全 文 ：药物分析杂志 h C in J h Par mA nl a 20() 6
,
2 6 ( 3 ) 一 33 3 一
高效液相色谱法同时测定芹菜籽油 中新蛇床内醋与芹菜 甲素的含量
刘洋 , 唐星
(沈阳药科大学 ,沈阳 1 10 0 1 6 )
摘要 目的 : 建立同时测定芹菜籽油中抗惊有效成分伞形科内醋类化合物含量的高效液相色谱法 。 方法 :采用 iD a m on isl 一 C 18
色谱柱 ( 5 林m , 2 00 m m x 4 . 6 m m ) , 甲醇 一 水 ( 60 : 4 0 ) 为流动相 ,检测波长 2 3 5 n m ,流速为 1 . 0 m l · m in 一 ’ : 柱温为室温 ,外标法
测定 。 结果 : 新蛇床 内醋和芹菜 甲素浓度分别在 28 . 3 一 5 6 . 0 协g · m L 一 ’ ( r 二 0 . 99 9 ) 和 10 . 05 一 201 . 0 协g · m L 一 ’ ( : 二
0
.
9 9 )范围内与峰面积呈 良好的线性关系 ;平均回收率分别为 98 . 9% 和 9 . 0% ; s h 内含量均稳定 ;4 种芹菜籽油中新蛇床
内醋的含量分别为 4 . 07 % , 2 . 25 % , 3 . 57 % , 0 . 43 % ;芹菜甲素的含量分别为 4 . 06 % , 2 . 39 % , 2 . 53 % , 1 . 62 % 。 结论 : 本法操作
简便 ,方法准确 、灵敏 、 重现性好 。
关键词 :芹菜籽油 ;新蛇床内醋 ;芹菜甲素 ;高效液相色谱法
中图分类号 : gR l 7 文献标识码 : A 文章编号 : 0 2 54 一 17 93 ( 2 0 06 ) 0 3 一 03 33 一 0 3
H P L C d e t e r m i n a it o n o f n e o e ul d i l i d e a n d 3 一 n 一 b u yt l P h th a l id e
’
in s e e d 0 11 o f AP i
u m g ar v e o le n s L
.
L IU Y
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,
T A N G X i n g
( Sh
e n y a n g p h
amr
a e e u t i e习 U n i v e sr i t y , S h e n y a n g 1 1X() 16 , C h i n a )
A b st r a e t O bj ce it
v e : T o e s t ab l i s h a n H PL C m e t h o d of r th e d e t e rm i
n a t io n o f n e o e n i d i lid e a n d 3 一 n 一 b u -
t y l ph t h al id e i n e s s e n t i a l 0 11 ofr m th
e s e e d s o f助 i u m g ar : e o le ns L . a n d t e s t t h e e o n t e n t s o f t h e t w o e o m p o n e n t p a rt s i n
of u r d i fe re
n t 0 11 s a m p l e s
.
M e ht
o d : A D iam
o n s i l 一 C I , e o l u m n ( 5 林m , 20 o n l x 4
.
6 m m ) w
a s u s e d iw t h t h e m o b i le
p h a s e b e i n g m e t h a n o l 一 w a t e r ( 6 0 : 4 0 )
,
fl o w ar t e b e i n g 1
.
0 m L
·
m i n
一 ’ , ( l e t e e t i n g w a v e l e n孚h b e in g 2 3 5 n m , th e
e o l u m n t e m p e ar t u er b e i n g or o m te m p e ar t u er
.
R e su l st
: Th e li n e a r r e s p o n s e r a n g e w a s 2 8
.
3 一 5 6 6
.
0 林g · m L 一 ’ fo r
n e o e n id i lid e (
r = 0
.
9 9 9 9 ) a n d 10
.
0 5 一 2 0 1
.
0 0 林g · m L 一 ` fo r 3 一 n 一 b u t y lp h t h al id e ( r = 0 . 9 9 9 9 ) ; hT e a v e r a g e r e
-
、
e o v e ir e s o f n e o e n id i l id e a n d 3
一 n 一 b u t y lp h th al i d e w e r e 9 8
.
9 % a n d 9 9
.
0% r e s p e e t i v e l y
,
t h e e o n t e n t s o f t h e wt o
e o m p o n e n t s in fo u r d i fe
r e n t 0 11 s am p l
e s w e er a l l s t a b le d u ir n g 8 h o u sr
.
T h e e o n te n t s of n e o e n id i l id e i n fo u r d i fe
r e n t
0 11 s a m p l e s w e r e 4
.
0 7%
,
2
.
2 5%
,
3
.
5 7%
,
0
.
4 3% r e s p e e t iv e l y a n d th e e o n t e n ts o f 3 一 n 一 b u t y lp h t h al i d e w e r e
4
.
0 6%
,
2
.
3 9%
,
2
.
5 3%
,
1
.
6 2% er s p e e ti v e l y
.
C o n c l u s i o n : H P LC a s t h e m e t h o d to d e t e mr i
n a te n e o e n id i lid e a n d
3 一 n 一 b u t y lp h th al id e i n e s s e n t i a l 0 11 for m t h
e s e e d s o f 助 i u m g var e o le o 15 q u i e k , s i m p le , a e e u ar t e a n d s e n s it i v e
w i th g o o d r e p e a t a b il i t y
.
K e y w o r ds
:助 i u m gr , o le sn L .: s e e d 0 11, n e o e n id i lid e ; 3 一 n 一 b u ty lp h t h al id e ; H P LC
芹菜籽油系伞形科植物旱芹 (助 iu m g r a , e o le sn
L
.
)的种子经提取所得的挥发油 , 曾报道其具有降
血压和中枢镇静作用 。 现代药理试验证明它能对抗
小鼠多种因素所致的惊厥 , 有抗癫痛作用川 。 由于
其良好的药用价值 , 70 年代曾有报道采用 G Lc 法和
G L C 一 M S 法对芹菜籽挥发油 的成分进行了系统研
究 ,从中分析和鉴定了苯酞衍生物 、 香豆精类 、黄酮
及其昔类等 40 几种化合物并采用硅胶柱层析的方
法 〔’ 〕从中分离得到了芹菜甲素 (3 一 正丁基苯酞 )和
芹菜乙素 ( 3 一 正丁基 一 4 , 5 一 二氢苯酞 ) ,通过药理
活性筛选证实了其中苯酞衍生物中的伞形科内醋类
成分 ( 主要包括 : 芹菜 甲素 、 芹菜 乙素和新蛇床内
醋 )为母核不含 N 元素的广谱抗惊化合物 [ ’ .’] 。 近
年来 ,对芹菜籽油 中抗惊成分的研究未见报道 。 迄
第一作者 eT l : ( 0 2 4 ) 2 3 9 86 3 4 3 ; E 一 ~ l : tan 即 haZ’n l@ s i n ` c o m
DOI : 10. 16155 /j . 0254 -1793. 2006. 03. 009
药物分析杂志 C hi n JP hx amA nl a 20( )6 , 2 6 ( 3 )
今 ,对这些成分的含量测定文献仅有 u v 法 【’ 〕和 G c
法 〔6 〕 ,本文采用 H P L c 法同时测定芹菜籽油中新蛇
床内醋与芹菜甲素的含量尚属首次 , 实验结果表明 :
本法简便快速 、 准确 、灵敏 、重现性好 。
1 仪器与试药
H IT A C H I L 一 7 1 10 型高效液相色谱仪 , H IT A -
C IH L
一
74 20 型紫外检测器 , JA SC O 色谱工作站 。
新蛇床内醋对照 品 (沈阳药科大学有机教研室
提供 , 归一化测含量为 98 . 8% ) ;芹菜甲素对照品
(中国医学科学院药物研究所 , 归一化测含量为
9
.
1% ) ;芹菜籽油样品 (广州美辰药业有限公司 ) ;
氯仿及甲醇均为色谱纯 。
2 实验方法和结果
2
.
1 色谱条件 根据新蛇床内酷和芹菜甲素紫外
吸收光谱特征 ,结合样品中其他成分的干扰情况 ,确
定 以 下色谱 条 件 : D i a m o n s i l ( 钻石 ) C l : ( 5 林m ,
20() m m
x 4
.
6 m m )色谱柱 , D ikm a T e e h n o l o ig e s ;流动
相 : 甲醇 一 水 ( 6 0 : 4 0 ) ; 检测波长 : 2 35 n m ; 流速 :
1
.
0 m L
·
m in
一 ` ;柱温 : 室温 。 在以上色谱条件下 油
中两组分能获得满意分离 , 峰形尖锐对称 , 互不干
扰 。 色谱图见图 1 。
一一一一了~ ~ ~ , ~ ~ ~ ~ r ~ ~
5 15 2 5
B
翩巨
图 1
品 ( C )
iF g l
芹菜甲素对照品 ( A ) 、新蛇床内醋对照品 ( B )
、样品 (批号 2 0 3 01 , D )高效液相色谱图
t /
一 i n
、含量测定对照
HPL C e h or mat
o gr a n l s Of e h e m i e al 化 fe er n e e s u l〕 sant e es o f 3 一 n 一
b u t y lp h ht al id e ( A )
, n e oc n id i lid e 气B ) , ht e tw 。 e o n l p o n e nt s t o g e th e r ( C )
an d 0 11 s am p l
e s (加 . N o . 2X() 3 0 1 , D )
2
.
2 线性关系考察 精密称取新蛇床内醋对照 品
5 6
.
6 m g 于 10 0 m L 量瓶中 ,加氯仿 2 m L 溶解 , 甲醇
定容至刻度 。 分别 吸取适量依次 稀释成 28 . 3 ,
5 6
.
6
,
1 1 3
.
2
, 一4 1 . 5 , 5 6 6 林g · m L 一 `系列浓度的对照
品溶液 。 另精密称取芹菜甲素对照 品 80 . 7 m g 于
10 m L 量瓶中 , 加氯仿 2 m L 溶解 , 甲醇定容至刻
度 。 分 别 吸 取 适 量 依 次 稀 释成 or . 05 , 20 . 10 ,
4 0
·
2 0
,
8 0
.
4 0
,
2 0 1
.
0 0 林g · m L 一 ’ 系列浓度对照品溶
液 ,在上述色谱条件下进样 10 林L , 以新蛇床内醋与
芹菜甲素峰面积对其浓度作图得回归方程分别为 :
Y = 1
.
1 3 1 x I O
4
X + 6
.
1 1 6 x 10 3 r = 0
.
9 9 9 9
Y = 2
.
04 8
x 1 0
4
X 一 1
.
9 8 2 x 1 0 3 r = 0
.
9 9 9 9
2
.
3 精密度实验 分别吸取 56 . 6 林g · m L 一 `新蛇
床内醋对照品溶液和 20 . 10 此 · m L 一 ’ 芹菜甲素对
照品溶液 ,在以上色谱条件下连续进样 6 次 , 进样量
or 林L , 记 录峰 面 积 , 计算 R SD 值 , 结果分别 为
0
.
6 3% 和 0 . 8 1% 。
2
.
4 重复性实验 称取同一批芹菜籽油 (批号
20 301 )样品 5 份 ,依法平行测定 ,新蛇床内酷与芹
菜甲素的平均含量 士 S D 分别为 ( 4 . 07 土 0 . 049 ) % 和
( 4
.
0 6 士 0
.
0 4 7 ) %
,
R SD 均为 1 . 2% , 表明本法的重
复性良好 。
2
.
5 加样回收实验 称取 已测知含量的芹菜籽油
(批 号 2 0 0 3 0 1 ) 样 品 9 份 14 5 . 2 , 1 4 4 . 5 , l科 . 5 ,
15 0
.
3
,
15 1
.
2
,
15 0
.
7
,
14 7
.
9
,
14 8
.
5
,
15 0
.
3 m g 于
10 m L量瓶中 ,分别加人 56 此 · m L 一 ’新蛇床内醋
对照品溶液 8 . 0 , 10 . 0 , 12 . 0 m L 各 3 份 , 8 0 7 林g ·
m L
一 `芹菜 甲素对照 品溶液 6 . 0 , 7 . 5 , 9 . 0 m L 各 3
份 ,加氯仿 2 m L 溶解 , 甲醇定容至刻度 ,摇匀 , 进样
or 林 L , 以测得加样量与实际加样量的比值计算回收
率 ( n 二 3 ) 。 结果新蛇床内醋低 , 中 , 高三浓度回收
率分别为 9 8 . 8% , 9 8 . 6% , 9 9 . 2 % ; R SD 为 0 . 4 5% ,
0
.
57 %
,
0
.
32 %
。 芹菜甲素低 , 中 , 高三浓度回收率
分别为 9 9 . 3% , 9 8 . 6% , 9 9 . 1% ; R SD 为 0 . 2 5% ,
0
.
3 4%
,
0
.
3 8%
。
2
.
6 稳定性实验 芹菜籽油供试 品溶液 (批号
2X() 3 0 1 )分别在 0 , 2 , 4 , 6 , s h 分别测其含量 ,结果供
试品在 s h 内含量均稳定 ,新蛇床内醋及芹菜甲素
的 RS D 分别为 1 . 2% 和 0 . 86 % 。
2
.
7 含量测定
2
.
7
.
1 对照品溶液的配制 精密量取 5 6 . 0 林 g ·
m L
一 ’ 新蛇床内酷对照品溶液和 807 . 0 林g · m L 一 ’ 芹
菜甲素对照品溶液各 1 m L 至 10 m L 量瓶中 ,用氯
仿 一 甲醇 ( 2 : 98 )定容至刻度 , 摇匀作为对照品溶
液 。
2
.
7
.
2 供试品溶液的配制 分别精密称取 4 批芹
菜籽油 3 1 3 . 8 , 3 0 5 . 6 , 1 3 6 . 0 , 8 3 0 . 0 m g 于 10 0 m L 量
瓶中 , 以氯仿 2 m L 溶解 , 甲醇定容至刻度配制成
3 13 8
,
3 0 5 6
,
13 6 0
,
8 30 此 · m L 一 `的供试品溶液 。
2
.
7
.
3 含量测定 精密吸取对照 品溶液与供试品
药物分析杂志 C h in J p h amr A n al 20 6
,
2 6 ( 3 ) 一 33 5 一
溶液分别进样 or 林L , 记录色谱图并用外标法计算
含量 ,结果见表 1 。
表 1 4 种芹菜籽油样品测定结某 (% )
T a b 1 C o n t e . st Of n ceo in 山 li d e a n d 3 一 n 一 b u yt lP h ht al de
in 4 山 n笼er nt on s aj m Pl es
批号
(肠 t N o . )
新蛇床内醋
( ne co
n i d i lid e )
芹菜甲素
( 3 一
n 一 b u yt lp hht al i d e )
4 批芹菜籽油的提取原料分别购 自 : 广州市药材公
司 ,广州市粤丰种子公司 ,广州市白云区种子公司和
泰国 ,其抗惊成分 (主要为新蛇床内醋 , 芹菜甲素和
芹菜乙素 )含量差别较大可能是由于芹菜种子的产
地和采收季节不同而非储存时间不同所致 川 。
3
.
4
“
2
.
1
” 项色谱图中可见在芹菜甲素左边与之
保留时间十分接近处有一色谱峰 , 由于芹菜乙素和
芹菜甲素结构相近 , 故推测该色谱峰可能为芹菜乙
素 。
肠3956242山1.072543421éO2X() 3 0 1
2X() 3 02
2X() 3 03
20 3 04
3 讨论
3
.
1 在 2 0 0 一 4 0 0 n m 紫外光谱扫描 ,新蛇床内醋和
芹菜 甲 素 的 紫外最 大 吸收波 长分 别为 223 和
2 2 6 n m
,在这 2 个波长处灵敏度虽高但由于芹菜籽
油成分复杂 ,为减小干扰 ,简化分析 , 故确定 235 n m
为检测波长 。
3
·
2 曾采用 甲醇 一 水比例为 2 0 : 8 0 , 3 0 : 7 0 , 3 5 : 6 5 ,
6:0 4 0
,
6 5 : 3 5 的流动相 , 结果表明以 6 0 : 40 的 比例
新蛇床内酷和芹菜甲素能够获得满意分离 , 其他成
分不干扰测定 。
3
.
3 80 年代文献 a[, ` ]报道的芹菜籽油 的提取方法
是将芹菜籽磨成细粉 ,用石油醚 、 乙醚等有机溶剂冷
浸 , 回收溶剂后 ,将油状物水蒸气蒸馏 , 再用 乙醚萃
取 ,操作烦琐 , 回收率低 。 本研究中的芹菜籽油样品
为芹菜种子采用超临界萃取后经分子蒸馏而得 , 回
收率较高 ,且可通过工艺调节除去油中 p 一 芹子烯 、
柠檬烯等无效成分 , 提高伞形科内醋类成分的含量
以提高芹菜籽油的药用价值 。 虽然芹菜乙素可缓慢
转化为芹菜甲素 ,但有研究报道川 10 年的储存时间
并没有影响芹菜籽油中芹菜乙素和芹菜甲素各自的
含量 。 说明两者在油中的含量是比较稳定的 。 文中
参考文献
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(本文于 2 0 5 年 1 月 15 日修改回 )