全 文 ：　　表 4 　不同营养液下菘蓝霜霉病菌的孢子囊萌发率(%)
h 蔗糖
1∶5 1∶10 1∶20
叶片榨出液
1∶5 1∶10 1∶20
土壤浸渍液
1∶5 1∶10 1∶20 CK
2 0.3 0.3 0.2 0.7 0.0 0.3 0.0 0.0 0.0 1.1
4 2.1 0.0 0.5 1.3 0.7 0.7 1.7 1.1 0.3 2.1
6 15.7 7.5 5.0 2.6 1.3 1.0 5.0 3.0 1.3 8.5
8 25.2 15.8 13.1 12.6 10.5 9.8 11.0 11.7 11.6 15.4
10 29.2 24.0 19.9 12.6 12.0 11.7 13.0 15.0 11.9 23.2
24 32.4 25.9 20.3 12.7 12.0 12.0 18.0 15.1 11.9 25.5
净 ,置于 100%湿度 , 18 ～ 20℃下保湿 10 ～ 15 h后 ,
挑取新鲜孢子囊完全混匀后再进行试验 ,否则难免
出现以上现象。
3.2 　孢子囊在不同酸碱度的磷酸缓冲液中的萌发
率都低于蒸馏水 ,且萌发得较晚 ,表明不同酸碱度的
磷酸缓冲液对孢子囊的萌发均有抑制作用 ,有待进
一步研究。
3.3 　据 《中国真菌志 》第六卷霜霉目记载 ,寄生霜
霉的寄主为欧菘蓝 I.tinctoria〔5〕 ,而甘肃成县所采
的寄主为菘蓝 I.indigotica,与文献记载寄主不一
致 ,是否为新寄主尚需进一步研究。
致谢:承魏勇良教授悉心指导及审阅全文,深表谢意。
参 考 文 献
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[ 6] 戴芳澜 .中国真菌总汇 .北京:科学出版社 , 1979:28.
(2008-05-19收稿
2008-08-20修回)
灰毡毛忍冬新鲜花蕾中多酚氧化酶热稳定性研究
赵　宇1 ,崔　晶 2 ,史　敏 1 ,温学森1
(山东大学 1.药学院生药学研究所;2.齐鲁医院药剂科 ,山东济南 250012)
　　摘要　灰毡毛忍冬的新鲜花蕾以磷酸盐缓冲液提取多酚氧化酶 ,以邻苯二酚为底物 , 测定酶的特异性 、稳定性
和活性。结果发现该酶热稳定性差 ,在 4℃低温放置即有部分失活 ,与热蒸汽作用 30s后即完全失活。
关键词　灰毡毛忍冬;花蕾;多酚氧化酶;热稳定性
中图分类号:R282.2　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2008)12-1784-03
作者简介:赵宇(1980-),山东济南人 ,硕士 ,助理实验师 ,从事生药学研究;Tel:0531-88382008, E-mail:zhaoyu@sdu.edu.cn。
　　忍冬科灰毡毛忍冬 Loniceramacranthoides
Hand.-Mazz.的干燥花蕾入药为山银花 ,有清热解
毒 、凉散风热的作用 〔1〕。由于其产量较高 ,且花蕾
能较长时间保持未开放状态 ,便于采摘 ,故近年来栽
培面积和范围逐渐增大。目前山银花除药用外 ,还
是一种保健饮品 〔2〕。
灰毡毛忍冬中主要成分为绿原酸 〔3〕 ,它是具有
邻苯一种二酚结构的有机酸 ,较易氧化 ,尤其在植物
中多酚氧化酶(PPO)的催化下 ,氧化更为迅速。灰
毡毛忍冬新鲜花蕾中含有大量 PPO,在花蕾采摘后
的干燥过程中 ,导致绿原酸大量损失 ,并使药材颜色
变深 ,常称作 “褐变 ”,导致药材外观品质下降。本
文报道从灰毡毛忍冬新鲜花蕾中提取 PPO,研究其
底物特异性 、稳定性和活性变化规律 ,为山银花采后
的褐变问题提供理论依据。
1　仪器与材料
·1784· JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 31卷第 12期 2008年 12月
DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2008.12.009
TU-1800型紫外可见分光光度计 (北京普析通
用);T18 basic匀浆器(IKA);GL-20G-Ⅱ型高速冷
冻离心机(上海安亭)。
灰毡毛忍冬新鲜花蕾采自山东临沂 。邻苯二
酶 、间苯二酚 、对苯二酚均为上海国药集团出品 。其
他试剂为国产分析纯 。
2 　方法与结果
2.1 　多酚氧化酶的活性测定 〔4, 5〕 　取新鲜花蕾 5
g,加入预冷的 pH6.0磷酸盐缓冲液 25 ml,冰浴下
匀浆粉碎。 12000 r/min低温离心 20min,取上清液
约 20ml,测试酶活性。
取酶液 0.1 ml,加入 pH6.0磷酸盐缓冲液 1.9
ml,混匀 ,加入 0.1 mol/L的邻苯二酚底物 1 ml,反
应 3 min,在紫外可见分光光度计 200 ～ 600nm范围
内扫描 ,得最大吸收波长为 410nm。
取酶液 0.1 ml,加入 pH6.0磷酸盐缓冲液 1.9
ml,混匀 ,加入 0.1 mol/L的邻苯二酚底物 1 ml,立
即置于紫外可见分光光度计 410 nm波长处测定 3
min内吸光度值变化 ,以邻苯二酚加 pH6.0磷酸盐
缓冲液的自然氧化作对照。结果如图 1所示:新鲜
花蕾含有的 PPO反应速度很快 ,在 3 min内几乎呈
直线上升 ,其后变缓 。故选择 3 min内的吸光度值
变化来表示酶活性 ,并定义为:在室温 20℃下 ,每 1
ml酶液 3 min内吸光度值上升 0.01为 1个酶活性
单位(U)。
图 1　酶活性测试曲线
　表 1 　新鲜花蕾中 PPO活性测定
样品编号 酶活性(U) 平均酶活(U) RSD(%)
1 631
2 583 610.67 4.07
3 618
　　三样品间 RSD=4.07%,说明该方法重现性较
好 ,能真实反映灰毡毛忍冬的新鲜花蕾中 PPO的活
性情况 。
2.2 　底物特异性　为考察灰毡毛忍冬新鲜花蕾中
所含 PPO的底物特异性 ,分别以 0.1 mol/L的邻苯
二酚 、间苯二酚和对苯二酚为底物 ,在相同条件下测
试酶活性 ,结果如图 2所示:邻苯二酚为底物所得
PPO活性为 618U,而间苯二酚和对苯二酚为底物均
测试不到酶活性。可见灰毡毛忍冬新鲜花蕾中所含
的 PPO仅能特异性催化氧化邻苯二酚 ,即邻苯二酚
为 PPO的特异底物。
图 2　新鲜花蕾中 PPO的底物特异性
2.3　PPO稳定性　新鲜花蕾 ,按上述方法制得酶
液置于 4℃冰箱保存 24h,再按上法测试酶活性 ,结
果如图 3,经计算酶液 PPO的初始活性为 631U,放
置 24 h后 PPO活性下降至 434U,下降了 31.2%。
可见 , PPO在提取液体系中稳定性较差 ,低温保存
24 h,活性有较大下降 ,但总体仍具有较高的催化氧
化活性。
图 3　酶稳定性示意图
图 4　加工过程中酶稳定性变化规律
2.4　加工过程中活性变化规律　新鲜花蕾若干
份 ,每份 5g,置于不锈钢纱网上 ,快速放入蒸锅蒸制
不同时间 ,按时迅速取出 ,置于冰浴中快速冷却至室
·1785·JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 31卷第 12期 2008年 12月
温 。加入预冷的 pH6.0磷酸盐缓冲液 ,冰浴下匀浆
粉碎。 12000 r/min低温离心 20min,取上清液测试
酶活性 。结果(图 4):新鲜花蕾在蒸制 10 s后 , PPO
活性由初始的 631U迅速下降至 173U, 下降了
72.6%。可见温度对 PPO的稳定性影响很大 ,在热
蒸汽的高温作用下 , PPO能迅速失活;蒸制 20 s后 ,
仅具有微弱活性(54U);而蒸制 30s之后 ,即完全失
活 。
与 PPO的活性变化相对应 ,蒸制 10 s后 ,匀浆
液颜色开始为棕黄色 ,之后迅速变为黑褐色 。蒸制
20 s的匀浆液开始为浅绿色 ,其后逐渐变为棕褐色
至黑褐色。蒸制 30 s与蒸制 60 s的样品匀浆液均
为浅黄绿色 ,放置较长时间颜色不发生改变。
3 　小结与讨论
本文采用邻苯二酚为底物 ,研究表明灰毡毛忍
冬新鲜花蕾中含有 PPO,邻苯二酚为其特异底物 。
该酶热稳定性较差 ,在 4℃低温放置即有一定活性
损失 ,在高温下能快速失活。以热蒸汽蒸制 30 s以
上 ,即可使该酶灭活 ,从而防止了对绿原酸活性成分
的催化氧化 ,既保持了药材的外观品质 ,又降低了活
性成分的损失 ,保证了药材质量 。本方法可在药材
采后加工过程中推广使用。
参 考 文 献
[ 1] 卫生部药典委员会 .中华人民共和国药典 .一部 .北
京:化学工业出版社 , 2005:21-22.
[ 2] 彭国平 , 饶力群 ,杨华 , 等.活性湘蕾金银花茶的制备与
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(2008-04-09收稿)
·动物药研究·
ICP-AES法测定貂心的金属元素
张丽华 ,孙晶波 ,苑广信
(北华大学药学院 ,吉林吉林 132013)
　　摘要　目的:研究貂心中金属元素的种类及含量。方法:样品湿法消化后应用 ICP-AES法同时测定多种金属
元素。结果:检出限为 0.0004 ppm～ 0.0121 ppm, 加样回收率为 96.1% ～ 104.3%, RSD为 0.5% ～ 2.4%。 结论:
ICP-AES法测得貂心中含有多种金属元素 ,其中 Fe、Mg、Zn元素含量较为丰富。
关键词　貂心;电感耦合等离子体发射光谱;金属元素
中图分类号:R282.74　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2008)12-1786-02
作者简介:张丽华(1957-),女,教授 ,硕士生导师。
　　貂心为名贵药材 , “利心丸 ”中的主药。利心丸
具有补心安神之功效 ,为治疗风湿性心脏病 、心动过
速 、心力衰竭等症之良药。
貂心多来自美洲水貂 Mustlavison的心脏 ,经采
集 、干燥 、粉碎而制得 。目前未见任何有关貂心化学
成分的研究报道 。中药中微量元素多是中药功效的
重要物质基础之一 ,在人体的生理过程中起着重要
的作用 〔1〕 ,越来越引人注目。
ICP-AES法具有灵敏度高 、线性范围宽 、相对干
扰小 、可同时测定多种元素等优点 ,已广泛应用于中
药 、豆类食品 、陶瓷制品等无机元素的定量测定 〔2-4〕。
本文采用 ICP-AES法测定貂心的金属元素 ,以期为
貂心功效提供参考 。
1　仪器 、材料与方法
1.1　仪器及操作条件　VISTA-MPX型电感耦合
等离子体发射光谱(美国瓦瑞安公司)。
采用 ICP-AES法测定经消化处理后的样品中
金属元素的含量 ,考察了功率 、载气流量等主要因素
对元素测定的影响 ,选定仪器参数如表 1所示。
1.2　试剂及标准溶液　标准离子储备液为国家标
准溶液(1000 μg/ml,国家钢铁材料测试中心钢铁研
究总院),去离子水;HNO3及其它试剂均为分析纯 。
·1786· JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 31卷第 12期 2008年 12月