全 文 ：培养物挑取少量菌苔接种到真菌培养基中于 20 ～
25℃培养 24 h 后作为原菌液。用灭菌生理盐水进
行10 倍系列稀释 ,使每 1 ml中含活菌数约 1000
个 ,作为实验菌液。
2.2 　供试液的制备　将外用紫金锭与营养肉汤以
1∶2的比例置于灭菌匀浆杯中 ,开动电动匀浆机将其
打碎搅匀 ,制成每 ml营养肉汤中含紫金锭 500 mg
的溶液作为供试液。
2.3 　实验方法〔1〕　用营养肉汤(白色念珠菌用真
菌培养基)以对倍稀释法对供试液进行逐管稀释 ,使
供试液浓度在每管中呈对倍递减。制成每组浓度依
次为 500 、250 、125 、62.5 、31.2 、15.6 mg/ml的供试
液若干组 。
于每组供试液的各抑菌实验管中 ,分别加入相
应已稀释好的实验菌液 0.1 ml。同时作阴性对照
和空白对照。然后置 36±1℃培养 24 h 。取出后 ,
对各试验管划线于营养琼脂平板上再置 37℃培养
24 h(白色念球菌置 20 ～ 25℃后划线于真菌琼脂培
养基上再置 20 ～ 25℃培养 24 h),观察有无菌落生
长。阴性对照不长菌 ,空白对照长菌 。则实验方法
成立 。各菌株杀菌和抑菌情况见表 。
3 　讨论
3.1 　对试验菌株的最低抑菌浓度分别为:致病大
肠杆菌 250 mg/ml ,金黄色葡萄球菌 、铜绿假单胞菌
和沙门氏菌 62.5 mg/ml ,白色念珠菌 125 mg/ml。
3.2 　由于致病大肠杆菌〔1〕在肠内能直接导致肠道
感染 ,在肠外可引起肠外的组织和器官感染 ,如肾
　表 外用紫金锭的抑菌实验结果
药液浓度(mg/ ml) 致病大肠杆菌 沙门氏菌 金黄色葡萄球菌 铜绿假单胞菌 白色念珠菌
500 - - - - -
250 - - - - -
125 + - - - -
62.5 + - - - +
31.2 + + + + +
15.6 + + + + +
　　注:+试验管长菌;-试验管未长菌
炎 、胆囊炎 、胆结石 、膀胱炎 、肺炎等;沙门氏菌〔1〕属
同是肠杆菌科的重要致病菌属 ,它侵害肠道 ,可引起
肠炎;沙门氏菌为肠杆菌的主要菌属 ,是引起人类细
菌性痢疾的病原菌 。金黄色葡萄球菌〔1〕能产生多
种毒素及酶 ,这些毒素物质是它致病的物质基础 ,能
引起局部及全身化脓性炎症 ,严重时可发展成为败
血症及浓毒血症 ,是人类化脓性感染中最重要的病
原菌 。铜绿假单胞菌〔1〕是目前各种医院内感染最
广泛 ,最严重的感染菌之一。由于紫金锭对这些致
病菌均有不同的抑制和杀灭作用 ,从而验证了它具
有对痈疽疮毒 、虫咬损伤 、无名肿毒等有独到的疗
效 ,为紫金锭的体内试验和临床疗效研究提供了理
论依据 。
参 考 文 献
1 　马绪荣.药品微生物学检验手册.北京:科学出版社 ,
2000∶86～ 197
(2004-08-02收稿)
·制剂与质量·
毛茛中白头翁素的制备工艺研究
周　滢1　胡世玺2　胡世卿2　梁光义1
(1.贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室 ,贵阳 550002;2.贵州省胡三萜药业有限公司 , 贵定
551300)
　　摘要　目的:研究白头翁素的制备工艺 , 以适应工业大生产的需要。方法:单因素考察 NaCl浓度 、萃取次数对
原白翁素粗品收率及干燥温度对白头翁素纯度的影响 ,并根据理化性质和多种波谱分析(UV , IR , 1HNMR , 13CN-
M R, 1H-1H COSY ,HMQC ,HMBC)对其进行结构鉴定及利用高效液相色谱进行纯度测定。结果:最佳制备工艺为
NaCl浓度为 15%, 萃取次数为 4 次 , 60℃减压(0.08 Mpa)干燥。白头翁素纯度达 99%, 收率达 0.72‰, 质量可控。
结论:本制备工艺较为简便 , 对白头翁素大工业生产提供参考。
关键词　毛茛　白头翁素　制备工艺　单因素考察
　　毛茛 科植 物毛茛 (Ranunculus japonicus
Thunb.)生长于河沟 、池沼 、水堤旁及阴湿的草丛
中 ,全国大部分地区有分布 。根入药 ,鲜根含原白头
翁素 ,在干燥情况下易发生分子重合生成无刺激作
·762· 中药材第 27 卷第 10 期 2004年 10 月
DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2004.10.027
用的结晶性白头翁素(Anemonin , C10H8O4)〔1〕 ,其对
豚鼠离体器官(支气管 、回肠)及整体试验均有抗组
织胺作用;对固紫染色阳性及阴性细菌 、酵母菌 、原
虫类均有相当强的抗菌作用〔2〕 。本文在综合文献
资料提取方法的基础上 , 单因素考察了三个因素
(NaCl浓度 、萃取次数及温度)对原白头翁素收率及
白头翁素纯度的影响 ,得出了提取白头翁素的最佳
工艺 ,从而为白头翁素的大工业生产提供参考 。
1 　仪器 、材料与试剂
1.1 　仪器　XT-4双目显微熔点测定仪(北京泰克
仪器有限公司);INOAV-400型超导核磁共振仪(带
纳克微量探头 , Varian 公司产品);VECT R22型傅
立叶变换红外光谱仪(Bruker 公司);HP5973 直接
进样质谱仪(HP 公司);HP-1100型高效液相色谱仪
(HP 公司)。
1.2 　材料与试剂　毛茛采自贵州贵定 ,鉴定人为
陈德媛研究员(贵阳中医学院);白头翁素对照品 ,纯
度为 98%(中国科学院上海药物研究所植化室);薄
层层析用硅胶 G(青岛海洋化工厂);甲醇 、CDCl3 为
色谱纯 ,其它试剂均为分析纯 。
2 　实验方法
2.1 　白头翁素的制备方法　本文在文献〔3〕的基础
上 ,单因素考察 NaCl浓度 、萃取次数对原白头翁素
粗品收率及干燥温度对白头翁素纯度的影响 。
2.2 　原白头翁素粗品收率测定　精密量取毛茛的
水蒸气蒸馏液 V1 ,经过制备得到原白头翁素粗品 ,
经真空干燥器 60℃减压干燥 36 h 后精密称重为
M 1 ,原白头翁素粗品收率=M1/V1×100%。
2.3 　白头翁素纯度的测定
2.3.1 　对照品溶液的制备:精密称取经真空干燥
器 60℃减压干燥 36 h的白头翁素对照品 4.20 mg ,
置5 ml量瓶(校正体积为 4.9766 m l)中 ,以无水乙
醇溶解并定容至刻度 ,摇匀 ,得 1 ml含 0.8439 mg
的溶液 ,即得。
2.3.2 　供试品溶液的制备:精密称取经真空干燥
器 60℃减压干燥 36 h的白头翁素(自制)4.20 mg ,
按“对照品溶液的制备”项下操作 ,即得 。
2.3.3 　色谱条件:分析柱:Hypersil C18柱(5 μm ,
4.6×250 mm);流动相:甲醇-水(40∶60);流速:0.8
ml/min;柱温:30℃;检测波长为 220 nm 。理论塔板
数按白头翁素计算应不低于 1500。
2.3.4 　测定方法:分别精密吸取上述对照品溶液
和供试品溶液各 20 μl注入高效液相色谱仪 ,在上
述色谱条件下测定白头翁素峰面积 ,由峰面积归一
化法处理得到供试品纯度 。
3 　结果与讨论
3.1 　单因素考察
3.1.1 　NaCl浓度的考察:以原白头翁素粗品收率
为指标 ,取水蒸气蒸馏液 100 ml四份 ,分别加入适
量 NaCl , 使其浓度(重量 g/萃取用水蒸气蒸馏液
ml)依次为 5%、10%、15%、20%,计算原白头翁素
粗品收率 ,结果见表 1。由表 1 可知 , NaCl以 15%
为最佳浓度 。
　表 1 NaCl浓度的考察
实验号 1 2 3 4
NaCl浓度(%) 5 10 15 20
原白头翁素粗品收率(%) 0.19 0.20 0.22 0.20
3.1.2 　萃取次数考察:以原白头翁素粗品收率为
指标 ,取浓度为 15%NaCl的水蒸气蒸馏液 100 ml
四份 ,以等量氯仿萃取 5次 ,计算原白头翁素粗品收
率 ,结果见表 2 。由表 2可知 ,萃取 5次与萃取 4次
收率相近 , RSD=1.65%,为了降低生产成本 ,选择
萃取 4次。
　表 2 萃取次数的考察
萃取次数(次) 1 2 3 4 5
原白头翁素粗品收率(%) 0.14 0.18 0.21 0.25 0.26
3.1.3 　干燥温度考察:以白头翁素纯度为指标 ,取
萃取好的样品四份 ,依次在不同温度下减压(0.08
M pa)干燥 ,计算样品纯度 ,结果见表 3 。
　表 3 干燥温度的考察
温度(℃) 室温 60 80 100
纯度(%) 99 99 51 变质
　　由表 3可知 ,室温和 60℃减压干燥对白头翁素
纯度均无明显影响 ,为了提高提取效率 ,选择 60℃
为最佳干燥温度。
3.2 　白头翁素鉴定 、纯度与收率测定
3.2.1 　鉴定:性状:无色透明块晶;熔点:157 ～
158℃;分子量:192.16;分子式:C10H8O4;显色:在荧
光灯下显色或以 2 ,4-二硝基苯肼喷后 80℃烘烤 30
min显紫色。波谱测定与解析:UVλEtOHmax nm(logε):
220(3.99);IRυKBrmaxcm-1:3100(-CH2-), 1630 和 3020
(-CH =CH-), 1778(S , 不饱和 γ-内酯), 1250(=
CO);MSm/e:192(M+);1HNMR(CDCl3)δ:2.4-2.6
(4H , m ,-CH2-CH2-), 6.14(2H ,d ,-O-C-CH =), 7.73
(2H , d ,-O-C-CH =)。13CNMR(CDCl3)δ:23.76(C-
5),90.26(C-4), 121.00(C-2), 153.3(C-3), 170.90
(C-1)。以上波谱解析结果与白头翁素的化学结构
及文献报道理化数据相符。
·763·中药材第 27 卷第 10期 2004 年 10 月
3.2.2 　纯度与收率测定:本品采用高效液相色谱
法 ,归一化法处理得到样品含量 ,结果表明白头翁素
供试品纯度为 99%,收率为 0.72‰(g/g)。
3.2.3 　在实验过程中发现 ,白头翁素在有机溶剂
中的溶解度很低 ,造成提取率低下 ,建议今后在对白
头翁素的研究中提高其在有机溶剂中的溶解度 ,以
提高提取率 ,从而适应工业化大生产的需求。
参 考 文 献
1 　刘振国 , 等.锡林郭勒盟草原毛茛科药用植物资源概
况.中国民族民间医药杂志 , 2001 , 49∶103
2 　《全国中草药汇编》编写组.全国中草药汇编(上册).北
京:人民卫生出版社 , 1996∶202
3 　吕丹.威灵仙的药学研究.海峡药学 , 1999 , 11(4)∶7
(2004-03-16收稿)
Study on Peparation of Anemonin from Ranunculus japonicus Thunb.
Zhou Ying1 ,Hu Shixi2 ,Hu Shiqing2 , Liang Guangyi1
(1.The Key Lab of Chemistry for Natural Products of Chinese Academy of Sciences in Guizhou Province , Guiyang 550002;
2.Guizhou Husantie Pharmaceutical Limited Company , Guiding 550013)
Abstract　Objective:To study the preparation of anemonin from Ranunculus japonicus Thunb.Methods:The best conditions
of preparation for anemonin were optimized with mono syllabic experiments , such as using the purity of anemonin as a index for best
selection of dying tempreture and the ex traction ratio as another index fo r the concentration o f NaCl and extracting times.The struc-
tures w ere clucidated on the basis of UV , IR , 1HNMR , 13CNMR , 1H-1H COSY ,HMQC and HMQC spectra and chemical reactions
and the purity is measured by HPLC.Results:The best conditions for the ex traction techniques of anemonin w ere 15%NaCl , four ex-
tracting times , 60℃ (0.08 Mpa) for drying.The purity of anemonin was 99% and yield rate was 0.72‰.Its quality w as
controlled.Conclusion:The preparation techniques are feasible and convenient.
Key words　Ranunculus japonicus Thunb;Anemonin;Preparation techniques;Monosyllabic experiments
柴胡提取工艺的研究
赵　磊1　刘本亮1　吴福祥1　陶兰萍1　刘　剑2
(1.甘肃省定西市药品检验所 ,定西 743000;2.甘肃省定西市安定区人民医院 ,定西 743000)
　　摘要　以柴胡中总皂苷和浸膏率为考察指标 , 应用正交设计优选柴胡的提取工艺 , 乙醇浓度 、乙醇用量 、回流
提取次数 、提取时间为影响因素 , 每个因素取三个水平。结果表明 , 最佳提取条件为:80%乙醇用量为药材量的 4
倍 ,回流提取 4 次 , 每次 60 min , 优选得到的工艺稳定可行。
关键词　柴胡　正交设计　提取工艺
　　柴胡为伞形科植物柴胡(Bupleurum chinense
DC.)和狭叶柴胡(B.scorzonerifolium Willd.)干燥
根。具和解表里 、疏肝解郁之功效 ,药理研究显示其
有解热 、镇痛 、镇静 、抗惊厥〔1〕、保肝 、抗炎 、抗溃疡 、
提高免疫功能等作用 ,临床上用于治疗感冒发热 、寒
热往来 、胸肋胀痛 、月经不调 、子宫脱垂 、脱肛等
症〔2〕 。柴胡总皂苷是柴胡的主要有效成分 ,对整个
药物的疗效起着举足轻重的作用 ,为确保制剂疗效 ,
提高药材的利用度 ,笔者对柴胡的提取工艺进行了
研究 。
1 　材料和仪器
柴胡采集于本市各县栽培基地 ,经兰州医学院
药学系赵汝能教授鉴定为柴胡(B.chinense DC.),
柴胡皂苷 a 对照品(购自中国药品生物制品检定
所),WFZ800-D2 可见-紫外分光光度计(北京第二
光学仪器厂), 电热恒温干燥箱 , 电光分析天平
(TG328B型),数字恒温水浴锅 ,所用试剂均为分析
纯 。
2 　方法与结果
2.1 　正交试验设计　用正交试验优选最佳提取工
艺 ,根据预试验结果 ,选用影响提取效果的四个主要
因素:乙醇浓度(A),乙醇用量(B),提取次数(C)和
回流提取时间(D),每一个因素各选三个水平 ,见表
1。选用正交设计表 L9(34)安排试验 ,结果见表 2。
每次试验均重复 3次。考察指标为柴胡总皂苷含量
(g/100g 生药)和浸膏率(g/100g生药)。
2.2 　样品的提取　称取柴胡粗粉 40 g ,按表 2的
设计进行回流提取 ,趁热过滤得滤液 ,将滤液均分为
·764· 中药材第 27 卷第 10 期 2004年 10 月