全 文 ：波叶青牛胆提取物对糖尿病肾病小鼠药效及急性毒性
马 珍， 黄丹民， 张卫华， 孙 艳， 陈 钧*
(江苏大学 药学院，江苏 镇江 212013)
收稿日期:2014-02-12
作者简介:马 珍 (1989—) ，女，硕士生，研究方向:中药药效与药理。Tel: (0511)88780196，E-mail:mazhendd@ 126． com
* 通信作者:陈 钧 (1947—) ，男，教授，研究方向:中药制剂与中药药理。Tel: (0511)88780196，E-mail:shchen@ ujs． edu． cn
摘要:目的 研究波叶青牛胆的乙醇提取物和不同极性溶剂萃取部位对Ⅱ型糖尿病肾病小鼠的疗效以及急性毒性。方
法 100 只采用高脂饮食联合小剂量链脲佐菌素 (STZ)复制Ⅱ型糖尿病肾病成功的 ICＲ小鼠分为模型组，乙醇提取
物低、中、高剂量组，三氯甲烷部位组，乙酸乙酯部位组，正丁醇部位组，水溶性部位组，以及卡托普利组和消渴丸
阳性药组，并设正常对照组。给药 6 周末测定各组小鼠血清中总胆固醇、尿素氮、肌酐、胱抑素 C水平，PAS染色观
察肾脏病理变化。结果 乙醇提取物的 LD50为 4 887 mg /kg。与模型组相比，乙醇提取物高剂量组和正丁醇部位组能
显著改善糖尿病肾病小鼠各血清生化指标水平，缓解肾小球肥大，肾小球基底膜增厚及系膜扩张等病理改变。结论
波叶青牛胆属于低毒类中草药，在其安全剂量范围内可以降低糖尿病肾病小鼠的血糖、总胆固醇，改善肾功能状态。
关键词:波叶青牛胆;半数致死量;糖尿病肾病;小鼠
中图分类号:Ｒ285. 5 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2015)01-0006-07
doi:10. 3969 / j． issn． 1001-1528. 2015. 01. 002
Effect of Tinospora crispa extract on diabetic nephropathy mice and their
acute toxicology
MA Zhen， HUANG Dan-ming， ZHANG Wei-hua， SUN Yan， CHEN Jun*
(School of Pharmacy，Jiangsu University，Zhenjiang 212013，China)
ABSTＲACT:AIM To observe the effect of Tinospora crispa ethanol extract (TCEE)and their solvent extracts
on ICＲ mice with diabetic nephropathy (DN)and their acute toxicities． METHOD LD50 of TCEE was deter-
mined by modified Kaber method． One hundred mice with DN induced by injection of STZ and fed high fat diet
were divided equally into vehicle-treated group，the low，middle and high dose TCEE groups，EtOAc fraction
group，BuOH fraction group，water soluble fraction group，Captopril group and Xiaoke Pills group，and setting the
control group (n = 10)． At the end of 6th week，the effects of T． crispa on serum biochemical indexes (BUN，
Crea，TC，and Cys-C)and the PAS staining histomorphology of kidney tissues were evaluated． ＲESULTS LD50
of TCEE was 4 887 mg /kg． The levels of biochemical indexes of mice with diabetic nephropathy were significantly
reduced with an improved renal function in TCEE and BuOH fraction group． PAS staining showed that the symp-
toms，including glomerular hypertrophy，thickening of glomerular basement membrance，and mesangial expansion，
were significantly improved，especially in high dose TCEE group and BuOH fraction group． CONCLUSION T．
crispa is a kind of low toxicity herb and it can reduce the level of blood glucose，total cholesterol and improve the
renal function in DN mice in the safety dosage．
KEY WOＲDS:Tinospora crispa;LD50;diabetic nephropathy;mouse
糖尿病肾病 (DN)是糖尿病最常见也是最严
重的并发症之一，它的发生是血液动力与代谢因素
共同作用的结果［1］。糖尿病微血管病变可导致肾
小球血管硬化、肾小球排泄蛋白和滤过异常，并逐
渐发展成尿毒症。一般在患糖尿病 5 年后会出现微
量白蛋白尿，肾脏结构的变化主要包括肾小球基底
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膜增厚，肾小球系膜细胞增多以及系膜膨胀［2-3］。
研究报道，临床长期糖尿病肾病患者肾小球滤过率
会逐渐下降，但是通过一定的药物治疗可以减缓肾
功能的恶化，因此寻找安全有效的治疗糖尿病肾病
药物对患者尤为重要［4］。
波叶青牛胆 Tinospora crispa L． 为防己科，青
牛胆属，别名:苦藤、千里找根、绿包藤。主要生
长在大部分亚洲和非洲雨林和混合落叶林，主要包
括印度、马来西亚、泰国等，我国云南亦有分
布［5-6］。波叶青牛胆藤茎富含生物碱类、二萜类、
三萜类化合物等［7-9］，具有抗菌、降血压、抗疟
疾，以及强心等药理作用 ［10-13］。Ｒuan 等研究发现
波叶青牛胆可通过增强胰岛素敏感性降低小鼠血
糖，然而目前尚未有波叶青牛胆提取物对糖尿病肾
病的具体报道［14-15］。本实验在建立Ⅱ型糖尿病肾
病动物模型基础上，通过生化指标、肾脏组织形态
病理改变等方面初步探讨波叶青牛胆提取物对糖尿
病肾病小鼠肾功能的影响，并测定波叶青牛胆醇提
物的 LD50，为波叶青牛胆的开发利用以及用药安
全提供一定的实验数据。
1 材料
1. 1 药品与试剂 波叶青牛胆 (采集于马来西亚
Bionice草本植物园，经药学院陈钧教授鉴定为防
己科青牛胆属植物波叶青牛胆的藤茎);卡托普利
片 (上海普康药业有限公司，批号 120901) ;消渴
丸 (广州中一药业有限公司，批号 Ｒ02101);STZ
(美国 Sigma 公司) ;One Touch Ultra 稳豪型血糖试
纸 (美国强生公司，批号 3435584) ;小鼠胱抑素
C酶联免疫试剂盒 (上海恒远生物科技有限公
司);酶法肌酐测定试剂盒 (奥斯邦实验有限公
司) ;UV-GLDH 法尿素氮测定试剂盒、COD-CE-
PAP法总胆固醇测定试剂盒 (四川迈克生物科技
有限公司)。
1. 2 主要仪器 TG328A 电子分析天平 (Sartorius
公司);Ｒ-205 旋转蒸发仪 (Buchi 公司) ;SPEC-
TＲA MAX 190 酶标仪 (美国 Moleculer Device 公
司) ;COVEＲ-018 光学显微镜 (日本 Olympus 公
司) ;全自动生化分析仪 (美国贝克曼库尔特公
司) ;One Touch Ultra 稳豪血糖仪 (美国强生
公司)。
1. 3 波叶青牛胆提取物的制备 干燥波叶青牛胆
藤茎 354 g 粉碎过 20 目筛，5 倍量 95% 乙醇和
60%乙醇分别加热回流提取 3 次，每次 3 h，合并
滤液，减压浓缩成醇提浸膏冷冻干燥成粉末，得醇
提物总浸膏粉 (TCEE)，总浸膏得率 24. 87% ［浸
膏粉质量 (g)/生药材质量(g) ］。取一部分醇提物
总浸膏粉依次用石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯、正
丁醇萃取，得率分别为:3. 94% (石油醚部位) ，
1. 94% (三氯甲烷部位) ，2. 00% (乙酸乙酯部
位) ，5. 07% (正丁醇部位) ，11. 8% (水溶性部
位)。其中，每 1 g 醇提物总浸膏粉相当于 4. 02 g
生药材。
1. 4 实验动物 SPF 级 ICＲ 小鼠， (20 ± 2) g，
购于江苏大学实验动物中心，合格证号:SCXK 苏
(2013-0011)。小鼠饲养条件:室温 (22 ～ 25)℃，
相对湿度 65%，12 h 明暗交替，自由饮水进食。
适应性饲养 1 周后用于正式实验。
2 方法
2. 1 急性毒理试验分组 根据改良寇氏法由预试
验得出波叶青牛胆醇提物总浸膏粉的 100% 致死
剂量 (LD)和 0% LD 分别为 6 000 mg /kg和3 920
mg /kg，相邻组间比为 1. 112 2，Ｒ = (100% LD /
0% LD)1 /n － 1，n = 5［16］。根据组间比将 60 只 ICＲ小
鼠随机分为 6 组:6 000 mg /kg (组Ⅰ)、5 393
mg /kg (组 Ⅱ)、4 849 mg /kg (组 Ⅲ)、4 360
mg /kg (组Ⅳ)、3 920 mg /kg (组Ⅴ)、正常对照
组 (组Ⅵ)。每组 10 只，雌雄各半。各给药组采
用单次灌胃大剂量醇提物总浸膏粉，正常对照组给
予相同体积的蒸馏水，连续观察 2 周。
2. 2 糖尿病肾病模型的制备以及分组 雄性 ICＲ
小鼠适应性喂养 1 周，随机抽取 10 只作为正常对
照组，其余作为糖尿病肾病造模组。正常小鼠以标
准基础饲料喂养，糖尿病肾病造模组以高脂饲料喂
养 (猪油 10%，蔗糖 20%，胆固醇 2. 5%，胆酸
盐 1%，基础饲料 66. 5%)［17］。于 6 周后造模组一
次性腹腔注射 STZ 80 mg /kg 诱发高血糖，小鼠实
验前禁食 12 h，STZ临用前以 0. 1 mmol /L 柠檬酸-
柠檬酸钠缓冲液配制成 1%的溶液。1 周后测定糖
尿病肾病小鼠空腹血糖 (FBG)，挑选 FBG ≥
11. 1 mmol /L的小鼠继续高脂饲料喂养 6 周，在 12
周末随机抽取造模组小鼠 30 只，CO2 窒息处死后
取出其肾脏，PAS 染色，大部分 PAS 染色结果显
示小鼠肾小球肥大且基底膜增厚，系膜区膨胀则视
为糖尿病肾病。继而从剩余的造模组中挑选 FBG
为 15 ～ 19 mmol /L 的小鼠为糖尿病肾病模型小鼠。
根据小鼠体质量以及血糖将 100 只造模成功的小鼠
分为 10 组:模型组、醇提物总浸膏粉低、中、高
剂量组 (155，310，620 mg /kg)、三氯甲烷部位组
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(48 mg /kg)、乙酸乙酯部位组 (50 mg /kg)、正丁
醇部位组 (126 mg /kg)、水溶性部位组 (295
mg /kg)、卡托普利组 (3. 13 mg /kg)、消渴丸组
(937. 5 mg /kg)，另设正常对照组。其中，各极性
萃取部位给药剂量按照与醇提取物总浸膏粉高剂
量所对应的生药材量相等而设定。每组 10 只，
各给药组每日上午给予相应的提取物，正常组和
模型组给予相同体积的 5%羧甲基纤维素钠溶液，
并且根据小鼠体质量每周调节给药剂量。实验期
间，模型组与糖尿病组继续高脂饲料喂养。于造
模 12 周后开始给药，连续给药 6 周。整个实验维
持 18 周。
2. 3 样本的采集及生化指标测定 急毒试验组小
鼠死亡后立即解剖，观察各器官的形态以及病理变
化。糖尿病肾病组小鼠尾静脉采血测定不同时间点
FBG，于实验 18 周末禁食 12 h，CO2 窒息后心脏
取血，3 000 r /min 离心 10 min 得血清样本。采用
全自动生化分析仪测定血清 BUN、Crea、TC 等生
化指标 (由江苏大学附属医院江滨医院测定)，
ELISA试剂盒测定血清 Cys-C。取出各组小鼠的
肝脏、肾脏、心脏立即称定质量并计算脏器指
数。随后将肾脏固定于 10% PBS中性福尔马林溶
液中用于 PAS染色，光镜下观察组织病理学改变
并且运用 NIS-Elements AＲ 3. 0 软件系统对图像进
行分析。
2. 4 STZ致小鼠糖尿病肾病模型 PAS 染色病理分
级 0 级:光镜观察可见肾小球毛细管及基底膜结
构正常，系膜区基质未见沉积以及扩张，毛细管袢
间结构清晰，细胞完整，毛细血管结构正常。肾间
质未见血管扩张、充血和炎症细胞浸润。
Ⅰ级:肾小球基底膜轻度增厚，肾小球内少量
淤血，系膜区少量基质沉积，出现毛细管袢折叠和
融合，毛细管袢细胞出现少量变性。
Ⅱ级:肾小球基底膜明显增厚，系膜区有中量
基质沉积，出现局灶节段性肾小球硬化毛细管袢见
部分折叠和融合，大量出血，渗血，毛细管袢细胞
出现部分坏死。
Ⅲ级:肾小球基底膜显著增厚，肾小球内部分
淤血，肾小球硬化，肾髓袢细胞减少，坏死，毛细
血管阻塞。肾间质局部纤维化伴炎性细胞浸润。
2. 5 数据处理 数据结果以 x ± s表示，多组间比
较采用单因素方差分析 (ANOVA) ，两两组数据比
较采用 Post Hoc 中 LSD 检验法，以 P ＜ 0. 05 为显
著性检验水平。半定量数据采用 Ｒidit 分析。
3 结果
3. 1 波叶青牛胆醇提物的毒性评价 与正常组相
比，各给药组小鼠出现倦怠，食欲不振，呼吸急促
等现象。在给药 24 h 内各给药组小鼠开始出现不
同比例的死亡，各组小鼠死亡率见表 1。解剖死亡
小鼠发现肝脏呈现深红色，且胃部膨大。根据
SPSS 16. 0 概率统计分析，得出醇提物的 LD50为
4 887 mg /kg，95% 可信限为 (4 587 ～ 5 232)
mg /kg［18］。
表 1 大剂量波叶青牛胆醇提物给药后各组的死亡率
Tab. 1 Mortality under over doses of TCEE
组别 数量 剂量 /(mg·kg －1) 死亡率 /%
Ⅰ 10 6 000 100
Ⅱ 10 5 393 70
Ⅲ 10 4 849 40
Ⅳ 10 4 360 20
Ⅴ 10 3 920 1
Ⅵ 10 0 0
3. 2 治疗前后糖尿病肾病小鼠基本生理状况 与
正常组相比，注射 STZ 造模后小鼠的体质量显著
下降 (图 1)，并且各糖尿病肾病小鼠表现出多食、
多尿、多饮等症状。经 6 周波叶青牛胆提取物治疗
后，醇提物组、正丁醇组和消渴丸明显改善上述症
状，但是该提取物未明显引起小鼠体质量增加。
图 1 波叶青牛胆提取物对糖尿病肾病小鼠体质量变化
的影响 (x ± s，n =10)
Fig. 1 Effects of T． crispa extracts on the body weight
of DN mice． (x ± s，n =10)
3. 3 对糖尿病肾病小鼠脏器指数的影响 如表 2
所示，与正常组相比，模型组肾脏指数 (KWI)和
肝脏指数 (LWI)明显升高 (P ＜ 0. 001)。给药 6
周后，与模型组相比，醇提物高剂量组及阳性药组
显著降低了 KWI (P ＜ 0. 05)，各给药组均明显降
低了 LWI，但各组小鼠心脏指数 (HWI)无统计
学差异 (P ＞ 0. 05)。
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表 2 波叶青牛胆提取物对糖尿病肾病小鼠脏器指数影响
(x ± s，n =10)
Tab. 2 Effects of T． crispa extracts on viscera index in DN
mice (x ± s，n =10)
组别
KWI /
(g·kg －1)
LWI /
(g·kg －1)
HWI /
(g·kg －1)
正常 8. 33 ± 1. 47 45. 27 ± 7. 79 5. 22 ± 0. 48
模型 9. 75 ± 0. 94△△ 74. 60 ± 4. 89△△△5. 86 ± 1. 08
醇提物(155 mg /kg) 9. 83 ± 0. 61 63. 87 ± 5. 29＊＊ 6. 17 ± 1. 30
醇提物(310 mg /kg) 9. 00 ± 0. 45 63. 87 ± 6. 56＊＊ 5. 99 ± 0. 79
醇提物(620 mg /kg) 8. 50 ± 0. 55* 59. 03 ± 4. 99＊＊＊ 6. 16 ± 0. 76
三氯甲烷部位 10. 00 ± 0. 55 55. 09 ± 7. 07＊＊＊ 4. 90 ± 0. 65
乙酸乙酯部位 9. 33 ± 1. 03 59. 67 ± 6. 07＊＊＊ 5. 37 ± 1. 02
正丁醇部位 9. 33 ± 0. 86 62. 93 ± 3. 48＊＊＊ 4. 99 ± 0. 82
水溶性部位 9. 67 ± 1. 04 56. 29 ± 6. 30＊＊ 5. 85 ± 1. 16
卡托普利 8. 58 ± 0. 86* 59. 72 ± 6. 11＊＊＊ 5. 56 ± 0. 40
消渴丸 8. 73 ± 0. 93* 61. 31 ± 9. 90＊＊ 5. 48 ± 1. 09
注:与模型组比较，* P ＜ 0. 05，＊＊P ＜ 0. 01，＊＊＊P ＜ 0. 001;与正
常组比较，△△P ＜ 0. 01，△△△P ＜ 0. 001
3. 4 对糖尿病肾病小鼠生化指标的影响 由图 2
可知，与正常组比较，模型组 FBG明显升高 (P ＜
0. 001)。与模型组比较，醇提物各给药组以及正
丁醇部位组的 FBG 显著下降 (P ＜ 0. 001)，且波
叶青牛胆醇提物高剂量组降糖效果优于消渴丸阳性
药组。如表 3 所示，与正常组比较，模型组 BUN、
Crea、TC、Cys-C 水平均明显升高 (P ＜ 0. 001)。
给药 6 周后，波叶青牛胆中、高剂量组以及正丁醇
部位组各血清生化指标显著降低，乙酸乙酯部位组
显著降低了 Crea 和 Cys-C 水平 (P ＜ 0. 01，P ＜
0. 001)，而没有降低 BUN 和 TC 水平。鉴于醇提
物高剂量组、正丁醇部位组、乙酸乙酯部位组及水
溶性部位组的给药剂量都对应于同等生药量，由此
反映出波叶青牛胆正丁醇部位表现出更好的生物活
性，为其主要有效部位。与卡托普利阳性药组相
比，醇提物高剂量组对糖尿病肾病小鼠肾脏保护作
用更强。
注:与模型组比较，＊＊＊P ＜ 0. 001;与正常组比较，△△△P ＜ 0. 001
图 2 波叶青牛胆提取物对糖尿病肾病小鼠 FBG 的影响
(x ± s，n =10)
Fig. 2 Effects of T． crispa extracts on FBG in DN mice
(x ± s，n =10)
表 3 波叶青牛胆提取物对糖尿病小鼠血清生化指标的影响 (x ± s，n =10)
Tab. 3 Effects of T． crispa extracts on serum biochemical indexes in DN mice (x ± s，n =10)
组别 BUN /(mmol·L －1) Crea /(μmol·L －1) TC(mmol·L －1) Cys-C(mg·L －1)
正常 5. 45 ± 0. 66 8. 900 ± 0. 94 3. 39 ± 0. 21 0. 16 ± 0. 035
模型 8. 72 ± 0. 51△△△ 13. 20 ± 2. 15△△△ 6. 94 ± 0. 68△△△ 0. 42 ± 0. 031△△△
醇提物(155 mg /kg) 7. 21 ± 0. 10 12. 10 ± 0. 89 6. 26 ± 0. 61 0. 39 ± 0. 048
醇提物(310 mg /kg) 6. 87 ± 1. 97* 10. 56 ± 1. 02＊＊＊ 5. 08 ± 0. 45* 0. 36 ± 0. 033*
醇提物(620 mg /kg) 5. 64 ± 1. 10＊＊ 10. 31 ± 0. 79＊＊＊ 4. 60 ± 1. 09＊＊＊ 0. 19 ± 0. 027＊＊＊
三氯甲烷部位 9. 26 ± 1. 40 12. 00 ± 1. 65 6. 78 ± 0. 60 0. 39 ± 0. 055
乙酸乙酯部位 8. 87 ± 1. 83 11. 26 ± 1. 23* 6. 08 ± 0. 89 0. 31 ± 0. 040＊＊＊
正丁醇部位 6. 84 ± 1. 59* 11. 28 ± 1. 50* 4. 67 ± 0. 69＊＊ 0. 21 ± 0. 034＊＊＊
水溶性部位 10. 18 ± 2. 93 12. 22 ± 1. 34 6. 97 ± 0. 94 0. 37 ± 0. 049*
卡托普利 6. 95 ± 0. 57* 11. 31 ± 1. 38＊＊ 4. 48 ± 0. 79＊＊ 0. 23 ± 0. 022＊＊＊
消渴丸 6. 40 ± 1. 05* 11. 12 ± 1. 17＊＊ 5. 22 ± 0. 71＊＊＊ 0. 27 ± 0. 042＊＊＊
注:与模型组比较，*P ＜ 0. 05，＊＊P ＜ 0. 01，＊＊＊P ＜ 0. 001;与正常组比较，△△△P ＜ 0. 001
3. 5 糖尿病肾病小鼠肾组织 PAS 染色结果 如图
3 所示，光镜下观察发现，正常组小鼠肾脏结构清
晰，肾小球毛细血管袢开放良好，未见系膜区增宽
及基膜增厚等现象 (图 3A)。模型组小鼠肾小球
肥大且基底膜增厚，肾小球毛细血管网弥散性增厚
且出现同心圆状的 Kimmelstiel-Wilson 结节 (图
3B)。与模型组相比，卡托普利与消渴丸组肾小球
膨胀程度减轻，肾小球基底膜变薄以及毛细血管网
扩张程度降低，未发现肾小球硬化现象，肾小管上
皮细胞排列整齐 (图 3J，3K)。醇提物低、中、高
剂量组不同程度缓解了肾小球膨大，基底膜增厚以
及系膜扩张等病理改变，并且呈现出剂量依赖性
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(图 3C ～ 3E)。在各极性萃取部位组，仅乙酸乙
酯、正丁醇萃取部位组缓解了上述症状，其中正丁
醇部位的药效作用较强。三氯甲烷萃取部位以及水
溶性部位组对糖尿病肾病小鼠肾脏结构无明显改善
作用。同时，对小鼠肾小球系膜区面积，肾小球面
积以及肾小球基底膜厚度 (GBMT)进行测定，并
且进行统计分析。结果显示，与正常组相比模型组
小鼠肾小球系膜扩张指数 ［肾小球系膜区面积
(μm2) /肾小球面积 (μm2) ，MEI］ 与 GBMT 极
其显著 (P ＜ 0. 001) ，各给药组 MEI 与 GBMT 均
有不同程度的降低，其中波叶青牛胆醇提物高剂量
组与正丁醇萃取部位组效果较好 (结果见表 4)。
肾脏病理分级 Ｒidit 分析结果显示，波叶青牛胆高
剂量组以及正丁醇萃取部位组显著改善了肾功能状
态 (P ＜ 0. 01)，其药效与阳性药组相当。结果见
表 5。
图 3 波叶青牛胆提取物治疗六周后正常小鼠和糖尿病肾病小鼠肾脏 PAS染色 (×400)
Fig. 3 PAS staining of kidney sections of normal and DN mice after 6 weeks treatment with T． crispa extracts (×400)
4 讨论
急性毒理实验结果表明波叶青牛胆醇提取物属
低毒类，但是过量服用会导致严重肝毒性，最近也
有研究报道波叶青牛胆会导致急性肝炎以及黄
疸［19-20］。解剖死亡小鼠可知，其毒性主要表现为
肝毒性而对肾脏和胃黏膜没有损伤。这个结果表明
在安全剂量范围之内，波叶青牛胆对小鼠肾脏几乎
没有损伤，不会导致肾功能恶化。全面深入研究波
叶青牛胆毒理是今后重点方向之一。
Cys-C是一种比肌酐清除率更能准确的反应肾
小球滤过率 (GFＲ)变化的内源性标志物。因
Cys-C 是一种低分子质量蛋白质，肾脏是清除循环
中 Cys-C的唯一器官，并且其在体内含有量不受性
别、年龄、体质量和种族的影响［21-22］。因此，只
要肾脏受损 Cys-C 的含有量就会升高，由表 2 可
知，血清 Cys-C在波叶青牛胆醇提取物组、乙酸乙
01
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表 4 波叶青牛胆对糖尿病小鼠肾小球基底膜厚度 (GB-
MT)及系膜膨胀指数 (MEI)的影响 (x ± s，n =
10)
Tab. 4 Effects of T． crispa extracts on glomerular base-
ment membrane thickness (GBMT)and glomeru-
lar matrix indexes (MEI)in DN mice (x ± s，n =
10)
组别 MEI /% GBMT /μm
正常 38. 66 ± 3. 43 0. 29 ± 0. 05
模型 52. 93 ± 2. 39△△△ 0. 63 ± 0. 07△△△
醇提物(155 mg /kg) 47. 68 ± 3. 26* 0. 56 ± 0. 04
醇提物(310 mg /kg) 46. 47 ± 2. 61＊＊＊ 0. 54 ± 0. 05*
醇提物(620 mg /kg) 40. 63 ± 2. 30＊＊＊ 0. 42 ± 0. 07＊＊＊
三氯甲烷部位 52. 16 ± 2. 92 0. 57 ± 0. 05
乙酸乙酯 49. 05 ± 3. 42 056 ± 0. 05
正丁醇 43. 41 ± 3. 68＊＊＊ 0. 53 ± 0. 05*
水溶性部位 52. 85 ± 4. 85 0. 59 ± 0. 05
卡托普利 36. 46 ± 1. 96＊＊＊ 0. 54 ± 0. 06*
消渴丸 41. 78 ± 2. 85＊＊＊ 033 ± 0. 05＊＊＊
注:与模型组比较，* P ＜ 0. 05，＊＊＊P ＜ 0. 001;与正常组比
较，△△△P ＜ 0. 001
表 5 波叶青牛胆对 STZ诱导的小鼠糖尿病肾病 PAS染色
肾脏病理影响 (Ｒidit检验，n =6)
Tab. 5 Effect of T． crispa on kidney induced by STZ in
DN mice (Ｒidit test，n =6)
组别
病理分级
0 Ⅰ Ⅱ Ⅲ
Ｒidit 值
正常 6 0 0 0 0. 04 ± 0. 00
模型 0 0 5 1 0. 68 ± 0. 11△△△
醇提物(155 mg /kg) 0 3 2 1 0. 49 ± 0. 28
醇提物(310 mg /kg) 0 3 3 0 0. 45 ± 0. 20
醇提物(620 mg /kg) 0 4 2 0 0. 32 ± 0. 15＊＊
三氯甲烷部位 0 0 4 2 0. 73 ± 0. 15
乙酸乙酯 0 3 2 1 0. 49 ± 0. 28
正丁醇 0 4 2 0 0. 39 ± 0. 20*
水溶性部位 0 1 4 1 0. 62 ± 0. 21
卡托普利 1 4 1 0 0. 29 ± 0. 19＊＊
消渴丸 2 2 1 1 0. 36 ± 0. 35*
注:与模型组比较，* P ＜ 0. 05，＊＊＊P ＜ 0. 001;与正常组比
较，△△△P ＜ 0. 001
酯、正丁醇萃取部位组、水溶性部位组和阳性药
组，都具有不同程度的降低，由于 Cys-C 与 GFＲ
直接负相关，提示上述各组中的 GFＲ 水平也有相
应的回升［23］。
目前治疗糖尿病肾病的主要药物为血管紧张素
Ⅱ转换酶抑制剂和血管紧张素受体阻滞剂，此外糖
尿病肾病的发生与高血糖直接相关［24-25］。因此，
本实验采用卡托普利和消渴丸两组阳性药，分别为
抗高血压和降血糖药物。实验结果表明，波叶青牛
胆醇提取物降血糖以及保护肾功能作用都优于阳性
药组，而且其主要活性部位为正丁醇部位。
参考文献:
［1］ Cooper M． Interaction of metabolic and haemodynamic factors in
mediating experimental diabetic nephropathy［J］． Diabetologia，
2011，44(11) :1957-1972．
［2］ Marshall S M． Ｒecent advances in diabetic nephropathy［J］．
Postgrad Med J，2004，80(949) :624-633．
［3］ Osterby Ｒ，Parving H H，Hommel E，et al． Glomerular struc-
ture and function in diabetic nephropathy:early to advanced sta-
ges［J］． Diabetes，1990，39(9) :1057-1063．
［4］ Parving H H，Andersen A，Smidt U，et al． Diabetic nephropa-
thy and arterial hypertension［J］． Diabetologia，1983，24(1) :
10-12．
［5］ Dweck A C，Cavin J P． Andawali (Tinospora crispa) :a review
［J］． Personal care Magazine，2006，7:33-39．
［6］ 连文琰． 中国防己科药用植物的初步调查［J］． 植物分类
学报，1975，13(1):32-52．
［7］ Choudhary M I，Ismail M，Ali Z，et al． Alkaloidal constituents
of Tinospora crispa ［J］． Nat Prod Commun， 2010， 5
(11) :1747．
［8］ Lam S H，Ｒuan C T，Hsieh P H，et al． Hypoglycemic diterpe-
noids from Tinospora crispa［J］． J Nat Prod，2012，75(2) :
153-159．
［9］ Praman S，Mulvany M J，Williams D E，et al． Crude extract
and purified components isolated from the stems of Tinospora
crispa exhibit positive inotropic effects on the isolated left atrium
of rats［J］． J Ethnopharmacol ，2013，149(1) :123-132．
［10］ Kongkathip N，Dhumma-upakorn P，Kongkathip B， et al．
Study on cardiac contractility of cycloeucalenol and cycloeu-
calenone isolated from Tinospora crispa［J］． J Ethnopharmacol，
2002，83(1) :95-99．
［11］ Najib Nik A Ｒahman N，Furuta T，Takane K，et al． Antimalar-
ial activity of extracts of Malaysian medicinal plants［J］． J Eth-
nopharmacol，1999，64(3) :249-254．
［12］ Praman S，Mulvany M J，Allenbach Y，et al． Effects of an n-
butanol extract from the stem of Tinospora crispa on blood pres-
sure and heart rate in anesthetized rats［J］． J Ethnopharmacol，
2011，133(2) :675-686．
［13］ Zakaria Z，Mat Jais A，Somchit M，et al． The in vitro antibac-
terial activity of Tinospora crispa extracts［J］． Int J Biol Sci，
2006，6(2) :398-401．
［14］ Ｒuan C T，Lam S H，Chi T C，et al． Borapetoside C from
Tinospora crispa improves insulin sensitivity in diabetic mice
［J］． Phytomedicine，2012，19(8) :719-724．
［15］ Noipha K，Ｒatanachaiyavong S，Purintrapiban J，et al． Effect
of Tinospora crispa on glucose uptake in skeletal muscle:role of
glucose transporter 1 expression and extracellular signal-regula-
ted kinase1 /2 activation ［J］． Asian Biomedicine，2011，5
(3) :361-369．
［16］ 陈 奇． 中药药理实验方法学［M］． 北京:北京人民卫生
11
2015 年 1 月
第 37 卷 第 1 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
January 2015
Vol． 37 No． 1
出版社，2006．
［17］ Zhang Q，Xiao X，Li M，et al． Attenuating effect of Fufang
Xueshuantong Capsule on kidney function in diabetic nephropa-
thy model［J］． J Nat Med，2013，67(1):86-97．
［18］ 周一平． 用 SPSS 软件计算新药 LD50 ［J］． 药学进展，
2003，27(5):314-316．
［19］ Denis G，Gerard Y，Sahpaz S，et al． Malarial prophylaxis with
medicinal plants:Toxic hepatitis due to Tinospora crispa［J］．
Therapie，2007，62(3) :271-272．
［20］ Wu M L，Deng J F，Yang C Y． Acute hepatitis and jaundice
due to Tinospora sinensis or Tinospora crispa［J］． Clin Toxicol，
2013，51 (4) :268-269．
［21］ Ｒule A D，Lieske J C． Cystatin C is more than GFＲ，and this
may be a good thing［J］． J Am Soc Nephrol，2011，22(5) :
795-797．
［22］ Shin M J，Song S H ，Kwak I S，et al． Serum cystatin C as a
predictor for cardiovascular events in end-stage renal disease pa-
tients at the initiation of dialysis［J］． Clini Expe Nephrol，2012，
16(3) :456-463．
［23］ Filler G，Bkenkamp A，Hofmann W，et al． Cystatin C as a
marker of GFＲ-history，indications，and future research［J］．
Clin Biochem，2005，38(1) :1-8．
［24］ Lewis E J，Hunsicker L G，Clarke W Ｒ，et al． Ｒenoprotective
effect of the angiotensin-receptor antagonist irbesartan in patients
with nephropathy due to type 2 diabetes［J］． New Engl J Med，
2001，345(12) :851-860．
［25］ Barnett A H，Bain S C，Bouter P，et al． Angiotensin-receptor
blockade versus converting-enzyme inhibition in type 2 diabetes
and nephropathy［J］． New Engl J Med，2004，351 (19) :
1952-1961．
铁皮石斛多糖对小鼠胚胎干细胞生长的影响
刘亚娟1，3， 吴江林2， 王诗豪3， 张 铭3， 华允芬1 *
(1． 浙江工业大学药学院，浙江 杭州 310012;2． 浙江省农药检定管理所，浙江 杭州 310020;3． 浙江大
学生命科学学院，浙江 杭州 310058)
收稿日期:2014-03-12
基金项目:浙江省自然科学基金 (LQ12C02003)
作者简介:刘亚娟 (1987—) ，女，硕士生，主要从事研究药物分析及胚胎干细胞方向的研究。Tel:15868840442，E-mail:liu_ yajuan
@ 126． com
* 通信作者:华允芬，男，副教授，主要从事天然活性多糖的化学成分及药理药效学研究。Tel:13173696879，E-mail:huayfyxwd@
hotmail． com
摘要:目的 研究铁皮石斛多糖对小鼠胚胎干细胞生长的影响。方法 采用水提醇沉法对铁皮石斛进行初步提取，体
外培养小鼠胚胎干细胞，通过克隆形成率试验、MTT试验及实时定量 PCＲ 的方法研究铁皮石斛提取多糖对小鼠胚胎
干细胞的增殖及多能性维持的作用。结果 铁皮石斛多糖处理组细胞 (50 ～ 200 μg /mL)的克隆形成率、MTT吸光度
值均高于空白对照组，同时其干性相关基因的表达量与对照组相比无显著差异。结论 铁皮石斛多糖可以显著促进小
鼠胚胎干细胞的增殖、提高其克隆形成率，同时又不影响其多潜能性的维持。
关键词:铁皮石斛;多糖;小鼠胚胎干细胞;增殖
中图分类号:Ｒ285. 5 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2015)01-0012-04
doi:10. 3969 / j． issn． 1001-1528. 2015. 01. 003
Effect of polysaccharides from Dendrobium officinale on mouse embryonic
stem cells
LIU Ya-juan1，3， WU Jiang-lin2， WANG Shi-hao3， ZHANG Ming3， HUA Yun-fen1*
(1． Pharmaceutical College，Zhejiang University of Technology，Hangzhou 310012，China;2． Pesticide Verification Management of Zhejiang Province，
Hangzhou 310020，China;3． College of Life Science，Zhejiang University，Hangzhou 310058，China)
ABSTＲACT:AIM To study the effect of polysaccharides from Dendrobium officinale on mouse embryonic stem
cells． METHODS Polysaccharides from Dendrobium officinale were preliminarily extracted in water and precipi-
21
2015 年 1 月
第 37 卷 第 1 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
January 2015
Vol． 37 No． 1