全 文 :·40· Chinese Journal of Information on TCM Oct.2008 Vol.15 No.10
·中药研究与开发·
匙羹藤提取物体外抑菌活性的观察
扈玉华 1,路建荣 1,朱习会 1,张明明 2,王军霞 3
(1.河北医科大学第二医院,河北 石家庄 050000;2.河北省人民医院,河北 石家庄 050071;
3.河北医科大学,河北 石家庄 050031)
摘要:目的 观察匙羹藤提取物(Gymnema sylvestre extractant,GE)的体外抑菌活性。方法 采用琼脂稀释的
实验方法,分别测定匙羹藤提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、变形杆菌以及绿脓杆菌的最低抑菌浓度(MIC)。
结果 匙羹藤提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、变形杆菌以及绿脓杆菌的 MIC 分别为 0.625、1.25、1.25、
2.5 mg/mL。结论 匙羹藤提取物对多种细菌具有抑菌作用。
关键词:匙羹藤提取物;体外抑菌活性;最低抑菌浓度
中图分类号:R285.5 文献标识码:A 文章编号:1005-5304(2008)10-0040-02
Observation of in Vitro Antibacterial Activity of Gymnema sylvestre Extractant HU Yu-hua,
LU Jian-rong, ZHU Xi-hui, et al (The Second Hospital of Hebei Medical University, Shijiazhuang 050000, China)
Abstract:Objective To evaluate invitro antibacterial activity of Gymnema sylvestre extractant. Methods
The antibacterial activity of Gymnema sylvestre extractant against staphyloccus aureus, bacillus coli,
bacillus proteus, bacillus aeruginosus was detected by agar dilution method. Results The minimum
inhibitory concentration were 0.65, 1.25, 1.25, 2.5 mg/mL respectively. Conclusion Gymnema sylvestre
extractant had strong antibacterial activity against various bacteria.
Key words:Gymnema sylvestre extractant; in vitro antibacteral activity;minimum inhibitory
concentration
匙羹藤(Gymnema sylvestre)系萝摩科植物,主要分布在
我国广东、广西、福建、台湾和云南等省区。全株可药用,民
间用于治疗风湿性关节痛、糖尿病、疥痈肿毒、毒蛇咬伤、枪
弹伤及杀虱等[1]。近年来,匙羹藤引起了国内外学者的高度重
视,对其化学成分和药理作用进行了大量的研究,但仅限于降
血糖、抗龋齿和抑制甜味反应等作用。本研究主要对匙羹藤提
取物的抑菌效果进行了实验观察,现将试验结果报道如下。
1 材料
1.1 仪器
微量多点接种仪:北京医科大学昆仑药物发展研究所生
产。微量移液器:德国 Eppendorf 公司。
1.2 培养基
Mulele-Hrint 琼脂:法国生物梅里埃公司生产,简称 M-H
琼脂。
1.3 药材
购广西产匙羹藤叶。取匙羹藤干燥叶 1.0 kg,粉碎后,加
40%乙醇水溶液加热提取3次[2],过滤,合并滤液,减压回收乙醇,
母液于水浴上蒸干,得深棕色提取物 122 g。然后加适量的水
溶解,用水饱和的正丁醇萃取 3 次,合并正丁醇层并减压蒸干,
用正己烷脱脂,脱脂产物用甲醇提取,浓缩甲醇分别用 70%的
乙醇水溶液 4 L 回流提取 4次,合并提取液,浓缩至干,得匙羹
基金项目:河北省中医药管理局科研项目(2007-40)
藤提取物 25.1 g。
1.4 菌种及菌悬液的制备
标准菌株:金黄色葡萄球菌(25923)、大肠杆菌(25922)、
绿脓杆菌(27853)、变形杆菌(29383)均由河北医科大学微生物
实验室提供。分别取其标准菌株,采用 16 h 新鲜斜面培养物,
用生理盐水稀释成含菌量为 105~106 cfu/mL 的菌悬液[3]。
2 方法
2.1 纸片琼脂扩散法抑菌试验[4]
2.1.1 菌片的制备[5] 将定性滤纸制成 6 mm 直径的圆片,经
高压蒸汽灭菌后,干燥保存备用。取处理好的滤纸片放入无菌
平皿中,用 10 µL 移液器把含匙羹藤提取物浓度为 50%的提取
液滴加在无菌滤纸片上,阴性对照片滴加 10 µL 的生理盐水,置
无菌室晾干,阳性对照选用已制好的标准的药敏头孢塞肟纸片。
2.1.2 步骤 首先在 M-H 琼脂平板表面均匀的涂抹试验菌悬
液,置室温干燥 5 min,在每个平板表面周边距贴 3 个试验和 1
个阴性对照纸片,中心贴 1 个阳性对照纸片。然后将贴好纸片
的平板放在 37 ℃温箱中培养 24 h,观察结果。用数显游标卡
尺测量数据。
2.1.3 判定标准 抑菌环直径大于 7 mm 者判为有抑菌作用,
抑菌环直径小于或等于7 mm为无抑菌作用,阴性对照应无抑菌
环产生,否则试验无效,抑菌环越大说明抑菌效果越好。
2.2 最低抑菌浓度的测定
2.2.1 步骤 用蒸馏水将匙羹藤提取物配制成 5%的提取液,
2008 年 10 月第 15 卷第 10 期 中国中医药信息杂志 ·41·
排列无菌试管(6 支编序),在 1-6支试管中分别加入 10 mL 的
M-H 液体培养基,于第 1支试管中加入 10 mL 5%匙羹藤提取液,
混匀,然后取出的 10 mL 5%匙羹藤提取液加入第 2 支试管中,
混匀,依次类推,第 5 支试管中取出 10 mL 弃掉,而第 6 支试管
不加药物作为阴性对照。最后在每个试管中加入 0.1 mL 试验
菌悬液,混匀,阳性对照取西药抗生素头孢三代头孢米诺钠,用
同样的方法依次稀释相对应的浓度。然后在 37 ℃温箱中培
养 24 h,观察结果。
2.2.2 判定标准 含药物的试管中以及阳性对照的试管中液
体清亮判断为该药物有抑菌作用,阴性对照的试管中液体浑浊
判断为该药物无抑菌作用,倍比稀释后有抑菌作用的最低药物
浓度判为该中药提取物的最低抑菌浓度(MIC)。
3 结果(见表 1、表 2)
表 1 匙羹藤提取物对不同试验菌抑菌环直径的影响(mm)
金黄色葡萄球菌 变形杆菌 大肠杆菌 绿脓杆菌 试验
序号 药物 对照 药物 对照 药物 对照 药物 对照
1 17.12 32.11 12.11 30.56 9.63 28.33 6.34 27.87
2 16.88 12.06 9.55 7.07
3 16.96 11.95 8.97 6.73
4 17.02 11.80 9.25 6.59
注:表中对照为阳性对照
表 1显示,匙羹藤提取物浓度为50 mg/mL,在 M-H 琼脂平板
上对金黄色葡萄球菌、变形杆菌及大肠杆菌标准菌株的抑菌环
直径均大于7 mm,显示出其抑菌作用,但对绿脓杆菌抑菌效果较
差,抑菌圈直径小于或等于7 mm。所有阴性对照无抑菌环产生。
表 2 匙羹藤提取物的抑菌作用
药物稀释浓度
试验菌
1∶1 1∶2 1∶4 1∶8 1∶16
阴性对照
金黄色葡萄球菌 - - - + + +
大肠杆菌 - - + + + +
变形杆菌 - - + + + +
绿脓杆菌 - + + + + +
注:“+”表示有菌生长,“-”表示无菌生长
表 2 结果表明,匙羹藤提取物对金黄色葡萄球菌最为敏感,
而对大肠杆菌和变形杆菌的抑菌效果也可。匙羹藤提取物对金
黄色葡萄球菌、大肠杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌标准菌株的
MIC 分别为 0.625、1.25、1.25、2.5 mg/mL。
4 讨论
目前,国内外对匙羹藤的化学成分和药理作用研究非常活
跃。匙羹藤主要含有皂苷、萜类、黄酮、多肽、果胶、生物碱等
成分,其提取物的有效成分主要是匙羹藤酸(gymnemic acide)。
为观察中药匙羹藤是否有抑菌作用以及抑菌作用如何,
首先我们对匙羹藤的有效成分进行了提取,然后对临床常见
多种细菌的标准菌株进行预试验,发现匙羹藤提取物对金黄
色葡萄球菌、变形杆菌及大肠杆菌的抑菌环直径均大于 7 mm,
显示出抑菌作用,而对绿脓杆菌抑菌效果较差,其抑菌环直径
等于或小于 7 mm。我们又对匙羹藤提取物进行了进一步研究,
其对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、变形杆菌及绿脓杆菌的 MIC
分别 0.625、1.25、1.25、1.25 mg/mL。通过研究发现匙羹
藤提取物对多种细菌有抑制效果,说明其抑菌谱范围较广。
本试验仅为标准菌株的体外抑菌实验,但匙羹藤对临床菌
株抑菌作用如何,我们将进行下一步的研究证实;匙羹藤提取
物是否有杀菌作用以及杀菌成分是否为匙羹藤酸等也有待进
一步的研究。匙羹藤有效成分的提取方法目前还不太成熟,本
试验只采用了乙醇进行提取,对有效成分提取的最佳方法以及
有效成分的研究还需进一步探索。
参考文献:
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2003,22(4):374-376.
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菌效果观察[J].中国中医药信息杂志,2000,7(9):26.
(收稿日期:2007-12-28,编辑:华强)
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