全 文 ：·方药纵横·
锦带花体内抗流感病毒有效部位研究
王芳，常沙，李秀景，高松
(大连大学医学院，辽宁 大连 116622)
摘 要:目的:研究锦带花有效部位在体内抗流感病毒的作用。方法:建立在体流感病毒感染小鼠肺炎模型，通过观
察小鼠肺部病变程度及指标，测定肺组织内流感病毒血凝滴度，判定锦带花各有效部位对小鼠肺炎的治疗作用。结果:
口服锦带花乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物及乙醇提取物能明显减轻小鼠肺组织病变程度，对肺组织内病毒的增殖有明
显抑制作用，其中，乙酸乙酯提取物效果最为显著。结论:锦带花乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物及乙醇提取物均具有良
好的抗甲型流感病毒的作用，其中乙酸乙酯提取物效果最为显著，且呈剂量效应关系。
关键词:锦带花;甲型流感病毒;有效部位;抗流感病毒作用
中图分类号:R285 文献标志码:A 文章编号:1000 － 1719(2013)07 － 1422 － 03
Study on Effective Fraction of Anti － influenza Virus of Weigela Florida in Vivo
WANG Fang，CHANG Sha，LI Xiujing，GAO Song
(Medical College of Dalian University，Dalian 116622，Liaoning，China)
Abstract:Objective:To investigate the antiviral effect of active component of Weigela florida on influenza virus H1N1 in vivo．
Methods:Influenza virus infection mouse pneumonitis model was established，and pulmonary pathological changes and pulmonary
virus hemagglutination titers of the mice were examined for the assessment of the anti-influenza activity of the active component in
vivo． Results:Oral use of the extract of ethyl acetate，n-butyl alcohol，ethyl alcohol of weigela florida significantly reduced the pul-
monary pathological changes，and inhibited the proliferation of pulmonary virus，especially the extract of ethyl acetate of weigela
florida． Conclusion:The extract of ethyl acetate，n － butyl alcohol，ethyl alcohol of weigela florida have antiviral activity by inhibi-
ting replication of influenza virus A /H1N1 in vivo in a dose － dependent manner，especially the extract of ethyl acetate of Weigela
florida．
Key words:Weigela florida;influenza A virus;effective fraction;anti-influenza virus effect
收稿日期:2013 － 01 － 09
作者简介:王芳(1988 －) ，女，辽宁大连人，硕士研究生，研究方向:药物
有效成分及其机理。
通讯作者:高松(1959 －) ，男，辽宁大连人，副教授，硕士研究生导师，研
究方向:中药质量控制与中药药效学研究。
锦带花包括锦带 Weigela florida(Bunge)A． DC 和
早开锦带花 W． praecox(Lemoine)Bailey。民间用其花
蕾治疗瘟病初起，头疼咽干，喉痹，痈肿疔疮，丹毒等
症［1］。笔者前期对其进行了体外抗流感病毒实验，显
示了较好的疗效。因此有必要对锦带花不同提取部位
进行小鼠的体内试验，以进一步确定各部位流感病毒
的作用。
1 实验材料
1. 1 药物 锦带花采于大连大学校内，经大连大学中
医中药学系高松教授鉴定为忍冬科植物锦带 Weigela
florida(Bunge)A. DC的干燥花蕾和初开的花。取干燥
锦带花 400 g，置圆底烧瓶中，加入 75%乙醇适量，浸泡
过夜，80℃回流提取 3 次，每次 2 h，将滤液减压回收乙
醇，使提取物体积达到 250 mL，依次用石油醚，乙酸乙
酯，正丁醇萃取，并回收溶剂，从而制的锦带花不同极
性部位提取物。
1. 2 病毒株 流感病毒 H1N1 购于中国科学院武汉
病毒研究所，经大连大学病原生物学实验室传代保存。
1. 3 动物 5 ～ 7 周龄的小鼠，雌雄各半，体重在 18 ～
22 g，购自大连医科大学实验动物中心。
2 方 法
2. 1 流感病毒对小鼠半数致死量(LD50)的测定 将
血凝滴度为 1∶ 1024 的病毒 10 倍倍比稀释，得到 10 －4、
10 －5、10 －6、10 －7、10 －8、10 －96 个稀释度的病毒液。乙醚
轻度麻醉后，每组分别给予每组小鼠上述稀释度的病
毒液，每组 6 只，雌雄各半，每只小鼠滴鼻接种 50 μL，
并观察感染后 14 d 小鼠死亡情况，按 Reed-Muench 法
计算 LD50
［4］。
2. 2 药物对小鼠流感病毒性肺炎的影响 140 只小
鼠随机分为 14 组。分别为正常对照组，病毒对照组，
均灌服羧甲基纤维素钠;锦带花各有效部位(石油醚
提取物，乙酸乙酯提取物，正丁醇提取物，乙醇提取
物)低剂量治疗组(0. 05 g · kg －1· d －1) ，中剂量治疗
组 (0. 1 g · kg －1 · d －1 ) ，高 剂 量 治 疗 组
(0. 2 g · kg －1·d －1)。小鼠经乙醚轻度麻醉，以 15
LD50病毒液滴鼻感染造模，每只 50 μL，正常对照组用
生理盐水代替病毒液滴鼻，感染 12 h 后灌胃给药，每
天灌胃 1 次，每次 100 μL，连续给药 5 d，最后一次给药
后继续饲养小鼠 5 d，每日观察小鼠发病症状和体重的
·2241· 辽宁中医杂志 2013 年第 40 卷第 7 期
DOI：10.13192/j.ljtcm.2013.07.148.wangf.080
变化情况。小鼠脱颈处死前禁食 8 h。取全肺，用生理
盐水洗涤 2 次，称肺重，逐个计算小鼠肺指数(Lung In-
dex，LI)和肺指数抑制率［5］。
肺指数 = 肺重 / 体重 × 100%
肺指数抑制率(%)=(病毒组肺指数 －给药组肺
指数)/ 病毒组肺指数 × 100%
2. 3 肺悬液流感病毒血凝滴度测定 小鼠肺组织置
匀浆器中加生理盐水［肺重(g)/生理盐水(mL) = 1
∶ 9］，冰浴研磨，离心(4℃，3000 r /min，20 min)后取上
清液，作血凝滴度试验［6］。选用 96 孔血凝试验板，每
孔加入 25 μL生理盐水，第一孔加入 25 μL 待测肺悬
液，混匀后取 25 μL做倍比稀释，最后一孔弃去 25 μL。
每孔加入 25 μL 1%鸡红细胞悬液，轻微振荡，室温静
置 45 min，观察血凝现象并记录结果。出现“+ +”
(即红细胞在孔底形成环状，四周有小凝集块)的流感
病毒最高稀释度为血凝滴度终点，以病毒悬液稀释倍
数表示病毒的血凝滴度，实验同时设生理盐水对照和
病毒对照。
2. 4 统计学处理 采用 SPSS 统计软件，用 One-Way
ANOVA分析进行组间比较。
3 结 果
3. 1 流感病毒对小鼠 LD50的测定 感染后第 5 天开
始陆续有小鼠死亡。观察小鼠死亡情况，统计各组小
鼠死亡数，按 Reed － Muench 法计算该病毒株 LD50为
10 －6. 5。
3. 2 对小鼠流感病毒性肺炎的影响 正常对照组小
鼠行动敏捷，精神状况良好，呼吸正常，饮食情况正常，
体重持续增长。病毒对照组小鼠行动迟缓，无精神，呼
吸加快、短促，食量减少，体重降低，逐渐消瘦。乙酸乙
酯、正丁醇、乙醇的高、中、低三个剂量和石油醚中、高
两个剂量的治疗组小鼠体重下降较少，与病毒对照组
相比有显著性差异(P ＜ 0. 05) ，而石油醚低剂量组与
病毒组相较，无显著性差异(P ＞ 0. 05)。正常对照组
小鼠肺脏呈淡粉红色，未见病变;病毒对照组小鼠肺脏
体积明显增大，说明实验建立的小鼠感染病毒模型造
模成功。各药物治疗组小鼠肺指数与病毒对照组相比
明显降低(P ＜ 0. 05) ，见表 1。
表 1 锦带花各有效部位不同剂量对流感病毒感染致小鼠肺炎的影响(n = 8，珋x ± s)
组别
剂量
(g·kg － 1·d － 1)
体重(g)
1d 2d 3 d 4 d 5 d 6 d 7 d 8 d 9 d 10 d
LI 肺指数
抑制率(%)
正常对照组 － － 19. 80 ± 1. 19 20. 47 ± 1. 11* 21. 20 ± 1. 12* 22. 02 ± 1. 09* 22. 01 ± 1. 10* 23. 39 ± 1. 20* 24. 05 ± 1. 24* 24. 74 ± 1. 24* 25. 46 ± 1. 23* 26. 00 ± 1. 22* 0. 95 ± 0. 08* － －
病毒对照组 － － 19. 82 ± 1. 21 19. 35 ± 1. 21 18. 63 ± 1. 37 18. 05 ± 1. 42 17. 46 ± 1. 45 16. 87 ± 1. 46 16. 41 ± 1. 35 16. 03 ± 1. 15 15. 64 ± 0. 99 15. 23 ± 0. 84 2. 28 ± 0. 14 － －
石油醚低剂量组 0. 05 20. 10 ± 0. 95 19. 64 ± 0. 94 19. 19 ± 0. 93 18. 75 ± 0. 92 18. 31 ± 0. 99 17. 87 ± 0. 98 17. 45 ± 0. 98 17. 03 ± 1. 00 16. 63 ± 1. 02 16. 22 ± 1. 02 2. 14 ± 0. 11* 6. 14
石油醚中剂量组 0. 1 19. 91 ± 1. 27 19. 42 ± 1. 33 18. 91 ± 1. 34 18. 46 ± 1. 38 18. 08 ± 1. 37 17. 73 ± 1. 37 17. 40 ± 1. 29 17. 11 ± 1. 24 16. 83 ± 1. 18 16. 56 ± 1. 11* 2. 11 ± 0. 12* 7. 46
石油醚高剂量组 0. 2 19. 63 ± 1. 61 19. 23 ± 1. 21 18. 80 ± 1. 21 18. 40 ± 1. 21 18. 03 ± 1. 20 17. 70 ± 1. 23 17. 29 ± 1. 10 17. 01 ± 1. 06 16. 70 ± 1. 05 16. 42 ± 1. 02* 2. 01 ± 0. 06* 11. 84
乙酸乙酯低剂量组 0. 05 19. 86 ± 1. 31 19. 32 ± 1. 29 18. 86 ± 1. 23 18. 22 ± 1. 47 18. 46 ± 1. 59 18. 94 ± 1. 64* 19. 58 ± 1. 67* 20. 45 ± 1. 70* 21. 18 ± 1. 68* 21. 95 ± 1. 63* 1. 70 ± 0. 11* 25. 44
乙酸乙酯中剂量组 0. 1 20. 19 ± 1. 21 19. 68 ± 1. 19 19. 28 ± 1. 67 18. 87 ± 1. 12 19. 35 ± 1. 16* 19. 95 ± 1. 22* 20. 62 ± 1. 23* 21. 47 ± 1. 28* 22. 33 ± 1. 30* 23. 17 ± 1. 30* 1. 65 ± 0. 08* 27. 63
乙酸乙酯高剂量组 0. 2 20. 00 ± 1. 13 19. 51 ± 1. 17 19. 02 ± 1. 22 19. 26 ± 1. 19* 19. 91 ± 1. 19* 20. 55 ± 1. 16* 21. 31 ± 1. 13* 22. 11 ± 1. 11* 22. 99 ± 1. 12* 23. 84 ± 1. 05* 1. 40 ± 0. 09* 38. 60
正丁醇低剂量组 0. 05 20. 04 ± 1. 14 19. 57 ± 1. 16 19. 07 ± 1. 17 18. 56 ± 1. 17 18. 10 ± 1. 20 18. 50 ± 1. 28 19. 05 ± 1. 36* 19. 71 ± 1. 40* 20. 49 ± 1. 46* 21. 24 ± 1. 41* 1. 83 ± 0. 08* 19. 74
正丁醇中剂量组 0. 1 20. 01 ± 1. 15 19. 59 ± 1. 13 19. 17 ± 1. 08 18. 79 ± 1. 09 19. 19 ± 1. 08* 19. 74 ± 1. 05* 20. 27 ± 1. 07* 20. 92 ± 1. 09* 21. 64 ± 0. 98* 22. 33 ± 0. 90* 1. 74 ± 0. 08* 23. 68
正丁醇高剂量组 0. 2 20. 10 ± 1. 19 19. 67 ± 1. 20 19. 25 ± 1. 18 19. 32 ± 1. 36* 19. 78 ± 1. 42* 20. 32 ± 1. 47* 20. 97 ± 1. 43* 21. 65 ± 1. 36* 22. 38 ± 1. 37* 23. 14 ± 1. 35* 1. 57 ± 0. 06* 31. 14
乙醇低剂量组 0. 05 20. 21 ± 1. 26 19. 73 ± 1. 23 19. 26 ± 1. 25 18. 84 ± 1. 22 19. 15 ± 1. 23* 19. 65 ± 1. 30* 20. 30 ± 1. 34* 21. 02 ± 1. 36* 21. 77 ± 1. 29* 22. 63 ± 1. 25* 1. 83 ± 0. 05* 19. 74
乙醇中剂量组 0. 1 19. 94 ± 1. 23 19. 48 ± 1. 21 19. 04 ± 1. 17 18. 51 ± 0. 95 18. 91 ± 0. 97* 19. 50 ± 1. 08* 20. 23 ± 1. 09* 21. 04 ± 1. 10* 21. 83 ± 1. 11* 22. 67 ± 1. 08* 1. 77 ± 0. 09* 22. 37
乙醇高剂量组 0. 2 20. 14 ± 1. 11 19. 50 ± 1. 11 19. 04 ± 1. 15 18. 66 ± 1. 14 19. 07 ± 1. 20* 19. 65 ± 1. 20* 20. 36 ± 1. 21* 21. 16 ± 1. 28* 21. 96 ± 1. 31* 22. 76 ± 1. 30* 1. 72 ± 0. 11* 24. 56
注:与病毒对照组比较，* P ＜ 0. 05。
3. 3 对小鼠肺组织流感病毒血凝滴度的影响 锦带
花乙酸乙酯提取物、乙醇提取物的低、中、高 3 个剂量
及正丁醇的中、高剂量对小鼠肺悬液病毒血凝滴度较
病毒对照组明显降低(P ＜ 0. 05) ，而石油醚低、中、高 3
个剂量及正丁醇低剂量组则未见明显差异(P ＞
0. 05) ，说明锦带花乙酸乙酯提取物、乙醇提取物的
低、中、高三个剂量及正丁醇提取物的中、高剂量能有
效抑制小鼠肺组织内流感病毒的增殖，见表 2。
4 讨 论
本实验通过体内建立流感病毒感染模型考察了锦
带花各有效部位抗 H1N1 流感病毒的效果。结果显
示，锦带花各有效成分提取物均有一定的延缓小鼠体
重下降，减轻小鼠肺部炎症病变程度，肺指数降低的作
用，其中乙酸乙酯提取物各剂量的效果尤为明显，说明
锦带花乙酸乙酯提取物对小鼠流感病毒性肺炎有较好
的治疗效果。
表 2 锦带花各有效部位不同剂量对小鼠肺组织流感病毒
血凝滴度的影响
组别 剂量(g·kg － 1·d － 1) 血凝(珋x ± s) 滴度(珋x ± s)
正常对照组 － － － － － －
病毒对照组 － － 20. 00 ± 8. 64 2. 91 ± 0. 44
石油醚低剂量组 0. 05 17. 60 ± 8. 26 2. 77 ± 0. 46
石油醚中剂量组 0. 10 16. 00 ± 6. 53 2. 70 ± 0. 39
石油醚高剂量组 0. 20 15. 20 ± 7. 01 2. 63 ± 0. 44
乙酸乙酯低剂量组 0. 05 7. 20 ± 3. 68 1. 87 ± 0. 47*
乙酸乙酯中剂量组 0. 10 7. 60 ± 3. 50 1. 94 ± 0. 44*
乙酸乙酯高剂量组 0. 20 6. 40 ± 3. 86 1. 73 ± 0. 49*
正丁醇低剂量组 0. 05 14. 40 ± 7. 35 2. 56 ± 0. 47
正丁醇中剂量组 0. 10 9. 60 ± 4. 70 2. 15 ± 0. 51*
正丁醇高剂量组 0. 20 7. 20 ± 3. 68 1. 87 ± 0. 47*
乙醇低剂量组 0. 05 13. 60 ± 7. 59 2. 50 ± 0. 48*
乙醇中剂量组 0. 10 10. 00 ± 4. 32 2. 22 ± 0. 44*
乙醇高剂量组 0. 20 8. 40 ± 4. 40 2. 01 ± 0. 51*
注:与病毒对照组相比，* P ＜0. 05。
·3241·辽宁中医杂志 2013 年第 40 卷第 7 期
流感病毒血凝素能与细胞膜上的蛋白结合，使得
病毒进入细胞，故病毒血凝效价在一定程度上能够反
映病毒的数量和毒力。因此，血凝试验可用来判定病
毒滴度［7］。通过对小鼠肺悬液血凝滴度的测定了解肺
内流感病毒增殖程度。结果显示，锦带花乙酸乙酯及
乙醇提取物的低、中、高三个剂量及正丁醇提取物的
中、高剂量组小鼠肺组织内流感病毒血凝滴度明显低
于病毒对照组，说明能有效抑制小鼠肺组织内流感病
毒的增殖。综上所述，锦带花各有效部位中，乙酸乙酯
提取物能够较好地抑制甲型流感病毒的增殖，可视为
对抑制流感病毒起主要作用的有效部位。本研究为临
床上治疗甲型流感病毒感染提供了药效学依据。
收稿日期:2013 － 01 － 03
作者简介:刘长松(1987 －) ，男，山东青岛人，硕士研究生，研究方向:药
效组分及质量控制。
通讯作者:张贵君(1954 －) ，教授，博士研究生导师，研究方向:中药鉴
定方法学;中药药效组分及药效组分质量评价体系研究。
参考文献
［1］ 高松．辽南地区药用植物志［M］．北京:科学出版社，2008:331．
［2］ Hiseh YC，Wu TZ，Liu DP，et al． Influenza Pandemics:Past，Present
and Future［J］． Formos Med Assoc，2006，105(1) :1 － 6．
［3］ Megan CS，Dominic ED，Aeron CH，et al． Detection of influenza A
H1N1 and H3N2 mutation conferring resistance to oseltanivir using roll-
ing circle amplification［J］． Antiviral Research，2009，84:242 －248．
［4］ Boyd MR，Beeson MF． Animal models for evaluation of compounds a-
gainst influenza viruses［J］． Antimicrob Chemother，1975，1:43 － 47．
［5］ Zheng WF，Chen CF，Cheng QP，et al． Oral administration of exopo-
lysaccharide from Aphanothece halophytica (Chroococcales)signifi-
cantly inhibits influenza virus (H1N1)－ induced pneumonia in mice
［J］． International Immunopharmacology，2006，6:1093 － 1099．
［6］ Irinoda K，Masihi KN，Chihara G，et al． Stimulation of microbicidal
host defence mechanisms against aerosol influenza virus infection by
lentinan［J］． International Immunopharmacol，1992，14(6) :971 －
977．
［7］ 黎锦，杨占秋，陈文，等．菘蓝有效成分抗流感病毒作用的实验研
究［J］．中药新药与临床药理，2010，21(4) :389 － 393．
大孔树脂对零陵香总黄酮的富集与纯化工艺研究
刘长松，张贵君，张智圆
(北京中医药大学中药学院，北京 100102)
摘 要:目的:研究用大孔树脂富集与纯化零陵香总黄酮工艺条件，为建立质量评价指标和中药药效组分新药研究
奠定基础。方法:通过静态吸附和解吸附方法筛选大孔树脂，通过动态单因素考察确定零陵香总黄酮富集与纯化工艺。
结果:D101 大孔树脂对零陵香总黄酮有良好的富集纯化效果。其动态富集纯化工艺条件为:零陵香总黄酮上样浓度为
1 g /mL，树脂和药液的体积比为 1∶ 1，吸附流速为 1 mL /min，用 3 BV50%的乙醇以 1 mL /min的流速洗脱，零陵香总黄酮
的纯度由 1． 2%提高到 18． 4%。结论:D101 大孔树脂用于零陵香总黄酮的富集与纯化，可提高纯度 15 倍。
关键词:零陵香;总黄酮;D101 大孔树脂;富集与纯化;药效组分
中图分类号:R284 文献标志码:A 文章编号:1000 － 1719(2013)07 － 1424 － 03
Study on Accumulation and Extraction of Total Flavonoids of Herba
Lysimachiae Foenum-graeti with Macroporous Resin
LIU Changsong，ZHANG Guijun，ZHANG Zhiyuan
(School of Materia Medica，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100102，China)
Abstract:Objective:To study the technique condition for accumulating and extracting the total flavonoids of Herba Lysimachi-
ae Foenum-graeti with macroporous resin，to establish the quality of evaluation index and Chinese medicines active components a-
lignment，which laid the foundation of new drug development． Methods:The macroporous resin was chosen by the static adsorption
and absorption method，determining the technique condition for accumulating and extracting the total flavonoids of Herba Lysima-
chiae Foenum-graeti through the dynamic single factor investigation． Results:The D101 macroporous resin has good effects to accu-
mulate and extract the total flavonoids of Herba Lysimachiae Foenum-graeti． The dynamic technique condition for accumulating
and extracting was as follow:the water solution concentration of Herba Lysimachiae Foenum-graeti that passed through macro-
porous resin was 1 g /mL． The volume ratio of macroporous resin and liquid medicine was 1∶ 1． The speed that sample flow through
macroporous resin was 1 mL /min，and the total flavonoids absorption on macroporous resin can be eluted by 50% ethanol of 3
BV，the elution speed was 1． 0 mL /min． The purity of the total flavonoids of Herba Lysimachiae Foenum － graeti was increased
from 1． 2% to 18． 4% ． Conclusion:The purity can improve the yield of 15 times when the D101 macroporous resin is used to ac-
cumulate and extract the total flavonoids of Herba Lysimachiae Foenum-graeti．
Key words:Herba Lysimachiae Foenum-graeti;total flavonoid;D101 macroporous resin;accumulate and extract;active com-
ponents alignment
·4241· 辽宁中医杂志 2013 年第 40 卷第 7 期