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酒瓶兰的组培快繁技术试验



全 文 :热带农业科技 2005,28(1)
Tropical Agricultural Science & Technology -6-
酒瓶兰的组培快繁技术试验
高 燕,白燕冰,季丽坤,张学英
(云南省德宏热带农业科学研究所,云南 瑞丽 678600)
摘要:以酒瓶兰的茎尖、茎段作为外植体组织培养,试验结果表明:适宜的起始培养基是MS+6-BA 3.0
mg·L-1+NAA 0.5mg·L-1;增殖培养基是MS+6-BA 2.0mg·L-1+NAA 0.05mg·L-1;生根培养基是1/2MS+NAA
1.0mg·L-1。
关键词:酒瓶兰;茎尖;组织培养;培养基
中图分类号:S682.19 文献标识码:B 文章编号:1672-450X(2005)01-0006-03
收稿日期:2004-06-13
酒瓶兰(Nolina recurvata Lem)为百合科酒瓶
兰属多年生常绿小乔木状草本植物。酒瓶兰茎干直
立,下部肥大,形似酒瓶;老株表皮龟裂,状似龟
甲,颇具特色;叶线形,全缘或细齿缘,软垂状;
总状花序,顶生,花白色,是一种特别适于热带地
区绿化和美化的园林观赏植物。酒瓶兰常用种子繁
殖,但国内栽培不易结籽,种子多由国外进口,价
格昂贵,且繁殖速度极慢。为满足市场需求,我们
进行了酒瓶兰组培技术快繁种苗的研究,现将结果
报道于下:
1 材料和方法
1.1 试验材料
取酒瓶兰茎尖作为外植体。
1.2 方法
1.2.1 起始培养
取生长健壮、无病虫害的酒瓶兰茎尖,用0.1%
的洗衣粉水冲洗2~3次,经清水洗净后,用
0.1%HgCl2灭菌15min,再用无菌水冲洗5~6次,
剥去叶片,切成1cm的小茎段晾干,正向接种于起
始培养基(MS+ 6-BA 1.0~4 mg·L-1+NAA 0.1~
0.5mg·L-1 +蔗糖3%+琼脂0.7%,pH5.8),置于培
养温度(25±1)℃,光照10~12h/d,光照强度
1 500 lx的培养条件下,诱导腋芽萌发,30d后转瓶。
1.2.2 增殖培养
把起始培养形成的愈伤组织切块,接种于增殖
培养基(MS+6-BA 0.5~3 0mg·L-1+NAA 0.05~
0.1mg·L-1+蔗糖3%+琼脂0.7%,pH 5.8)。培养条
件同上,以诱导形成丛生芽。比较不同条件下丛生
芽的生长状态及增殖率,30d后转瓶。
1.2.3 继代增殖
在继代培养基(MS+6-BA 2.0mg·L-1+NAA
0.05mg·L-1)上培养,30d转1次瓶。
1.2.4 生根培养
将继代培养的丛生芽切成单苗,接种于生根培
养基(1/2 MS+NAA 0.1~2.0mg·L-1+蔗糖2%+琼
脂0.7%,pH 5.8)上培养。培养条件同上,诱导形
成完整的根系。比较不同状态的幼苗在不同条件下
的生根情况。
1.2.5 移栽
取出生根培养的幼苗,洗去附着在苗上的培养
基,移栽至混合基质(珍珠岩∶河沙为3∶1)中,
荫蔽度80%,保湿培养。
2 结果与分析
2.1 不同激素(浓度)对茎尖诱导的影响
茎尖材料接种培养10d后,顶芽开始萌发,切
口形成愈伤组织,20d后长出不定芽,30d后诱导
速度快的可分化出3~4个不定芽,差的仅萌出1个
芽。不同的激素(浓度)对愈伤组织的诱导效果(表
1):参试的8种培养基都能诱导出愈伤组织,分化
出幼苗,诱导率在25%以上。在附加6-BA 3.0
mg·L-1的培养基上,诱导率高达90%~95%;
6-BA 3.0 mg·L-1+NAA 0.5mg·L-1分化的新芽多,
粗壮;当6-BA为4.0mg·L-1时,不定芽出现明显
的变异,愈伤组织肥大、开裂、叶小。
DOI:10.16005/j.cnki.tast.2005.01.003
热带农业科技 2005,28(1)
Tropical Agricultural Science & Technology-7-
2.2 不同激素(浓度)对不定芽分化的影响
诱导产生的愈伤组织接种在8种不同激素浓度
组合的增殖培养基上,培养30d后(表2),平均诱
导率81.2%,其中以6-BA 2.0mg·L-1+NAA 0.05
mg·L-1为最好,分化率100%,月增殖率达5倍,
分化出的不定芽多、粗壮,无变异,长势好。
随着6-BA浓度的增加,茎尖愈伤组织减少,块
茎小,愈伤组织有似海绵化,颜色淡黄色,分化的
不定芽少,生势细弱。这说明6-BA对诱导不定芽
有促进作用,只有使用浓度适当诱导率才会提高,
幼苗长势好,而一定量的NAA对不定根的分化有促
进作用。
2.3 继代增殖培养代数对萌发率、增殖率、成苗
率的影响
在MS+6-BA 2.0mg·L-1+NAA 0.05mg·L-1培
养基上进行继代增殖培养,随着代次的增加,在继
代9代以后,其萌发率、增殖率、成苗率呈明显下
降趋势(表3)。
2.4 NAA不同浓度对幼苗生根的影响
当继代培养的幼苗长出有2~3片叶时,从基部
切下单苗接于含有4种不同浓度的NAA生根培养基
上培养,结果(表4)在NAA 0.5~1.0 mg·L-1的
培养基上,10d左右开始长根,30d后不定根生根
率达100%,不定根伸长达4.2~4.6cm,平均每株
幼苗有4.1~5.6条根,幼苗生势粗壮。随着NAA浓
度的增加或减少,不定根数减少,幼苗生势变弱。
2.5 生根苗的炼苗
表2 不同植物激素(浓度)增殖培养基对不定芽分化的影响
增殖培养基(mg·L-1) 接种数(个) 分化数(个) 不定芽总数(个) 平均分化数(个) 分化率(%)
6-BA 0.5+NAA 0.05 20 12 30 2.5 60
6-BA 1.0+NAA 0.05 20 15 48 3.2 75
6-BA 2.0+NAA 0.05 20 20 100 5 100
6-BA 3.0+NAA 0.05 20 18 75 4.2 90
6-BA 0.5+NAA 0.1 20 13 38 2.9 65
6-BA 1.0+NAA 0.1 20 16 65 4.1 80
6-BA 2.0+NAA 0.1 20 19 90 4.7 95
6-BA 3.0+NAA 0.1 20 17 73 4.3 85
合 计 160 130 519 3.9 81.1

表1 不同激素(浓度)对茎尖诱导的影响
起始培养基
(mg·L-1)
接种愈伤组织
片数(个)
诱导数
(个)
诱导率
(%) 诱导情况
6-BA 1.0+NAA 0.1 20 5 25 诱导速度慢,抽新芽少,
6-BA 2.0+NAA 0.1 20 10 50 诱导速度较快,新芽长势正常。
6-BA 3.0+NAA 0.1 20 18 90 诱导速度快,抽生新芽多,粗壮。
6-BA 4.0+NAA 0.1 20 16 80 诱导速度较快,新芽长势一般。
6-BA 1.0+NAA 0.5 20 6 30 诱导速度慢,新芽少,较弱。
6-BA 2.0+NAA 0.5 20 12 60 诱导速度较快,新芽长势正常。
6-BA 3.0+NAA 0.5 20 19 95 诱导速度快,新芽多,粗壮。
6-BA 4.0+NAA 0.5 20 17 85 诱导速度较快,愈伤组织肥大、开裂,新芽细弱,叶小


表3 继代代数对茎块萌发、增殖、成苗率的影响
继代代数 萌发率 (%)
增殖率
(%)
成苗率
(%) 生长状况
1 87 287 91 幼苗茁壮
3 94 301 93 幼苗茁壮
6 98 323 95 幼苗茁壮
9 90 250 86 幼苗中等
12 82 120 61 幼苗细弱

热带农业科技 2005,28(1)
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幼苗在生根培养基上培养30d后,长至4~
5cm,将瓶苗在室内过渡7~10d,取出幼苗,洗净
附着在根上的培养基,用0.5%~1.0%的多菌灵或
高锰酸钾溶液消毒30s,晾干。移栽在珍珠岩∶河
沙为3∶1的混合基质中,浇足定根水,置于80%荫
蔽度的荫棚中,保湿10d后,荫蔽度调整为60%。
在炼苗过程中必须保持较适宜的温、湿度,高温季
节每天喷雾2~3次。小苗移栽10d后,每7d喷施
表4 NAA不同浓度对幼苗生根的影响
NAA
(mg·L-1)
接种
幼苗数
(个)
生根

(%)
平均
根数
(条)
平均
根长
(cm)
幼苗
生势
0.1 20 40 1.2 2.1 细
0.5 20 100 4.1 4.2 中等
1.0 20 100 5.6 4.6 粗壮
2.0 20 100 3.2 3.5 中等
0.5%氮肥1次或MS无机盐的营养液。30d后,成
活率可达95%。抽发新叶后即可移栽塑料袋或土壤
中。
3 小结
试验表明,MS+6-BA 3.0mg·L-1+NAA 0.05
mg·L-1、MS+6-BA 2.0mg·L-1、1/2 MS+ NAA
1.0mg·L-1分别是酒瓶兰组培快繁起始培养、增殖
培养和生根培养适宜的培养基;继代增殖培养宜在
第9代以前就出瓶进行生根培养;良好的炼苗技术
其成活率可达95%。
4 致谢
李桂琳、赵云翔、钏相仙、周华等参加了部分
试验工作,特此致谢!
Tissue Culture Technique of Nolina recurvata
GAO Yan, BAI Yan-bing, JI Li-kun, ZHANG Xue-ying
(Dehong Tropical Agriculture Institute of Yunnan, Ruili 678600 China)
Abstract: The stem top and stem segment of the Nolina recurvata are good explant. The originative culture
medium made of MS+6-BA3.0 mg/L+NAA0.5mg/L.The multiplicative culture medium made of MS+6-BA2.0mg/L+NAA
0.05mg/L.The rooting culture medium made of 1/2MS+NAA0.5mg/L.
Key words: Nolina recurvata; explant; Tissue Culture
封面说明——红木
红木(Bixa orellana),亦称胭脂树,为红木科红木属速生灌木或小乔木,是一种古老而著名的食用色
素植物,原产热带美洲和西印度群岛,现广泛分布于世界热带、亚热带地区。从其假种皮中提取的天然黄
橙色素称胭脂树橙(annatto),亦叫红木素(Bixin),为类胡萝卜素中的一种,既可供食用染色,又能作棉
麻纺织品与药剂品染色。1997年我国卫生部颁布的“食品添加剂使用卫生标准”中,已将天然胭脂树橙列
入着色剂新品种名单。
1960年,云南省热带作物科学研究所引进红木在西双版纳试种,表现出适应性广、粗放、速生的特
性,并对红木的丰产栽培技术和色素提取、纯化技术进行了深入的研究,为云南热区发展胭脂树橙天然色
素生产提供了技术基础。