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金叶卫矛无菌系建立及继代培养基配方优化



全 文 :文章编号:1002-2724(2008)06-0045-02
金叶卫矛无菌系建立及继代培养基配方优化*
王洪波1 ,丁雪珍1 ,郝会军1 ,房师梅1 ,林建强2 ,张艳丽3
(1.潍坊职业学院园林工程系 , 山东 潍坊 261041;2.山东大学微生物技术国家重点实验室;3.潍坊十中)
摘要:通过研究金叶卫矛外植体灭菌剂 、灭菌时间及继代培养基配方优化等内容 , 得到以下结果:用 0.1%的升汞溶液灭
菌 5~ 8min 对外植体灭菌效果最好;在继代培养基配方优化中 ,以 MS+BA 1.0mg/ L+IBA 0.2mg/ L 激素组合最佳。
关键词:金叶卫矛;无菌系;继代培养基 配方优化
中图分类号:S722.3          文献标识码:A
Study on aseptic culture system and subculture medium prescription optimization of Euonymus fortunei
Wang Hongbo et al.
(H or ticulture Depar tment of Weifang Voca tional Colleg e ,Weifang 261041)
Abstract:In this ar ticle , explants biocide , disinfection time and subculture medium prescription optimization of Euonymus
for tunei are studied.The results are determined as fo llow ing:as for e xplants , 0.1%HgCl-2 solution is best , w hile the optimum
disinfection time is 5~ 8min;a s for subculture medium presc ription optimization , the optimum prescription is MS+BA 1.0mg/ L
+IBA 0.2mg/ L.
Key words:Euonymus f ortunei cv.Go ld;aseptic culture system;subcultur e medium;pre scription optimiza tion
  金叶卫矛(E uonymus f ortunei cv.Go ld), 别名:鬼箭羽 、
四棱树 ,属卫矛科 , 卫矛属。原产中国东北 、华北及华中地
区 ,主要生于山间杂木林下 、林缘或灌丛中长江下游各省至
吉林都有分布 ,各地多有栽培[ 1] 。
金叶卫矛枝翅奇特 ,果裂红艳 , 秋叶变红 , 堪称观叶 、观
果佳木。园林中多用于庭院绿化 ,也可植于假山石旁作配植
或作地被基础栽植和模纹花坛。木翅入药 ,有破血 、止痛 、通
经 、泻下 、杀虫等功效;种子油做工业用油。全株含卫矛醇 、
糖类等成分[ 1][ 2] 。
金叶卫矛传统的繁殖方式以播种为主。但近年来 ,我国
城市化进程明显加快 , 城市规模迅速扩大 , 城市绿化要求逐
步提高 ,对花木的需求也有数量型向质量型进行转变 , 传统
的繁殖方式很难满足市场的需求。因此 , 对金叶卫矛的植物
组织培养的研究就显得格外引人注目 , 但现在还没有一套最
好的组培金叶卫矛的实验方案投入到实践中。为此对其进
行植物组织培养的研究 ,也就显得尤为重要。
1 材料与方法
1.1 材料
金叶卫矛(取自潍坊职业学院生物实训基地);升汞(来
源:湖南省新晃汞矿生产天津市化学试剂批发部经销);新洁
尔灭(来源:安徽国正药业股份有限公司);84 消毒液(来源:
山东省德州市经济开发区利尔康消毒科技有限公司)。
收稿日期:2008-10-20
*资助项目:本论文得到山东省高等学校优秀青年教师国内访问学者项目经费资助
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山东林业科技  2008 年第 6期  总 179 期  SHANDONG FORESTRY SCIENCE AND TECHNOLOGY  2008.No.6
1.2 不同灭菌剂 、灭菌时间对灭菌效果的影响[3][ 4]
取生长健壮 、无病虫害金叶卫矛植株上的新生枝条作外
植体 ,分别对茎尖 、茎段分别进行不同灭菌剂 、不同灭菌时间
处理 ,共设 18 个处理 , 每个处理接种 30 个外植体 , 每个外植
体接种一个三角瓶中 , 每隔 1d 观察一次 , 10d 后做统计成活
个数和成活率。(见表 1)
表 1 不同灭菌剂处理表
外植体
种类
0.1%HgCl2 10% 84消毒液 10%新洁尔灭
灭菌时间
(min)
茎尖/茎
段数(个)
灭菌时间
(min)
茎尖/茎
段数(个)
灭菌时间
(min)
茎尖/茎
段数(个)
茎尖 2 30 10 30 10 30
茎尖 5 30 20 30 20 30
茎尖 9 30 30 30 30 30
茎段 4 30 10 30 10 30
茎段 8 30 20 30 20 30
茎段 12 30 30 30 30 30
1.3 金叶卫矛继代培养基配方优化[ 3] [ 4]
以 MS 为基本培养基 , 分别设细胞分裂素 BA 浓度(mg/
l)梯度为:0.5 , 1.0 , 1.5;生长素 IBA 浓度(mg/ l)梯度为:
0.1 , 0.2 , 0.3;按 2 因素 3 水平正交试验设计 9 个处理 , 每处
理接种 20 瓶 ,每瓶接种 2 ~ 3cm 高的无菌茎段 20 颗 , 每隔2d
观察一次 , 30d 后统计每瓶分株数和各个处理增值系数。
1.4 培养条件
光照强度 2000 ~ 3000Lx , 光照时间卫 13h/ d , 培养室温
度为 25℃~ 28℃,湿度为 75%左右。
2 结果与分析
2.1 不同灭菌剂 、灭菌时间对灭菌效果的影响
表 2 不同灭菌剂 、灭菌时间对灭菌效果的影响
外植体种类
0.1%HgCl2 10% 84消毒液 10%新洁尔灭
成活
个数
成活
率(%)
成活
个数
成活
率(%)
成活
个数
成活
率(%)
茎尖 18 60 8 27 4 13
茎尖 24 80 14 47 10 33
茎尖 20 67 9 30 8 27
茎段 21 70 10 33 3 10
茎段 26 87 13 43 8 27
茎段 19 64 10 33 6 20
通过表 2 可以看出 ,茎尖最佳灭菌剂及最佳灭菌时间为
0.1%升汞灭菌 5min;茎段最佳灭菌剂及最佳灭菌时间为
0.1%升汞灭菌 8min;84 消毒液灭菌效果次之 , 新洁尔灭的
灭菌效果最差。
2.2 金叶卫矛继代培养基配方优化
从表 3 可以看出 , BA 的极差大于 IBA 极差。这反映了
细胞分裂素 BA 对金叶卫矛继代分化增殖的影响最大 , 生长
素 IBA 对其影响次之。
通过对表 3 的统计分析 ,可以得出最佳继代培养基配方
组合为 A2B2 ,即最佳继代分化培养基为 MS+BA 1.0mg/ L
+IBA 0.2mg/ L;同时从表 3 中还可以看出最佳继代分化培
养基配方的瓶苗的长势也是最好的。
表 3 继代培养基配方优化结果表
序号 IBA(m g/ L)6-BA(mg/ L)分株数 增值系数 瓶苗长势
1 0.1 0.5 39 1.5 +
2 0.1 1.0 81 4.05 +++
3 0.1 1.5 65 3.25 +++
4 0.2 0.5 43 2.15 ++
5 0.2 1.0 122 6.1 +++++
6 0.2 1.5 72 3.6 ++++
7 0.3 0.5 45 2.25 ++
8 0.3 1.0 85 4.25 +++
9 0.3 1.5 76 3.8 +
K 1 185 127
K 2 237 288
K 3 206 213
k1 61.7 42.3
k2 79.0 96.0
k3 70.3 71.0
R 18.7 53.7
注:+++++表示最好 , ++++表示较好 , +++表示一般 , +
++表示较差 , +表示很差
3 结论
对于金叶卫矛的无菌系建立 ,茎尖最佳灭菌剂及最佳灭
菌时间为 0.1%升汞灭菌 5min;茎段最佳灭菌剂及最佳灭菌
时间为 0.1%升汞灭菌 8min , 茎尖的灭菌时间短 ,可能由于
茎尖比较幼嫩的缘故 , 因此选用 5 ~ 8min 的灭菌时间 , 对外
植体灭菌的效果较好。
对于金叶卫矛的最佳继代培养基配方而言 , 通过正交试
验可以得到如下配方:MS+BA 1.0mg/ L+IBA 0.2mg/ L ,
在最佳继代培养基配方下培养 ,金叶卫矛的增值系数可达到
6.1 , 而且瓶苗的生长态势旺盛 , 基本满足了生产的要求 , 为
金叶卫矛的产业化生产奠定了基础。
参考文献:
[ 1] 郑勉.中国植物志[ M] .北京:科技出版社.1980.12:15~
16.
[ 2] 江先甫 ,贺士元.北京植物志[ M] .北京出版社.1984.12:
537 ~ 548.
[ 3] 许耀祖 ,韦彦余等.薰衣草叶片高频再生体系的建立.园
艺学报[ J] .2006.33(1):182~ 185
[ 4] 田郎 ,谭海燕 ,张霖.金边富贵竹的茎段培养及试管繁殖.
园艺学报[ J] .1999.26(2):133~ 134.
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山东林业科技 2008 年第 6 期