全 文 ：天山花楸药材 HPLC指纹图谱的研究
李毓斌1， 常军民2* ， 王 岩2
(1．新疆医科大学第一附属医院，新疆 乌鲁木齐 830011;2．新疆医科大学药学院，新疆 乌鲁木齐 830011)
收稿日期:2010-04-15
基金项目:新疆维吾尔自治区高校科研计划项目(XJEDU2005I19)
作者简介:李毓斌(1983—)，男，硕士，药师，研究方向:天然药物分析。Tel:13565887123，E-mail:liyubin2003@ 163． com
* 通信作者:常军民(1965—)，男，教授，主要从事天然药物研究开发。E-mail:cjmcjn2471@ yahoo． com． cn
摘要:目的 建立天山花楸药材的 HPLC 指纹图谱。方法 采用 RP-HPLC 法，选用 Shim-pack VP-ODS(150 mm × 4． 6
mm)色谱柱，流动相为甲醇-水-0． 1%磷酸溶液，梯度洗脱，体积流量 0． 8 mL /min;检测波长 λ = 215 nm;柱温 30 °C;检测
时间 70 min。结果 运用梯度洗脱得到的色谱图各色谱峰分离较好，达到中药指纹图谱研究的技术要求。结论 该方
法稳定可靠，可以有效地用于天山花楸药材的质量控制。
关键词:天山花楸;HPLC;指纹图谱
中图分类号:R284． 1 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2011)05-0742-04
天山花楸来源于蔷薇科 Rosaceae 花楸属 Sorbus
植物天山花楸 Sorbus tianschanica Ruper． 的干燥嫩
枝叶，主要分布于天山山脉溪谷或云杉林边缘的阴
处，是新疆特有的民间天然植物药材［1］。天山花楸
所含成分较复杂，并且随品种、产地、气候和生态环
境的不同，其成分也有一定的差异。据文献报道对
天山花楸药材的质量控制仅限于苦杏仁苷和金丝桃
苷等单一有效成分的测定，不能系统、完整地反映天
山花楸的内在质量［2］。目前，指纹图谱已成为国际
公认的控制中药质量的有效手段［3-4］。本实验通过
对新疆几个不同产地、不同采摘期的天山花楸
HLPC 指纹研究和分析，建立了天山花楸的 HPLC
指纹图谱，为天山花楸质量控制提供参考。
1 仪器与药品
1． 1 仪器 高效液相色谱仪(LC-20A 日本岛津)，
二级管阵列检测器(SPD-M20A 日本岛津)，自动进
样 器 (SIL-20A 日 本 岛 津)，超 声 波 清 洗 器
(SK8210HP型功率 500 W 及频率 59 Hz，上海科
导);Sartorius AG BS110S 电子天平(北京赛多利斯
天平有限公司)。
1． 2 药品 金丝桃苷对照品购于中国药品生物制
品检定所(批号:111521-200303);苦杏仁苷对照品
购于中国药品生物制品检定所(批号:110820-
200403);甲醇(Burdick ＆ Jackson 色谱醇);水为超
纯水;其他试剂为分析纯。天山花楸药材(10 批)来
自于新疆不同产地，不同采摘期，品种由新疆医科大
学生药 /天药教研室帕丽达教授鉴定为天山花楸
Sorbus tianschanica Ruper。见表 1。
表 1 供试品编号及来源
批号 产 地 采摘年月
1 呼图壁林场 2007-08
2 呼图壁林场 2008-08
3 米泉市铁仓沟林场 2006-08
4 米泉市铁仓沟林场 2007-08
5 米泉市铁仓沟林场 2008-08
6 乌市南山白杨沟 2006-08
7 乌市南山白杨沟 2007-08
8 乌市南山白杨沟 2008-08
9 玛纳斯林场 2007-08
10 玛纳斯林场 2008-08
2 方法与结果
2． 1 色谱条件 色谱柱:Shim-pack VP-ODS(150
mm ×4． 6 mm);流动相:甲醇(A)-水(B)-0． 1%磷
酸溶液(C);柱温:30 °C;体积流量:0． 8 mL /min;检
测波长:215 nm;检测时间 70 min。梯度洗脱条件见
表 2。
表 2 甲醇(A)-水(B)-0． 1%磷酸溶液(C)梯度洗脱
时间 /min A /% B /% C /%
0 15 70 15
18 15 70 15
28 25 60 15
46 35 50 15
50 45 40 15
70 65 30 15
2． 2 对照品溶液的制备 取苦杏仁苷对照品 5
mg、金丝桃苷对照品 10 mg，精密称定，分别置 25
mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成
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0． 208 mg /mL 和 0． 408 mg /mL 的苦杏仁苷和金丝
桃苷对照品溶液。分别精密吸取苦杏仁苷和金丝桃
苷对照品溶液各 5 mL，混合均匀，经 0． 45 μm 微孔
滤膜过滤，作为混合对照品溶液。
2． 3 供试品溶液的制备 取天山花楸药材，粉碎，
过 20 目筛，取药材粉末 5． 0 g，置 100 mL 具塞三角
瓶中，加甲醇 50 mL超声提取(30 min × 3)，过滤，合
并提取液，将甲醇挥尽，用水溶解，再用乙醚萃取，将
水溶液浓缩至 10 mL，摇匀，制成样品溶液。精密量
取样品溶液 1 mL，置 10 mL 棕色量瓶中，加甲醇稀
释至刻度，摇匀，经 0． 45 μm 微孔滤膜滤过后作为
供试品溶液。
2． 4 测定方法 分别精密吸取混合对照品溶液和
供试品溶液 10 μL，注入高效液相色谱仪，记录 70
min色谱峰。供试品色谱中，以对照品金丝桃苷对
应的色谱峰的相对保留时间和相对峰面积分别为
1，计算共有指纹峰的相对保留时间和相对峰面积。
2． 5 方法学考察
2． 5． 1 精密度实验 取同一供试品溶液，连续进样
6 次，考察各共有峰的相对保留时间及峰面积比值
的一致性。结果表明，各共有峰相对保留时间稳定，
共有峰峰面积比值 RSD为 0． 27% ～0． 84%，符合指
纹图谱技术要求中精密度试验的有关规定(RSD ＜
3%)。
2． 5． 2 重复性实验 取同一批次的药材 6 份，照
2． 3 项项下方法平行制备供试品溶液 6 份，进样测
定。结果表明，各共有峰相对保留时间稳定，共有峰
峰面积比值 RSD为 0． 48% ～1． 04%，符合指纹图谱
技术要求中重复性试验的有关规定。
2． 5． 3 稳定性实验 取同一供试品溶液，分别在
0、2、4、8、12、16、24 h 进样，考察各共有峰的相对保
留时间及峰面积比值的一致性，结果 RSD为 0． 17%
～0． 94%，说明供试品在常温下 24 h 内的稳定性较
好，符合指纹图谱测定的要求。
2． 6 指纹图谱的建立 按 2． 4 项测定 10 批天山花
楸样品和混合对照品，其色谱图见图 1、2、3，检测结
果见表 3、4。根据 10 批供试品 HPLC图给出的相关
参数，比较、分析供试品谱图和对照品谱图，以金丝
桃苷的保留时间和峰面积积分值为 1，计算相对保
留时间及峰面积积分值的比值。采用相对保留时间
标定共有指纹峰，标定了 20 个峰为共有指纹峰，建
立了天山药材的 HPLC 图谱。共有指纹峰的峰号
(相对保留时间):1(0． 127)、2(0． 155)、3(0． 185)、
4(0． 204)、5(0． 346)、6(0． 393)、7(0． 429)、8
(0． 465)、9(0． 510)、10(0． 545)、11(0． 577)、12
(0． 766)、13 (1)、14 (1． 011)、15 (1． 064)、16
(1． 089)、17(1． 103)、18(1． 157)、19(1． 217)、20
(1． 272)。
表 3 10 批天山花楸药材共有指纹峰的相对保留时间
共有峰
峰号
样 品 号
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
平均值
1 0． 127 0． 128 0． 127 0． 127 0． 127 0． 127 0． 127 0． 127 0． 128 0． 124 0． 127
2 0． 156 0． 155 0． 154 0． 158 0． 157 0． 155 0． 155 0． 154 0． 155 0． 155 0． 155
3 0． 185 0． 185 0． 183 0． 188 0． 186 0． 186 0． 184 0． 184 0． 183 0． 186 0． 185
4 0． 202 0． 206 0． 203 0． 206 0． 204 0． 205 0． 202 0． 206 0． 207 0． 204 0． 204
5 0． 340 0． 345 0． 340 0． 353 0． 370 0． 345 0． 340 0． 344 0． 346 0． 335 0． 346
6 0． 392 0． 394 0． 393 0． 392 0． 395 0． 394 0． 393 0． 393 0． 394 0． 392 0． 393
7 0． 430 0． 432 0． 429 0． 428 0． 428 0． 427 0． 428 0． 427 0． 429 0． 428 0． 429
8 0． 464 0． 467 0． 465 0． 465 0． 469 0． 466 0． 463 0． 464 0． 467 0． 462 0． 465
9 0． 510 0． 512 0． 509 0． 511 0． 510 0． 511 0． 508 0． 509 0． 510 0． 512 0． 510
10 0． 546 0． 549 0． 542 0． 546 0． 548 0． 547 0． 544 0． 543 0． 543 0． 543 0． 545
11 0． 574 0． 581 0． 572 0． 585 0． 577 0． 576 0． 573 0． 579 0． 575 0． 577 0． 577
12 0． 766 0． 769 0． 764 0． 766 0． 765 0． 766 0． 764 0． 764 0． 764 0． 769 0． 766
13(s) 1． 000 1． 000 1． 000 1． 000 1． 000 1． 000 1． 000 1． 000 1． 000 1． 000 1． 000
14 1． 010 1． 010 1． 012 1． 010 1． 008 1． 012 1． 011 1． 012 1． 011 1． 011 1． 011
15 1． 065 1． 064 1． 065 1． 063 1． 064 1． 062 1． 060 1． 066 1． 065 1． 065 1． 064
16 1． 087 1． 093 1． 089 1． 090 1． 087 1． 091 1． 089 1． 086 1． 088 1． 086 1． 089
17 1． 099 1． 104 1． 102 1． 105 1． 102 1． 106 1． 104 1． 103 1． 102 1． 100 1． 103
18 1． 156 1． 158 1． 158 1． 159 1． 158 1． 156 1． 156 1． 157 1． 158 1． 157 1． 157
19 1． 216 1． 217 1． 218 1． 217 1． 216 1． 217 1． 217 1． 218 1． 218 1． 218 1． 217
20 1． 278 1． 279 1． 279 1． 279 1． 204 1． 279 1． 278 1． 279 1． 280 1． 280 1． 272
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表 4 10 批天山花楸药材共有指纹峰的相对峰面积
共有峰
峰号
样 品 号
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
平均值
1 0． 186 0． 305 0． 317 0． 343 0． 368 0． 120 0． 149 0． 298 0． 077 0． 172 0． 233
2 0． 729 1． 159 1． 218 1． 352 1． 375 0． 503 0． 626 1． 145 0． 315 0． 720 0． 914
3 0． 278 0． 241 0． 382 0． 228 0． 516 0． 246 0． 262 0． 226 0． 128 0． 285 0． 279
4 1． 130 1． 700 1． 818 1． 920 2． 022 0． 752 0． 941 1． 687 0． 479 1． 092 1． 354
5 0． 179 0． 249 0． 255 0． 299 0． 298 0． 113 0． 139 0． 264 0． 070 0． 161 0． 203
6 0． 123 0． 193 0． 193 0． 210 0． 233 0． 082 0． 086 0． 180 0． 044 0． 100 0． 144
7 0． 179 0． 247 0． 243 0． 261 0． 303 0． 115 0． 074 0． 214 0． 059 0． 137 0． 183
8 3． 718 4． 294 4． 618 5． 002 5． 307 2． 556 2． 558 5． 245 1． 288 2． 930 3． 752
9 1． 260 1． 757 1． 940 2． 023 2． 093 0． 859 1． 084 1． 810 0． 538 1． 223 1． 459
10 0． 101 0． 080 0． 161 0． 169 0． 180 0． 074 0． 086 0． 148 0． 082 0． 267 0． 135
11 0． 155 0． 218 0． 234 0． 251 0． 257 0． 113 0． 144 0． 219 0． 137 0． 212 0． 194
12 0． 222 0． 360 0． 300 0． 353 0． 385 0． 179 0． 261 0． 321 0． 176 0． 186 0． 274
13(s) 1． 000 1． 000 1． 000 1． 000 1． 000 1． 000 1． 000 1． 000 1． 000 1． 000 1． 000
14 0． 695 0． 902 0． 886 0． 942 0． 891 0． 570 0． 649 0． 782 0． 328 0． 714 0． 736
15 0． 855 1． 874 1． 599 0． 827 1． 745 0． 421 0． 940 1． 510 0． 232 1． 944 1． 195
16 0． 512 1． 356 0． 558 0． 316 1． 430 0． 085 0． 447 0． 444 0． 728 0． 446 0． 632
17 0． 449 1． 186 0． 344 1． 508 0． 318 0． 292 0． 562 0． 433 0． 242 0． 619 0． 595
18 0． 931 2． 206 1． 139 0． 379 2． 180 0． 590 1． 184 1． 065 0． 408 0． 724 1． 081
19 0． 240 0． 628 0． 238 0． 186 0． 658 0． 195 0． 386 0． 367 0． 225 0． 512 0． 364
20 0． 134 0． 260 0． 127 0． 016 0． 345 0． 080 0． 200 0． 211 0． 104 0． 281 0． 176
图 1 天山花楸药材 HPLC色谱图
2． 7 相似度评价 采用《中药色谱指纹图谱相似
度评价系统(2004 年 A 版)》评价 10 批天山花楸药
材指纹图谱，进行相似度分析。得出 10 批天山花楸
图 2 10 批天山花楸药材 HPLC指纹图谱
药材与对照指纹图谱的相似度结果均大于 0． 90，表
明各批次药材之间具有良好的一致性。结果见表
5。
表 5 10 批天山花楸药材指纹图谱的相似度
S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 对照
S1 1 0． 957 0． 930 0． 946 0． 903 0． 907 0． 926 0． 927 0． 916 0． 935 0． 957
S2 0． 957 1 0． 959 0． 971 0． 952 0． 952 0． 916 0． 932 0． 953 0． 957 0． 981
S3 0． 930 0． 959 1 0． 903 0． 948 0． 944 0． 948 0． 922 0． 940 0． 946 0． 960
S4 0． 946 0． 871 0． 903 1 0． 954 0． 957 0． 954 0． 997 0． 940 0． 941 0． 922
S5 0． 903 0． 952 0． 948 0． 954 1 0． 989 0． 909 0． 928 0． 924 0． 945 0． 930
S6 0． 907 0． 952 0． 944 0． 957 0． 989 1 0． 922 0． 900 0． 913 0． 923 0． 927
S7 0． 926 0． 916 0． 948 0． 954 0． 909 0． 922 1 0． 990 0． 936 0． 957 0． 935
S8 0． 927 0． 932 0． 922 0． 997 0． 928 0． 900 0． 990 1 0． 979 0． 997 0． 972
S9 0． 916 0． 953 0． 940 0． 940 0． 924 0． 913 0． 936 0． 979 1 0． 991 0． 964
S10 0． 935 0． 957 0． 946 0． 941 0． 945 0． 923 0． 957 0． 997 0． 991 1 0． 976
对照 0． 957 0． 981 0． 960 0． 922 0． 930 0． 927 0． 935 0． 972 0． 964 0． 976 1
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图 3 苦杏仁苷和金丝桃苷混合对照品色谱图
6．苦杏仁苷 13．金丝桃苷
3 讨论
3． 1 检测波长的选择 采用 DAD对指纹图谱的检
测波长进行选择，结果表明检测波长以 215 nm色谱
图包含的信息量大，各色谱峰分离较好，所以在实验
中选择了 215 nm。
3． 2 流动相梯度洗脱程序及各溶剂比例选择 曾
选择其他 3 种梯度洗脱程序的各溶剂比例，对天山
花楸供试品溶液进行指纹图谱试验，结果以表 2 的
梯度洗脱程序条件为最好。
3． 3 参照物的选择 苦杏仁苷毒性大，但它通常被
认为是治疗哮喘的重要有效成分，而天山花楸中苦
杏仁苷的量少，因而毒性小。金丝桃苷属于黄酮类
化合物，具有降胆固醇、抗炎和镇咳作用，它在天山
花楸药材中的质量分数高且相对稳定。因此苦杏仁
苷和金丝桃苷被选为参照物。
3． 4 共有峰的确定 由图 1，2 可看出，每个天山花
楸样品均有 30 多个色谱峰。对不同供试品所得指
纹图谱进行分析，选择稳定性较好，特征明显的色谱
峰为共有峰，共标定了 20 个峰。共有峰总面积大于
总峰面积的 90%。其中 6 号峰为苦杏仁苷，13 号峰
为金丝桃苷，均依对照品的色谱峰确定。在对指纹
图中各共有峰进行稳定性、精密度、重复性试验考察
后，所得数据均符合指纹图谱要求。
3． 5 方法评价 目前天山花楸的质量控制多为测
定一个或几个成分，不能真正反映中药材质量。本
实验采用苦杏仁苷和金丝桃苷为参照物，对天山花
楸指纹图谱进行了系统的研究。从 10 批天山花楸
药材指纹相似度结果可以看出，不同来源的天山花
楸指纹图谱相似度较高，均大于 0． 9。但是，各峰相
对峰面积有一定的差异，说明药材之间的内在质量
是有差异的，提示药材应在定产地的前提下才能保
证药品内在质量的一致性。同时说明利用指纹图谱
对药材进行综合、宏观的评价可获得全面反映药材
特性的色谱分离图，制定出系统性、特征性和稳定性
均较好的药材指纹图谱，为中药材的质量评价提供
了全面的分析方法。本实验中所建立的测定方法快
速准确，灵敏度高，可作为天山花楸质量控制和应用
的依据以及中药研究的方法学借鉴。
参考文献:
［1］ 中国科学院中国植物志编辑委员会．中国植物志:第三十六卷
［M］．北京:科技出版社，1974:284．
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2011 年 5 月
第 33 卷 第 5 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
May 2011
Vol． 33 No． 5