全 文 ：
优选条件满足多种葱蒜类植物中 MSeC含量测定样
品的制备要求。
MCSHEEHY等曾尝试建立甲醇提取结合 ESI-
MS MS离线鉴定和定量其中 MSeC 的方法[ 7] ,在样
品分离后经过多步纯化和浓缩过程导致 MSeC 损
失 ,曾被认为是离线方法难以准确定量 MSeC的主
要原因。本研究发现甲醇提取 MSeC 的能力显著低
于水 ,证明甲醇不能保证最大程度提取 MSeC 。此
外 ,本研究优化的样品处理方法简单可靠 ,与灵敏 、
特异性强的 LC-MS MS 结合应用 ,有望为深入探讨
富硒葱蒜类植物硒成分的安全性和应用价值研究提
供必要的定量分析检测技术。
参考文献
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[ 收稿日期:2008-12-26]
中图分类号:R15;TS207.5;TS207.3;Q503 文献标识码:A 文章编号:1004-8456(2009)05-0389-04
作者简介:何 华 女 副主任医师
论著
新疆琐琐葡萄提取物抗流感病毒A(H1N1)亚型作用研究
何 华1 马 龙2 徐良军1 谌建新1 杨浩峰1 卢耀勤1
(1.乌鲁木齐市疾病预防控中心 ,新疆 乌鲁木齐 830026;
2.新疆医科大学公共卫生学院 ,新疆 乌鲁木齐 830026)
摘 要:目的 对新疆琐琐葡萄提取物抗流感病毒A(H1N1)亚型作用进行研究。方法 1.采用狗肾传代细胞培
养法和MTT 法研究新疆琐琐葡萄多糖 、琐琐葡萄总黄酮 、琐琐葡萄总三萜对抗流感病毒 A(H1N1)型作用。 2.采用
Read-muench法计算流感病毒A(H1N1)型在狗肾传代细胞中的半数感染量。3.通过观察细胞病变(CPE)、计算细胞
病变 CPE 抑制率 、MTT法测定药物对细胞的保护率等来评价琐琐葡萄多糖 、总黄酮 、总三萜的抗流感病毒效果。结
果 琐琐葡萄总黄酮的最大无毒作用浓度(TC0)为20μg ml , 琐琐葡萄总三萜的 TC0 为1 500μg ml。体外细胞试验
中 ,琐琐葡萄黄酮 、多糖提取物表现出对病毒的直接抑制作用 , 但是琐琐葡萄三萜提取物和利巴韦林(阳性对照)此
作用不明显。体外细胞试验中 ,琐琐葡萄黄酮 、多糖 、三萜提取物均表现出对感染细胞后病毒的抑制作用 , 三萜的
抑制效果要强于黄酮和多糖 ,利巴韦林的抑制作用强于黄酮 、多糖 、三萜。结论 新疆特色植物资源—琐琐葡萄提
取物抗流感病毒A(H1N1)亚型的作用是多途径的 ,琐琐葡萄总黄酮 、琐琐葡萄多酚 、琐琐葡萄三萜分别表现出对流
感病毒A(H1N1)亚型感染细胞前 、感染细胞后的抑制作用 , 以及直接抑制作用 ,可考虑作为抗流感药用资源进行进
一步的开发利用。
关键词:黄酮类;多糖类;三萜类;琐琐葡萄;植物提取物;抗流感病毒 A(H1N1)
Research on Xinjiang SuoSuo Grape Extract Against Influenza A(H1N1)
HE Hua , MA Long , XU Liang-jun , SHEN Jian-xin , YANG Hao-feng , LU Yao-qin
(Urumqi Municipal Center for Disease Control and Prevention , Xinjiang Wulumuqi 830026 , China)
Abstract:Objective To research on Xinjiang SuoSuo grape extract against influenza A(H1N1).Method 1.Use MDCK
cell culture and MTT method on Xinjiang SuoSuo grape polysaccharide , SuoSuo grape flavonoids , total terpene SuoSuo grapes
—392— 中国食品卫生杂志CHINESE JOURNAL OF FOOD HYGIENE 2009 年第 21卷第5 期
DOI :10.13590/j.c jfh.2009.05.018
against influenza virus A(H1N1)-type role.2.Use read-muench method to calculate the TICD50 in influenza virus A(H1N1)-
type MDCK cells.3.By observing cytopathic effect (CPE), the calculation CPE cytopathic effect inhibition rate , MTT
determination of drugs on cells , such as the protection rate to evaluate the SuoSuo grape polysaccharide , total flavonoids , total
triterpenoid the effect of anti-influenza virus.Results Determine the total flavonoids of grape Suo Suo largest concentration of
non-toxic(TC0)to 20 μg ml , Suo Suo total triterpenoid grape TC0 for the 1 500 μg ml.Flavonoids , polysaccharides extract
directly inactivated with relatively good , but this triterpenoid , and the role of ribavirin was not obvious.Flavonoids ,
polysaccharides , triterpenes have therapeutic effects , and the triterpenoid and flavonoidss effect of therapeutic than the
polysaccharide , the therapeutic effect of ribavirin than flavonoids , polysaccharides , triterpene.Conclusion After studying the
characteristics of plant resources in Xinjiang Suo Suo grape extract of anti-influenza virus A(H1N1)subtype of the role is a multi-
passing, In vitro studies have shown by the different active ingredients of total flavonoids of suo suo grape , suo suo grape
polyphenols , Suo Suo grape triterpenoid have a better treatment results to prevention of the influenza virus A(H1N1)subtype ,
directly inactivated treatment , can be regarded as anti-influenza medicine resources for further development and utilization.
Key word:Flavones;Polysaccharides;Triterpenes;Vitis;Plant Extracts;Anti-influenza Virus(H1N1)
流感的药物治疗已经成为人类亟待解决的问题
之一。虽然疫苗接种是预防流感的主要措施 ,但是
当一种疫苗定型以后 ,如果出现大的抗原性漂移 ,就
会造成流感的暴发流行 ,特别是住院治疗的高危人
群更容易感染[ 1] ,有资料显示住院治疗人群的流感
疫苗接种率(5%～ 10%)和保护率(40%～ 60%)都
不高[ 2] ,特别是在高危人群(儿童和老年人)中的保
护水平更低[ 3] 。疫苗对不同时期流感暴发可能会失
去预防作用 。因此 ,开发具有预防和治疗流感的药
物对完善流感防控工作意义重大。
本研究依托的项目组前期在国家自然科学基金
资助项目《新疆维吾尔族食药兼用植物抗衰老的研
究》中对葡萄的保健功效已做过初步研究 ,继而又在
新疆维吾尔自治区自然科学基金资助项目《葡萄及
其果皮中保健性功效成分的开发应用研究》的研究
中 ,对新疆地产主要葡萄品种的生物活性物质作了
系统分析 ,发现葡萄中含有齐墩果酸(oleanolic acid ,
OA)等多种生物活性成分[ 4 , 5] ;并建立了葡萄皮籽中
OA
[ 6] 和原花青素(proanthyocyanidin , OPC)的提取
工艺 。
琐琐葡萄(Vitis vinifera L.)又名 SUOSUO葡萄 、
索索葡萄 、豆粒葡萄 ,果粒小如胡椒 ,来源于葡萄科
(vitaceae)葡萄属植物山葡萄 ,属无核红葡萄品系 ,主
要分布在东亚地区 ,我国主产于新疆吐鲁番 、和田 、
鄯善等地 ,是医药文献如《神农本草经》 、《维吾尔药
志》 、《草本纲目拾遗》等所记载的药用葡萄品种之
一。其果实味甜微酸 、气微 、无毒 ,可内服 、煎汤 、捣
汁或浸酒 ,有补气血 ,强筋骨 ,利小便之功效 ,主治气
血虚弱 ,肺虚咳嗽 ,心悸盗汗 ,风湿痹痛等症[ 7] ,维吾
尔医用于治疗脾胃不和 、头晕腰酸 、神志不安等 ,民
间用于小儿麻疹 、肝炎等症;其根与藤可除风湿 、利
尿 ,用于风湿骨痛 、水肿 ,外用于骨折;茎叶可利尿 、
通小肠 、消肿满 ,用于小便淋痛[ 8] 。传统医学常用作
补气药 ,有解表透疹 、补五脏 、退黄等功效[ 9] 。现代
研究发现琐琐葡萄除含有丰富的维生素 、氨基酸 、果
糖 、无机盐等营养物质外 ,还含有 OA 、黄酮等生物活
性物质[ 10 , 11] 。目前 ,提取琐琐葡萄有效成分进行抗
流感药物的筛选工作尚未见报道[ 4 , 12-14 , 16] 。本研究
结合新疆地源优势 ,拟初步探讨琐琐葡萄提取物多
糖类 、三萜类 、黄酮类抗流感病毒的作用。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 细胞 狗肾传代细胞(MDCK),由乌鲁木齐
市疾病预防控制中心提供。
1.1.2 病毒株 A 乌鲁木齐 139 2005 H1N1 ,由乌
鲁木齐市疾病预防控制中心提供 ,并经中国疾病预
防控制中心病毒病预防控制所国家流感中心鉴定。
1.1.3 阳性对照 利巴韦林片 ,由四川美大康药业
股份有限公司生产 ,批号 070106 ,药店自购 。
1.1.4 琐琐葡萄提取物 琐琐葡萄购自新疆维吾
尔自治区吐鲁番维药市场 ,提取物有总多糖 、总三
萜 、总黄酮三类。用醇提法提取总多糖 ,苯酚-硫酸
法测定琐琐葡萄中多糖的含量为 8.19%;用超声法
提取总三萜 ,比色法测定总三萜的含量为 48.2%;
用醇提法提取总黄酮 ,比色法测定总黄酮含量为
21.0%。
1.1.5 实验试剂 0.9%氯化钠注射液(四川科伦
药业股份有限公司)、L -谷氨酸(GIBCO)、DMEM 培
养基(GIBCO)、Trypsin 胰酶(GIBCO)、牛血清白蛋白
(BBI)、HEPES 缓冲液(Sigma)、碳酸氢钠注射液(国
产)、国家流感中心提供的 A(H1N1)型流感病毒的
标准参照抗原与血清 、国产 RDE(受体破坏酶)。
1.2 方法
1.2.1 病毒毒力测定 用维持液将病毒稀释成
10
-1 、10-2 、10-3 、10-4 、10-5 、10-6 、10-7 、10-8 、10-9 、
—393—新疆琐琐葡萄提取物抗流感病毒 A(H1N1)亚型作用研究———何 华 马 龙 徐良军等
10
-10倍10个浓度 ,按常量分别加入细胞已长成单层
的96孔培养板中 ,倒置显微镜下观察记录细胞病变
(CPE)程度。计算组织半数感染量(TCID50),确定最
大不感染浓度(TCID0)。
1.2.2 琐琐葡萄提取物对 MDCK细胞的毒性实验
用不含小牛血清的细胞维持液配制琐琐葡萄提取
物不同浓度:黄酮2 500 、500 、100 和20μg ml , 多糖
2 500 、500 、100 和20μg ml ,三萜7 500 、1 500 、300和
60 μg ml。传代 MDCK 细胞于 96孔培养板 ,待长成
单层后加入上述浓度的药物 , 100 μl 孔 ,每个浓度加
入4 孔 ,置于37 ℃、5%二氧化碳培养箱内培养 ,每
天置显微镜下观察细胞形态 ,连续观察 3 ～ 5 d 。设
正常细胞对照和病毒对照 。计算药物最大无毒浓度
(TC0)。阳性对照组:利巴韦林配置成37 500 、7 500 、
1 500和300 μg ml 4个浓度 ,其对细胞的毒性测定按
上法进行 。
1.2.3 设计与分组 将最大无毒作用浓度稀释 2
倍 ,按琐琐葡萄提取物对流感病毒的不同作用环节
分成 3组 ,分别就琐琐葡萄提取物对流感病毒感染
细胞前的抑制作用(1 组)、对流感病毒的直接抑制
作用(2组)、对流感病毒感染细胞后的抑制作用(3
组)进行研究:1组:先加入含不同浓度药物的细胞
维持液 , 100μl 孔 , 24 h , 吸出 , 再吸附病毒 100
TCID50 ,100μl 孔 , 2 h ,吸出 ,再加入细胞维持液;2
组:药物与病毒先作用 2 h后再加入细胞上 ,吸附 2
h ,吸出 ,再加入细胞维持液;3组:先吸附病毒 2 h ,
吸出 ,再加入含药物的细胞维持液。每个剂量药物
加入 4 孔 ,置于37 ℃、5%二氧化碳培养箱内培养 ,
每天置显微镜下观察细胞形态 ,连续观察 3 ～ 5 d 。
当病毒对照 CPE出现+++～ ++++,正常细胞
对照 CPE阴性时 ,进行 MTT 实验 。同时设利巴韦林
阳性对照组 、正常细胞对照组和病毒对照组。
1.2.4 结果测定
1.2.4.1 细胞形态 光镜下观察细胞病变 ,细胞病
变-(0%)、+(1 ～ 25%)、++(25%～ 50%)、++
+(50%～ 75%)、++++(75%～ 100%)时 ,分别
计为 0分 、1分 、2分 、3分 、4分 ,并对各实验孔积分 ,
按照下列公式计算细胞病变 CPE抑制率[ 16] :CPE抑
制率=(对照组 CPE积分-实验组 CPE积分) 对照
组CPE积分 。
1.2.4.2 细胞保护率测定:在 570 nm 处测定MTT ,
计算药物对 MDCK细胞的保护率[ 16] :保护率=(加
药孔 A值-病毒对照孔 A值) 细胞对照孔 A 值。
2 结果
2.1 病毒 TICD50的测定
采用 READ-MUENCH[ 1] 法计算流感病毒 A
(H1N1)型在 MDCK 细胞中的 TICD50为 104 0.1 ml ,
TICD0 为 109 0.1 ml , 试验用的病毒攻击量为 100
TICD50 0.1 ml。
2.2 受试物对细胞的毒性实验
给予 MDCK细胞不同浓度的受试物 ,观察细胞
病变 ,黄酮的最大无毒浓度(TC0)为20 μg ml ,连续观
察 3 d ,未观察到细胞病变;而从100μg ml开始对细
胞有轻微毒性反应 ,并随着浓度的加大毒性增强。
故20μg ml为实验用的最适稀释浓度。同理 ,多糖和
三萜的最适稀释浓度分别为 20和1 500 μg ml ,利巴
韦林的最适实验浓度为300 μg ml ,结果见表 1。
表 1 琐琐葡萄提取物对MDCK细胞毒性(CPE)观察结果
试验物质 剂量(μg ml)
观察时间(h)
24 48 72
黄酮 2500 脱落 脱落 脱落
500 颗粒增多 脱落 脱落
100 颗粒增多 颗粒增多 脱落
20 - - -
多糖 2500 脱落 脱落 脱落
500 颗粒增多 颗粒增多 脱落
100 ± 颗粒增多 脱落
20 - - -
三萜 7500 颗粒增多 脱落 脱落
1500 - - -
300 - - -
60 - - -
利巴韦林 7500 ± ± 颗粒增多
1500 ± 颗粒增多 颗粒增多
300 - - -
细胞对照 - - -
注:“ -”为MDCK 细胞生长正常。“ ±”为 MDCK 细胞开始出现病
变。
2.3 琐琐葡萄提取物抗流感病毒 A(H1N1)型作用
2.3.1 光镜下细胞病变 1 组黄酮 、多糖提取物对
流感病毒均有一定的抑制作用 ,最高 CPE抑制率可
达 100.00%,三萜提取物和利巴韦林 CPE抑制率相
对较低 ,三萜最高抑制率只有 12.50%;2组黄酮 、多
糖提取物对流感病毒的抑制作用较强 , CPE 抑制率
可达 80.00%以上 ,但是三萜提取物和利巴韦林的
CPE抑制率均较低;3组黄酮提取物 、多糖提取物 、
三萜提取物和利巴韦林的 CPE抑制率均较高 ,其中
利巴韦林的抑制率最高 ,可达 93.75%。
不同程度细胞病变的分级评分形态如图 1
所示 。
2.3.2 琐琐葡萄提取物对流感病毒A(H1N1)型的
抑制率 1组和 2组黄酮提取物和多糖提取物对流
感病毒均有一定的抑制作用 ,最高 CPE 抑制率可达
100.00%,三萜提取物和利巴韦林 CPE 抑制率相对
—394— 中国食品卫生杂志CHINESE JOURNAL OF FOOD HYGIENE 2009 年第 21卷第5 期
图 1 流感病毒A(H1N1)型在 MDCK细胞中
细胞病变(CPE)(×400)
较低;3组三萜提取物和利巴韦林提取物 CPE 抑制
率较高 ,而黄酮提取物和多糖提取物 CPE抑制率相
对较低。结果见表 2。
2.3.3 计算琐琐葡萄提取物对 MDCK细胞的保护
率 镜下观察 CPE 基础上 , 用 MTT 方法测定
Aλ=570 nm值 ,以便可以更客观地反应加药与不加药之
间的差别 。1组黄酮 、多糖提取物对 MDCK 细胞具
有较高的保护率 ,而三萜和利巴韦林的保护率则相
对较低;2组黄酮和多糖对 MDCK细胞具有较高的
保护率 ,三萜和利巴韦林对 MDCK 细胞保护率相对
较低;3组三萜和利巴韦林对 MDCK细胞保护率较
高 ,而黄酮 、多糖提取物相对较低 ,结果见表 3。
2.3.4 琐琐葡萄对流感病毒 A(H1N1)型活性的抑
制作用 1组:以最适给药浓度 2倍稀释 , 20 μg ml
和10μg ml浓度黄酮 、多糖能使流感病毒滴度下降
1.5个对数值以上 ,但三萜和利巴韦林抑制作用不
明显 。2 组:黄酮和多糖浓度均在10μg ml时 ,对流
感病毒的作用最强;三萜和利巴韦林作用不明显 。3
组:黄酮 、多糖 、三萜 、利巴韦林分别在 20 、10 、750和
300 μg ml时可以使流感病毒滴度下降 1.5个对数值
以上 ,抑制流感病毒作用最强 ,结果见表4 。
3 讨论
3.1 三萜 、黄酮 、多糖类物质的药理作用
三萜类存在于许多植物中 ,具有清热 ,消炎 ,利
尿 ,强心等作用。本项目课题组曾对琐琐葡萄三萜
类成分总三萜(VTT)和齐墩果酸(OA)进行体外大鼠
免疫性肝损伤研究 ,具有明显的保护作用[ 17] 。国内
外研究表明OA具有抗炎 、镇静 、强心 、利尿 、增强免
疫和抑制 S-180瘤株生长等作用[ 18] ,但其抗流感病
毒作用未见报道。
黄酮类有镇痛 ,降血脂 ,抗动脉粥样硬化 ,抗高
血压血管壁扩张 ,抗心率失常 ,抗心肌损伤 ,抗心绞
痛 ,抗凝血 ,利胆及肝脏保护 ,抗氧化 、清除氧自由
基 ,抗肿瘤 ,对抗脑血管疾病 ,抗病毒 ,延缓衰老等多
种作用[ 19] 。国外研究表明黄酮类可抑制病毒的吸
附作用及病毒蛋白质和 RNA的合成;并具有抑制流
感病毒唾液酸酶活性的作用 ,以及抑制膜融合的作
用[ 20] 。实验研究表明[ 21] ,黄酮类物质是抗流感病毒
的活性成分之一 ,主要机制是抑制流感病毒唾液酸
酶的活性及膜融合作用 。
多糖(polysaccharides)广泛分布于多种生物体
中 ,尤其是动物细胞膜 、植物和微生物细胞壁中 ,是
一类由醛糖或酮糖通过糖苷键连接而成的天然高分
子多聚物 ,是构成生命的分子基础之一 ,也是一种重
要的信号或信息分子的受体 ,它参与分子识别 、细胞
粘附及防御等生理过程的调节活动 ,具有抗病毒 、免
疫促进 、抗肿瘤及降血糖等作用[ 22] 。多糖成分对病
毒的抑制作用已经被国内外许多研究者认可。
—395—新疆琐琐葡萄提取物抗流感病毒 A(H1N1)亚型作用研究———何 华 马 龙 徐良军等
表 2 琐琐葡萄提取物对流感病毒 A(H1N1)型的抑制率
试验物质 剂量(μg ml)
1组
每孔 CPE程度
CPE
抑制率(%)
2组
每孔CPE程度
CPE
抑制率(%)
3组
每孔CPE程度
CPE
抑制率(%)
黄酮 20 1 0 0 1 75.00 1 2 0 0 81.25 0 1 0 1 87.50
10 1 0 0 0 93.75 1 0 1 0 87.50 1 0 1 2 75.00
5 1 1 0 0 87.50 1 1 1 1 75.00 1 1 2 2 62.50
多糖 20 1 1 1 0 81.75 1 2 1 1 68.75 2 1 1 2 56.25
10 0 0 0 0 100.00 0 1 1 0 87.50 0 1 0 2 68.75
5 0 0 1 0 93.75 0 2 2 0 75.00 1 0 1 1 81.25
三萜 1500 4 4 4 3 6.25 3 4 4 4 6.25 2 1 0 1 75.00
750 4 3 4 3 12.50 3 3 4 4 12.50 0 0 1 0 81.25
375 3 4 4 4 6.25 4 3 3 4 18.75 1 2 3 1 56.25
利巴韦林 4 3 2 4 18.75 4 3 3 4 12.50 0 1 0 0 93.75
细胞对照 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
病毒对照 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4
表 3 琐琐葡萄提取物对 MDCK细胞的保护率
试验物质 剂量(μg ml) 1组(%) 2组(%) 3组(%)
黄酮 20 72.5 80.4 85.5
10 89.6 87.6 78.5
5 78.8 83.3 63.7
多糖 20 79.3 59.4 68.4
10 93.3 85.2 83.6
5 87.9 63.1 70.2
三萜 1500 1.0 1.4 382.6
750 2.3 2.7 91.9
375 9.4 6.8 14.0
300 2.2 7.5 348.8
利巴韦林 750 2.5 3.2 101.1
375 9.6 7.1 24.2
300 2.5 7.2 338.4
GARIE
[ 23] 等认为多糖可能作为宿主受体硫酸乙酰肝
素的竞争抑制剂 ,通过与病毒糖蛋白上带正电荷的
富精氨酸区域结合来阻止病毒与细胞的结合。国内
研究结果[ 24] 也显示黄芪多糖 、紫菜多糖等均具有抗
流感病毒的作用 ,其中 ,黄芪多糖对流感病毒引起的
小鼠肺炎病变有明显的抑制作用 ,能延长流感病毒
感染的小鼠生存时间。一般认为 ,多糖抗病毒机制
是对病毒复制早期阶段进行抑制 ,即抑制病毒向细
胞表面的吸附[ 25] 。多糖硫酸基团的负电荷与病毒
膜上识别宿主细胞表面受体的糖蛋白的正电荷通过
静电作用结合而阻止病毒与细胞的吸附 ,虽然不同
的病毒糖蛋白和细胞受体可能存在差异 ,但硫酸多
表 4 琐琐葡萄提取物抑制流感病毒 A(H1N1)型活性(HA)作用
试验物质 剂量(μg ml) 1组 与病毒 log 滴度差 2组 与病毒 log 滴度差 3组 与病毒 log 滴度差
黄酮 20 0.226 1.881 0.526 1.581 0.526 1.581
10 0.075 2.032 0.451 1.656 0.828 1.279
5 0.150 1.957 0.451 1.581 1.054 1.504
多糖 20 0.150 1.957 0.903 1.204 1.204 0.903
10 0.000 2.107 0.602 1.505 0.527 1.580
5 0.075 2.032 0.752 1.355 1.054 1.053
三萜 1500 2.107 0.000 2.107 0.000 0.753 1.354
750 2.107 0.000 2.107 0.000 0.075 2.032
375 2.107 0.000 2.107 0.000 1.500 0.607
利巴韦林 300 1.806 0.301 1.806 0.301 0.000 2.107
病毒对照 2.107 2.107 2.107
细胞对照 - - -
注:“ -”表示 HA测定结果为阴性。
糖可以靠静电作用与囊膜病毒外膜糖蛋白结合 ,占
据囊膜病毒与细胞受体结合的部位 ,使囊膜病毒不
能感染细胞。多糖具有抗流感病毒作用的机制可能
是通过抑制病毒向细胞表面的吸附得以实现的。
3.2 新疆琐琐葡萄提取物抗流感病毒效果
本研究在进行MDCK细胞培养试验中设定感染
细胞前作用组 ,直接作用组 ,感染细胞后作用组 3个
试验组。感染细胞前作用组先加药物的试验目的是
观察药物能否进入细胞或吸附于细胞表面 ,以阻止
病毒的吸附与穿入 ,即预防作用 ,试验结果表明黄
酮 、多糖提取物具有明显的预防作用 ,CPE抑制率均
在80%以上 ,而三萜和利巴韦林的预防作用不明
显;直接作用组同时加入病毒和药物的目的是观察
药物对病毒是否具有直接抑制作用 ,试验结果表明
—396— 中国食品卫生杂志CHINESE JOURNAL OF FOOD HYGIENE 2009 年第 21卷第5 期
黄酮 、多糖提取物具有一定的直接抑制作用 ,而三萜
和利巴韦林此作用不明显;感染细胞后作用组先加
病毒是为了观察药物能否抑制已经进入细胞的病毒
的生物合成和成熟释放 ,即治疗作用 ,试验结果表明
黄酮 、多糖 、三萜均具有治疗作用 ,且三萜的治疗效
果要强于黄酮和多糖 ,利巴韦林的治疗作用强于黄
酮 、多糖 、三萜。本研究从光镜下 CPE变化及 CPE
抑制率 、MTT计算保护率和血凝实验(HA)三个方面
对实验结果进行测定 ,实验结果一致 ,进一步增强了
实验结果的可靠性。
新疆琐琐葡萄提取物抗流感病毒 A(H1N1)型
的量效曲线存在量效关系 ,但有拐点。可能原因:一
是中药本身的复杂性 ,化学成分复杂 ,不同于化学纯
品(成分单一 、结构明确);二是细胞培养实验中细胞
本身的特性 ,任何细胞置于体外培养后 ,其细胞形态
和功能都会发生一定程度的改变;三是试验中细胞
代数对病毒毒力和药物毒力可能存在一定影响。因
此 ,对于体外培养的细胞 ,应该将其视作一种既保持
动物体内原细胞一定的形状 、结构和功能又具有某
些改变的特定的细胞群体 ,而不能将之与体内的细
胞完全等同。在深入探索其抗流感病毒作用机制的
同时 ,还有待于对其抗流感病毒作用进行体内试验
研究 。
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[ 收稿日期:2009-05-16]
中图分类号:R155;O629.12;O629.61 文献标识码:A 文章编号:1004-8456(2009)05-0392-06
—397—新疆琐琐葡萄提取物抗流感病毒 A(H1N1)亚型作用研究———何 华 马 龙 徐良军等