的抑制作用(MTT法 24h)
复孔
(OD)
系统干扰
CK
(0． 1%DMSO)
峨参乙酸乙酯部位提取物(μg /mL)
10 100 1000
1 0． 039512 1． 67386 0． 714879 0． 681356 0． 064914
2 1． 66273 0． 867413 0． 827168 0． 06323
3 1． 56218 0． 848994 0． 785042 0． 062021
t － test P ＜0． 05 P ＜0． 01 P ＜0． 01
注:与 CK组 t － test比较，P ＜ 0． 05 说明有显著性差异，对细胞
有抑制作用;P ＜ 0． 01 说明有非常显著性差异，对细胞增殖有较强
抑制作用。
有明显的抑制增殖作用，其中石油醚提取物、氯仿提取物、
乙酸乙酯提取物抑制效果更明显，这为峨参抗肿瘤提供了
实验依据，值得进一步深入研究。
参考文献
［1］ 王凤岐，吴大真．峨眉神效验方［M］．北京:科学普及出版社，
1982:42．
［2］ Yeonjoong Yong，Soon Young Shin，Young Han Lee，et al． Anti-
tumor activity of deoxypodophyllotoxin isolated from Anthriscus
sylvestris:Induction of G2 /M cell cycle arrest and caspase － de-
pendent apoptosis［S］． Bioorg． Med． Chem． Lett，2009(19) :4367
－ 4371．
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HPLC － ESI － MS法分析山茱萸炮制前后的化学成分
杜伟锋1，张云1，丛晓东1，蔡宝昌1，2
(1．浙江中医药大学中药炮制技术研究中心，浙江 杭州 311401;
2．南京中医药大学江苏省中药炮制重点实验室，江苏 南京 210029)
摘 要:目的:建立高效液相色谱 －电喷雾 －质谱(HPLC － ESI － MS)方法，分析比较山茱萸炮制前后化学成
分的变化。方法:采用 Agilent Extend － C18 色谱柱，乙腈 － 0． 1%甲酸水溶液梯度洗脱;Agilent1200 高效液相色谱
仪—6410 三重四级杆质谱仪联用;正、负离子检测模式。结果:通过质谱中的主要碎片，在正离子检测模式下，山
茱萸生品中检测出了莫诺苷、马钱苷、山茱萸裂苷，制品中检测出了 5 －羟甲基糠醛、莫诺苷、马钱苷和山茱萸裂
苷;在负离子检测模式下，山茱萸生、制品中均检测出了没食子酸、7 － O －没食子酰基景天庚酮糖、莫诺苷、山茱
萸裂苷。结论:在质谱正、负离子检出模式下，主要化学成分响应均较好，这为分析山茱萸炮制前后化学成分变
化，以及控制饮片质量提供了一种新的方法。
关键词:HPLC － ESI － MS;山茱萸;炮制;化学成分
中图分类号:R284． 1 文献标识码:A 文章编号:1673 － 7717(2012)01 － 0062 － 04
Analysis on Active Components in Crude And Processed Cornus
Officinals by HPLC － ESI －MS
DU Wei-feng1，ZHANG Yun1，CONG Xiao-dong1，CAI Bao-chang1，2
(1． Research Center of TCM Processing Technology，Zhejiang Chinese Medical University，Hangzhou 311401，Zhejiang，China;
2． Jiangsu Key Laboratory of Chinese Medicine Processing，Nanjing University of Chinese Medicine，Nanjing 210029，Jiangsu，China)
Abstract:Objective:To establish an analytical method for comparing the components in crude and processed Cornus
officinalis by HPLC － ESI － MS． Methods:These components were analyzed with a Agilent Extend － C18 by gradient elu-
26