全 文 ：高效阳离子交换色谱法测定槟榔中槟榔碱的含量
广东省药品检验所 (广州 51 01 8 0) 陈浩按 赖宇红
广东省汕头市药品检验所 (汕头 5 151 0 ) 王晓枉
广东药学院 (广州 51 0 224 ) 杨卫荣
摘要 目的 :建立槟榔中槟榔碱的含量测定方法 。 方法 :以高效阳离子交换色谱 一紫外检测器分离测定槟榔碱 ,
并考察提取过程中的关键步骤及整个方法学 。 结果 : 重复性试验 1洛 1) 二 2 . 3% ( n 二 6) , 加样回收率为 98 . 6 % ( RS D 二
5
.
0 %
, n 二 6 )
。 结论 : 本法快速 、 简便 、专属性强 、 灵敏度高 , 可应用于控制槟榔及其成方制剂中的槟榔碱含量 。
关键词 槟榔 槟榔碱 高效液相色谱 阳离子交换色谱
槟榔有杀虫消积 、 降气 、 行水 、 截疟的功效 ,其质
量标准收载于中国药典 2仪刃年版一部 , 含量测定项
为酸碱滴定法测定醚溶性生物碱 ,灵敏度低 、专属性
差 。 由于槟榔碱 ( A er co l in e )是槟榔主要有效成分并
具有一定毒性 〔` 〕 ,而且槟榔碱的性质并不十分稳定 ,
槟榔及其成方制剂中的槟榔碱含量有必要得到更好
的控制 。 本文选用阳离子交换高效液相色谱柱测定
槟榔碱的含量 , 并考察了提取过程 中对槟榔碱稳定
性有影响的步骤 ,现将结果报道如下 。
1 材料与仪器
,
.
, 仪器 H l〕 105 0高效液相色谱仪 (班〕 105 0 四元
梯度泵 , M V月〕 多波长检测器 , HP Che ms at ion Z D 化
学工作站 , 六通 阀 20 川定 量环 ;) 色谱 柱 : H yeP 二 il
SC XS 产 , 4 . 6 mrn
x 2 50 mrn
; P/ N
: 342 05
-
0 20 ; S / N : 5 /
1的 / 55 1 1 ( 3一 2 19 3 5 ) 。
1
.
2 样品与试药 槟榔 , 市售 ,经广东省药品检验
所中药室吴志南副主任中药师鉴定 ;氢澳酸槟榔碱
对照品 , A C RO S ,助 t 0A 13 49 120 1 , 纯度 9 % 。
2 方法与结果
2
.
1 提取条件的考察
2
.
1
.
1 提取方法的选择 : 根据槟榔碱的溶解性 ,选
用水 、 乙醇 、 乙醚三种溶媒 , 比较其提取情况 。 结果
乙醚的提取效率非常低 ;水 、 乙醇提取的杂质太多 ,
浓缩 、 净化存在较大的困难 ;而氨性 乙醚提取率高 、
溶液相对较纯 ,故选用氨性乙醚超声提取 。
2
.
1
.
2 提取过程 中槟榔碱稳定性的考察 : 按供试
液制备方法 ,取槟榔粉末 6 9 ,加氨水 o . s inl ,加 乙醚
lX() lnI
、
5 0 lnI
、
SOhlI 分别超声 5 m i n 、 2 而 n 、 2 而 n ,合并
乙醚提取液 ,精密吸取 巧 耐 共 12 份 ,其中 6 份置蒸
发皿 中挥去乙醚 , 在预定时间以流动相溶样 ,定容至
or 以 , 离心 ,取上清液过 0 . 45 脚 滤膜 , 取续滤液作
为氨性乙醚系列供试液 ; 另 6 份加至预置 I inl 磷酸
液 ( 5一 1侧洲) )的蒸发皿 中 , 挥去乙醚 ,在预定时间以
50 % 乙睛溶样定容至 or 而 , 离心 ,取上清液过 0 . 4 5
中药材第 25 卷第 l 期 2以) 2 年 1月
脚 滤膜 ,取续滤液作为磷酸中和系列供试液 。 自吸
出乙醚液起至溶样之间为计时段 ,分别在不同时段
溶样 , 注入液相色谱仪测定 ,考察乙醚挥干放置过程
中的稳定性 。 实验结果表 明 , 磷酸中和系列供试液
SR D
= 2
.
45 (
n 二
6)
, 没有 明显的趋 向性 ; 而氨性乙 醚
系列随时间放置的分解现象显著可见 。 这可能是乙
醚提取液带出一定量的氨 , 乙醚挥干后 , 氨的浓度较
大 ,碱性较强 ,而槟榔碱在碱性条件下易分解 。 如果
立即溶样 ( o . s h ) ,分解 尚不明显 ;但随后的数小 时
内 ,则发生急剧的显著分解 ;而后 , 分解速度逐渐减
缓 ,这可能跟氨的挥发 、碱性下降相关 。 实验通过蒸
发皿中予置一定的磷酸液 ,则很好地中和乙醚提取
液中带出的氨 , 有效地稳定了槟榔碱 。
2
.
,
.
3 提取次数 : 取槟榔按样品测定法操作 , 分别
收集处理乙醚三次超声提取液 , 注人液相色谱仪测
定 。 结果表明 ,在三次提取下能基本保证槟榔碱被
提取完全 。
2
.
2 测定条件的选定
2
.
2
.
1 色谱柱 : 选用对 生物碱的分离有专属性的
阳离子型 ( SC X )高效液相色谱柱 ,流动相 : 乙睛 一磷酸
( 5一 10 1〕, 氨试液调 p H 3 . 8 )( 60 : 40 ) 。 供试 品色谱
与氢溟酸槟榔碱对照品色谱见图 。
2
.
2
.
2 检测波长的选择 : 取氢澳酸槟榔碱对照品
以流动相稀释至吸收度适 中的溶液 , 在紫外分光光
度计上扫描测定 ,槟榔碱只有末端吸收 , 参照文献选
用 1Z 5 mn 为检测波长图 。
2
.
3 线性关 系的考察 取氢嗅酸槟榔碱对照品母
液 , 加 甲 醇 稀 释 成 0 . 0 5 74 2 、 0 . 1 14 84 、 0 . 17 22 6 、
0
·
2 % 8
、
o
.
28 7 or 11 19/ 血 的溶液 , 分别注人液相色谱
仪 , 以氢澳酸槟榔碱的浓度 m留而 为横坐标 , 色谱峰
面积为纵坐标 ,在 0 . 05 一 0 . 30 n l岁而 范围内 ,得线性
方程为 : Y 二 57 2以 . 仅双拓 X 一 54 . 87 少X ) , : = 0 注刃性刃 。
2
.
4 精密度试验 取 同一份供试 品溶液 , 进样 5
次 , 结果 SR D 为 0 . 24 % ( n = 5) 。
DOI : 10. 13863 /j . i ssn1001 -4454. 2002. 01. 013
MW D I A
.
S一g二 2 1 5. 4 Re f二 5 5 0、 1 0 0 o f B L侣 L0 0 9 4刀
n 1 A U
MW O I A
,
S 一g 二 2 1 5 . 4 R e f二550
,
1 0 0f B L \B L以关冷 D
M W D I A
,
5 19 二2 15
.
4 R时二 5 50 . 10 o f B L\ B L0 0 8 7
.
D
(e )
3021
。一rnUAm3021
图 槟榔与氢澳酸槟榔碱高效液相色谱
( a)
. 槟榔 ( b) . 氢澳酸槟榔碱 ( )C . 澳化钠溶液
2
.
5 重复性试验 取同一供试 品粉末 , 按样品测
定项下的方法 , 平行测定 6 份 ,结果 SR D 为 2 . 3% 。
2
.
6 加样回收试验 分别精密称取同一供试品粉
末 0 . 1 9 、 0 . 巧 g 、 0 . 2 9 各两份 ,分别精密加人对照品
母液 3 . 0 时 、 2 . 5 而 、 2 . 0 耐 , 挥去 甲醇 , 按供试品测
定法 , 依法平行操作 , 结果平均 回收率为 98 . 6 % ,
RS D 为 5 . 0% ( n = 6 ) 。
2
.
7 样品测定
2
.
7
.
1 对照品溶液的制备 : 取氢澳酸槟榔碱对照
品 29 . o gm ,置 10 而 量瓶中 ,加 甲醇稀释至刻度 ,
摇匀 ,作为对照品母液 。 精密吸取 5 耐 , 置 10 耐 量
瓶中 ,加磷酸 ( 5~ l以刃 , 氨试液调 p H 3 . 8) 稀释至刻
度 ,摇匀 , 即得 。
2
.
7
.
2 供试品溶液的制备 : 取供试品粉碎过 3 号
筛 ,精密称取 0 . 3 9 ,加氨水 0 . 4 d , 立即加乙醚 50 耐
超 声 (在 2 5 ℃以 下 ) 5而 n ,倾出乙醚提取液至预置 1
d 磷酸液 ( 5~ l 《刀 ) )的蒸发皿 中 , 再分别加 乙醚 30
耐 、 20 耐 超声 2 次 , 每次 Z m in , 合并乙醚提取液 , 挥
去乙醚 , 残渣加 50 % 乙睛使溶解 , 转移至 10 司 量
瓶 ,并 以 同一 溶剂 稀 释至 刻 度 , 摇 匀 , 离心 ( 3 (联 )
甲m ) 5 m in ,取上清液过 0 . 45 脚 滤膜 ,取续滤液作为
供试液 。 实测样品 ,结果含槟榔碱 以氢嗅酸槟榔碱
( CS H 13 N仇 · HB r )计 , 为 0 . 5 9% 。
3 讨论
3
.
1 槟榔中槟榔碱的含量测定方法有高效液相色
谱法图 、 薄层扫描法〔3〕 、 电位滴定法闭 。 经典容量分
析川的测定灵敏度低 、 专属性差 ;薄层扫描法需要以
改良碘化秘钾显色 , 灵敏度也不高 ; 以高效液相色谱
一紫外检测灵敏度高 , 阳离子交换色谱柱分离专属性
好 、 效能高 。
3
.
2 槟榔碱性质不稳定 ,可被碱水解 , 又易随水蒸
气挥发 。 因此 ,探讨槟榔碱 的提取方法对建立测定
方法有指导性意义 。 氨性乙醚提取法必须注意碱性
下槟榔碱的稳定性 。 根据文献报道 , 槟榔的含量测
定以选用过三号筛 的粉末超声处理 , 提取可相对完
全 [ 5〕。 因此 ,尽量缩短超声时间 、 将超声水浴温度控
制在 25 ℃以下 , 并立 即以 l 耐 磷酸液 ( 1~ 1(XX) )中
和氨性乙醚提取液 ,是提取过程中保证槟榔碱稳定
性的关键步骤 ,加样回收试验表明本法可行 。
参 考 文 献
柯铭清 . 中草药有效成分理化与药理特性 . 长沙 : 湖南
科学技术出版社 , 19 8 2 : 426
H
Ll a n g LJ
,
et al
. 场沙详山 〕m如 I c e h卿 d c ha 加 alt 尊a】h) ic de -
et nlu ant io
n of het al 目 io ds in 阮et l nu t . J C l l or m a l o g r . 1989 ,
47 5
:书 7
林励 ,等 . 槟榔中槟榔碱含量的薄层扫描测定 . 中国中
药杂志 , 19 2 , 17 ( 8 ) : 49 1
黄德杰 ,等 . 水蒸气蒸馏一电位滴定法测定槟榔中槟榔碱
的含量 . 中成药研究 , 1984 , ( 6) : 28
徐丽华 , 等 . 药材粒度和提取方法对槟榔含量测定结果
的影响 . 药物分析杂志 , l卯 8 , l 8( 4 ) : 26 3
( 2 (X) 1
一 10 一 08 收稿 )
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