全 文 ：2014 年 10 月第 21 卷第 10 期 中国中医药信息杂志 ·47·
·实验研究·
竹节参总皂苷对四氯化碳诱导小鼠肝损伤的影响
覃玉娥 1,崔倩倩 2,张长城 2,王婷 2,袁丁 2,刘朝奇 1
1.三峡大学分子生物学研究所,湖北 宜昌 443002；2.三峡大学医学院,湖北 宜昌 443002
摘要：目的 探讨竹节参总皂苷对四氯化碳(CCl4)诱导小鼠肝损伤的保护作用。方法 体外实验采用 HepG2
细胞株建立 CCl4诱导肝细胞损伤模型。体内实验采用 1%CCl4油剂处理 Balb/c 小鼠造成急性肝损伤模型,随机
分为正常组、模型组、药物组,药物组灌胃 20 mL/kg 竹节参总皂苷,正常组和模型组灌胃等量无菌生理盐水,
连续 8 d。MTT 法观察肝细胞存活状况,HE染色观察肝组织形态,RT-PCR 检测转化生长因子-β(TGF-β)、肿瘤
坏死因子-α(TNF-α)和 Toll 样受体 4(TLR4) mRNA 表达。结果 与正常组比较,模型组存活细胞明显减少
(P＜0.01)；与模型组比较,药物组存活细胞明显增多(P＜0.01)。HE 染色镜下观察,药物组小鼠肝组织损伤较
模型组明显改善。RT-PCR检测结果显示,与正常组比较,模型组 TGF-β、TNF-α和 TLR4 mRNA 表达水平明显升
高；与模型组比较,药物组 TGF-β、TLR4、TNF-α mRNA 水平明显降低,差异有统计学意义(P＜0.01)。结论 竹
节参总皂苷对 CCl4诱导小鼠肝损伤具有保护作用。
关键词：急性肝损伤；竹节参总皂苷；HepG2细胞；小鼠
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2014.10.014
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304(2014)10-0047-03
Effects of Total Saponins from Panax Japonicus on Acute Hepatic Injury Induced by Carbon
Tetrachloride QIN Yu-e1, CUI Qian-qian2, ZHANG Chang-cheng2, WANG Ting2, YUAN Ding2, LIU Chao-qi1
(1.Molecular Biology Research Institute of China Three Gorges University, Yichang 443002, China；2.Medicine
College, China Three Gorges University, Yichang 443002, China)
Abstract：Objective To discuss the protection mechanism of total saponins from Panax
japonicus on acute hepatic injury induced by carbon tetrachloride. Methods HepG2 cells were used
to establish CCl4-induced liver cell injury model in vitro experiments. Mouse model of acute liver
injury was caused by 1% CCl4 oil on Balb/c. Mice were randomly divided into normal group, model
group and medicine group. Mice in the medicine group were given a gavage with 20 mL/kg total
saponins from Panax japonicus, while mice in the other two groups were given a gavage with the
same amount of stroke-physiological saline solution. MTT method was used to detect the activity
of hepatic cells. The pathological changes of mouse liver were examined by HE staining. RT-PCR
was used to detect changes in the expression of transforming growth TGF-β, TNF-α, and TLR4
mRNA. Results Compared with normal group, less hepatic cells survived in model group (P＜0.01)；
compared with model group, more hepatic cells survived in medicine group (P＜0.01). HE staining
showed that damages in liver tissues of medicine group significantly improved than those in model
group. RT-PCR results showed that the levels of TGF-β, TNF-α, and expression of TLR4 mRNA
increased more significantly than those in model group；the expression of TGF-β, TNF-α, and TLR4
mRNA in medicine group decreased more significantly than those in model group, with statistical
significance (P＜0.01). Conclusion The total saponins from Panax japonicus has a protective effect
on liver injury induced by carbon tetrachloride.
Key words：acute hepatic injury；total saponins from Panax japonicus；HepG2 cell；mice

基金项目：湖北省自然科学基金重点项目(2012FFA086)
通讯作者：刘朝奇,E-mail：ctgulcq@163.com
·48· Chinese Journal of Information on TCM Oct.2014 Vol.21 No.10
竹节参为五加科植物竹节参 Panax japonicus C.
A.Mey.的干燥根茎,味甘、微苦,性温,归肝、脾、肺
经,具有滋补强壮、散瘀止痛、止血祛痰功效,用于病
后虚弱、劳咳咯血、咳嗽痰多、跌打损伤等。本研究
采用四氯化碳(CCl4)诱导小鼠肝损伤模型,观察竹节
参总皂苷提取物对模型小鼠的影响,探讨其作用机制。
1 实验材料
1.1 细胞
HepG2 肝癌细胞株购自武汉大学中国典型培养物
保藏中心。
1.2 动物
Balb/c小鼠 36只,SPF级,体质量22～25 g,雌雄
各半,购于湖北省实验动物中心,动物许可证号：
SCXK(鄂)2008-0003。
1.3 药物及制备
竹节参购于湖北恩施竹节参种植基地,经三峡大
学天然产物研究与利用湖北省重点实验室鉴定为五
加科人参属植物竹节参 Panax japonicus C.A.Mey.
的干燥根茎。将竹节参粉碎成粗粉,取竹节参粗粉,按
料液比 1∶10 加入 60%乙醇溶液,先浸泡 2 h,加热回
流提取 3 次,合并滤液,得提取液,将提取液减压浓缩
致无醇味,加适量水放置,离心,取上清液,用正丁醇
萃取,减压浓缩得正丁醇浸膏。取浸膏溶于水,过 D101
大孔树脂,依次用水和 30%、60%、90%乙醇冲洗。取
60%洗脱部位,经硅胶柱层析分离,采用三氯甲烷-甲
醇梯度洗脱,即得竹节参总皂苷。
1.4 主要试剂与仪器
CCl4、二甲基亚砜(DMSO),广东光华化学有限公
司；反转录试剂盒,Thermo公司。梯度PCR仪(Germany),
ECLIPSE TE2000-S 倒置荧光显微镜(日本尼康),Gel
logic 200 凝胶成像分析系统(美国柯达),DU730 核酸
蛋白分析仪(美国贝克曼库尔特公司)。
2 实验方法
2.1 体外培养
培养肝癌细胞 HepG2,采用胰酶消化传代,以每孔
10 000个细胞铺96孔板,细胞贴壁生长状况较好时加
药物预保护 6 h,然后加 CCl4 10 mmol/L,建立体外细
胞损伤模型。因只有活细胞线粒体内的琥珀酸脱氢酶
才能使外源性 MTT 还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲
瓒,并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。DMSO 能溶
解细胞中的甲瓒,24 h 后加 MTT 20 μL (5 mg/mL),4～
6 h 后弃掉废液,加 DMSO 溶解,在酶标仪 490 nm 波长
处测 OD 值,确定细胞存活状况。计算细胞存活率(%)
[(药物组―模型组)/(正常组―模型组)×100%]。
2.2 体内实验
2.2.1 造模、分组与给药 取 Balb/c 小鼠 36 只,随
机分为正常组、模型组、药物组(100 mg/kg),每组 12
只。于第 2、5、8 日参照文献[1]方法,按 20 mL/kg
腹腔注射 1%CCl4油剂,造成小鼠急性肝损伤模型。药
物组灌胃 20 mL/kg 竹节参总皂苷,连续 8 d,正常组和
模型组灌胃等量无菌生理盐水。
2.2.2 一般观察 第 9 日处死小鼠肉眼观察小鼠肝
脏颜色、形态并拍照。
2.2.3 肝组织炎症相关因子基因水平检测 取小鼠
肝组织 400 mg 匀浆,按 Trizol 试剂操作说明抽提肝
组织 RNA,测定其浓度,取总 RNA 1 μg,在 20 μL 反转
录反应体系合成 cDNA,并进行 PCR 扩增。TNF-α：上
游 5’-TCAACCTCCTCTCTGCCGTC-3’,下游 5’-GAGCAATGA
CTCCAAAGTAGACCTG-3’；TGF-β：上游 5’-CAACTTCTG
TCTGGGACCCTG-3’,下游 5’-ACTGCTCCACCTTGGGCTT-3’；
TLR4：上游 5’–AGACACTTTATTCAGAGCCGTTGG-3’,下游
5’-TCCTCCCATTCCAGGTAGGTG-3’；GAPDH：上游 5’-GGT
TGTCTCCTGCGACTTCAA-3’,下游 5’-CCACCCTGTTGCTGT
AGCC-3’,引物由上海生工生物工程技术服务有限公
司合成。PCR 参数：94 ℃预变性 3 min,94 ℃、30 s,
55 ℃、30 s,72 ℃、30 s,25～30 个循环,最后 72 ℃
延伸 5 min。2%琼脂糖凝胶电泳,采用凝胶成像分析系
统测定平均灰度值,以样品各基因的灰度值与其内参
照 GAPDH 的比值代表其 mRNA 相对水平。
2.2.4 组织病理学观察 取小鼠肝脏小叶,切取组
织块 5 mm×2 mm,置于塑料储片夹中,10%福尔马林中
固定 24 h,用水冲洗后经梯度乙醇脱水,二甲苯透明,
常规石蜡包埋处理后切成 4 μm 厚薄片,HE 染色,于倒
置荧光显微镜下观察肝脏切片的形态学变化。
3 统计学方法
采用 SPSS13.0 统计软件进行分析。计量资料采
用—x±s 表示,多组间比较用方差分析。P＜0.05 表示差
异有统计学意义。
4 结果
4.1 竹节参总皂苷对体外培养肝细胞HepG2存活率的
影响
与正常组比较,模型组存活细胞明显减少(P＜
0.01)；与模型组比较,药物组存活细胞明显增多,差
异有统计学意义(P＜0.05)。结果见表 1。
4.2 肝脏大体观察
正常组小鼠肝脏质地柔软而有弹性,色泽黯红,
有较好的光泽；模型组肝脏明显肿胀,质地较硬,弹性
差,有多个乳白色脂肪点、瘀血点,呈花斑状；药物组
2014 年
相
对
灰
度
值

100
80
60
40
20

颜色较模
点,质地较
组别
正常组
模型组
药物组
注：与正常
4.3 病理
正常
脉呈放射
细胞排列
肝细胞普
细胞变性
细胞索排
组肝细胞
整,细胞排
组有明显
正常
图
4.4 竹节
的影响
模型
水平与正
较,药物组
表达,差异







T
TNF
TGF
GA
10 月第 2
TNF-α

正
模
药物
000
000
000
000
000
0
型组有明显
柔软,弹性
表 1 各组

1
0
0
组比较,##P＜
学观察
组其肝细胞
状排列,肝
致密、均一
遍浊肿,出
、坏死和炎
列紊乱,外
基本结构
列较整齐
改善。结果

组
1 各组小鼠
参总皂苷
组小鼠肝组
常组比较明
显著抑制
有统计学
图 2 各组小鼠
正常组
LR4
-α
-β
PDH
1 卷第 10
TLR4
常组
型组
组
改善,颜色
较好。
HepG2 肝细胞存
OD 值
.50±0.31
.50±0.13##
.77±0.11*
0.01；与模型
索排列整
细胞形状规
；模型组镜
现以中央静
细胞浸润,
形不规则,
正常,镜下
,只有少量
见图 1。
模型组
肝组织形态学比
对小鼠肝细
织 TGF-β
显增高(P
肝组织TGF
意义(P＜0
肝组织炎症相
模型组
期
TGF-
黯红,无花
活率比较(—x±s
存活
100.00±
25.79±
51.30±
组比较,*P＜0
齐而清晰,
则,胞核较
下见肝小叶
脉为中心
肝细胞边界
肝细胞明显
见肝小叶
的炎细胞浸

较(HE 染色,×
胞损伤炎
、TLR4、T
＜0.01)；
-β、TLR4、T
.01)。结果
关因子 mRNA 表
药物组
中国
β
斑,无瘀血
)
率(%)
10.50
3.16##
6.08*
.05
围绕中央静
大呈圆形
结构破坏
的局灶性肝
不清楚,肝
肿胀；药物
结构基本完
润,较模型
药物组
200)
症相关因子
NF-α mRN
与模型组比
NF-α mRN
见图 2。
达
中医药信
,
,

A
A
5 讨
从
的化合
皂苷
用[2]；
多糖刺
炎效果
急
肝损伤
脉为
显,系
简便,
程度
存活率
T
TNF-
伤；C
伤更敏
功能受
肝组织
药物组
明显。
综
伤,进
参考文
[1] 汤
作用
[2] 袁
胞增殖
[3] 代
炎作用
[4] 孙
量的影
[5] Oya
recep
and
J Phy
[6] Xi
prot
indu
673–6
息杂志
论
天然药物
物是目前
对二甲苯所
代氏等[3]研
激RAW264
好。
性 CCl4 肝
模型,在形
中心的大量
最为常用的
重复性好。
明显减轻,
较模型组
NF-α是引
α可直接损
Cl4 致肝损
感,从而使
损而加重
TLR4、T
炎性因子

上,竹节参
而起到保护
献：
超,汤文凡,刘朝
[J].食品科学,
丁,顿耀艳,张长
抑制作用的研
艳文,袁丁,张海
初步研究[J]
设宗,赵杰,官守
响[J].山西医
S, Yokoyama
tor 4 suppres
subsequent in
siol Gastroi
ao-Yan Jia,
ective effect
ced liver inj
78.

中提取和
的研究热点
致的小鼠
究发现,竹
.7巨噬细
损伤动物
态学上主
细胞坏死
急性肝炎
本实验结
肝组织坏死
明显升高。
起急慢性
伤肝细胞
伤后,肝脏
内毒素及
肝损伤[4-6]
GF-β、TN
表达显著降
总皂苷可
肝脏作用
奇.木瓜发酵液
2013,34(13)：
城.竹节参总皂
究[J].时珍国
滨.不同工艺提
.中国中医药信
涛.山药多糖对
科大学学报,2
Y, Kokuryo T
ses liver inju
traportal lip
ntest Liver P
Qing-An Zhang
s of almond o
ury in rats[
(收稿日期：

发现具有防
。有研究
耳肿胀有
节参皂苷粗
胞释放一氧
模型是一种
要表现为以
和出血,脂
模型,成功
果表明,药物
和炎症浸

肝损伤的
或激活免疫
对内毒素及
炎性因子更
。本实验结
F-α mRNA
低,与正常
明显改善
。
对小鼠四氯化
271-274.
苷对胶原诱导
医国药,2008,1
取的竹节参皂
息杂志,2014,2
CCl4 肝损伤小
011,42(6)：45
, et al. Inhi
ry induced by
opolysacchari
hysiol,2014,3
, Zhi-Qi Zha
il against c
J]. Food Che
2014-03-0
·4
治肝损伤
发现,竹节
明显的抑
提物可干
化氮,提示
经典的化
肝小叶中
肪变性十
率高,实验
组肝细胞
润减少,肝
重要因素之
细胞的间
炎性因子
易介导肝
果表明,模
水平明显升
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CCl4所致的
碳诱发肝损伤
性关节炎大鼠
9(8)：1882-18
苷粗提物毒性
1(1)：50-53.
鼠自由基、TN
2-454.
bition of Tol
biliary obstr
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06(3)：244-25
ng, et al. H
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mistry,2011,1
8；编辑：
9·
作用
参总
制作
预脂
其抗
学性
央静
分明
方法
受损
细胞
一,
接损
的损
细胞
型组
高,
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肝损
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滑膜细
83.
及其抗
F-α含
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J]. Am
2.
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2(5)：
华强)