全 文 ：第 25卷 第 11期
2 0 07年 11月
中 华 中 医 药 学 刊
CH INESE ARCH IVES OF TRAD IT IONAL CH INESE MED IC INE
Vo.l 25 N o. 11
Nov. 2 0 0 7
中华中医药
2304
学刊
银荆感冒颗粒抗甲型流感病毒的药效学研究
邱召娟,朱萱萱,倪文澎,严士海
(南京中医药大学附属医院药剂科, 江苏 南京 210029)
摘 要:目的:研究银荆感冒颗粒对甲型流感病毒的抑制作用。方法:体外接种甲型流感病毒鼠肺适应株于
狗肾细胞 (MDCK ),观察银荆感冒颗粒体外抗病毒作用 ;体内实验 ( 1): 以甲型流感病毒鼠肺适应株滴鼻感染小
鼠,观察 14天,计算小鼠存活率及存活天数; 体内实验 ( 2):以甲型流感病毒鼠肺适应株滴鼻感染小鼠,观察肺指
数,病理改变等。结果: 银荆感冒颗粒体外抗甲型流感毒 EC50为 3. 24mg /mL。银荆感冒颗粒 10g /kg和 20g /kg剂
量组可明显延长甲型流感病毒感染小鼠存活天数, 降低死亡率;银荆感冒颗粒 10g /kg和 20g /kg剂量组可明显抑
制肺指数值,抑制率分别为 31. 4%和 29. 1%。结论: 银荆感冒颗粒对甲型流感病毒有一定的抑制作用。
关键词:银荆感冒颗粒;甲型流感病毒; 体内外;抑制
中图分类号: R285. 5 文献标识码: A 文章编号: 1673 - 7717( 2007) 11 -2304 - 03
Effect o fY in jing Ganmao G ranu le on Influenza A V irus
QIU Zhao-juan, ZHU Xuan-xuan, N IWen-peng, YAN Shi-hai
(M ed icam en tDepartm en t of The A ffi liatedH osp ital ofNan jing Un iversity of TCM, N an jing 210029, Jiangsu, C hina)
Abstrac:t Ob jective: To investiga te the inh ib itory effectY in jing G anmao G ranu le on Influenza A V iru s. Me thods :
The inhibito ry cy topath ic effec ts( CPE) o fY in jing Ganmao G ranu le w ere observed byMDCK ce ll culture techniches. The
expe rim en t in v ivo we re done by the fo llow ing tw o me thods: ( 1) Them ice w ere given w ith Y in jing Ganm ao G ranu le for 7
day s and we re given w ith 30LL Influenza A V irus by no se a t sequenti luce. ( 2) Them icew ere g iven w ithY injing Ganm ao
Ke li for 7days and w ere g iven w ith 30LL In fluenzaA V irus by nose a t sequenti luce. W e ca lcu la ted the lung index and ob-
se rved the patho log ical change. Results : The EC50 ofY in jing Ganm ao G ranu le on Influenza A V irus is 3. 24mg /m L. The
10g /kg and 20g /kg g roups o fY in jing Ganm ao Granule can leng then the su rv iva l day s and cut down the dea th rate signifi-
cantly. The 10g /kg and 20g /kg groups o fY injing Ganm ao G ranu le can inh ib it the lung index of the infec ted m ice and the
inhib ition ratio is 31. 4% and 29. 1% re spec tively. And it can also lessen the patho log ical change. Conc lus ion: Y injing
G anmao Granule ha s the strong effe ct on on In fluenza A V irus.
Keywords: Y in jing Ganm ao G ranu le; In fluenza A V irus; in v ivo and v itro; inh ibition
收稿日期: 2007 - 06 - 11
基金项目:江苏省中医药管理局课题 ( H05027)
作者简介:邱召娟 ( 1966 - ),女,山东青岛人,副主任药师,学士, 主
要从事中药药理和临床药学研究。
流行性感冒是上呼吸道传染性极强的病毒感染性疾
病,在呼吸系统中发病率占首位, 可引起许多并发症, 重者
可引起死亡。笔者运用现代工艺, 选用古方银翘散结合临
床化裁而制成银荆感冒颗粒, 作为本院院内制剂,在临床上
取得了良好疗效。为了探索该颗粒剂治疗流行性感冒的机
制,笔者选择与呼吸道有关的甲型流感病毒,以该病毒感染
小鼠为药物评价模型, 通过感染小鼠存活率、存活天数、肺
指数值与肺病理变化为指标来评价药效,同时结合体外实
验,来观察银荆感冒颗粒对甲型流感病毒引起的细胞病变
的作用。
1 实验材料
1. 1 实验用药及试剂
银荆感冒颗粒, 江苏省中医院药剂科提供, 批号:
050424;利巴韦林注射液, 华北制药集团有限公司, 批号:
050128; RPM IMedium 1640, G IBCO公司; 胰蛋白酶, 上海伯
奥生物技术有限公司, 批号: 020602; HEPES, 江苏科威技术
服务有限公司, 批号: H3375; 磷酸氢二钠, 南京化学试剂厂,
批号 051207; 磷酸二氢钾,广西西陇化工厂, 批号: 04119;碳
酸氢钠,上海虹光化工厂,批号: 050622;新生牛血清, 杭州四
季青生物工程材料有限公司, 批号: 050827;青霉素, 山东鲁
抗医药股份有限公司,批号: 8040613;链霉素, 大连美罗大药
厂, 批号: 040707;乙醚,南京试剂厂,批号: 050628。
1. 2 实验用仪器
CO2培养箱 ( BB16), Beracus公司,倒置显微镜 ( XSZ -
D2), 重庆光学仪器厂;微孔滤器,上海医药工业研究院; 细
胞培养板,丹麦 NUNC公司; 净化工作台 ( SW - CJ - IF )苏
州安泰空气技术有限公司; FA1004型电子分析天平, 上海
精科天平厂。
1. 3 实验用病毒株及细胞株
甲型流感病毒 A /PR8 /34 ( H1N1 ),购自中国预防医学
科学院病毒所,病毒由江苏省中医院临床研究所药理实验
室传代后 -70e 低温冰箱保存备用; 狗肾细胞 ( MDCK ), 购
自上海细胞所。
1. 4 实验用动物
ICR小鼠,雌雄各半,体重 13~ 16g,由南京青龙山动物饲
养厂提供,合格证号: SCZK (苏 ) 2001 -0008。
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DOI：10.13193/j.archtcm.2007.11.98.qiuzhj.056
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学刊
2 方 法
2. 1 银荆感冒颗粒体外对甲型流感病毒的作用
2. 1. 1 MDCK细胞培养 新购置的 MDCK细胞, 用 0. 25%
的胰酶消化,然后加入含血清培养液适量, 轻轻吹打均匀,
按 1B3比例进行分瓶传代。实验前则接细胞于 96孔培养
板中,培养 24h后, 用于实验。
2. 1. 2 病毒毒力测定 将冻存的病毒液快速冻融后, 按
10稀释法稀释成 10- 1 ~ 10- 9的不同稀释液,接种到 MDCK
细胞培养板中,每个浓度 4个孔, 每孔接种 150LL病毒液,
于 5% CO2、37e 静置培养, 同时设正常细胞对照, 4个复
孔,观察细胞病变情况, 以 CPE不再进展时, 按 Reed -
M uench氏法 [1 ]计算病毒滴度,即该病毒的 TC ID50。 CPE程
度: -, 无细胞病变; + , 25% 细胞病变; + + , 50% 细胞病
变; + + + , 75%细胞病变: + + + + , 100%细胞病变。
2. 1. 3 银荆感冒颗粒最大无毒浓度实验 银荆感冒颗粒
(浸膏 ), 每毫升相当于 4. 9g药材, 首先将原浸膏稀释成
1g /m L, 再用完全培养液稀释成 100m g /m L, 最后用完全培
养液将其分别稀释成 80、40、20、10、5、2. 5m g /m L的不同浓
度加入长成单层 MDCK细胞的 96孔培养板中, 每个浓度 4
个复孔, 每孔 150LL同时设立正常细胞对照组, 置培养箱
中培养,观察细胞的生长情况,观察病变情况, 以不出现细
胞变暗、变圆、融合、脱落等病变的最大药物浓度为该药物
的无毒性浓度。
2. 1. 4 银荆感冒颗粒 TC50测定 根据最大无毒浓度实验
结果,将银荆感冒颗粒稀释成不同浓度,加入长成单层 MD-
CK细胞的 96孔板,每个浓度 4个复孔, 150LL /孔, 同时设
立正常的细胞对照组,置培养箱中培养,观察细胞的生长情
况, 观察病变情况, 采用孙氏综合法 [2 ]计算该药物对细胞
的 TC50 [2]。 CPE程度: -,无细胞病变; + , 25% 细胞病变;
+ + , 50% 细胞病变; + + + , 75% 细胞病变; + + + + ,
100%细胞病变。
2. 1. 5 银荆感冒颗粒对甲型流感病毒的作用 已长成单
层的细胞接种剂量为 100TC ID50的病毒, 置 37e 、5% CO 2温
箱孵育 2h, 弃去含病毒维持液, 更换含不同浓度药物的维
持液,置培养箱内培养。每天观察细胞形态, 连续观察 3
天,记录 CPE程度,同时设立正常细胞对照组、病毒对照组
各 4孔,采用孙氏综合法计算药物半数有效浓度 ( EC50 )和
治疗指数 ( T I)。治疗指数 ( T I) = TC50 /EC50。 CPE程度:
-,无细胞病变; + , 25%细胞病变; + + , 50%细胞病变: +
+ + , 75%细胞病变; + + + + , 100%细胞病变。
2. 2 银荆感冒颗粒体内对甲型流感病毒的作用
2. 2. 1 病毒感染小鼠半数致死量 ( LD50 )测定 方法参考
文献 [ 1 ]。
2. 2. 2 银荆感冒颗粒对甲型流感病毒感染小鼠死亡的保
护作用 取 ICR小鼠 120只 ,体重 13g~ 16g, 雌雄各半,随
机分 6组,每组 20只: ( 1)空白对照组, 等量生理盐水; ( 2)
模型组,等量生理盐水; ( 3)利巴韦林组, 75m g /kg; ( 4)银荆
感冒颗粒Ñ 组, 5g /kg; ( 5)银荆感冒颗粒Ò 组, 10g /kg; ( 6)银
荆感冒颗粒Ó 组, 20g /kg。以上各组均灌胃给药,给药容量
10mL /kg,每天 1次,连续 5天。于给药第 2d各小鼠 (除空白
对照组外 )在乙醚麻醉下, 以血凝试验 640以上的尿囊液给
小鼠滴鼻感染,每鼠 30LL( 20个 LD50致死量 )观察感染后发
病及死亡情况,每日记录动物的死亡情况, 连续 2周。
2. 2. 3 银荆感冒颗粒对甲型流感病毒感染小鼠肺指数及
病理的影响 取 ICR小鼠 60只, 体重 13g~ 16g, 雌雄各半,
随机分 6组, 每组 10只: ( 1)正常组, 等量生理盐水; ( 2)病
毒对照组等量生理盐水; ( 3)利巴韦林组, 75m g /kg; ( 4)银
荆感冒颗粒 Ñ 组, 5g /kg; ( 5 )银荆感冒颗粒 Ò 组, 10g /kg;
( 6)银荆感冒颗粒 Ó 组, 20g /kg。以上各组动物均灌胃给
药,灌胃容量 10m L /kg, 每天 1次, 连续 5天。于给药第 2
天各组动物 (除空白对照组外 )在乙醚麻醉下, 用增毒 3次
尿囊液滴鼻感染小鼠,每鼠 30LL( 20个 LD50致死量 ), 实验
前禁食不禁水,末次给药后, 实验当日各组小鼠称重, 脱颈
椎处死解剖,观察肺部病变: 取全肺称重, 计算各鼠肺指数
及肺指数抑制率, 比较各组间差异。肺指数 = 小鼠肺重
( g) /小鼠体重 ( g) @ 100% ;肺指数抑制率 =对照组平均肺
指数 -实验组平均肺指数 /对照组平均肺指数 @ 100%。并
随机抽取 10只鼠肺, 用 10% 甲醛溶液固定, 送做病理, 作
组织学检查。
2. 3 统计方法
数据处理运用 SPSS 13. 0软件完成, 组间比较采用单
因素方差分析。
3 结 果
3. 1 银荆感冒颗粒体外对甲型流感病毒的作用
病毒毒力测定结果为了解甲型流感病毒在 MDCK细
胞中的毒力情况,确定体外抗病毒药效学试验中病毒的攻
击量。根据所得数据, 采用 Reed -Muench法计算 TC IDm
为 10- 4. 5。银荆感冒颗粒毒性实验测定结果为了解银荆感
冒颗粒在 MDCK细胞中的毒性作用, 确定试验中药物剂
量。根据所得数据, 银荆感冒颗粒最大无毒浓度为 20m g /
m L;采用孙氏综合法计算 TC50为 26. 94m g /mL。银荆感冒
颗粒体外对甲型流感病毒有良好的抑制作用, 其 EC50为
3. 24mg /mL。 T l为 8. 31。
3. 2 银荆感冒颗粒体内对甲型流感病毒的作用
( 1)病毒感染小鼠半数致死量 ( LD50 )滴定是为了了解
甲型流感病毒感染小鼠的死亡情况,确定体内实验甲型流
感病毒感染小鼠的量。按孙氏综合法计算 LD50是 10 -1. 9。
( 2)银荆感冒颗粒对甲型流感病毒感染小鼠死亡的保
护作用,结果见表 1。
表 1 银荆感冒颗粒对甲型流感病毒
感染小鼠死亡的保护作用
组 别 动物数
(只 )
死亡数
(只 )
死亡率
(% )
存活率
(% )
存活天数
(天 )
空 白 对 照 组 20 0 0 100 -
模 型 组 20 17 85. 0v v 15. 0v v 6. 9 ? 3. 48
利 巴 韦 林 组 20 8 40. 0 60. 0* * 11. 3 ? 3. 63* *
银荆感冒颗粒Ñ组 20 12 60. 0 40. 0 7. 4 ? 17. 3
银荆感冒颗粒 Ò 组 20 10 50. 0 50. 0* 10. 3 ? 4. 11*
银荆感冒颗粒Ó 组 20 10 50. 0 50. 0* 10. 4 ? 3. 99*
注:与正常组比较, v v P < 0. 01; 与模型组比较, * P < 0. 05, * * P <
0. 01。
实验结果提示: 银荆感冒颗粒 10g /kg和 20g /kg剂量
可明显延长甲型流感病毒感染小鼠存活天数,降低死亡率,
对甲型流感病毒感染小鼠死亡具有保护作用。
( 3)银荆感冒颗粒对甲型流感病毒感染小鼠肺指数及
病理的影响,结果见表 2。
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收稿日期: 2007 - 06 - 09
基金项目:吉林省中医药管理局科技项目 ( 2004 - 028)
作者简介:闫凤杰 ( 1961 - ),女,吉林磐石人,副教授、副主任医师,
硕士研究生导师,主要从事心血管病及糖尿病慢性并发
症研究。
表 2 银荆感冒颗粒对甲型流感
病毒感染小鼠肺指数的影响
组 别 剂量
( g /kg)
动物数
(只 )
肺指数
( g /10g)
抑制率
(% )
正 常 组 等量 NS 10 0. 0926 ? 0. 0072 -
模 型 对 照 组 等量 NS 10 0. 1886 ? 0. 0569v v -
利 巴 韦 林 组 0. 075 10 0. 1199 ? 0. 0387* * 36. 4
银荆感冒颗粒Ñ组 5. 0 10 0. 1485 ? 0. 0517 21. 3
银荆感冒颗粒 Ò 组 10. 0 10 0. 1294 ? 0. 0588* 31. 4
银荆感冒颗粒Ó 组 20 10 0. 1337 ? 0. 0477* 29. 1
注: 与正常组比较, v v P < 0. 01;与模型组比较, * P < 0. 05, * * P <
0. 01。
实验结果提示: 银荆感冒颗粒 10g /kg和 20g /kg剂量
组可明显抑制肺指数值, 抑制率分别为 31. 4%和 29. 1% ,
提示银荆感冒颗粒具有减轻甲型流感病毒感染小鼠肺部病
变的作用。
4 讨 论
流行性感冒由流感病毒引起, 目前,国际上防治流感的
方法是接种减毒活疫苗和使用化学药物治疗, 但由于流感
病毒容易发生抗原变异, 使疫苗保护作用效果受到一定限
制,而使用的化学药物又有较大的不良反应, 因此到目前为
止还没有有效防治流感的方法 [3 ]。中医认为流行性感冒
是外感六淫,时行病毒所致。以风为主因, 风为六淫之首,
但在不同季节,往往与其它当令之时气相合而伤人。一般
以风热为多见, 银荆感冒颗粒由金银花、连翘、荆芥、板蓝
根、防风和薄荷组成, 是银翘散结合临床经验化裁而成, 方
中金银花味甘,性寒, 连翘味苦, 性微寒, 甘苦相合为君药,
既有辛凉透邪清热之效, 又有芳香辟秽解毒之功; 荆芥味
辛,性温, 助君药辛开皮毛而散邪, 板蓝根苦寒助君药清热
解毒,共为臣药; 防风、薄荷加强辛散泄热。对风热感冒发
热、咽痛、周身酸痛、咳嗽等症有良好的治疗作用。笔者通
过体内外实验初步证实了银荆感冒颗粒确有抗甲型流感病
毒的作用。
参考文献
[ 1 ] 杜平.医用实验病毒学 [M ].北京:人民军医出版社, 1985:
107 - 109, 80 - 82
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2006: 113 -115
[ 3 ] Luscher -M att liM. Inf luenza chem oth erapy: a review of the p res-
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学刊
生脉解毒通络胶囊对糖尿病大鼠心肌组织 ECM积聚的影响
闫凤杰,邓 悦,朴春丽
(长春中医药大学第一附属医院,吉林 长春 130021)
摘 要:目的: 研究糖尿病大鼠心肌组织 ECM积聚及中药生脉解毒通络胶囊的调节作用。方法: 46只W ista r
大鼠用链脲佐菌素诱发糖尿病后, 随机分为 DM组、苯那普利治疗组和生脉解毒通络胶囊治疗组, 以正常 10只大
鼠作为对照。连续处理 12周后, 应用免疫组化方法检测心肌组织的基质金属蛋白酶 (MM P - 1 )及其抑制物
( T IMP - 1)和Ñ 、Ó 型胶原的蛋白表达水平。结果: DM大鼠 T IMP - 1及Ñ 、Ó 型胶原蛋白表达增加, MMP - 1表
达减少,生脉解毒通络胶囊组心肌组织 T IMP -1及Ñ 、Ó 型胶原蛋白表达明显低于 DM 组 ( P < 0. 01) , MM P - 1
蛋白表达明显高于 DM组 ( P < 0. 01)。结论: 生脉解毒通络胶囊对 DM心肌病变有保护作用, 其机制可能是通过
改善糖脂代谢, 减少细胞外基质的积聚。
关键词:糖尿病;生脉解毒通络胶囊; 细胞外基质 ( ECM )
中图分类号: R259. 871 文献标识码: A 文章编号: 1673 - 7717( 2007) 11 - 2306 - 03
The Effect o fMyocard ia l ECM Accumulation forShengma i J iedu Tong luo Capsule
to D iabetes Rats
YAN Feng-jie, DENG Yue, P IAO Chun-li
( The F irstA ffiliated H ospita l of Changchun University of T rditiona l ChineseM edicine, Changchun 130021, Jilin, China)
Abstrac:t Ob jective: To deve lop the M yocardia l ECM Accum ula tion of D iabe tes Rats and the m echanism s of
Shengma i J iedu Tong luo Capsu le. M ethod s: 46W istar ra ts we re evoked to DM m ode lw ith S treptozo to cin and random ized
to 4 groups: DM group, Benazepril group, Shengma i J iedu Tong luo Capsu le g roup and no rma l contro l g roup. A fter 12
weeks, the Exp ression o fMMP -1, T IM P - 1 and Co llagenÑ , Ó we re de tected w ith them e thods o f imm unoh istochem ical
staining. R esults: The expression o f T IM P - 1 and Co llagenÑ , Ó o f DM rats ra ised and the expression o f MMP - 1
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