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木蹄层孔菌子实体化学成分及对肿瘤细胞的抑制作用的研究



全 文 : 菌物学报
jwxt@im.ac.cn 15 September 2012, 31(5): 775-783
Http://journals.im.ac.cn Mycosystema ISSN1672-6472 CN11-5180/Q © 2012 IMCAS, all rights reserved.







基金项目:江苏省高校自然科学重大基础研究项目(No. 08KJA350001);江苏省高校优秀创新团队
*Corresponding author. E-mail: jhjiang@xznu.edu.cn
收稿日期: 2011-09-06, 接受日期: 2011-11-04

木蹄层孔菌子实体化学成分及对肿瘤细胞的抑制作用的
研究
黄天姿 杜德尧 陈永强 袁博 鞠秀云 冯友建 王力 蒋继宏*
徐州师范大学 江苏省药用植物生物技术重点实验室 江苏 徐州 221116



摘 要:运用硅胶、sephadex LH-20等柱色谱,从木蹄层孔菌子实体的乙醇提取物分离得到 12个化合物,通过单体
的理化性质、NMR和MS技术鉴定单体的结构为 3-十六碳酸酯-7,22-二烯麦角甾醇(1),十八烷酸(2),棕榈酸(3),
7,22-二烯麦角甾-3-酮(4),麦角甾-7,22-二烯-3-醇(5),5,8-过氧麦角甾-6,22-二烯-3-醇(6),3,3-二甲氧基-7,22-二
烯麦角烷(7),28-乙酰白桦脂醇(8),白桦脂醇(9),β-羟基十八烷酸(10),9,10-二羟基十八烷酸(11),瑞香素
(12)。采用 Alamar Blue法检测单体化合物对人肺癌细胞 NCI-H 460和人胃癌细胞 SGC-7901的抑制活性。结果表
明,化合物 4对 NCI-H 460细胞株的抑制活性最高,化合物 9对 SGC-7901的抑制活性最高。
关键词:木蹄层孔菌,化学成分,人肺癌细胞 NCI-H 460,人胃癌细胞 SGC-7901,瑞香素

Chemical constituents and antitumor activity of fruiting body of
Fomes fomentarius
HUANG Tian-Zi DU De-Yao CHEN Yong-Qiang YUAN Bo JU Xiu-Yun FENG You-Jian
WANG Li JIANG Ji-Hong*
Key Laboratory for Biotechnology on Medicinal Plants of Jiangsu Province, Xuzhou Normal University, Xuzhou, Jiangsu 221116, China
Abstract: The compounds from the EtOH-extract of Fomes fomentarius were isolated and purified by using silicagel and
Sephadex LH-20 column chromatography. NMR, MS and other spectroscopy were used to identify the structures of
compounds. Twelve compounds were determined: ergosta-7,22-dien-3-palmitate (1), stearic acid (2), palmitic acid (3),
ergosta-7,22-dien-3-one (4), ergosta-7,22-dien-3-ol (5), 5,8-epidioxyergosta-6,22-dien-3-ol (6), ergosta-7,22-dien-3-
one,dimethyl acetal (7), lup-20(29)-ene-3,28-diol,28-acetate (8), betulin (9), 3-hydroxyoctadecanoic acid (10), 9,10-
dihydroxystearic acid (11), daphnetin (12). The anti-tumor activities against NCI-H 460 and SGC-7901 were evaluated by
DOI:10.13346/j.mycosystema.2012.05.013
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Alamar Blue method, and the results showed that compound 4 had the highest antitumor activity against NCI-H 460 and
compound 9 against SGC-7901.
Key words: Fomes fomentarius, chemical constituent, NCI-H 460, SGC-7901, daphnetin


木蹄层孔菌 Fomes fomentarius (L.) Fr.是一
种常见的多孔菌,多年生,多生于阔叶树干上
(戴玉成 2009,2010,2012),又名火绒层孔
菌,属于担子菌门 Basidiomycota,多孔菌目
Polyporales,多孔菌科 Polyporaceae,层孔菌属,
又称木蹄。其药用功能主要为退烧,消炎,止
痛,抗肿瘤和治疗小儿积食(卯晓岚等 1993;
戴玉成和杨祝良 2008)。其作为民间药物历史
悠久,可用于治疗食管癌、胃癌、子宫癌(Wasser
2002;Moradali et al. 2007)。刘量等(2005)发
现木蹄层孔菌 Fomes fomentarius乙醇提取物对
S180 荷瘤鼠有很强的抑瘤活性,陆勇芹等
(2007)发现其三氯甲烷提取物和乙酸乙酯提
取物在体外对Hela细胞增殖具有较强的抑制作
用,但发现石油醚提取物和正丁醇提取物对
Hela 细胞增殖的抑制活性不强。目前国内对木
蹄层孔菌的化学成分的研究报道较少。冯薇和
杨俊山(2010)从木蹄层孔菌 95%乙醇提取物
中分离得到 6 个化合物。本研究对木蹄层孔菌
子实体体积分数 95%的乙醇提取物的石油醚相
和乙酸乙酯相化合物进行了分离纯化,并对单
体化合物进行体外细胞毒活性检测的初步研
究,旨在明确木蹄层孔菌子实体的化学成分,
为其药理活性研究提供研究基础。
1 材料与方法
1.1 材料、试剂与仪器
1.1.1 材料:木蹄层孔菌 Fomes fomentarius子实
体由大连王力野生灵芝生物科技有限公司提
供,采自黑龙江省伊春乌伊岭,保存于徐州师
范大学药用植物生物技术重点实验室。
1.1.2 试剂与仪器:旋转蒸发仪(RE-52A 型,
上海亚荣生化仪器厂);96 孔细胞培养板购于
Gibico 公司,Alamar Blue 购自 Sigma 公司,
DMSO 购自上海生工公司,硅胶(青岛海洋化
工有限公司);薄层层析用硅胶(青岛海洋化工
有限公司);葡聚糖( Sephadex LH-20)
(Pharmacia公司);乙醇回流提取器、RE-52A
型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);核磁共
振仪(400M,TMS内标,Bruker公司);乙醇
(95%)(工业重蒸试剂);无水乙醇(分析纯,
上海苏懿化学试剂有限公司):丙酮(分析纯,
上海苏懿化学试剂有限公司);甲醇(分析纯,
西陇化工股份有限公司);乙酸乙酯、石油醚、
正己烷(分析纯,上海苏懿化学试剂有限公司)。
1.2 提取分离
将粉碎的子实体(4kg)置于乙醇回流提取
器中,用 5倍量的 95%乙醇回流提取 3次。合
并提取液,40℃减压蒸干得到 280g褐色浸膏。
将浸膏用乙醇溶解,与 2倍量的硅胶(100目)
拌样,装柱,用石油醚淋洗;合并石油醚,减
压蒸干。得到淡黄色石油醚组分 50.3g,继续用
乙酸乙酯淋洗;再合并乙酸乙酯淋洗液,减压
蒸干。得到黑褐色乙酸乙酯组分 101.3g,4℃保
存备用。
1.3 体外抗肿瘤活性
采用 Alamar Blue法(Brigitte et al. 1993;
Hamidet et al. 2004)检测体外抗肿瘤活性。取
对数生长期的细胞用 0.25%胰酶从培养瓶上消
化下来,制成细胞悬液,在 96 孔板中每孔加
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100µL(约 1万个细胞),对照组加 100µL不含
细胞的培养基,放入 5% CO2细胞培养箱中,细
胞贴壁,培养一夜。将不同化合物用 DMSO或
丙酮溶解后,用培养基稀释到所需浓度(DMSO
和丙酮的浓度均小于 1%),加 100µL到实验组
中,对照组补加 100µL培养基。培养 48h后,
弃去培养液,用新鲜的细胞培养液洗涤两次。
Alamar Blue 贮存液用培养基以 1:10 比例稀释
后,每孔加 200µL,4h后将培养板放于 570nm
的激发波长和 590nm 的发射波长下检测,加
入不含细胞的培养基的孔作空白组,加细胞
液不加药的孔作对照组,以细胞培养孔的值
减去空白值为实际值。按照下式计算细胞抑
制率:
细胞抑制率I=[(对照组-实验组)/(对照组-
空白组)]×100%
根据上述公式分别求出每个稀释浓度的抑
制率 I。
2 结果与分析
2.1 提取与分离
2.1.1 石油醚相的分离:石油醚相(17g)用适
量的石油醚溶解,然后与 30g 硅胶(200–300
目)混匀,装柱,用石油醚:乙酸乙酯=100:1、
100:2、100:4、20:1、10:1、5:1、2:1 等不同比
例进行洗脱,最后用甲醇冲洗。共得到 40个馏
分(A1–A40),TLC检测合并相同组分。
A3–A6 合并,用石油醚:乙酸乙酯=20:1 经
硅胶柱层析,重结晶后,得到化合物 1(9mg)。
A10–A11经过硅胶柱层析和 Sephadex LH-20纯
化分别得到化合物 2(25mg)和化合物 3
(27mg)。A13–A17 分别经过硅胶柱层析和重
结晶得到化合物4(205mg)和化合物 7(127mg)。
2.1.2 乙酸乙酯相的分离:取乙酸乙酯相 80g用
适量氯仿溶解,与 150g硅胶拌匀,装柱,用氯
仿:甲醇=200:0、200:1、100:1、50:1、20:1、10:1
等不同比例进行洗脱,最后用甲醇冲柱。得到
90个馏分(B1–B90),TLC检测各个馏分后合
并相同组分。减压蒸干得到浸膏。
B6–B7馏分的浸膏 17g与 30g硅胶拌样,
蒸干,装柱,用石油醚:丙酮=40:1、20:1、10:1、
5:1、2:1 梯度洗脱,最后用甲醇冲柱。共得到
43个馏分(C1–C43),TLC检测后合并相同馏
分。C7–C20做硅胶柱层析实验,重结晶得到
化合物 5(41mg)、6(63mg)。C22–C24通过
硅胶柱层析实验,重结晶得到化合物 8
(325mg)。
B10–B26 通过上述相同方法做硅胶柱层析
实验,体系为氯仿:甲醇=100:1开始,然后梯度
洗脱得 17 个馏分(D1–D17)。馏分用 TLC 检
测后合并相同组分。D3–D7 继续过硅胶柱、
Sephadex LH-20 柱,重结晶得到化合物 9
(17mg)。
B30–B39 通过与上述相同的方法做硅胶柱
层析实验,体系为石油醚:丙酮=20:1、10:1、5:1、
2:1等梯度洗脱。得到馏分(E1–E23),E7–E10
蒸干后继续过硅胶柱,体系为氯仿:甲醇,最后
用 Sephadex LH-20 纯化。得到化合物 10
(8mg)、11(11mg)。
B44–B45 通过与上述相同的方法做硅胶柱
层析实验,体系为石油醚:丙酮=10:1、5:1、2:1
等梯度洗脱。得到馏分(F1–F15),F3–F7合并
蒸干后继续过硅胶柱,体系为氯仿:甲醇,最后
用 Sephadex LH-20纯化。得到化合物 11(16mg)
和 12(31mg)。
2.2 结构鉴定
化合物 1:无色针状结晶(正己烷),易溶
解于氯仿;mp:106–107.7℃。EI-MS m/z:636。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:5.19(H-7,m),
5.19(H-22,23,m),4.7(H-3,m),1.25(多
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氢),0.54(H-18,s),δ1.01(H-19,s),1.02
(H-21,d,J=6.3Hz),0.78(H-26,d,J=4.5Hz),
0.79(H-27,d,J=4.8Hz),0.91(H-28,d,
J=3.9Hz)。13C-NMR(100MHz,CDCl3)δ:38.1
(C-1),31.02(C-2),173.5(C-3),40.8(C-4),
38.8(C-5),30.1(C-6),117.3(C-7),139.5
(C-8),48.9(C-9),34.4(C-10),21.7(C-11),
39.3(C-12),43.3(C-13),55.0(C-14),22.9
(C-15),28.1(C-16),55.9(C-17),12.1(C-18),
12.45(C-19),40.5(C-20),19.7(C-21),131.8
(C-22),135.7(C-23),42.9(C-24),33.1
(C-25),21.1(C-26),20.0(C-27),17.6(C-28),
29.2(C-2’-14’)。从氢谱与碳谱的总出峰情况
可以看出与 7,22-二烯麦角甾醇非常相似,但在
氢谱的 δ1.25处出现峰面积非常大的峰,碳谱的
δ29.2处出现了高度异常的峰,这两种情况与脂
肪酸的出峰情况非常吻合,初步确定此化合物
的结构为 3位连有脂肪酸的 7,22-二烯麦角甾醇
衍生物,在通过质谱得出其分子量为 636,推
出脂肪酸的碳链应为 16 个碳。再与 Chiang &
Chu(1991)对比可以确定其为 3-十六碳酯-7,22-
二烯麦角甾醇(ergosta-7,22-dien-3-palmitate)。
化合物 2:白色蜡状固体(三氯甲烷),mp:
67–69℃。EI-MS m/z:284。1H-NMR(400MHz,
CDCl3)δ:0.880(H-Me),1.300(H-CH2),
1.620(16-CH2),2.347(17-CH2)。13C-NMR
(100MHz,CDCl3)δ:14.11(C-1),22.71(C-2),
24.70(C-3),29.09(C-4),29.26(C-5),29.38
(C-6),29.45(C-7),29.61(C-8),29.66(C-9),
29.69(C-10),29.76(C-11),31.95(C-12),
34.02(C-13),179.80(C-18)。氢谱与碳谱的
化学维系与于德泉和杨峻山(1999)对比可以
确定其为十八烷酸。
化合物 3:白色蜡状固体,EI-MS m/z:256
各种物理性质与十八烷酸非常相似,但仅熔点
不同。Mp:61–63℃,与棕榈酸的熔点相同,
故确定其为棕榈酸(于德泉和杨峻山 1999)。
化合物 4:无色片状结晶[三氯甲烷-甲醇
(1:6)],mp:180–182℃。EI-MS m/z:396。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:5.19(H-7,m),
0.57(H-18,s),1.01(H-19,s),1.02(H-21,
d,J=6.3Hz),5.19(H-22,23,m),0.80(H-26,
d,J=4.5Hz),0.84(H-27,d,J=4.8Hz),0.91
(H-28,d,J=3.9Hz)。13C-NMR(400MHz,
CDCl3)δ:38.1(C-1),42.8(C-2),212.0(C-3),
44.2(C-4),38.8(C-5),30.1(C-6),117.0(C-7),
139.5(C-8),48.9(C-9),34.4(C-10),21.7
(C-11),39.3(C-12),43.3(C-13),55.0(C-14),
22.9(C-15),28.1(C-16),55.9(C-17),12.1
(C-18),12.45(C-19),40.5(C-20),19.7
(C-21),125.6(C-22),132.0(C-23),42.9
(C-24),33.1(C-25),21.1(C-26),20.0(C-27),
17.6(C-28)。与文献(Amolak & Sushil 1984;
杜德尧等 2011)对比可以确定其为 7,22-二烯
麦角甾-3-酮,分子式:C28H44O。
化合物 5:无色针状结晶(甲醇),mp:
167–169℃。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:
0.53(s,3H,Me),0.78(s,3H,Me),0.81
(d,3H,J=6.4Hz,Me),0.83(d,3H,J=6.4Hz,
Me),0.90(d,3H,J=7.2Hz,Me),1.0(d,
3H,J=6.4Hz,Me),3.60(m,1H,H-3),5.19
(m,3H,H-7,22,23)。13C-NMR(100MHz,
CDCl3)δ:37.1(C-1),29.6(C-2),71.1(C-3),
38.0(C-4),40.3(C-5),31.5(C-6),117.4(C-7),
139.6(C-8),49.4(C-9),34.2(C-10),21.6
(C-11),39.5(C-12),43.3(C-13),55.1(C-14),
22.9(C-15),28.1(C-16),56.0(C-17),12.1
(C-18),13.1(C-19),40.5(C-20),21.1(C-21),
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135.7(C-22),131.9(C-23),42.8(C-24),
33.1(C-25),17.6(C-26),19.7(C-27),20.0
(C-28)。与 Keller et al.(1996)比对,与
ergosta-7,22-dien-3-ol一致,确定该化合物为麦
角甾-7,22-二烯-3-醇,分子式:C28H46O。
化合物 6:无色针状结晶(甲醇),mp:
177.5–180℃。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:
0.81(s,3H,Me),0.84(d,6H,J=6.8Hz,
H-26,H-27),0.88(s,3H,Me),0.9(d,3H,
J=6.8Hz,Me),0.99(d,3H,J=6.4Hz,Me),
3.96(m,1H,H-3),5.15(dd,1H,J=15.2,
7.4Hz,H-22),5.19(dd,1H,J=15.2,6.2Hz,
H-23),6.23(d,1H,J=8.4Hz,H-6),6.49(d,
1H,J=8.4Hz,H-7)。13C-NMR(100MHz,CDCl3)
δ:37.0(C-1),30.1(C-2),66.5(C-3),51.1
(C-4),82.2(C-5),135.4(C-6),130.8(C-7),
79.4(C-8),34.7(C-9),36.9(C-10),20.9
(C-11),39.4(C-12),44.6(C-13),51.7(C-14),
28.6(C-15),23.4(C-16),56.2(C-17),12.9
(C-18),18.2(C-19),39.7(C-20),19.6(C-21),
135.2(C-22),132.3(C-23),42.8(C-24),
33.1(C-25),20.0(C-26),20.7(C-27),17.6
(C-28)。与 Kim et al.(2008)报道的 5,8-过氧
麦角甾-6,22-二烯-3-醇对照一致。与文献比对,
其物理常数和 5,8-过氧麦角甾-6,22-二烯-3-醇
一致,确定该化合物为 5,8-过氧麦角甾-6,22-二
烯-3-醇(5,8-epidioxyergosta-6,22-dien-3-ol),分
子式:C28H44O3。
化合物 7:无色针状结晶[三氯甲烷-甲醇
(1:6)],mp:180–182℃。1H-NMRδ:5.19
(H-7,m),0.57(H-18,s),1.01(H-19,s),
1.02(H-21,d,J=6.3Hz),5.19(H-22,23,
m),0.80(H-26,d,J=4.5Hz),0.84(H-27,
d,J=4.8Hz),0.91(H-28,d,J=3.9Hz),3.13
(H-OCaH3),3.20(H-OCbH3)。13C-NMRδ:
38.1(C-1),35.1(C-2),110.0(C-3),44.3(C-4),
35.0(C-5),29.4(C-6),117.0(C-7),139.5
(C-8),49.2(C-9),34.4(C-10),21.7(C-11),
39.4(C-12),δ43.3(C-13),55.0(C-14),22.9
(C-15),28.1(C-16),55.9(C-17),12.1(C-18),
12.45(C-19),40.5(C-20),19.7(C-21),125.6
(C-22),132.0(C-23),42.9(C-24),33.1
(C-25),21.1(C-26),20.0(C-27),17.6(C-28),
47.45/47.47(C-CH3O)。与 Odorchai et al.(1964)
对比可以确定其为 3,3-二甲氧基-7,22-二烯麦角
烷(ergosta-7,22-dien-3-one,dimethyl acetal),分
子式:C30H50O2。
化合物 8:白色针状结晶(甲醇),mp:
265–267℃,1H-NMR(400MHz,d-吡啶)δ:
6.0(s,1H,H-29a),6.1(s,1H,H-29b),
5.22(d,1H,J=3.3Hz,H-28),5.61(d,1H,
J=3.3Hz,H-28),4.58(t,1H,J=8.0Hz,H-3),
3.10(s,3H,H-OAc),2.10(s,3H,Me),
2.12(s,3H,Me),2.14(s,3H,Me),2.31
(s,3H,Me),2.86(s,3H,Me),1.16(s,
3H,Me)。13C-NMR(100MHz,d-吡啶)δ:
38.09(C-1),22.87(C-2),79.71(C-3),37.69
(C-4),57.5(C-5),18.18(C-6),33.81(C-7),
39.31(C-8),47.57(C-9),37.01(C-10),23.39
(C-11),25.1(C-12),38.6(C-13),41.56(C-14),
32.55(C-15),35.5(C-16),46.56(C-17),
40.93(C-18),45.86(C-19),152.2(C-20),
32.46(C-21),27.68(C-22),28.04(C-23),
16.63(C-24),15.36(C-25),17.18(C-26),
25.89(C-27),64.4(C-28),111.9(C-29),23.57
(C-30),172.9(C-31),21.23(C-32)。其
13C-NMR数据与 Pohjala et al.(2009)报道的
28-乙酯白桦脂对照一致。确定该化合物为 28-
ISSN1672-6472 CN11-5180/Q Mycosystema September 15, 2012 Vol.31 No.5
http://journals.im.ac.cn/jwxtcn
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乙 酯 白 桦 脂 醇 [lup-20(29)-ene-3,28-diol,28-
acetate]。分子式:C32H52O3。
化合物 9:白色针状结晶(甲醇),mp:
247–248℃。1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ4.69
(brs,1H,H-29a),4.58(brs,1H,H-29b),
3.81(d,1H,J=10.8Hz,H-28),3.44(d,1H,
J=10.8Hz,H-28),3.20(t,1H,H-3),0.77
(s,3H,Me),0.83(s,3H,Me),0.97(s,
3H,Me),0.99(s,3H,Me),1.05(s,3H,
Me),1.70(s,3H,Me)。13C-NMR(100MHz,
CDCl3)δ:38.71(C-1),27.39(C-2),78.7(C-3),
38.85(C-4),55.30(C-5),18.29(C-6),34.26
(C-7),40.92(C-8),50.41(C-9),37.32(C-10),
20.83(C-11),25.22(C-12),37.16(C-13),
42.71(C-14),27.05(C-15),29.18(C-16),
47.79(C-17),47.79(C-18),48.77(C-19),
150.47(C-20),29.76(C-21),33.95(C-22),
27.97(C-23),15.33(C-24),15.97(C-25),
16.08(C-26),14.75(C-27),60.55(C-28),
109.68(C-29),19.07(C-30)。与Macias et al.
(1994)比对,其物理常数和白桦脂醇(betulin)
一致,确定该化合物为白桦脂醇。分子式:
C30H50O2。
化合物 10:白色固体(甲醇),mp:
80–82.5℃ 。 EI-MS m/z : 300 , 1H-NMR
(400MHz,CDCl3)δ1.985(t,J=7.0Hz,3H,
C18-CH3),2.380[m,36H-(CH2)14],2.400[m,
36H-(CH2)13],2.800(m,2H,C4-CH2),3.980
(dd,2H,J=15,C2-CH2),5.652(m,1H,
C3-H)。13C-NMR(100MHz,CDCl3)δ:15.85
(C-1),24.52(C-2),27.83(C-3),31.20(C-4),
31.51(C-5),31.58(C-6-12),31.64(C-13),
33.72(C-14),39.65(C-15),45.45(C-17),
70.01(C-16),176.66(C-18)。与 Chen et al.
(2009)对比可以确定其为 β-羟基十八烷酸
( 3-hydroxyoctadecanoic acid),分子式:
C18H36O3。
化合物 11:白色针状结晶(甲醇),mp:
94–95℃。EI-MS m/z:316。1H-NMR(400MHz,
CD3OD)δ:0.922(t,3H,-CH3),1.337(H-CH2),
1.370–1.623(m,26H,-CH2),2.299(t,2H,
C2-CH2),3.39(m,2H,CH-OH)。13C-NMR
(100MHz,CD3OD)δ:14.45(C-18),23.74
(C-17),26.11(C-16),27.01(C-3),27.08
(C-15),30.22(C-4),30.41(C-14),30.45
(C-5),30.68(C-13),30.75(C-6),30.87(C-7),
33.08(C-12),33.94(C-2),33.96(C-8),34.97
(C-11),75.31(C-9),75.33(C-10),177.70
(C-1)。与朱玉军等(1998)对比可以确定其
为 9,10-二羟基十八烷酸(9,10-dihydroxystearic
acid),分子式:C18H36O4。
化合物 12:黄色针状结晶(甲醇),mp:
226–228℃,EI-MS m/z:178,1H-NMR(400MHz,
d-吡啶)δ:6.170(H-3,d),6.818(H-6,d),
6.990(H-5,d),7.826(H-4,d),4.92(H-OH,
s)。13C-NMR(100MHz,d-吡啶)δ:116.22(C-3),
116.44(C-2),120.64(C-6),115.29(C-5),
146.61(C-7),144.57(C-9),162.59(C-1),
113.22(C-10),135.74(C-8)。与张薇等(2005)
对比,确定其为瑞香素(daphnetin),分子式:
C9H6O4。
2.3 化合物体外细胞毒活性研究
采用 Alamar Blue 法对单体化合物进行体
外细胞毒活性检测,其半抑制浓度(IC50)见表
1。其中对细胞株 NCI-H 460,抑制作用中最强
的物质为 7,22-二烯麦角甾-3-酮,其 IC50 为
30.5µg/mL;对细胞株 SGC-7901,白桦脂醇的
IC50值最高,为 42.1µg/mL。
黄天姿 等 /木蹄层孔菌子实体化学成分及对肿瘤细胞的抑制作用的研究
菌物学报
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表 1 化合物对测试细胞株的 IC50值(µg/mL)
Table 1 IC50 values of the compounds against NCI-H 460 and SGC-790
NCI-H 460 SGC-7901
3-十六碳酸酯-7,22-二烯麦角甾醇 Ergosta-7,22-dien-3-palmitate - >200
十八烷酸 Stearic acid - -
棕榈酸 Palmitic acid - -
7,22-二烯麦角甾-3-酮 Ergosta-7,22-dien-3-one 30.5 >200
3,3-二甲氧基-7,22-二烯麦角烷 Ergosta-7,22-dien-3-one,dimethyl acetal >200 >200
白桦脂醇 Betulin 103.6 42.1
28-乙酰白桦脂醇 Lup-20(29)-ene-3,28-diol,28-acetate 160.5 134.2
瑞香素 Daphnetin 40.2 47.1
5,8-过氧麦角甾-6,22-二烯-3-醇 5,8-epidioxyergosta-6,22-dien-3-ol 45.3 50.4
β-羟基十八烷酸 3-hydroxyoctadecanoic acid >200 >200
麦角甾-7,22-二烯-3-醇 Ergosta-7,22-dien-3-ol - -
9,10-二羟基十八烷酸 9,10-dihydroxystearic acid - -
注:-表示没有活性.
Note: -, not active.

3 讨论
本实验对木蹄层孔菌子实体 95%乙醇提取
物的石油醚相和乙酸乙酯相化合物进行了分离
纯化,共分离鉴定出 12个化合物,其中 3-十六
碳酸酯-7,22-二烯麦角甾醇,9,10-二羟基十八烷
酸,28-乙酰白桦脂醇,β-羟基十八烷酸和 3,3-
二甲氧基-7,22-二烯麦角烷为首次从该菌中发
现,瑞香素为首次从层孔菌属中发现,初步确定
了木蹄层孔菌子实体中的部分化合物。并对单体
化合物进行体外细胞毒活性检测,初步确定了单
体对细胞株NCI-H 460和SGC-7901的抑制活性。
在石油醚相中,分离得到化合物 3-十六碳
酸酯-7,22-二烯麦角甾醇,十八烷酸,棕榈酸,
3,3-二甲氧基-7,22-二烯麦角烷和 7,22-二烯麦角
甾-3-酮。对细胞株 NCI-H 460,7,22-二烯麦角
甾-3-酮的抑制作用最强,与杜德尧等(2011)
研究结果一致,又一次验证了此化合物的抗肿
瘤活性;对细胞株 SGC-7901,这 5个化合物均
无明显的抑制作用。在乙酸乙酯相中,分离得
到其他 7个化合物。其中白桦脂醇对 SGC-7901
的抑制作用最强,IC50为 42.1µg/mL,瑞香素对
NCI-H 460的抑制作用最强,IC50为 40.2µg/mL。
白桦脂醇和瑞香素为潜在药物前体。以白
桦脂醇为前体,通过有机合成得到白桦脂酸。
这种方式已经应用于工业生产,可以得到工业
规模的白桦脂酸,是现在市场上白桦脂酸的主
要来源。白桦脂醇和白桦脂酸均具有抗 HIV、
抗肿瘤、抗炎、抗 HSV-1、抗溃疡等生物活性,
并且目前在国内外的各种研究都还处于临床前
的研究阶段(刘婧等 2009)。瑞香素具有抗炎、
抗缺氧、抗腹泻、抗寄生虫、抑制蛋白酶等活
性(徐静和傅颖媛 2006),目前在国内已经做
为心血管疾病方面的药物在临床上应用(李雪
梅 1986;王志强 1977),但其抗肿瘤活性已引
起了诸多学者的关注。本实验为充分利用木蹄
ISSN1672-6472 CN11-5180/Q Mycosystema September 15, 2012 Vol.31 No.5
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782
层孔菌以及进一步开发利用白桦脂醇和瑞香素
的药用价值提供一定的实验基础和理论依据。
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