全 文 ：收稿日期:2014 － 01 － 13;修回日期:2015 － 02 － 05
作者简介:刘福堂(1979 －)，男，兽医师，硕士，研究方向为临
床兽医学，lft201410@ 163． com．
萹蓄对畜禽常见肠道菌的体外
抑菌活性研究
刘福堂1，杨丽梅2，马 力2，秦蜜蜜3，李 睿4，韩影影3
(1．招远市齐山畜牧兽医站，山东 招远 265415;2．山东省滨州畜牧兽医研究院，
山东 滨州 256600;3．滨州医学院附属医院 病理科，山东 滨州 256600;
4．东北农业大学 动物医学学院，哈尔滨 150030)
中图分类号:S853． 75;S856． 4 文献标识码:B 文章编号:1004 － 7034(2015)09 － 0160 － 02
萹蓄为蓼科植物(Polygonum aviculare L．)的干
燥地上部分，夏季枝叶茂盛时采收，被 2010 版药典收
载。萹蓄味苦，性微寒，归膀胱经。萹蓄全草入药，具
有清热解毒、利尿驱虫、止泻消炎等药理作用［1］。萹
蓄对犊牛下痢和仔猪白痢都有良好的治疗效果［2 － 3］，
但其作用原理尚不清楚，在一定程度上限制了其应
用。笔者研究了萹蓄对畜禽常见肠道菌的体外抑菌
活性，为其临床用药奠定理论基础。
1 材料
1． 1 供试菌株
大肠杆菌(O2、O8、O78、O139)、魏氏梭菌 B 型、魏
氏梭菌 C 型，鼠伤寒沙门杆菌、猪伤寒沙门杆菌、猪
霍乱沙门杆菌、鸡伤寒沙门杆菌、鸡白痢沙门杆菌、鸡
志贺菌，均购自中国兽药监察所。
1． 2 主要仪器
微量振荡器(型号为 ZW － A) ，购自江苏省海门
市麒麟仪器厂;电热式蒸汽消毒器 (型号为
YXQGO2) ，购自山东新华医疗器械股份有限公司;电
子天平(型号为 ALC －210． 4) ，购自北京赛多利斯股
份有限公司;电热恒温培养箱(型号为 600) ，购自中
国龙口市先科仪器公司;洁净工作台(型号为 SW －
CJ － IF) ，购自苏州安泰空气技术有限公司;可调微量
移液器(型号为 WKYIII － 200) ，购自上海求精生化
试剂仪器有限公司;可调电炉(型号为 DK － 98 － II) ，
购自北京科伟永兴仪器有限公司;水浴锅(型号为
HH － S6) ，购自永兴昌医疗器械厂。
1． 3 主要试剂
蛋白胨、牛肉膏、琼脂粉等，均购自北京奥博星生
物技术有限责任公司;NaCl，购自天津市标准科技有
限公司。
2 方法
2． 1 菌种活化及浓度测定
试验前将保存的各试验菌种接种于普通琼脂斜
面培养基使其活化，然后接种于 2 mL 无菌新鲜肉汤
中，37 ℃培养 24 h后取 100 μL 菌液扩培于 2 mL 无
菌普通营养肉汤中，37 ℃培养 18 h 后经比浊法和活
菌计数法测定，配制成 1 × 106 cfu /mL的菌液备用。
2． 2 提取方法
采用传统煎煮法提取中药药液。首先称取所需
量的药材，加 10 倍量纯化水浸泡 30 min，加热至沸
腾，文火保持 1 h，过滤，药渣再加 8 倍量纯化水，加热
至沸腾，文火保持 1 h，过滤，合并 2 次滤液。将滤液
经 3 000 r /min离心 15 min，取上清，减压浓缩至相当
于原生药 1 g /mL，121 ℃高压灭菌 15 min，4 ℃保存
备用。
2． 3 体外药物敏感试验
2． 3． 1 纸片的制备 用直径为 6 mm 打孔器在新华
1 号定性滤纸上打孔，得纸片。每 50 片置于青霉素
小瓶中，高压灭菌干燥后备用。在每个青霉素小瓶中
加入灭菌药液 0． 5 mL，使纸片浸透，然后放入 4 ℃冰
箱 4 h后，在超净台中吹干，备用［4］。
2． 3． 2 体外抑菌试验 采用药敏纸片抑菌法［5］。
抑菌效果判定标准按《中药药理学》标准，即抑菌直
径≥20 mm 为极敏，15 ～ 19 mm 为高敏，10 ～ 14 mm
为中敏，10 mm以下为低敏，6 mm表示无作用。
2． 4 最小抑菌浓度测定
采用液体试管 2 倍稀释法测定萹蓄提取液对
12 种常见肠道菌的最小抑菌浓度(MIC)［6］。取试管
12 支，于各管中加入菌液，在第 1 支试管中加入药
液，然后依次稀释至第 11 支试管，第 12 支试管为不
加药对照，在 12 支试管内，中药的含量分别为 200，
100，50，25，12． 5，6． 25，3． 125，1． 563，0． 781，0． 391，
0． 196，0 mg /mL。稀释完毕后，将试管置 37 ℃恒温培
养箱中培养，分别在第 24 小时、第 48 小时时观察结
061
Heilongjiang Animal Science
and Veterinary Medicine № 09 2015
DOI:10.13881/j.cnki.hljxmsy.2015.1510
2015 年 09 月(下)
果。试验重复 3 次。
培养 24 h 后，若对照管细菌生长良好发生混浊，
药液管亦发生混浊，表示细菌生长，该浓度供试药物
无抑菌作用;若药液管清亮，表示细菌生长受到抑制，
能够抑制细菌生长的最大稀释度的药液即为该药物
的 MIC。
继续培养至第 48 小时，若药液管仍清亮，将各管
清亮的药液接种于普通琼脂平板，培养 8 ～ 12 h 观
察，仍无细菌生长的 MIC 即为该药物的最小杀菌浓
度(MBC)。
2． 5 数据统计与分析
采用 SPSS 13． 0 进行各提取药液的细菌敏感度
分析，结果用“X ± SD”表示。
3 结果与分析
3． 1 体外药物敏感试验(见表 1)
表 1 萹蓄提取物对 12 种常见肠道菌的体外抑菌效果 mm
菌株
抑菌圈直
径 /mm
菌株
抑菌圈直
径 /mm
大肠杆菌 O2 16． 88 ± 0． 08 魏氏梭菌 B型 8． 12 ± 0． 14
大肠杆菌 O8 11． 24 ± 0． 15 魏氏梭菌 C型 8． 16 ± 0． 13
大肠杆菌 O78 10． 94 ± 0． 09 鼠伤寒沙门杆菌 16． 32 ± 0． 13
大肠杆菌 O139 17． 16 ± 0． 11 猪伤寒沙门杆菌 17． 16 ± 0． 05
猪霍乱沙门杆菌 11． 24 ± 0． 16 鸡伤寒沙门杆菌 16． 14 ± 0． 07
鸡白痢沙门杆菌 16． 56 ± 0． 12 鸡志贺菌 12． 28 ± 0． 06
由表 1 可以看出，萹蓄提取物对大肠杆菌 O2、大
肠杆菌 O139、鸡白痢沙门杆菌、鼠伤寒沙门杆菌、猪伤
寒沙门杆菌、鸡伤寒沙门杆菌有较强的抑菌作用，抑
菌圈直径均大于 16 mm;对大肠杆菌 O8、大肠杆菌
O78、猪霍乱沙门杆菌、鸡志贺菌具有一定的抑菌作
用，抑菌圈直径均大于 10 mm;对魏氏梭菌 B型、魏氏
梭菌 C型为低敏，抑菌圈直径在 10 mm以下。
3． 2 最小抑菌浓度测定(见表 2)
表 2 萹蓄提取物对 12 种常见肠道菌的MIC和
MBC测定结果 mg·mL － 1
菌株 MIC MBC 菌株 MIC MBC
大肠杆菌 O2 12． 5 50 魏氏梭菌 B 型 100． 0 ＞ 200
大肠杆菌 O8 50． 0 200 魏氏梭菌 C 型 100． 0 ＞ 200
大肠杆菌 O78 50． 0 200 鼠伤寒沙门杆菌 12． 5 50
大肠杆菌 O139 12． 5 50 猪伤寒沙门杆菌 12． 5 50
猪霍乱沙门杆菌 50． 0 200 鸡伤寒沙门杆菌 12． 5 50
鸡白痢沙门杆菌 6． 3 50 鸡志贺菌 50． 0 200
由表 2 可以看出，萹蓄提取物对大肠杆菌 O2、大
肠杆菌 O139、鼠伤寒沙门杆菌、猪伤寒沙门杆菌、鸡伤
寒沙门杆菌、鸡白痢沙门杆菌有较强的抑菌效果，
MIC≤12． 5 mg /mL;对大肠杆菌 O8、大肠杆菌 O78、猪
霍乱沙门杆菌、鸡志贺菌的 MIC 均为 50． 0 mg /mL，
而对魏氏梭菌 B 型、魏氏梭菌 C 型也有一定的抑菌
效果，MIC均为 100 mg /mL。萹蓄提取物对除魏氏梭
菌 B型、魏氏梭菌 C 型外的 10 株菌都有杀菌作用，
MBC≤200 mg /mL。
4 讨论与结论
试验采用传统的水提取的方法制备萹蓄提取物，
采用纸片法、试管倍比稀释法测定萹蓄提取物对
12 种畜禽常见肠道菌的体外抑菌效果。纸片法能够
直观地显示出抑菌效果，试管倍比稀释法能够做到定
量测定。本研究中纸片法和试管倍比稀释法得出了
相似的结论，即萹蓄提取物对大肠杆菌 O2、大肠杆菌
O139、鼠伤寒沙门杆菌、猪伤寒沙门杆菌、鸡伤寒沙门
杆菌、鸡白痢沙门杆菌有较强的抑菌和杀菌效果;对
大肠杆菌 O8、大肠杆菌 O78、猪霍乱沙门杆菌、鸡志贺
菌有一定的抑菌和杀菌效果;对魏氏梭菌 B 型、魏氏
梭菌 C型的抑菌和杀菌效果均较差。张蓉等［7］研究
发现，萹蓄提取液对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均有
抑菌效果。李曼曼等［8］也发现，萹蓄对大肠杆菌、金
黄色葡萄球菌、痢疾杆菌有抑菌效果，本研究结果与
上述研究得出了相似的结果。萹蓄提取物对畜禽肠
道病原菌的抑菌效果罕见报道，本研究为萹蓄在畜牧
生产中的应用奠定了基础。
参考文献:
［1］ 国家中医药管理局中华本草编委会．中华草本(第六卷) ［M］．
上海:上海科技出版社，1999．
［2］ 江苏省泰兴县城东公社畜牧兽医站． 萹蓄对仔猪白痢 746 例的
临症治疗观察［J］．中兽医学杂志，1980(2) :71 － 72．
［3］ 孙洪强．萹蓄草治疗犊牛下痢效果明显［J］． 中兽医医药杂志，
2004(1) :39．
［4］ 黄志坚．纸片扩散法在药敏试验中的应用［J］． 福建畜牧兽医，
2004(6) :9 － 10．
［5］ 黄青云．畜牧微生物学［M］．北京:中国农业出版社，2003．
［6］ 陈秀枢，屠涛． 微量肉汤稀释法测定 MIC 的评价［J］． 中华医学
检验杂志，1994(2) :95 － 98．
［7］ 张蓉，魏希颖．萹蓄体外抑菌作用及其绿原酸含量测定［J］． 陕
西农业科学，2010，36(6) :64 － 66．
［8］ 李曼曼，刘增辉，王海燕，等． 萹蓄抑菌活性及化学成分研究
［J］．天然产物研究与开发，2014，26(4) :526 － 530．
(019)
161《黑龙江畜牧兽医》综合版