全 文 ：收稿日期:2012-12-05; 修订日期:2013-05-21
基金项目:重庆市科委科技攻关项目资助( No． CSTC2011GGC003033)
作者简介:罗音久( 1972-) ，男( 汉族) ，重庆荣昌人，现任西南大学药学院
讲师，硕士学位，主要从事中药药理学研究工作．
* 通讯作者简介:付爱玲( 1973-) ，女( 汉族) ，河南郑州人，现任西南大学
药学院教授，博士学位，主要从事药理学研究工作．
双花黄栀露的抗炎作用及其机制研究
罗音久，张法仁，曾忠良，付爱玲*
(西南大学药学院，重庆 400716)
摘要:目的 根据方剂的组方原则，对可作为食品保健品的中草药进行组方，制备出“双花黄栀露”，实验验证其抗炎作用
及其机制。方法 采用角叉菜胶致大鼠足肿胀的炎症模型，检测该制剂的抗炎作用;测定足肿胀大鼠血清炎症因子 PGE2
和炎症组织中组胺和 5 －羟色胺的含量，研究该制剂的抗炎机制。结果 双花黄栀露能够有效抑制大鼠的足肿胀率，减少
炎性介质 PGE2 的生成，抑制炎性部位组胺和 5 －羟色胺的含量，抑制毛细血管通透性。结论 双花黄栀露具有抗炎作用，
为其实际应用提供了参考。
关键词:双花黄栀露; 大鼠足肿胀; 抗炎机制
DOI标识:doi: 10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2013． 09． 029
中图分类号:Ｒ285． 5 文献标识码:A 文章编号:1008-0805( 2013) 09-2129-02
双花黄栀露是我研究室方剂的严密组方原则，选取可以作为
食品保健品的中草药(如金银花、观音茶、黄芩和栀子等) ，研制
而成的具有清热解毒、活血化瘀的制剂［1］。中医认为炎症由毒
而生，多辨证为热毒炽盛、疫毒感染等。双花黄栀露中含有的一
些组分，如金银花、黄芩和栀子等，具有一定的抗炎功效［2］。本
实验将通过动物实验确证双花黄栀露的抗炎效果及其可能的作
用机制。
1 药品与试剂
双花黄栀露为我室自制，批号为 20090504。醋酸地塞米松
注射液 (5 mg /ml)购自太极集团西南药业公司 (批号:
20080712) ;角叉菜胶购自上海生工生物工程技术服务有限公司;
磷酸组织胺由中科院上海生物化学研究所提供 (批号:
9110291)。胆红素、肌酐、天门冬氨酸基转移酶、丙氨酸氨基转移
酶、葡萄糖和尿素氮测定试剂盒均购自长春汇力生物技术有限公
司。其他试剂均为分析纯。
2 方法
2． 1 角叉菜胶致大鼠足肿胀实验 取健康 Wistar 大鼠 30 只，雄
性，体质量 170 ～ 220 g，按体质量随机分为 4 组，双花黄栀露灌
胃剂量为 3． 5 g /kg，每日 2 次，连续 3 d。醋酸地塞米松以 10 mg /
kg，皮下注射每日 1 次。实验前在各鼠右后足踝关节处作标记，
按足容积测定法测定各鼠足容积 2 次，取平均值作为各鼠给药前
正常足容积。末次给药后 30 min，每只大鼠右后足跖部皮下进
针，注射 1%角叉菜胶生理盐水溶液 0． 1 ml 致炎，同时灌胃生理
盐水 40 ml /kg行水负荷。分别于致炎后 30，60，120，180 min 同
法测定右后足容积，计算各大鼠致炎前后右足跖容积变化值，以
肿胀度判定药物的抗炎效应［3，4］。
肿胀率(%)=(测定容积 －正常容积)/正常容积
2． 2 对大鼠足肿模型血清中皮质醇和炎性介质 PGE2 的影响
根据大鼠足肿模型，在 4 h 后，大鼠眼底静脉取血，离心，取上层
血清，用 ELSA试剂盒检测血清中皮质醇含量。测定血清 PGE2
含量时，取 0． 1 ml血清加入 0． 5 mol /L KOH甲醇液 2 ml，50℃水
浴中异构化 20 min，用甲醇稀释至 5 ml，以紫外分光光度仪于 278
nm处测定吸光度(A)［5］。
2． 3 对足肿模型大鼠炎性组织中 5 － HT和组胺的影响 在足肿
胀模型中，致炎 40 min后，沿踝关节上 0． 5 mm处剪下致炎足，剔
除骨后称重，划破皮肤组织浸泡于酸化正丁醇 4． 0 ml 中 4 h，再
用超声波处理 20 min，去除组织，离心。取上清液 2． 5 ml 加正庚
烷 3． 0 ml及 0． 1mol /L盐酸 1． 2 ml振荡 5 min后，3 000 r·min －1
离心 5 min，得 0． 5 ml水相 2 份，1 份分别依次加入以下试剂;注
射用水 1． 5 ml及 0． 4 mol·L －1氢氧化钠 0． 5 ml后，再加 0． 1%的
邻苯二甲醛甲醇溶液 0． 1 ml于 22℃水浴中反应 10 min，0． 5 mol
·L －1盐酸 0． 5 ml终止反应，于 360nm激发，在 450 nm处测定荧
光强度为组胺含量［6］。
另以 0． 1 mol·L －1盐酸 0． 5 ml代替水相作为空白管，以 2． 5
ml酸化正丁醇加 0． 05 ml 浓度为 5 mg·L －1的组胺盐酸溶液代
替样品上清液为标准管，进行试验，试验所测荧光强度按下列公
式计算组胺含量。
含量
(ng·g － 1)
= (样本管荧光读数 －空白管荧光读数)
(标准管荧光读数 －空白管荧光读数)
×
所加标准品量
组织湿重(g)
× 反应液体积
测定正丁醇体积
取上述未处理过的水相分别依次加入如下试剂:0． 5%半胱
氨酸 0． 1 ml及 6%的邻苯二甲醛盐酸溶液 3 ml，混匀后再加 0． 1
ml 0． 02%碘酸钠溶液，沸水浴 10 min，取出置水中冷却，于 365
nm激发，在 480 nm处测定荧光强度为 5 － HT 含量，计算方法同
上。
2． 4 统计分析 实验结果用 珋x ± s表示。SPSS统计软件处理实验
数据，各组间采用单因素方差分析进行统计，以 P ＜ 0． 05 为有统
计学意义。
3 结果
3． 1 对角叉菜胶致大鼠足肿胀的影响 实验结果见表 1。与空
白组相比，模型组大鼠的肿胀率极显著性增加(P ＜ 0． 01) ，表明
所建立的炎症模型是成功的。在致炎 60 min 后肿胀率达到最大
值，表明炎症持续发展。双花黄栀露和地塞米松组均能显著抑制
角叉菜胶引起的炎性足肿胀，并能够促进炎性肿胀的恢复，促进
渗出物的吸收。
3． 2 对大鼠足肿模型中血清中皮质醇和炎性介质 PGE2 的影响
结果见表 2。各实验组大鼠血清的皮质醇含量均没有明显差异
(P ＞ 0． 05) ，表明制备足肿模型和给药时并未引起皮质醇含量的
变化。PGE2 是花生四烯酸代谢过程中产生的一种炎性介质，能
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2013 VOL． 24 NO． 9 时珍国医国药 2013 年第 24 卷第 9 期
够致痛，致热，是研究炎性反应的重要指标。结果显示模型组血
清中 PGE2 浓度显著高于空白组(P ＜ 0． 05) ，说明病理模型制备
成功。双花黄栀露中高剂量组和地塞米松组能显著降低 PGE2
浓度(P ＜ 0． 05) ，显示出明显的抗炎效果。
表 1 双花黄栀露抑制角叉菜胶所致大鼠足肿胀的抑制作用(珋x ± s) mm3
分组 正常足底容积
肿胀度
30 min 60 min 120 min 180 min
空白组 1． 20 ± 0． 134 0． 023 ± 0． 015(1． 91)
0． 033 ± 0． 026
(2． 75)
0． 036 ± 0． 032
(3． 00)
0． 035 ± 0． 034
(2． 91)
模型组 1． 15 ± 0． 082 0． 197 ± 0． 068
△△
(17． 13)
0． 197 ± 0． 026△△
(17． 13)
0． 192 ± 0． 022△△
(16． 69)
0． 156 ± 0． 076△△
(13． 56)
给药组 1． 33 ± 0． 09 0． 120 ± 0． 065
*
(9． 02)
0． 146 ± 0． 028*
(10． 97)
0． 134 ± 0． 030*
(10． 31)
0． 109 ± 0． 015*
(8． 20)
括号内的数值为肿胀率(%) ;与空白组比较，△△P ＜ 0． 01，与模型组比较，* P ＜ 0． 05
表 2 双花黄栀露对致炎大鼠血清中皮质醇和 PGE2 的影响(珋x ± s)
分组 皮质醇含量 /μg·L －1 PGE2 浓度(A)
空白 76． 81 ± 14． 37 0． 372 ± 0． 094
模型组 79． 43 ± 12． 14 0． 456 ± 0． 124△
给药组 81． 08 ± 13． 60 0． 377 ± 0． 062*
与空白组比较，△P ＜ 0． 05，与模型组比较，* P ＜ 0． 05
3． 3 对足肿模型大鼠炎性组织中 5 － HT和组胺的影响 结果见
表 3。与空白组相比，模型组大鼠炎性组织中组胺的含量极显著
升高(P ＜ 0． 01) ，5 － HT 的含量显著降低(P ＜ 0． 05)。双花黄栀
露各剂量组均能显著降低雄性大鼠炎性组织中组胺与 5 － HT 的
含量，而地塞米松作用效果不明显。5 － HT与组胺是在体内的活
性介质，具有增加毛细血管通透性的作用，双花黄栀露能够降低
组胺与 5 － HT的浓度，提示能够降低毛细血管通透性。
表 3 双花黄栀露对炎性足肿大鼠
组织中 5 －羟色胺和组胺的影响(珋x ± s) ng·g － 1
分组 组胺含量 5 － HT
空白 477． 36 ± 105． 97 38． 28 ± 15． 99
模型组 797． 87 ± 158． 02△△ 59． 19 ± 17． 96△
给药组 522． 56 ± 101． 98* 42． 69 ± 12． 55*
与空白组比较，△P ＜ 0． 05，△△P ＜ 0． 01，与模型组比较，* P ＜ 0． 05
4 讨论
肿胀是炎症部位的一种基本变化，并且是急性炎症的标志性
变化之一。对肿胀这一病理变化的抑制程度可以反映抗炎药物
对急性炎症的作用。本研究采用了足跖肿胀实验，比较给药组与
对照组的足肿胀率，确定了抗炎效果。
花生四烯酸是二十碳不饱和脂肪酸，当细胞膜的磷脂酶被激
活后，细胞膜磷脂便释放出花生四烯酸。花生四烯酸通过脂质加
氧酶代谢途径生成 PGE等炎性介质。本研究发现双花黄栀露能
抑制 PGE2 的生成，说明它干扰了花生四烯酸的代谢。
血管活性胺包括组胺和 5 － HT。本世纪初，Lewis 首先报道
组织受损伤后或抗原抗体发生反应时能释放血管活性胺，并认为
有致炎作用。这些血管活性胺的致炎作用是多方面的。组胺在
炎症中既能舒张小血管，又能使血管内皮细胞收缩，加大内皮细
胞间间隙，引起所谓的血管内壁开窗，使血管通透性增加，血浆蛋
白、红细胞和血小板从通透性高的血管渗出［7］。本实验研究了在
致炎足跖中血管活性胺的浓度变化，发现双花黄栀露能够抑制血
管活性胺类的释放。
总之，双花黄栀露可通过抑制炎症介质 PGE2 和血管活性胺
的生成等方面抑制炎症过程的渗出和增生，在炎症中能够发挥抗
炎作用，本研究为其实际应用提供了实验依据。
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