全 文 ：色谱 12 9 9 年第 10 卷第 4 期 ·2 4 1 ·
05%
;但 v : 在最适波长2 2 9 n m处的克分子消光系数
远较 v^ ,在 325n m 处的低川 , 为得到合适的响应 , 故
调至 2 92n m 处检测 。 有在 4 50n m 检测 压胡萝 卜素的
报道川 , 但在本实验流动相为乙睛一四氢映喃体系条
件下 , 压胡萝 卜素在 4 5 0n m 处的光吸收仅为它在
4 3 6 n m 处的 5 4夕石, 所以调至 4 3 6n m 处检测 。
初始流速用 .0 s m t / m in 能改善生物样本中 v^ 1
与其相邻干扰峰的分离以及减小 V D Z和 v o 3之间的叠
峰程度 。 在柱效高的情况下初始流速可用 1 . om l/
m in
. 待 v 。 出峰后即将流速升至 2 . o m l/ m in , 色谱分
析一次时间近 20 分钟 。
用 se p一 aP k is il ca 柱 处理样品的优点是预处理步
骤简单 、快速 、 回收率高和杂质峰干扰少 ;缺点是进口
预处理柱价格昂贵 , 且只能一次性使用 。
分离脂溶性维生素或 卜胡萝 卜素常用的流动相
为甲醇川 、 甲醇 一水川 、 甲醇 一异丙醇 , 了〕、 甲醇一二氯甲
烷闭和 乙睛 一 二氯甲烷川体系 。 用甲醇体系会使峰形
展宽 . 对 v E 影响尤大川 , 用 乙睛能明显改善上述现
象川 ,在流动相中加入二氯甲烷能改善低极性组分的
溶解性能 4j[ 。 我们曾使用过乙睛 一二氯甲烷体系 ,但柱
压太高 , 改用乙睛 一四氢吠喃体系后既有上述体系的
优点 , 且柱压明显下降 , 又能同时分离 、检测脂溶性维
生素和 冬胡萝 卜素 。
我们测得牛乳中 v A , 、 v o 3 、 V E 和 卜胡萝 卜素的含
量分别为 1 . 1 4 士 0 . 1 9 、 0 . 2 8土 0 . 05 、 9 . 3 5 士 0 . 7 3 和
1
.
31 士 0 . 3 1 0 9 / g 乳脂 (均值士标准误差 . n ~ 6 ) ,未能
检测出 v D Z , 与文献报道的结果困基本吻合 。 关于 用
反相 H P L c 一紫外检测法分析脂溶性生素和 冬胡萝 卜
素的优越性已有评论比 3〕 , 本文不再赘述 。
参 考 文 献
巨1」W . J . rD ` k e u e t a l . , e l加 . c恤m . , 2 9 , 1 0 4 2 ( 19 8 3 ) .
〔2〕D . W . N i e r e n be r s , D . c . L心 s t e r . , J . C hr o am t喂 . , 3 4 5 , 2 7 5
( 19 8 5 )
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[ 3」赵鹏 、 何崇乐 、李 杰 、 陈俊玲 ,色谱 , 5 , 4 5 ( 1 9 5 7 ) .
[魂〕卓海通 ,色谱 , 5 , 3 1 3 ( 19 5 7 ) .
〔5」王玉梅 、 唐品志 、王善莲 , 色谱 , 2 , 2 09 ( 19 5 5 ) .
〔6〕M . aZ ak r逗 , K . s加讲o n , J . e h r o m a t叩 . , 17 6 , 10 9 ( 1 9 79 ) .
[ 7〕黄向东 、 李振宇 ,色谱 , 7 , 2 4 0 ( 2 9 5 9 ) .
[ 8〕秦洪万 主译 , 《油脂化学与工艺学 》 , 轻工业出版社 . 北
京 , P . 3 40一 3 4 2 , 1 98 9 .
(收稿日期 : 19 9 0 年 8 月 2 2 日 )
T h e D e t e r m l n a t i o n of t h e F a t
一
S O lu b l e V i ta m 血协 a n d
卜 C a r o t e ne in M i】k by H hlg eF rI 0 r ma n e e U q u id
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t o g r a p h y (H P L C ) ) ,e 1百’e汉脚 , L必 iL a nd 众 2勿自翻夕,
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P r OC
e d u r e in v o l v ed sa m P l
e n r e Pa r a t i o n w i th se 卜 P a k s i l ica
e a r t r id g e a n d d e et r m i
n a t i o n b y H P LC
一
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.
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o 1 0 0 0 n g
w e r e sa t i s fa e t o r y ( Y 二 0 . 9 9 4 3一 0 . 9 9 9 8 , n = 6 ) , T h e
e oc f f i e i e n ts o f v ar i a t i o n in r e te n t io n t ime
s a n d pe a k a r e as
w e r e 0
.
8一2 . 7 ;石. T h e C hr o ma t o g r a P h ie co n d i t i o ns a :一 e
bt i e f l y d isc u s e d
.
用反相液相色谱法从肖石蚕五蕊花中
分离环烯醚单菇类化合物 `
黎永献
( 西南农业大学 ,重庆 , 6 3 071 6)
天然产物单菇类中除熟知精油中的普通单菇外 .
环烯醚单菇类 ( ir do ids )则鲜为人知 。 自 1 9 6 3年 Br igs
等 lj[ 提出 ir id io ds 一词到七十年代才引起人们的重视
和兴趣 , 这不仅由于这类单赌是许多民间药用植 物
的活性成分 ,而且还提供了菇类和生物碱结构间的联
系 。 到 80 年代为止 已知这类单菇就有 258 种 2[] 。 当前
对它的研究方兴未艾 。
玄参科 (& 刊户场犷妇怕叨 )中不同属 、 种的植物中多
含这类单菇 ,有的还含有生物碱〔3一幻 。 本文将报道从
玄参科肖石蚕五蕊花 ( eP ns et m on et u cr io des )中分离鉴
, 本文系作者在美国 oC lor 阂。 州立大学化学系作访问学者时的部分研究工作
·
4 2 2
·
定的三种环烯醚单掂普和一种糖昔的初步结果 。
R
r 二 H
H 0
R Z
二
Ho公八/ CO - 。 。 o九七/O H
、 ` 产 、O H
。钾
RO o gl u 卜 0八/ “O -
R , : 祀合物 1 . R : : 化合物 2 , R 3 : 化合物 3 . 末者为化合物 4 。
实 验
(一 )实验材料
试样由 C o l o r a d o 少卜}立大学化学系 S te r m i t z 教授
于 1 9 8 8 年提供全植株 (包括花 )的风干磨碎样 。
( 二 )分离
首先用和不用锌粉还原进行小量 ( 1 09) 试验川 ,
并在硅胶薄层色谱 仁检查 (显色剂 : 茵香醛 一硫酸乙醇
溶液 和氯铂酸 一碘化钾溶液 ) . 结果皆有粉红一棕色点
而无紫色点 , 说明试样中有环烯醚单菇昔而无生物
碱 。
1 0呢 试样用 0 . 8L 己烷浸泡过夜 , 试样过滤后放
置至干 ,再用 3 火 0 . 7L 甲醇浸泡三次过夜 , 滤后合并
提取液在 45 ℃旋转减压蒸馏器中蒸馏至干 , 得残留
物 2 4 9 。 将残留物溶于 l o o m l 水中 , 用 4 x z o om l 乙醚
洗涤 , 去除有色物质等 。 水溶液分少量加入旋转减压
蒸馏器中蒸馏至干 。 残留物溶于 75 而 甲醇中过夜 , 滤
去不溶物 。 滤液再减压蒸 干得粗环烯醚单菇昔浅黄
褐色混合物 2Og( 产率 20 %干重 ) 。 用反相硅胶板 ( lC :
硅胶板 , M e o H / H ZO ~ l 厂1 , v 勺 , 显色剂同前 )检查有
粉红色一 棕色斑点 8个 。
0
.
59 粗单菇昔用快速反相液相色谱 (F Lc) 川 ( cl 。
反相色谱硅胶 , 6 0一 2 00 目 . 柱 2 . o x l 7 . o e m ,洗脱剂
M e o H / H Zo = l /一 , 2 0个流分 , 每流分 1 o m l )分离结果
为 : F , ( 7 3m g . R , : 0 . 5 5 , 0 . 6 5 )主含 R , : 0. 8 5 的化合物
l
。
F Z ( 1 5 7 m g
,
R
, :
0
.
8 5
,
0
.
6 5
,
0
.
5 7
,
0
.
5 3 )为混合物 。
F 3
. ` ( 1 0 3m g
,
R ,
:
0
.
68
.
0
.
5 7
,
0
.
5 3
,
0
.
4 7
,
0
.
3 7
,
0
.
3 0 )
为混合物 。 F S ( 1 5 . 6m g , R , : 0 . 谧7 . 0 . 3 0 )主含 R , : 0 . 3 0
化合物 2 。 r 卜 : 。 ( 1 3m s , R , : 0 . 23 )纯化合物 3 。 F l卜 2。为
其他物质 。
前流分 F 3 . ; ( 1 0 3m 8) 混合物再用反相 H PcL 分离
(砚 Ckm a n 3 3 1 型 H P Le ,训 2 5 4n m 检测 , 反相分析柱
dp
,
5。 , 4 . o m m 1 . d . 只 2 5 e m , 1 . l m l / m in , 1 7 . 2妞。 ;反相
制备柱 d p s o . 1 0m m l . d x 2 5 e m , 3 . 9m 一/ m i。 , 2 9 . 3
k p a
. 洗脱剂皆用M e o H / H : 0 二 l / l )结果为 : H , ( 1 0 . 5
m g
,
R
, :
o
·
6 8 )纯物 ; H Z ( 3 0 . 6m g , R , : 0 . 5 7 , 0 . 5 3 )混合
物 ; H 3 ( 1 8m g , R , : 0 . 4 7 )纯物 ; H ; ( s m g , R , : 0 . 3 7 )纯物扩
H S ( l l m g )混合物 ; H 6 ( 1 3m g , R , : 0 . 3 0 )纯化合物 2 。
前 流分 H : ( 30 . 6 m g ) 混合物进一步再用反相
H P CL 分离 (仅变化洗脱剂 M eo H / H Zo 一 4 / 6) 结果为 :
H与( 1 3m g . R , : 0 . 5 7 )纯化合物 ; H石( 15m g , R , : 0. 5 3 )为
纯化合物 4 。
( 三 )鉴定
测定各种分离化学成分的 ’ H一 N M R , 经过解析
并与文献化合物比较 , 其数据完全 一致地确定了三种
环烯醚单菇普和一 种糖昔的结构 。
化合物 1 : 桃叶珊瑚 昔 ( a uc u b sn ) R , : 0. 5 5 , ` H -
N M R 数据 ( 2 7 0M H z B R LrK ER , C D 3o D )与文献 [ 9〕化
合物完全一致 (数据略 , 见文献「叼) 。
化合物 2 : 反一 1 0 一对 一经基桃叶珊瑚昔桂皮酸醋
( t r a n s
一
1 0
一
P
一
O H
一 e in n a m o y la u b i n ) R , : 0
.
3 0
, ’
H
一
N M R
( 2 7 0卜I H : B R U K E R , c D 3 0 D )数据与文献 〔10 〕化合物
完全吻合 (数据略 , 见文献 [ l 。 ] ) 。
化合物 3 : 反一桃叶珊瑚普桂皮酸酷 (t r an d 一 1 0 -
c i n n a m o y l a u e u b l n ) R
, : 0
.
13
, ’
H
一
N M R ( 2 7 0M H z
B R U K E .R C D
3 o D )数据与文献〔1 1」化合物完全 一 致
(数据略 , 见文献【1 1 ] ) 。
化合物 4 : 毛蕊糖 普 ( v e r b as e o s , d e ) . R , : 0 . 5 3 , , H -
N M R ( 2 7 0M zH B R U K E R
,
C D 3o D )数据与文献 [ 1 2〕化
合物比较完全吻合 (数据略 ,见文献〔1 2」) 。
讨 论
试样中除三种环烯醚单菇昔和一种糖昔被分离
鉴定外 , 其余几种虽用 H P cL 分离但含量少 ,未能进
行系统鉴定 ,有待进一步研究 。 从分离结果得知 , 环
烯醚单菇昔 R , 相差 0 . 10 左右 ,若用一般色谱法分离
困难 。 看来 H P cL 是分离环烯醚单菇昔的最有效的方
法 。
致淤 本文承 S , r nr 沈 z 教授的支持翔助并提
供买验村料 , 谨此致谢 。
色谱 1 9 9 2年第 1 0卷第 4期 243 ·
1 1习D J u ni or· p竺。 : ` a, M de · , 4 3 , 3 4 ( 19 8 1 ) .
参考 文 献
〔l 〕 L . H . B r i脚 e , a l . , T e t r a h e d r o n L e : t . , 6 9 ( 2 9 6 3 )
〔2〕 L . J . E x一N o g , r e t a i . , J . N a , . P r司 . , 4 3 , 6 4 9 火 29 8 0 ) .
[ 3 〕 R . L . A r s l a n , a o e t a l . , J . N a , . p r泪二 4 8 , 9 5 7 ( 19 8 5 ) .
〔4 ] F . R . s t e r m : : 2 e t a l . , B 工o e h e m . s y s t e m . E e o l . , 1 4 . 4 9 9
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仁5二0 . R . G a r d n e r e t a z` , J . N a r . P r记 . , 5 0 , 魂8 5 ( 19 8 7 ) .
〔6 〕 F . R . s t e r m i r Z e t a l . , J . e比 m . E e o l . , 14 , 4 3 5 ( 19 8 8 ) .
〔7」K . M . L ` Em详 r e u r e t a l . , J . N a t . P r司二 5 2 , 36 5 ( 2 9 8 9 ) .
[ 8」W . e . s t i l l e t a l . , J . O r g . e h e m . , 4 3 , 2 9 2 3 ( 19 7 8 ) .
〔9〕 M . R . R o b y e t a l , J . N a t . P r记二 刁7 , 8 4` ( 1 9 8 4 ) .
[ 1 0〕 Ias o K o u n o e t a l . , p h y to e h e m is t r y , 2 7 , 6 11 ( 1 98 8 ) .
「一? ] B . G e r in s e t a l . , J . 吻 t . P r浏 . ,石。 , 1 0 4 5 ( x , 8 7 )
(收稿 日期 : 2 9 9 0年 7月 2 4 日 )
5 0 「n e Ir ld o lds G lu e佣 id se f r o 们。 P e sn et m o n
T e u e r i o ld eS b y R e v e n祀 d 一 P hase C h
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t o g r a Ph y L之
}饭笋脚 , & 刃泛触进够岌 月尹反别左2护司 饰 , 柳召交y ,已切刀卯动g , 6 3 0 7 1 6
T h r e e i r id o l d s g lu e o s id es
, a u e u b in
, t r a n s 一 1 0一 P 一 O H -
e i n n a m o y la u e u b in
,
t r a n s 一 1 0
一 e in n a m o y la u e u b in a n d o n e
g lu e os id e
, v e r恤 s e o s id e w e r e ios al t de f r o m P . T e u e r i o i d e s
(
J
, , 。夕版必l r妇洲犯 ) . T h e i r s t r u ct u r es w e r e p r o po s图 b y ’ H -
N M R S详 e t r a i n e o m pa r i s o n w i th l i t e r a t u r es [9一 2 2〕.
反相离子对色谱用于尿液中假尿普和肌醉的测定
李永 田 王 绍绅 仲 宁 杨传和 朱丽阳
(沈阳军区 2 0 2 医院儿科 ,沈阳 , 11 0 0 0 3 )
假尿许 ( P U )可作为钟瘤的生物学标志义 . 并可
据其变化监测疗效川 。 以往测定血及尿液中 P U 需经
笨硼酸亲合色谱预处理样品 [ ` ’ j . 操作繁琐费时 。 另
外 . 对分析结果必 须求出 P U 与肌配的比值才有意
义 .j[ ` 口, 且需两种不同方法检测两种物质的含量 ,所得
结果的精确性较差 。 本文提出 , 标本不经亲合色谱预
处理 , 可用反相离子对色谱同时测定尿液中 P U 和肌
配含量 。
相 : 0 . 0 5m o z / L N a ZH p o ` , p H 5 . 8 , 3 % 甲 醉 , 0 ·
O05 m of / L 辛烷 磺 酸钠 , 流速 l m l/ m in , 检测 波 长
2 5 On m
.
A U F S 为 () . 0 7 。
( 三 )样品处理
收集肿瘤病人及正常人任意 一 次尿液 , 4 C 低温
离心 4 3 , 0 0 0 9 Z om in , 0 . 4 5协滤膜过滤 , 一 7 0 一C 冻存 ,
测前用流功相稀释 20 一80 倍 , 进样 2伽 I , 外标法定
量 。
实 验 部 分 结果和讨论
(一 )仪器与试剂 ( 一 )尿中 Pu 和肌酥的鉴定
eB ck m
a n 犯6 泵 . 16 6 紫外检测器 , 427 积分仪 。 尿中 P u 和肌配的分离如图 1 所示 , 对二者的鉴
试剂 : P u 为 is g m a 产 品 ; 月几酥 . E M K 产品 ; N a Z H P o ; , 定 , 除保留时间和标准相同外 . 又分析了尿液和标准
北京化工厂 , 分析纯 ; 甲醇 ,沈阳试剂 J一 , 分析纯 : 辛烷 品中两种物质在不同波长的吸光率 , 据所测峰面积求
磺酸钠 , 天津试剂二 ) 一 。 出 2 8 0 / 2 5 4 , 和 2 7 0 / 2 5 4 的比值 , 结果 与文献报告一
(二 )色谱条件 致 〔j 〕 (见表 1 ) 。
分离柱 : U l tar s p h e r e o DS 2 5 丫 0 . 4 6 e m 更. d . , 流功
表 l 标准品和尿中 P U 和尿醉在不同波长所测峰面积比
标准品 ( n 一 4 ) 尿液 ( , 1一 3 )
P u 肌醉 P u 肌醉
2 8 0厂2 5 4 0 8 0士 0 . 1 1 0 . 0 1士 0 . 0 0 1 0 . 7 8士 0 . 06 0 . 0 1士 0 . 0 0 9
2 7 0厂2 5凌 1 . 14士 0 . 0 9 0 . 0 4士 0 . 0 0 8 1 . 17士 0 . 09 0 . 0 4士 0 . 0 18
(二 ) 回收率试验 因是 PU 后杂峰干扰 ,解决的办法是调整缓冲液 p H
测四份尿样求出 P u 平均回收率为 8 1 . 37 士 值和甲醇浓度 , 改善 P U 与杂峰的分离度 。 我们认为
5
.
07
, 变异系数为 6 . 2% , 肌醉平均回收率为 I n . 7 p H 5 . 8 , 加 3%甲醇较为适宜 ,与 aP lim as no 法略有区
士 .6 7 3 ,变异系数为 6 . 0写 。 影响 P U 回收率的主要原 别阁 。