全 文 ：表 1
给药途径 Mouse LD50 mg /kg
静脉注射 ♀ 120～ 144144～ 173
腹腔注射 ♀ 300以上300以上
皮下注射 ♀ 320或 320以上320或 320以上
口　　服 ♀ 6000以上6000以上
表 2
实验数 剂量μg /ml 51Cr特异同位素释放 (% )
实验 1
实验 2
实验 3
对　　照 27. 7± 3. 3
50μg /ml 39. 9± 0. 4 P < 0. 01
10μg /ml 39. 4± 1. 3 P < 0. 01
对　　照 33. 8± 3. 9
50μg /ml 42. 7± 4. 7 P < 0. 05
25μg /ml 45. 2± 0. 6 P < 0. 01
10μg /ml 42. 5± 5. 0 P < 0. 05
对　　照 17. 1± 1. 2
25μg /ml 25. 6± 1. 9 P < 0. 01
在波长为 278 nm处有紫外吸收峰 (与文献报导相
符 )。
2. 4　用 L8500发酵代谢物进行药理研究
2. 4. 1　急性毒性实验
如表 1所示: 通过静脉、腹腔、皮下及口服四种
途径给药测定 L8500代谢物的急性毒性 ,显示出很
弱的毒性 ,尤其是口服给药毒性更小。
2. 4. 2　 L8500代谢物对人血自然杀伤细胞
( NK)的作用
如表 2,从以上实验得出: L8500代谢物对人血
自然杀伤细胞 ( N K)在所用浓度时有升高对 K562
白血病细胞的杀伤作用。
2. 4. 3　 L8500代谢物对小鼠 ( C57 BL )天然杀伤
细胞的作用: 用同位素释放法观察了对小鼠脾 NK
细胞-yac-1(鼠淋巴细胞瘤 )及腹腔 NK细胞的细胞
毒作用 ,共做了 5次试验 , 4次结果为阳性 ,这表明
L8500代谢物有升高对小鼠 ( C57BL)天然杀伤细胞
的作用。
综上所述 ,通过对 L8500菌的发酵培养 ,代谢
产物的提取以及药理研究 ,发现 L8500代谢物是一
种毒性小 ,在肿瘤抑制方面有较明显作用的活性物
质。当前抗病毒、抗肿瘤药物还很缺乏 ,对 L8500代
谢物的深入研究前景可观。
异紫堇定抗失血性休克条件下脂质过氧化
及细胞膜脂流动性的改变
昆明医学院生理教研室 ( 650031)曹跃华 　杨映宁　熊文昌　罗海荟　徐世莲　罗耀辉　周定邦
　昆明医学院生化教研室 　 　陈　颖* *　田兴亚　　　　　　 　　　　　　　　　　　　　　
昆明医学院附一院制剂室　　陈昌昆　李保平　　　　　　　　　　 　　　　　　　　
　　摘要　异紫堇定在动物实验中可以抗失血性休
克 ,增加动脉血压 ,本研究采用家兔造成急性失血性
休克 ,测定草药异紫堇定抗失血性休克条件下血浆
MDA及红细胞膜脂质流动性的改变 ,结果显示失
血性休克条件下红细胞膜脂质流动性明显降低 (P
< 0. 05) ,而异紫堇定可以增加失血性休克时红细胞
膜脂的流动性 ,使其维持在正常水平 ( P> 0. 05) ,此
文对该草药的抗休克机制进行了探讨。
关键词　膜流动性　休克　出血性　异紫堇定
膜流动性是生物膜结构的基本特征 ,合适的流
·47·
第 14卷　第 4期　 1998年 8月 　 　　　　　　　中　医　药　研　究RESEARCH OF TRADIT ION AL CHINESE M EDICINE　 　 Vo l. 14　 No . 4　 Aug. 1998
共享第一作者收稿日期: 1998— 03— 12
动性对维持生物膜的生理功能 ,如物质转运、能量转
换、信息传递等均具有十分重要的作用。迄今为止已
发现某些疾病的病变细胞膜或红细胞膜流动性有异
常变化。 已有实验证明失血性休克条件下红细胞膜
流动性有异常改变〔1〕。 本研究旨在探讨异紫堇定抗
失血性休克条件下红细胞膜脂流动性的改变 ,从而
阐述该草药在非血流动力学方面的抗休克机制。
1　材料和方法
用 2. 5～ 3. 0kg健康成年家兔 20只 ,随机分为
三组:人血性休克组 6只 ,异紫堇定治疗组 8只 ,异
紫堇定预防组 6只。 3%戍巴比妥纳静脉麻醉 ,气管
插管 ,颈静脉插管备用 ,颈动脉插管用水银检压计测
平均动脉血压 ;股动脉放血 ,于 1. 5内快速放血至约
6KPa,造成家兔急性失血性休克 ,以后不断抽血和
输血 ,维持低血压每小时约 6KPa,再继续观察
1. 5 h,分别于休克前及失血性休克后 60 min、 120
min及 150 min抽取股动脉血 2ml测定血浆脂质过
氧化物丙二醛 ( M DA )含量及细胞膜流动性的改变。
1. 1　失血性休克组: 快速放血造成休克模型。
1. 2　异紫堇定治疗组: 休克后 60min由静脉注
入 0. 5%异紫堇定 1mg /kg。
1. 3　异紫堇定预防组:休克前抽血样本后由静
脉注入上述量的异紫堇定 ,之后再放血复制休克模
型。
血浆过氧化脂质 ( MDA)测定〔2〕: 采用硫代巴比
妥酸反应 ( TBA法 ) ,荧光分光光度法。
红细胞膜脂荧光偏振度测定〔3〕: 以荧光试剂
DPH为探针 ,测定光偏振度 ,然后求得细胞膜脂质
的流动性及膜的平均微粘度。
红细胞膜荧光标记: 取新鲜制备的红细胞膜
2ml(膜蛋白浓度 400～ 600mg· L-1 ) ,加入 2× 10- 6
mo l· L- 1DPH液 2ml进行标记 , 25℃温育 20min,
离心、用 PBS洗涤 1次 ,最后悬浮在 4mlPBS液中 ,
测定荧光偏振度 ,激发波长为 362nm,发射波长为
432nm。
2　实验结果
2. 1　平均动脉血压的改变 (表 1):
失血性休克组动物休克后平均动脉压随休克时
间延长而持续下降 ;而治疗组血压明显回升接近休
克前对照水平 ;预防组血压有部分回升。
　　表 1 异紫堇定对家兔失血性休克平均动脉血压 ( KPa )的影响　 (X± SD)
组别 休克前 休克后 60 min 120 min 150 min
单纯休克组
( n= 6)
13. 74± 1. 66 6. 63± 0. 12* * 5. 36± 1. 16* * 5. 06± 1. 11* *
异紫堇定治疗组
( n= 8)
14. 54± 2. 10 6. 42± 0. 49* * 11. 31± 1. 62 10. 82± 1. 09
异紫堇定预防组
( n= 6)
13. 08± 0. 91 6. 54± 0. 25* * 8. 65± 1. 09* 8. 02± 1. 47*
　　　　注: * P < 0. 05　* * P< 0. 01
　　 2. 2　血浆 M DA含量的改变 (表 2):
三组动物失血性休克后 MDA含量均升高 ,但
其变化与休克前对照水平相比差异无显著性 ,三组
间变化的差异也无显著性。
　　表 2　 异紫堇定对家兔失血性休克条件下血浆 MDA含量 ( nmol /L)的影响 (X± SD )
组别 休克前 休克后 60 min 120 min 150 min
单纯休克组
( n= 6)
2. 70± 0. 08 4. 11± 0. 13 3. 80± 0. 30 3. 67± 0. 23
异紫堇定治疗组
( n= 8)
2. 77± 0. 13 3. 90± 0. 10 3. 76± 0. 12 3. 78± 0. 07
异紫堇定预防组
( n= 6)
2. 68± 0. 12 3. 98± 0. 08 3. 47± 0. 17 3. 38± 0. 10
　　 2. 3　红细胞膜脂流动性的改变 (表 3):
·48·
　　　　　　　　　　　　　　中　医　药　研　究　　　　　　　　　　　 1998年第 4期
　　表 3　 异紫堇定对家兔失血性休克红细胞膜脂流动性的影响 ( x± SD)
组别 休克前 休克后 60 min 120 min 150 min
单纯休克组
( n= 6)
P 0. 243± 0. 049 0. 260± 0. 015 0. 287± 0. 007 0. 294± 0. 0036
F 4. 630± 0. 425 3. 002± 0. 533 2. 101± 0. 354 1. 921± 0. 581
η 1. 962± 0. 102 2. 504± 0. 287 3. 318± 0. 708 3. 543± 0. 296
异紫堇定治疗组
( n= 8)
P 0. 230± 0. 016 0. 246± 0. 022 0. 237± 0. 033 0. 223± 0. 040
F 4. 452± 0. 976 3. 692± 0. 997 4. 298± 1. 711 4. 452± 1. 245
η 2. 017± 0. 268 2. 342± 0. 486 2. 211± 0. 654 2. 043± 0. 775
异紫堇定预防组
( n= 6)
P 0. 222± 0. 015 0. 235± 0. 027 0. 224± 0. 021 0. 219± 0. 019
F 4. 969± 0. 944 4. 311± 1. 420 4. 703± 1. 415 5. 025± 1. 029
η 1. 871± 0. 252 2. 139± 0. 509 1. 898± 0. 361 1. 817± 0. 284
　　注: P—荧光偏振度　　 F—红细胞膜脂流动性　η—膜平均微粘度
　　结果显示失血性休克组动物休克后 2h,红细胞
膜荧光偏振度明显升高并持续 (P < 0. 05) ,红细胞
膜的平均微粘度也持续升高 (P < 0. 05) ,而红细胞
膜脂区流动性却明显降低 (P < 0. 05)。
其余用药二组动物休克后 2小时 ,三项指标的
变化与休克前对照水平相比差异无显著性 (P >
0. 05) ,基本接近对照水平。
3　讨论
本院以前的实验研究已证明异紫堇定可使急性
失血性休克家兔的血压升高 ,并延长其存活时
间〔4, 5〕 ,还可改善休克时器官血流量〔6〕。 本实验结果
同样显示了异紫堇定可使失血性休克家兔的动脉血
压回升 ;而在预防组中看到控制低血压 1小时后 ,动
脉血压同样有部分回升 ,进一步肯定了异紫堇定抗
失血性休克的血流动力学作用。 且该研究从异紫堇
定对细胞膜脂流动性影响的非血流动力学方面探讨
了异紫堇定的抗休克作用机制。
众所周知 ,生物膜是由蛋白质、脂质及碳水化合
物组成的超分子体系 ,以脂质双分子层为骨架。膜的
流动性一般是指膜脂脂肪酸烃链部分的运动状态 ,
即膜脂质流动性。 通过膜脂质流动性的改变可反应
出细胞膜的功能状态及膜受损伤的程度。 影响膜脂
质流动性的因素很多 ,诸如温度、 PH、药物、病理因
素等。 已有实验证明〔1〕在失血性休克条件下红细胞
膜脂质的流动性降低 ,组织 MDA升高而血浆 MDA
的变化不明显。 本研究也显示了失血性休克状态下
红细胞膜脂质流动性降低的同样结果 ,而 M DA的
变化虽无统计学差异 (可能与血浆代偿性稀释有
关 ) ,却显示了升高的趋势。 而不论是异紫堇定的休
克治疗组 ,还是预防组均显示了红细胞膜流动性并
不降低 ,而是保持或是回升到对照水平。
失血性休克状态下红细胞膜脂质的流动性降低
可能与许多休克介质有关 ,其中之一便是膜的脂质
过氧化作用。本研究中 ,异紫堇定虽并未降低休克所
至的 MDA的升高趋势 ,但却显示出改善休克时细
胞膜脂质流动性的明显效应。因此 ,该研究揭示异紫
堇定可能是经其它途径保护和改善细胞膜的功能。
例如 ,可能提高细胞膜 Na+ - K+ - ATP酶活性 ,降
低失血性休克缺血所致的细胞内钙超载以及通过抑
制内源性磷脂酶 A2 ( PLA2 )的活性 ,从而阻止以膜
磷脂为介质释放花生四稀酸及一系列休克介质的反
应 ,防止由此而致的循环衰竭。
总之 ,现在及以往的实验研究已肯定了异紫堇
定抗动物失血性休克的作用 ,并显示该草药的抗休
克机制包括了血流动力学及血流非动力学的双重机
制。 提示异紫堇定有可能成为较有前途的抗休克药
物 ,从而为休克的治疗提供新的途径。
参考文献
1　陆松敏 ,等 . 失血性休克条件下磷脂酶 A1
( PLA1 )和细胞膜脂流动性的改变 . 中国病理生理
杂志 , 1994, 10( 1): 73
2　 Oh kaw a H, et al . Assay fo r lipid pero xides in
animal tissues by thiobarbituric acid reaction. Anal
Biochem, 1979, 95: 351
3　 Shinizky M , et al. Dynamics of the hydrocarbon
layer in liposomes of in lecithin and sphingom yelin
containing dicety lphospha te. J. o f Biological
chemistr y, 1974, 249( 8): 2652
4　胡辅 ,等 . 异紫堇定抗猕猴失血性休克的实验研
究 . 昆明医学院学报 , 1989, 10( 1): 29
5　范亚兰 ,等 . 异紫堇定改善家兔急性失血后的左
心功能 . 云南中医杂志 , 1992, 13( 4): 35
6　周定邦 ,等 . 异紫堇定对失血性休克家兔器官血
流量的影响 . 云南中医杂志 , 1990, 11( 1): 33
·49·
　　　　　　　　　　　　　　中　医　药　研　究　　　　　　　　　　　 1998年第 4期