全 文 ： 药理药化
收稿日期:2010-02-09;　修订日期:2010-05-08
作者简介:李　清(1972-),女(汉族),河北石家庄人, 现任河北医科大学
中医学院副教授 ,硕士学位 ,主要从事中药药理教学及科研工作.
＊通讯作者简介:刘　姣(1978-), 女(汉族),河北石家庄人 ,现任河北医
科大学中医学院讲师 ,硕士学位 ,主要从事中药药理教学及科研工作.
垂盆草提取物对乙醇致小鼠肝损伤的保护作用研究
李　清 1 , 刘　姣1＊ , 曹秀莲 1 , 张雪静2 ,任艳青 1
(1.河北医科大学中医学院 ,河南 郑州　050091;　2.河北医科大学基础部 ,河北 石家庄　050091)
摘要:目的 研究不同剂量垂盆草提取物对乙醇致小鼠肝损伤动物模型的保护作用。方法 采用乙醇灌胃造成乙醇型肝
损伤小鼠模型。用 70%乙醇对原药材进行回流提取 ,将垂盆草药材的醇浸膏分得醇提高剂量组 、醇提低剂量组 2组;另
取等量原药材加水煎煮 ,并将水煎液分得水提高剂量组 、水提低剂量组 2组;以联苯双酯为阳性对照。垂盆草提取物 4个
剂量组小鼠均连续灌胃给药 10 d, 分别测定各组小鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性及肝匀浆中丙二醛
(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果 垂盆草水提物(ESB-Ⅱ)、醇提物(ESB-Ⅰ )能抑制乙醇所致的 ALT及
AST活性的升高 ,降低乙醇所致的 MDA含量的升高(P<0.01),扭转乙醇所致的鼠肝脏 SOD活性的降低。结论 垂盆草
水提物 、醇提物对乙醇致小鼠急性肝损伤有保护作用。且对血清 ALT及肝组织 SOD活性影响 , 水提物强于醇提物;对
AST活性尤其 MDA含量影响 , 醇提物强于水提物。
关键词:垂盆草;　小鼠;　急性肝损伤
DOI标识:doi:10.3969 /j.issn.1008-0805.2011.01.131
中图分类号:R285.5　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2011)01-封 3-02
　　景天科植物垂盆草SedumsarmentosumBunge是历版《中国药
典》收载的常用中药之一 ,味甘 、淡 ,性凉 ,具有清热解毒 、利尿消
肿 、排脓生肌之效 ,主治丹毒溃疡 ,小便不利及急慢性肝炎等。化
学研究表明 , 垂盆草主要含有蛋白质 、氨基酸 、糖类 、黄酮类 、三萜
类及垂盆草苷类。据有关文献报道 [ 1] , 垂盆草具有抑制炎性渗
出 , 减少肝细胞损伤的作用。因此 ,可使血清转氨酶降低 ,这与史
书记载的该药有 “清热解毒 、消肿 ”之效完全吻合。 笔者采用乙
醇致小鼠急性肝损伤药理模型 ,研究了垂盆草提取物对肝损伤小
鼠的保护作用。
1　材料与仪器
1.1　药物与试剂 垂盆草药材 , 由石家庄乐仁堂提供。垂盆草提
取物(ExtractofSedumsarmentosumBungeESB)的制备:醇提物
(ESB-Ⅰ ):将 400 g药材常规加工粉碎后 , 用 70%乙醇回流提
取 2次 , 每次 1h,合并提取液。提取液一部分用旋转蒸发仪浓缩
至无醇味 , 置冰箱备用。水提物(ESB-Ⅱ ):垂盆草 250 g, 加水
至没过药面加热 , 水沸后煎煮 20 min,趁热过滤 , 蒸发浓缩 , 置冰
箱备用。 乙醇分析纯 , 天津市北方天医化学试剂厂 , 批号
080820。联苯双酯滴丸:浙江万邦药业有限公司生产 , 批号
081209(规格 1.5mg/丸)。 ALT、AST测定试剂盒为南京建成生
物工程研究所提供。 MDA、SOD测定试剂盒购自南京建成生物
工程研究所。
1.2　动物 KM小鼠 , 清洁级 , 18 ～ 22 g, ♂, 由河北省实验动物中
心提供。实验动物使用许可证号 SCXK(冀)2008-1 -003。合
格证编号 904124。
1.3　仪器 1-15K型高速冷冻离心机 , 美国 Sigma;RE-52A旋
转蒸发仪 , 上海亚荣生化仪器厂;DY89-1型电动玻璃匀浆机 ,波
新芝生物科技股份有限公司;600型电热恒温水箱 ,天津;TDL-5
-A型离心机 ,上海安亭;752型紫外光栅分光光度计 ,上海分析
仪器厂;722型可见分光光度计 , 上海分析仪器厂。
2　方法 [ 2]
2.1　剂量设计 根据药材的临床用药剂量(人临床用量 15～ 30g/
d,取 20g),由剂量换算公式折算成小鼠剂量,作为小鼠的给药低剂
量(经过预试验),即高剂量为 6.67g/kg,低剂量为 3.33g/kg。
2.2　肝损伤模型的制备及给药方法 取 KM小鼠 70只 , ♂,体质
量(20±2)g, 随机分为 7组 , 每组 10只 , 即空白对照组 、模型组 、
阳性对照组(即联苯双酯组 , 250 mg/kg)和醇提物高剂量组 、醇提
物低剂量组 、水提物高剂量组 、水提物低剂量组 ,以上各组均灌胃
给药 , 空白对照组和模型组给予蒸馏水 , 1次 /d,连续 8 d, 第 1次
给药前禁食不禁水 24 h。第 8天 , 各组灌胃相应受试物 , 30 min
后 , 除空白对照组以外 ,每组小鼠再灌 55%乙醇(0.12 g/10 g体
质量),空白对照组灌胃等容积蒸馏水。
2.3　小鼠血清 ALT及 AST活性的测定(赖氏法)末次给乙醇后
禁食不禁水 24 h, 所有小鼠断头取血 , 3 500 r/min, 离心 10 min,
分离血清 , 按试剂盒说明 , 测定和计算出相应 ALT和 AST的酶活
力单位值。
2.4　小鼠肝脏脂质过氧化物终产物 MDA含量及肝组织 SOD活
性的测定 小鼠断头放血后 , 立即剖腹取肝 ,放在冰生理盐水中漂
洗 2次 , 滤纸吸干 , 取相同部位的 1小块肝组织用生理盐水制备
成 10%的肝匀浆 , 2 000 r/min离心 10 min, 取上清液 , 按试剂盒
说明书测定肝组织 SOD活性 , 硫代巴比妥酸法(TBA显色法)测
定每克肝组织中 MDA含量。
2.5　统计学处理 实验数据均以 x±s,统计学处理采用 SPSS11.
5 forwindow统计软件。
3　结果
空白对照组小鼠毛色光泽 ,行动灵活 , 食量及大便正常。 模
型组在给乙醇后 , 轻者走路不稳 , 动作呆板;重者醉倒嗜睡 ,甚至
出现呼吸急促 ,约 30 min～ 1h后恢复常态。造模 1d。饮酒导致
消化道损伤 ,动物造模后出现饮食量减少 , 体重降低 ,毛发渐干枯
无光泽 ,精神萎靡不振等表现。给药组上述一般状况较模型组明
显改善 。
与空白对照组比较 ,模型组血清中 ALT、AST的含量明显升
高(P<0.05), 说明造模成功。与模型组比较 , 各给药组均程度
不同地使小鼠血清 ALT、AST活性降低。其中水提低剂 、醇提低
剂和阳性对照组能明显降低小鼠血清中升高的 ALT活性(分别
为 P<0.05, P<0.01),且水提物强于醇提物。水提低剂 、醇提高
剂明显降低小鼠血清 AST的活性(P<0.05),且醇提物略强于水
提物 , 而其他各剂量组不明显 , 差异无统计学意义。另外 , 除对
AST水平影响 , 醇提物高剂强于低剂外 , ESB其他各剂量组对
AST、ALT水平影响表现出剂量依赖趋势 , 低剂作用强于高剂。
见表 1。
与空白对照组比较 , 模型组小鼠肝组织 SOD活性降低 , MDA
含量显著增加(P<0.05)。与模型组比较 , 各给药组均可以升高
小鼠肝组织 SOD活性 , 并显著降低肝组织 MDA的含量
(P<0.01), 且有剂量依赖趋势 , 剂量越高降低效果越明显。降
低肝组织 MDA的含量尤以醇提高剂作用最明显 , 其效果与阳性
对照药联苯双酯效果相似。见表 2。与模型组比较 , 对肝组织
SOD活性 ,阳性组与 ESB水提低剂作用明显(P<0.05)。而其他
各剂量组虽亦均能升高肝组织 SOD的活性 , 且低剂作用强于高
剂 , 水提物强于醇提物 ,但影响均不明显(P>0.05), 差异均无统
计学意义。结果见表 2。
从以上结果可以看出 , 垂盆草提取物能抑制灌胃乙醇小鼠
ALT和 AST升高 ,尤其对小鼠血清中升高的 ALT升高作用显著
明显(P<0.01), 并降低乙醇所致的 MDA含量的升高 , 扭转乙醇
所致的鼠肝脏 SOD活性的降低 , 尤对 MDA作用明显 , 且有剂量
依赖趋势。 对血清 ALT及肝组织 SOD活性影响 , 水提物强于醇
提物 , 对 AST活性尤其 MDA含量影响 , 醇提物强于水提物。阳
性对照药对血清 AST及肝组织 SOD活性的影响介于垂盆草提取
物的高 、低剂量组之间 , 对血清 ALT活性及肝组织 MDA含量的
影响显著。
表 1　ESB对乙醇致肝损伤小鼠血清 AST和 ALT的影响( x±s)
组别 剂量C/g生药· kg-1
AST
/U· L-1
ALT
/U· L-1
空白对照 - 18.94±3.50＊＊ 11.41±3.25＊
模型 - 35.35±5.77 18.07±3.79
阳性对照组 0.25 25.70±8.40 8.63±2.58＊＊
水提取(高剂量) 6.67 27.37±3.51 12.99±4.23
水提取(低剂量) 6.67 23.88±6.96＊ 10.77±3.96＊
醇提物(高剂量) 6.67 21.48±6.42＊ 13.17±5.69
醇提物(低剂量) 3.33 25.81±4.69 11.17±4.15＊
　　与模型组比较 , ＊P<0.05, ＊＊P<0.01;n=10
表 2　ESB对小鼠肝脏 SOD活性及 MDA含量的影响( x±s)
组别 剂量C/g生药·kg-1
SOD/
U· (mg蛋白)-1
MDA/
μmol·(g蛋白)-1
空白对照 - 393.44±78.10＊ 1.53±0.22＊＊
模型 - 301.14±42.62 3.86±1.60
阳性对照 0.25 384.80±75.48＊ 2.01±0.65＊＊
水提物(高剂量) 6.67 377.28±92.38 2.10±0.49＊＊
水提物(低剂量) 6.67 407.16±75.97＊ 2.91±3.48＊＊
醇提物(高剂量) 6.67 367.55±65.26 2.04±0.55＊＊
醇提物(低剂量) 3.33 372.51±57.49 2.39±0.74＊＊
　　与模型组比较 , ＊P<0.05, ＊＊P<0.01;n=10
4　讨论
肝炎的发病机制较为复杂 , 常涉及到病毒复制 、炎性介质释
放 、免疫功能紊乱 、自由基损伤等多个环节。研究肝炎的发病机
制和保肝药物的作用原理需要建立合适的实验性肝损伤动物模
型 , 因此 ,在抗肝炎药物研究中可采取损伤机制不同的多个模型
来观察药物的保肝作用 ,以综合判断药物的疗效和作用机制 [ 3] 。
本课题采用乙醇诱导的小鼠实验性肝损伤模型 ,观察垂盆草提取
物的保肝作用。
由酒精性肝损伤引起的酒精性肝病(AlcoholicLiverDisease,
ALD)已成为一种世界性的疾病 ,发病率呈明显上升趋势 , 成为仅
次于病毒性肝炎的第二大肝病。 ALD发病率高 、后果严重 , 加之
酒精中毒对神经系统 、生殖系统的影响 , 已成为一种严重危害人
们健康的疾病 [ 4] 。乙醇能激活氧分子 , 产生氧自由基导致肝细
胞膜的脂质过氧化及体内还原型谷胱甘肽的耗竭 [ 5];同时研究
证实酒精中毒可以直接引起肝纤维化 ,并由纤维化直接进入肝硬
化 [ 6] 。有关急性酒精性肝损伤动物模型建立方法国内外基本一
致 , 主要有两种:一是小鼠或大鼠以 50 ～ 60度白酒或体积分数为
50% ～ 60%的乙醇一次性经口灌胃 410 ～ 610 g/kg, 4 ～ 24h内处
死动物 ,检查肝功 、病理及脂质过氧化等有关指标;二是腹腔注射
一定浓度的乙醇 ,每次 20ml/kg, 2次 /d, 共 1 ～ 10d。本实验小鼠
的造模方法简便易行 ,形成率高 , 死亡率低 ,可以快速诱导肝损伤
模型 [ 6] 。我们实验发现 , ESB-I和 ESB-Ⅱ能改善酒精性肝损
伤小鼠肝脏病变状况 , 使血清 ALT、AST、和肝组织 SOD、MDA向
正常水平恢复。提示 ESB-I和 ESB-Ⅱ对酒精引起的肝损伤均
具有保护作用。
垂盆草药用历史悠久 , 据本草及药典记载其有清利湿热 , 解
毒等多种功效 , 常用于湿热黄疸 , 小便不利 ,痈肿疮疡;急 、慢性肝
炎。本实验结果表明 , ESB-I和 ESB-Ⅱ对乙醇致肝损伤均具
有良好的保护作用。但是作用有所差异 ,可能跟各提取物中主要
成分不同有关。国内外学者对垂盆草化学成分的研究比较多 , 目
前已从垂盆草中分离得到多种化学成分 , 包括垂盆草苷 , 生物碱
类成分 , 三萜类成分 ,甾醇类成分 、黄酮类成分等。其中水溶性氰
苷类成分 ,命名为垂盆草苷 , 并确定其结构为 2-氰基 -4-O-β
-D-葡萄糖 -反丁烯 -2-醇 , 其为抗肝炎活性成分 , 目前已能
够人工合成 [ 7] 。潘金火等对垂盆草的保肝降酶活性成分进行了
一系列的研究 , 证明垂盆草中具有保肝降酶作用的活性成分主要
存在于 H2O部分和 n-BuOH部分(主要含苷类和总黄酮),进而
确认其中的总黄酮是垂盆草中保肝降酶的主要活性组分之
一 [ 8] 。另有药理试验表明三萜类成分具有显著降低谷丙转氨酶
的作用 [ 9] 。因此推测实验中垂盆草提取物主要含有两大类成
分 , 即水溶性苷类(如垂盆草苷等)和总黄酮可能是 ESB保肝作
用的主要有效成分。本实验还表明 , ESB-I的保肝作用与 ESB
-Ⅱ有差异 ,这可能与垂盆草中的总黄酮含量不同有关。在此基
础上 , 进行进一步分离 , 通过药效学跟踪研究 ,最终确定垂盆草抗
肝损伤的有效成分是今后研究的方向之一。
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