全 文 ：中国药房 2015年第26卷第33期 China Pharmacy 2015 Vol. 26 No. 33
水曲柳（Fraxinus mandschurica Rupr.）属木犀科梣属植
物，其树皮具有抗炎镇痛之功效[1]。近年来由于大量的砍伐，
水曲柳资源日渐减少[2]，水曲柳皮也不易获得。经研究发现，其
树叶中主要成分除了香豆素类，还含有苯乙醇苷类等成分[3-4]。
目前未见有关水曲柳叶中苯乙醇苷类成分（如荷包花苷A）含
量测定的报道。为此，笔者建立了水曲柳叶中荷包花苷A的
高效毛细管电泳（HPCE）含量测定方法，以为该药材的新选择
及质量标准的制定提供一定的参考依据。
1 材料
1.1 仪器
G1600A型毛细管电泳仪，包括二极管阵列检测器、1200
色谱工作站（美国Agilent公司）；JA12002型电子天平（上海恒
平科学仪器有限公司）；LE104E 型电子天平（美国
Mettler-Toledo公司）；KQ-400KDE型超声波清洗器（昆山禾创
超声仪器有限公司）。
1.2 试剂
荷包花苷A对照品由本课题组从水曲柳皮中分离纯化，
经核磁共振氢谱（1H-NMR）和核磁共振碳谱（13C-NMR）鉴定结
构 [5]，经高效液相色谱（HPLC）峰面积归一化法测定纯度＞
99％；硼酸盐缓冲液（美国Agilent公司，pH 9.3）；试验所用试
剂均为分析纯，水为去离子水。
1.3 药材
水曲柳叶（共 3批，No1、No2、No3）采自长白山，经吉林大
学张静敏教授鉴定为真品，标本存放于长春理工大学生命科
学技术学院。
2 方法与结果
2.1 色谱条件[6]与系统适用性试验[7]
毛细管：未涂层熔融石英毛细管（50 cm×75 μm）；缓冲液：
硼酸盐缓冲盐（20 mmol/L，pH 9.3）；分离电压：20 KV；压力进
样（进样压力为50 bar，进样时间为3 s）；检测波长：350 nm；柱
温：30 ℃。开机后依次用 1 mol/LNaOH冲洗 5 min，水冲洗 3
min，硼酸盐缓冲液冲洗 5 min，然后进样；每次进样之间用 1
mol/LNaOH冲洗 1 min，水冲洗 1 min，硼酸盐缓冲液冲洗 2
min。在上述色谱条件下进样测定，理论板数以荷包花苷A峰
计不低于3 000，各成分基线分离良好，详见图1。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液 精密称取荷包花苷A对照品 5 mg，置于
Δ基金项目：吉林省科技重点科技攻关项目（No.20140204052YY）
＊讲师，硕士生导师，博士。研究方向：中药新药研发。E-mail：
jychenzxcv@163.com
HPCE法测定水曲柳叶中荷包花苷A的含量Δ
陈玉娟＊，王 巍，李成玉，张佳佳，杨 业，李步步（长春理工大学生命科学技术学院，长春 130022）
中图分类号 R917 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2015）33-4709-02
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2015.33.35
摘 要 目的：建立测定水曲柳叶中荷包花苷A含量的方法。方法：采用高效毛细管电泳法。毛细管为未涂层熔融石英毛细管，
缓冲液为硼酸盐缓冲盐（20 mmol/L，pH 9.3），分离电压为20 KV，采用压力进样（进样压力为50 bar，进样时间为3 s），检测波长为
350 nm，柱温为30 ℃。结果：荷包花苷A检测质量浓度线性范围为50～250 μg/ml（r＝0.999 7）；精密度、稳定性、重复性的RSD＜
3％，加样回收率为97.48％～102.08％，RSD为1.12％（n＝6）。结论：该方法操作简便、重复性好，可用于测定水曲柳叶中荷包花苷
A的含量。
关键词 水曲柳；叶；荷包花苷A；高效毛细管电泳法
Content Determination of Calceolarioside A in the Leaves of Fraxinus mandschurica by HPCE
CHEN Yu-juan，WANG Wei，LI Cheng-yu，ZHANG Jia-jia，YANG Ye，LI Bu-bu（School of Life Science and Tech-
nology，Changchun University of Science and Technology，Changchun 130022，China）
ABSTRACT OBJECTIVE：To establish a method for the content determination of calceolarioside A in the Leaves of Fraxi-
nus mandschurica. METHODS：HPCE was performed on the capillary of uncoated fused silica capillary，buffer solution of borate
buffered saline（20 mmol/L，pH 9.3），separation voltage of 20 KV by pressure injection（injection pressure was 50 bar with 3 s），
detection wavelength was 350 nm，and column temperature was 30 ℃ . RESULTS：The linear range of calceolarioside A was
50-250 μg/ml（r＝0.999 7）；RSDs of precision，stability and reproducibility tests were less than 3％，recovery was 97.48％-102.08％
（RSD＝1.12，n＝6）. CONCLUSIONS：The method is simple，good reproducibility，and can be used for the content determination
of calceolarioside A in the Leaves of F. mandschurica.
KEYWORDS Fraxinus mandschurica；Leaf；Calceolarioside A；HPCE
1086420－2－4
0 5 10 15
t，min
A
mA
U
15.012.510.07.55.02.50－2.5－5 0 5 10 15
t，min
B
mA
U
图1 高效毛细管电泳图
A.对照品；B.供试品；1.荷包花苷A
Fig 1 HPCE chromatograms
A.reference substance；B.test sample；1.calceolarioside A
1 1
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China Pharmacy 2015 Vol. 26 No. 33 中国药房 2015年第26卷第33期
50 ml量瓶中，用硼酸盐缓冲液溶解并定容，得每 1 ml含荷包
花苷A 0.1 mg的对照品溶液。
2.2.2 供试品溶液 取干燥的水曲柳叶 5 g，加 50 ml 80％乙
醇浸泡 30 min，超声（功率：250W，频率：40 kHz）提取 3次，每
次10 min，滤过，滤液备用；残渣重复提取1次，合并2次滤液，
减压浓缩得稠膏。稠膏加水 100 ml分散，再用 100 ml乙酸乙
酯分3次萃取；萃取完的水液用水饱和正丁醇100 ml分3次萃
取，合并正丁醇层，减压回收正丁醇；剩余物用乙醇 10 ml溶
解，取300 μl乙醇溶解液并加硼酸盐缓冲液稀释至1 ml，滤过，
取续滤液，即得。
2.3 线性关系考察
取对照品适量，加硼酸盐缓冲液稀释成质量浓度为 50、
100、150、200、250 μg/ml的系列对照品溶液。精密吸取上述系
列对照品溶液各适量，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰
面积。以荷包花苷A质量浓度（x，μg/ml）为横坐标、峰面积（y）
为纵坐标进行线性回归，得回归方程为 y＝64.024x－144.58
（r＝0.999 7，n＝6）。结果表明，荷包花苷A检测质量浓度线性
范围为50～250 μg/ml。
2.4 精密度试验
取“2.2.1”项下对照品溶液适量，按“2.1”项下色谱条件连
续进样测定 6次，记录峰面积。结果，荷包花苷A峰面积的
RSD为0.29％（n＝6），表明仪器精密度良好。
2.5 稳定性试验
取同一供试品（No.1）溶液适量，分别于放置 0、2、4、6、8 h
时进样测定，记录峰面积。结果，荷包花苷A峰面积的RSD为
2.3％（n＝5），表明供试品溶液在8 h内基本稳定。
2.6 重复性试验
精密称取同一批样品（No.1）适量，共 6份，按“2.2.2”项下
方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录
峰面积。结果，荷包花苷A峰面积的RSD为 2.4％（n＝6），表
明本方法重复性良好。
2.7 加样回收率试验
取已知含量的样品（No.1）适量，共 6份，分别加入一定质
量对照品，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下
色谱条件进样测定，计算样品含量，并计算加样回收率，结果
见表1。
表1 加样回收率试验结果（n＝6）
Tab 1 Results of recovery test（n＝6）
取样量，g
5.32
5.09
5.13
5.44
4.93
5.02
样品含量，
mg
7.283 1
6.968 2
7.023 0
7.447 4
6.749 2
6.872 4
加入量，
mg
1.000 0
1.000 0
1.000 0
1.000 0
1.000 0
1.000 0
测得量，
mg
8.257 9
7.949 2
8.002 3
8.431 2
7.735 9
7.893 2
加样回收
率，％
97.48
98.10
97.93
98.38
98.67
102.08
平均加样
回收率，％
98.78
RSD，
％
1.12
2.8 样品含量测定
取 3批样品各适量，分别按“2.2.2”项下方法制备供试品
溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，计算样品含量，结
果见表 2。
3 讨论
预试验中制备供试品时，与传统的加热回流和冷浸法比
较，超声提取法效果好、用时短；采用乙酸乙酯进行萃取，除去
了极性较低成分的干扰。对水曲柳叶中荷包花苷A测定干扰
最大的是香豆素类成分，本试验通过以下两个方面减少相关
成分干扰：（1）选用350 nm的检查波长，在此波长下，荷包花苷
A有最大吸收，而香豆素类成分吸收相对较弱；（2）在pH 9.3硼
酸盐缓冲液中，含量最多的白蜡树精苷呈中性，与溶剂峰的保
留时间一致，在6.6 min左右出峰；荷包花苷A可在此缓冲盐溶
液中电离成负离子，在11 min左右出峰，所以避免了白蜡树精
苷的干扰。
文献中测定苯乙醇苷含量多采用HPLC法 [8-10]，与HPLC
法比较，HPCE法不仅同样具有快速分析的特点，并且操作更
简单，而且所用缓冲液便宜易得、无毒、用量少。
综上所述，该法操作简便、重复性好，可用于测定水曲柳
叶中荷包花苷A的含量。
参考文献
[ 1 ] 严仲铠，李万林.中国长白山药用植物彩色图谱[M].北
京：人民卫生出版社，1997：339.
[ 2 ] 贾淑霞，赵妍丽，丁国泉，等.落叶松和水曲柳不同根序细
根形态结构，组织氮浓度与根呼吸的关系[J].植物学报，
2010（2）：174.
[ 3 ] Chen YJ，Zhang HG，Li X. Phenylethanoid glycosides fr-
om the bark of Fraxinus mandschurica[J]. Chem Nat
Compd，2009，45（3）：330.
[ 4 ] Drenkhan R，Sander H，Hanso M. Introduction of Mand-
shurian ash（Fraxinus mandshurica Rupr.）to Estonia：is it
related to the current epidemic on European ash （F.
excelsior L.）[J]. Eur J Forest Res，2014，133（5）：769.
[ 5 ] 陈玉娟，王会堂，张宏桂，等.水曲柳皮中化学成分的研究
[J].中国药学杂志，2009，44（15）：1 133.
[ 6 ] Karaźniewicz-Łada M，Danielak D，Główka F. HPCE an-
d HPLC methods for determination of clopidogrel and its
carboxylic acid metabolite in biological samples：a
comparative analysis[J]. J Liq Chromatogr RT，2014，37
（5）：620.
[ 7 ] 彭明丽，赵冠人，温筱煦.HPLC法同时测定茵栀黄颗粒
中黄芩苷、木犀草素和绿原酸的含量 [J].中国药房，
2015，26（6）：837.
[ 8 ] 李茂星，尉丽力，陶锐，等. RP-HPLC法同时测定 4种唇
形科植物中 3种苯乙醇苷的含量[J].中国药房，2014，25
（11）：1 027.
[ 9 ] 黄永林，刘金磊，陈月圆，等.红背山麻杆叶的化学成分研
究（Ⅷ）：黄酮和苯乙醇苷类化合物[J].广西植物，2014，
34（2）：143.
[10] 曲正义，金银萍，孙成贺，等.RP-HPLC同时测定向日葵
列当中苯乙醇苷类化合物Crenatoside和类叶升麻苷[J].
中国实验方剂学杂志，2014，20（10）：87.
（收稿日期：2014-11-25 修回日期：2015-06-25）
（编辑：张 静）
表2 样品含量测定结果（n＝3）
Tab 2 Results of content determination of samples（n＝3）
No
1
2
3
荷包花苷A，％
0.1383
0.1435
0.1418
··4710