全 文 ：第 32 卷第 2 期
2013 年 4 月
中 国 野 生 植 物 资 源
Chinese Wild Plant Resources
Vol． 32 No． 2
Apr． 2013
收稿日期:2012 － 07 － 12
资助项目:“十二五”国家科技支撑计划(2011BAD33B02) ;常州市科技支撑计划(CE20115054)。
* 通讯作者:孙力军，博士，主要研究方向:生物技术。E － mail:shengwudiqiu@ 126． com
doi:10． 3969 / j． issn． 1006 － 9690． 2013． 02． 003
不同干燥方法对灰毡毛忍冬花蕾中活性成分含量的影响
姚正颖1，张卫明1，李春霞2，孙力军1*
(1．南京野生植物综合利用研究院，江苏 南京 210042;2．南京师范大学 生命科学学院，江苏 南京 210023)
摘 要 目的: 比较不同干燥方法对灰毡毛忍冬花蕾中 4 种活性成分含量的影响。方法: 采用生晒法、烘干法、蒸
制生晒法和蒸制烘干法对灰毡毛忍冬花蕾进行干燥处理。参照《中国药典》，利用高效液相色谱( HPLC) －紫外扫
描( UV) 法测定干燥样品中绿原酸和木犀草苷的含量; 利用 HPLC –蒸发光散射检测器( ELSD) 法测定干燥样品中
灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙的含量。结果: 蒸制烘干法处理的灰毡毛忍冬花蕾中绿原酸含量和皂苷总量最
高，分别为 3． 705%和 11． 834%，木犀草苷含量为 0． 103%，均高于《中国药典》对山银花和金银花指标物质含量的
规定。结论: 不同干燥方法对灰毡毛忍冬花蕾中活性成分的含量有较大影响，以蒸制烘干法最优。
关键词 灰毡毛忍冬; HPLC;绿原酸; 灰毡毛忍冬皂苷乙;川续断皂苷乙;木犀草苷
中图分类号:R284． 1 文献标识码:A 文章编号:1006 － 9690(2013)02 － 0008 － 04
The Effect of Different Dehydrating Methods on the Contents of
Active Constituents in Flower Buds of Lonicera macranthoides
Yao Zhengying1，Zhang Weiming1，Li Chunxia2，Sun Lijun1*
(1． Institute for Comprehensive Utilization of Wild Plants，Nanjing 210042，China;2． College of Life
Science，Nanjing Normal University，Nanjing 210023，China)
Abstract Objective:To compare the effect of different dehydrating methods on the contents of four ac-
tive constituents in flower buds of Lonicera macranthoides． Methods:Dehydrating methods of sun drying，
oven drying，steaming － sun drying and steaming － oven drying were chosed to deal with flower buds of
Lonicera macranthoides． According to Chinese Pharmacopoeia，the contents of chlorogenic acid and ga-
luteolin in dried samples were determined by High Performance Liquid Chromatography (HPLC)－ UV，
and the contents of macranthoidin B and dipsacoside B were determined by HPLC － Evaporative Light
Scattering Detector (ELSD)． Results:Using the steaming － oven drying method，the contents of chloro-
genic acid，total saponins and galuteolin from dried flower buds reached 3． 705%，11． 834% and
0． 103%，respectively，which were higher than the prescribed contents of corresponding index in Chinese
Pharmacopoeia． Conclusion:Different dehydrating methods had great influence on the contents of active
constituents in flower buds of Lonicera macranthoides． The steaming － oven drying method performed opti-
mally．
Key words Lonicera macranthoides;HPLC;Chlorogenic acid;Macranthoidin B;Dipsacoside B;Ga-
luteolin
灰毡毛忍冬(Lonicera macranthoides Hand． －
Mazz．) ，归忍冬科忍冬属，是我国特有的种类［1］。
2010 年版《中国药典》将灰毡毛忍冬的干燥花蕾或
初开的花列于山银花项下，与金银花具有相同的功
效与主治，并以绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断
皂苷乙作为山银花的指标成分进行质量控制［2］。
山银花具有花期长、适应性强、易繁殖、易采摘
等特点，在我国西南、中南地区大量栽培，是当地金
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第 2 期 姚正颖，等:不同干燥方法对灰毡毛忍冬花蕾中活性成分含量的影响
银花药材的主流商品之一。山银花的品质受多种因
素的影响，其中不同的干燥加工工艺可直接影响药
材的外观和质量［3］。常用的干燥方法有晒干法、烘
干法、蒸制干燥法等。国内研究主要以绿原酸含量
作为金银花和山银花干燥加工方法的评价指
标［4 － 5］，然而，同时检测绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙、
川续断皂苷乙和木犀草苷的含量来考察灰毡毛忍冬
花蕾干燥加工方法的研究未见报道。因此，本文以
灰毡毛忍冬花蕾为材料，对其采用生晒法、烘干法、
蒸制晒干法和蒸制烘干法进行干燥加工，比较分析
4 种活性成分含量的变化，以筛选出适于灰毡毛忍
冬花蕾的干燥技术，为控制和提高灰毡毛忍冬药材
质量提供理论与技术依据。
1 实验部分
1． 1 仪器与试剂
Agilent 1200 型高效液相色谱仪(HPLC) (美国
Agilent 公司) ，配有二极管阵列检测器(DAD)、四元
泵和柱温箱;Alltech 3300 蒸发光散射检测器
(ELSD) (美国 Grace 公司) ;EL204 电子分析天平
(中国梅特勒 －托利多公司) ;KQ5200E 型超声波清
洗机(昆山市超声仪器有限公司)。
对照品:绿原酸(纯度大于 95%，美国 Sigma －
Aldrich公司) ;木犀草苷(批号 LF2012A0001)、灰毡
毛忍冬皂苷乙(批号 LM2012B0001)、川续断皂苷乙
(批号 LM2012C0001) ，纯度均大于 98%，由南京春
秋生物工程有限公司提供。HPLC 分析用试剂为色
谱纯，包括乙腈(国药集团化学试剂公司)和乙酸
(美国 Tedia公司)。甲醇、乙醇为分析纯(国药集团
化学试剂公司)。超纯水为娃哈哈纯净水。
灰毡毛忍冬为南京野生植物综合利用研究院选
育品种，该品种花蕾呈含苞未放的棒状，花冠一直不
开裂，待花蕾不再伸长且颜色由黄绿转白时采摘，用
于后续研究。
1． 2 灰毡毛忍冬花蕾干燥处理
将采摘下的灰毡毛忍冬花蕾分别采用不同的干
燥加工方法立即处理。生晒法:将采摘下的新鲜花
蕾疏松摊在晒盘内，厚 2 ～ 3 cm，置于太阳光下直接
晒干。烘干法:将采摘下的新鲜花蕾疏松摊在托盘
内，厚 2 ～ 3 cm，置于烘箱内阶段升温(40℃，2 h;
50℃，1 h;60℃，3 h;70℃，40 min)至全部烘干。蒸
制生晒法:将采摘下的新鲜花蕾摊在蒸笼内，厚 4 ～
5 cm，以蒸盖上气时计时 3 min，取出按上述生晒法
干燥。蒸制烘干法:将采摘下的新鲜花蕾摊在蒸笼
内，厚 4 ～ 5 cm，以蒸盖上气时计时 3 min，取出按上
述烘干法干燥。
1． 3 绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙含
量测定
1． 3． 1 色谱条件
色谱柱:Agilent ZORBAX Eclipse XDB － C18
(150 mm × 4． 6 mm，5 μm) ;柱温 25℃;流速 1． 0
mL /min;流动相:0． 4%冰醋酸(A)－乙腈(B) ，梯度
洗脱(0 ～ 10 min，88． 5% A ～ 85% A;10 ～ 12 min，
85%A ～71%A;12 ～ 18 min，71% A ～ 67% A;18 ～ 30
min，67% A ～ 55% A;30 ～ 31 min，55% A ～ 88． 5%
A)。进样量 10 μL，外标法定量。检测绿原酸:λ =
330nm;灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙:采用
ELSD，漂移管温度 80℃，空气流量 1． 5 L /min［2］。
1． 3． 2 混合对照品溶液的制备
精密称取绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断
皂苷乙对照品各适量，置棕色量瓶中，用 50%甲醇
溶解并稀释制成每 1 mL含绿原酸 0． 50 mg、灰毡毛
忍冬皂苷乙 0． 60 mg、川续断皂苷乙 0． 75 mg的混合
溶液，即得。
1． 3． 3 供试品溶液的制备
取干燥样品细粉(过 5 号筛) ，精密称定 0． 5 g，
置 50 mL 容量瓶中，用 50%甲醇定容至刻度，称定
重量，超声处理 40 min，放冷，再称定重量，用 50%
甲醇补足减失的重量，摇匀，8 000 r /min 离心 5
min，取上清过 0． 45 μm滤膜，即得。
1． 4 木犀草苷含量测定
1． 4． 1 色谱条件
色谱柱:Agilent ZORBAX Eclipse XDB － C18
(150 mm × 4． 6 mm，5 μm) ;柱温 25℃;流速 1． 0
mL /min;λ = 350nm;流动相:0． 4%冰醋酸(A)－乙
腈(B) ，梯度洗脱(0 ～ 30 min，90% A ～ 70% A) ;进
样量 10 μL，外标法定量［2］。
1． 4． 2 木犀草苷对照品溶液的制备
精密称取木犀草苷对照品适量，置棕色量瓶中，
用 70%乙醇溶解并稀释制成每 1 mL含 40 μg 的溶
液，即得。
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中 国 野 生 植 物 资 源 第 32 卷
1． 4． 3 供试品溶液的制备
取干燥样品细粉(过 5 号筛) ，精密称定 3 g，置
50 mL容量瓶中，用 70%乙醇定容至刻度，称定重
量，超声处理 1 h，放冷，再称定重量，用 70%乙醇补
足减失的重量，摇匀，8 000 r /min 离心 5 min，取上
清过 0． 45 μm滤膜，即得。
2 结果与讨论
2． 1 线性关系考察
精密吸取不同体积的混合对照品溶液(绿原
酸、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙)和木犀草
苷对照品溶液进样分析，以峰面积(Y)对各对照品
的进样量(X，μg)进行线性回归，所得 4 种成分的线
性回归方程如表 1 所示，结果表明各对照品在其相
应的进样量范围内与峰面积呈现良好的线性关系。
该 4 种对照品的 HPLC色谱峰见图 1a － c和图 2a。
表 1 四种对照品的线性关系
成 分 线性方程 R2 线性范围 /μg
绿原酸 Y1 = 4 097X1 + 5． 76 0． 999 4 0． 25 － 7． 50
灰毡毛忍冬皂苷乙 Y2 = 311． 38X2 + 36． 27 0． 998 2 0． 30 － 6． 00
川续断皂苷乙 Y3 = 386． 51X3 － 26． 88 0． 999 9 0． 15 － 0． 75
木犀草苷 Y4 = 1 227． 5X4 + 0． 05 0． 997 6 0． 16 － 1． 60
供试品中的绿原酸(A)、灰毡毛忍冬皂苷乙(B)和川续断皂苷乙(C)
混合标准品中的绿原酸(a)、灰毡毛忍冬皂苷乙(b)和川续断皂苷乙(c)
图 1 绿原酸和皂苷的 HPLC色谱图
A:供试品木犀草苷;a:标准品中的木犀草苷
图 2 木犀草苷的 HPLC色谱图
2． 2 方法学考察
2． 2． 1 精密度
分别精密吸取混合对照品溶液和木犀草苷对照
品溶液，按各自的色谱条件测定绿原酸、灰毡毛忍冬
皂苷乙、川续断皂苷乙和木犀草苷峰面积的 RSD(n
= 5)分别为 1． 02%、0． 70%、0． 10%和 1． 18%。表
明仪器精密度良好。
2． 2． 2 稳定性
取同一供试品溶液，分别于 0、4、6、12、24 h 进
样测定的绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙
和木犀草苷峰面积的 RSD 分别为 1． 56%、2． 55%、
0． 51%和 1． 09%(n = 3) ，表明供试品溶液中各组分
在 24 h内稳定。
2． 2． 3 重复性
分别按 1． 3． 3 和 1． 4． 3 项下方法制备供试品溶
液 5 份，按各自色谱条件测定绿原酸、灰毡毛忍冬皂
苷乙、川续断皂苷乙和木犀草苷含量的 RSD(n = 5)
分别为 1． 89%、3． 06%、3． 81%和 1． 34%。表明本
方法重复性良好。
2． 2． 4 加样回收率
取已知含量的经蒸制烘干的样品粉末，精密称
定后分别精密加入对照品适量，按 1． 3． 3 和 1． 4． 3
项下方法制备供试品溶液，测定各组分含量计算回
收率，结果见表 2。
表 2 四种活性组分加样回收率试验结果(n = 5)
成 分
样品含量 /
mg·g － 1
加入量 /
mg·g － 1
测定值 /
mg·g － 1
平均回
收率 /%
RSD /
%
绿原酸 37． 05 2． 50 40． 89 101． 01 2． 06
37． 05 5． 00 41． 83
37． 05 7． 50 44． 63
灰毡毛忍冬皂苷乙 112． 92 3． 00 119． 11 102． 84 1． 97
112． 92 6． 00 119． 93
112． 92 9． 00 127． 90
川续断皂苷乙 5． 42 3． 75 9． 22 100． 46 0． 80
5． 42 7． 50 12． 87
5． 42 11． 25 16． 75
木犀草苷 1． 03 0． 13 1． 16 99． 09 1． 08
1． 03 0． 26 1． 24
1． 03 0． 40 1． 40
2． 3 样品测定
按照“1． 2”项下的 4 种干燥方法处理的灰毡毛
忍冬花蕾，采用 HPLC － UV 法检测绿原酸(图 1A)
和木犀草苷(图 2A) ，采用 HPLC － ELSD 检测灰毡
毛忍冬皂苷乙(图 1B)和川续断皂苷乙(图 1C)。从
HPLC 色谱图中可见，各检测组分均能获得良好的
分离。以干燥品计算各干燥样品中活性成分的含
量，结果如表 3 所示。依据 2010 年版《中国药典》，
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第 2 期 姚正颖，等:不同干燥方法对灰毡毛忍冬花蕾中活性成分含量的影响
山银花的干燥花蕾中绿原酸含量不低于 2． 0%、灰
毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙总量不低于5． 0%;
金银花干燥花蕾中木犀草苷含量不低于0． 05%［2］。
由表 3 可知，不同干燥方法对于不同化学成分的影
响不一样。绿原酸等有机酸成分具有显著的抗病
毒、调节糖脂代谢等作用［6］，按其递减总趋势:蒸制
烘干法 ＞蒸制晒干法 ＞生晒法 ＞烘干法，其中烘干
法干燥的样品已不符合药典的规定，蒸制烘干法含
量最高。灰毡毛忍冬皂苷乙等三萜皂苷具有抗肿瘤
活性［6］，按皂苷总量递减总趋势:蒸制烘干法 ＞烘
干法 ＞生晒法 ＞蒸制晒干法。木犀草苷等黄酮具有
抗菌活性［6］，按其递减总趋势:蒸制晒干法较好，蒸
制烘干法和生晒法次之，烘干法则未检出。
由此可见，经蒸制再干燥的样品中各指标组分
含量均高于《中国药典》的规定，说明水蒸气蒸制能
使灰毡毛忍冬花蕾中的多酚氧化酶迅速灭活，从而
减少氧化酶对样品中有效成分含量的影响。高建邦
等［7］研究金银花的不同加工方法，结果表明蒸干样
品中绿原酸含量和色泽均优于烘干和晒干样品。包
卫华［8］采用蒸制后干燥的方法所获得金银花样品
中绿原酸含量比直接干燥的样品高出 5 倍多。本研
究采用蒸制烘干法干燥获得的灰毡毛忍冬花蕾中绿
原酸和皂苷总量两项指标显著高于其他方法(P ＜
0． 01) ，而且获得的干燥成品色泽金黄，品相较好。
吉永奇等［9］对金银花的蒸后烘干工艺参数进行了
优化，影响绿原酸含量的主要因素是蒸制时间，优化
后的工艺较传统干燥方法，金银花的绿原酸含量和
干燥速率分别提高了 14． 8%和 51． 7%。我们后续
将展开蒸制烘干法工艺参数的研究，为其作为灰毡
毛忍冬花蕾的规模化干燥加工方法提供依据。
木犀草苷作为《中国药典》金银花项下的指标
成分，在本研究材料灰毡毛忍冬花蕾中也能测得，且
含量高于药典规定。据 2010 版《中国药典》所述，
山银花与金银花具有相同的功效与主治，因此，建议
木犀草苷也作为控制山银花质量的参考依据。
表 3 不同干燥方法处理的灰毡毛忍冬花蕾中
活性成分的含量(x ± s%，n = 3)
加工方法 绿原酸 灰毡毛忍冬皂苷乙 川续断皂苷乙 木犀草苷
生晒法 2． 278 ± 0． 025C 8． 365 ± 0． 172C 0． 318 ± 0． 019C 0． 106 ± 0． 005B
烘干法 1． 234 ± 0． 049D 9． 757 ± 0． 106B 0． 435 ± 0． 023B ND
蒸制晒干法 3． 156 ± 0． 013B 7． 506 ± 0． 185D 0． 329 ± 0． 009C 0． 122 ± 0． 003A
蒸制烘干法 3． 705 ± 0． 070A 11． 292 ± 0． 212A 0． 542 ± 0． 125A 0． 103 ± 0． 004B
ND:未检出;同一列的不同字母代表有极显著性差异(Duncan’s test，P = 0． 01)。
3 结 论
本研究采用生晒法、烘干法、蒸制晒干法和蒸制
烘干法对灰毡毛忍冬花蕾进行干燥加工，并利用
HPLC － UV 法和 HPLC － ELSD 法对 4 种活性成分
进行检测，方法准确、稳定、可靠。其中以蒸制烘干
法获得的干燥样品中，绿原酸含量达 3． 705%，灰毡
毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙总量达 11． 834%，木
犀草苷含量达 0． 103%。前两项含量显著高于另 3
种方法，并且 3 项指标均高于《中国药典》对金银花
和山银花的规定，干燥成品色泽好。因此，建议采用
蒸制烘干法作为灰毡毛忍冬花蕾的干燥加工方法。
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