全 文 ：灰毡毛忍冬与黄芩水提物 HPLC指纹图谱研究
任旻琼 ,周日宝＊ ,潘清平 ,吴　佳 ,陈　言 ,王　珊
(湖南中医药大学药学院 ,湖南长沙 410007)
　　摘要　目的:建立灰毡毛忍冬和黄芩水提物 HPLC指纹图谱。方法:色谱柱:Phenomenex-C
18
(250 mm×4.6
mm, 5 μm), 流动相:甲醇与 2%磷酸溶液进行梯度洗脱 , 检测波长为 322nm。采用《中药色谱指纹图谱相似度评价
系统 2004A版》软件对其进行了相似度计算。结果:确立了 14个共有峰 , 方法学考察结果较好 , 10批水提物指纹图
谱的相似度均大于 0.9。结论:该方法为灰毡毛忍冬与黄芩水提物以及银黄制剂质量控制提供了依据。
关键词　灰毡毛忍冬和黄芩水提物;指纹图谱;相似度
中图分类号:R282.5　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2008)12-1803-04
StudyonHPLCFingerprintofLoniceramacranthoidesandBaicalinExtract
RENMin-qiong, ZHOURi-bao, PANQing-ping, WUJia, CHENYan, WANGShan
(HunanUniversityofTraditionalChineseMedicine, Changsha410007, China)
Abstract　Objective:ToestablishLoniceramacranthoidesandbaicalinextractHPLCfingerprint.Methods:Column:C18 (250
mm×4.6mm, 5μm), mobilephase:withmixtureofmethanoland2% phosphoricacidinagradientmode, thewavelengthofmeas-
urementwas322nm.Touse“SimilarityEvaluationSystemforChromatographicFingerprintofTCM 2004” tocalculatesimilarityoffin-
gerprint.Results:Weestablishedatotalof14 markedcommonpeaks, inspectionresultsofthemethodweregood, tenbatchesofex-
tractfingerprintofsimilarityweremorethan0.9.Conclusion:ThemethodprovidesthebasicforqualitycontrolofLoniceramacran-
thoidesandbaicalinextractandYinhuangPreparations.
Keywords　Loniceramacrathoidesandbaicalinextract;Fingerprint;Similarity
基金项目:湖南省教育厅课题(01C236);湖南省中医药管理局课题(2006-062)＊通讯作者:周日宝(1962-),男 ,教授 ,主要从事中药资源与质量研究;Tel:13973134355, E-mail:zhouribao20032003@yahoo.com.cn。
　　银黄制剂是黄芩与金银花组成的复方制剂 ,是
临床常用的中成药 ,有清热解毒之功效 ,主要用于治
疗急慢性扁桃体炎 、咽喉炎 、上呼吸道感染等。由于
金银花药材价格一直高于山银花 2倍以上 ,且灰毡
毛忍冬(山银花)中绿原酸含量是同属植物中最高
的 ,故全国绝大部分制药企业生产的银黄颗粒 、银黄
冲剂 、银黄口服液等产品的原料多采用山银花 ,且主
要为灰毡毛忍冬 〔1〕。灰毡毛忍冬 Loniceramacran-
thoidesHand.-Mazz.为忍冬科忍冬属植物 。具有清
热解毒 、凉散风热之功效 ,为商品 “金银花 ”主流品
种之一 ,主产于湖南 、四川等地 ,已作为中药 “山银
花 ”列入了 2005年版中国药典 〔2, 3〕。本实验采用
RP-HPLC法建立了灰毡毛忍冬与黄芩水提物的
HPLC指纹图谱;并采用 《中药色谱指纹图谱相似度
评价系统 2004A版 》软件对其进行了相似度计算;
其方法和结果为银黄制剂质量的有效控制提供了参
考依据 。
1 　仪器与试药
Agilent1100高效液相色谱仪 , Agilent1100晶
体二极管阵列检测器(DAD), Agilent色谱工作站 。
电子分析天平 (MetersA E-163)(瑞士 ),
KQ5200B型超声波清热器(昆山市超声仪器有限公
司)。
绿原酸和黄芩苷标准品均购自中国药品生物制
品检定所(批号:110753-200212和 110715-200212,
纯度 >98%);甲醇为色谱纯 ,其它试剂均为分析
纯 ,水为重蒸水(自制)。
供试材料:药材灰毡毛忍冬 10批 ,编号灰毡毛
忍冬 1 ～ 10;药材黄芩 10批 ,编号黄芩 1 ～ 10。均购
自湖南省邵东廉桥药材市场 ,由湖南中医药大学药
学院药用植物教研室周日宝教授鉴定为正品 。
2　方法与结果
2.1 　色谱条件 　色谱柱:美国 phenomenex-C18
(250 mm×4.6mm, 5μm);流动相:甲醇(A), 2%磷
酸溶液(B),梯度洗脱:0 ～ 5 min, B(10% ～ 20%);
5 ～ 25min, B(20% ～ 40%);25 ～ 45 min, B(40% ～
60%);45 ～ 55 min, B(60% ～ 10%);检测波长:322
nm;柱温:25℃;流速:1.0 ml/min;进样量:5μl;理论
塔板数按绿原酸峰计不低于 50000。
2.2　供试品和对照品溶液的制备
2.2.1 　供试品溶液的制备:精密称取干燥灰毡毛
忍冬粉末(过 20目筛)10 g,与干燥黄芩粉末(过 20
目筛)4 g混匀 ,用 100 ml水回流提取 2次 ,每次 30
min,过滤 ,合并滤液 ,用蒸馏水定容至 250ml。移取
·1803·JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 31卷第 12期 2008年 12月
DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2008.12.015
10 ml置 25 ml容量瓶中 ,乙醇定容 , 0.45 μm微孔
滤膜滤过 ,即得。
2.2.2　对照品溶液的制备:精密称取绿原酸和黄
芩苷标准品适量 ,精密称定 ,加甲醇制成含绿原酸
210μg/ml、黄芩苷 155.2 μg/ml的混合对照品溶
液 。
2.3 　方法学考察
2.3.1　对照品和样品的色谱行为:按上述色谱条
件 ,对绿原酸和黄芩苷对照品和样品进行测定 ,样品
中与对照品的保留值处有相应的色谱峰 ,且与杂质
得到较好的分离 。见图 1。
图 1　灰毡毛忍冬与黄芩水提物(3号样
品 , a)及对照品(b)的 HPLC图谱
2.3.2　精密度试验:取同一对照品溶液连续进样 6
次 ,结果各共有峰相对保留时间的 RSD均小于 1%,
相对峰面积的 RSD均小于 2%,表明精密度较好。
2.3.3 　稳定性试验:取同一供试品溶液 ,分别在
0、4、8、12、15、24 h进样 ,结果各共有峰相对保留时
间的 RSD均小于 1%,相对峰面积的 RSD均小于
2%,表明样品在 24h内稳定性良好。
2.3.4 　重复性试验:取同一批次的供试品溶液 6
份 ,进行测定 ,结果各共有峰相对保留时间的 RSD
均小于 1%,相对峰面积的 RSD均小于 3%,表明该
方法重复性较好。
2.4　指纹图谱及各项技术参数　按上述方法测定
10批样品的指纹图谱 ,结果 10批样品共标出 14个
共有指纹峰 ,其中 3号峰为绿原酸峰 ,其峰面积较
大 ,且较稳定 ,故选择其为参照峰 。指纹图谱见图
2。
将 10批样品的指纹图谱导入 《中药色谱指纹
图谱相似度评价系统 2004A版 》(研究版)中 ,设参
照图谱(采用中位数法)和时间漂移(漂移范围 0.20
min),匹配谱峰 ,生成对照图谱 。各共有峰相对保
留时间见表 1,共有峰相对峰面积见表 2。
各色谱峰相对保留时间的 RSD<1%,共有峰面
积之和百分比均大于 90%,符合指纹图谱的要求。
2.5　指纹图谱相似度计算　将 10批样品的指纹
图谱导入 《中药色谱指纹图谱相似度评价系统
2004A中 》,计算各样品 HPLC色谱图与生成的对照
图谱 R的相似度 ,结果见表 3,图 2。
2.6　灰毡毛忍冬 、黄芩成分峰的归属　取绿原酸 、
黄芩苷对照品 ,按 “ 2.1”项下进样分析 ,根据相对保
留时间定位 ,判断 3号峰为绿原酸峰 , 12号峰为黄
芩苷峰。混合对照品图见图 1。
　　表 1 　10批灰毡毛忍冬和黄芩水提物共有峰相对保留时间
S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 平均值 RSD/%
1 0.638 0.637 0.639 0.638 0.639 0.639 0.639 0.640 0.638 0.639 0.639 0.15
2 0.675 0.674 0.674 0.674 0.675 0.676 0.676 0.676 0.676 0.675 0.675 0.13
3 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 -
4 1.069 1.068 1.069 1.069 1.069 1.068 1.069 1.068 1.068 1.069 1.068 0.05
5 1.192 1.193 1.192 1.194 1.194 1.192 1.193 1.193 1.191 1.192 1.193 0.09
6 1.404 1.406 1.403 1.407 1.403 1.401 1.403 1.404 1.402 1.404 1.404 0.13
7 1.808 1.812 1.807 1.808 1.808 1.803 1.807 1.809 1.807 1.810 1.808 0.13
8 1.892 1.889 1.891 1.893 1.890 1.888 1.892 1.895 1.895 1.892 1.892 0.13
9 1.932 1.930 1.930 1.933 1.929 1.926 1.930 1.933 1.933 1.930 1.931 0.12
10 1.992 1.993 1.989 1.992 1.987 1.984 1.987 1.990 1.990 1.987 1.989 0.15
11 2.203 2.194 2.197 2.202 2.194 2.193 2.193 2.202 2.202 2.203 2.199 0.20
12 2.505 2.497 2.498 2.504 2.496 2.495 2.503 2.504 2.506 2.506 2.501 0.18
13 2.828 2.822 2.818 2.826 2.817 2.817 2.824 0.829 2.832 2.830 2.824 0.20
14 2.876 2.864 2.866 2.873 2.863 2.864 2.870 2.875 2.878 2.876 2.871 0.21
·1804· JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 31卷第 12期 2008年 12月
　　表 2 　10批灰毡毛忍冬和黄芩水提物共有峰相对峰面积
S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 平均值 RSD/%
1 0.007 0.009 0.011 0.011 0.013 0.010 0.009 0.006 0.007 0.007 0.009 25.12
2 0.092 0.088 0.144 0.142 0.239 0.161 0.134 0.123 0.122 0.196 0.144 31.90
3 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 -
4 0.052 0.046 0.079 0.165 0.248 0.184 0.158 0.056 0.154 0.223 0.137 53.99
5 0.015 0.028 0.009 0.006 0.006 0.007 0.030 0.017 0.007 0.007 0.013 69.42
6 0.016 0.019 0.009 0.013 0.013 0.010 0.016 0.015 0.010 0.012 0.013 24.06
7 0.014 0.024 0.028 0.020 0.027 0.016 0.0210 0.016 0.011 0.021 0.020 28.16
8 0.023 0.025 0.026 0.180 0.100 0.118 0.110 0.024 0.106 0.130 0.084 66.33
9 0.431 0.509 0.318 0.509 0.206 0.296 0.370 0.564 0.290 0.227 0.372 33.76
10 0.012 0.017 0.011 0.010 0.008 0.006 0.005 0.008 0.005 0.005 0.009 44.70
11 0.114 0.114 0.116 0.501 0.348 0.407 0.392 0.142 0.419 0.355 0.291 52.15
12 0.170 0.481 0.644 0.491 0.428 0.418 0.353 0.266 0.406 0.433 0.409 31.45
13 0.011 0.039 0.043 0.033 0.049 0.025 0.043 0.015 0.029 0.045 0.033 39.20
14 0.009 0.028 0.035 0.037 0.029 0.022 0.026 0.016 0.018 0.022 0.024 35.59
∑共有峰(%) 93.49 97.03 94.99 97.06 97.52 97.42 95.14 93.89 97.37 97.97 - -
图 2　10批灰毡毛忍冬和黄芩水提物色谱图
S1 ～ S10.分别代表 1 ～ 10号样品　R.对照图谱
　表 3 　相似度分析结果
编号 相似度 编号 相似度
1 0.962 6 0.993
2 0.973 7 0.995
3 0.968 8 0.966
4 0.980 9 0.992
5 0.985 10 0.989
3 　讨论
3.1 　该实验对色谱条件进行了优化 ,曾试用甲醇-
水 -磷酸(35∶65∶0.2)、甲醇-0.02 mol/l磷酸二氢钠
缓冲液(42∶58)等作为流动相 ,但由于绿原酸与黄
芩苷的极性相差悬殊 ,保留时间相差太大 ,不能得到
较好的分离 ,所以采用梯度洗脱的方法 ,比较了甲醇
-2%磷酸溶液 、乙腈 -2%磷酸溶液等不同梯度的流
动相 ,结果表明甲醇-2%磷酸溶液进行梯度洗脱所
得色谱分离度好 ,保留时间适宜;并以乙醇为溶剂 ,
测定绿原酸与黄芩苷的紫外光谱图 ,绿原酸的最大
吸收波长为 322 nm,黄芩苷的最大吸收波长为 322
nm与 274nm,故选择 322nm为检测波长 ,且在此波
长下各色谱峰间分离度 、稳定性均较好 。
·1805·JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 31卷第 12期 2008年 12月
3.2 　目前 ,色谱指纹图谱的相似度评价技术主要
有夹角余弦法 、相关系数法 、Nei系数法 、改进 Nei系
数法等 〔4〕。本实验采用国家药典委员会颁布的 《中
药色谱指纹图谱相似度评价系统 2004A版 》软件 ,
用夹角余弦法计算相似度 。相似度的评价标准由国
家药典委员会规定:一般成品的相似度计算结果在
0.9 ～ 1.0之间即符合要求。将 10批灰毡毛忍冬和
黄芩水提物的指纹图谱导入 《中药色谱指纹图谱相
似度评价系统 2004A版 》软件 ,结果表明 10批水提
物的色谱图相似度均大于 0.96,相似度较好 ,且用
了 10批药材 ,保证了本实验所建立的指纹图谱的代
表性。说明不同批次灰毡毛忍冬和黄芩水提物指纹
图谱很相似 ,可通过制定标准指纹图谱来控制其质
量;用此方法来评价灰毡毛忍冬和黄芩水提物的质
量是可行 、有效的 。
3.3 　中国药典通过控制绿原酸和黄芩苷的含量来
控制银黄制剂的质量 ,故全国大部分药厂在进行银
黄制剂的生产时 ,综合成本和绿原酸含量来考虑 ,均
以灰毡毛忍冬(山银花)作为原料来生产银黄制剂。
本实验所用的实验材料和全国大部分药厂所生产的
银黄制剂所用的原料是一样的 ,提取物制备方法也
近似 ,故本研究的方法和结果为建立银黄制剂的指
纹图谱等质量控制体系提供了参考。
参 考 文 献
[ 1] 郑师章 .若干金银花中绿原酸含量的比较研究 .复旦
大学学报(自然科学版), 1987, (11):44.
[ 2] 石钺 , 石任兵 ,陆蕴如 .我国药用金银花资源 、化学成分
及药理研究进展 .中国药学杂志 , 1999, 34(11):724-
727.
[ 3] 卫生部药典委员会 .中华人民共和国药典 .一部 .北
京:化学工业出版社 , 2005:21, 22.
[ 4] 聂磊 , 曹进 ,罗国安 , 等.中药指纹图谱相似度评价方法
的比较 .中成药 , 2005, 27(3):249-252.
(2008-05-21收稿)
基金项目:成都市科技局研究项目(06GGYB084SF-034);四川省农作物育种攻关项目(2006yzgg12-82)作者简介:李敏 ,女 ,教授 ,硕士生导师 ,长期从事中药材品种质量评价和中药材 GAP研究;Tel:13980038316, E-mail:028limin@ 163.com。
蓬莪术 HPLC指纹图谱研究
李　敏 1, 2 ,张钰苓1 ,贾君君 1 ,田　蜜 1 ,兰泽伦 1 ,刘德军 2
(1.成都中医药大学 ,四川成都 610075;2.温州医学院 ,浙江温州 325035)
　　摘要　目的:建立蓬莪术药材的指纹图谱。方法:采用 HPLC法 , 色谱柱:KromasilODS-1(250 mm×4.6 mm, 5
μm);流动相:乙腈-水(梯度洗脱);流速:1.0 ml/min;柱温:25℃;检测波长:210 nm。结果:建立了蓬莪术 HPLC指
纹图谱共有模式 , 并对不同产地的莪术药材进行了相似度比较。结论:蓬莪术药材中各成分均得到了较好的分离 ,
可作为蓬莪术药材专属性的指纹图谱。
关键词　蓬莪术;HPLC;指纹图谱
中图分类号:R282.5　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2008)12-1806-04
StudyonHPLCFingerprintofCurcumaephaeocaulis
LIMin1 , 2 , ZHANGYu-ling1 , JIAJun-jun1 , TIANMi1 , LANZe-lun1 , LIUDe-jun2
(1.ChengduUniversityofTraditionalChineseMedicine, Chengdu 610075, China; 2.MedicalcollgegofWenzhou, Wenzhou
325035, China)
Abstract　Objective:ToestablishthefingerprintofCurcumaephaeocaulisbyHPLC.Methods:Thechromatographicconditions
wereasfollows:Chromatographiccolumn:KromasilODS-1(250 mm×4.6mm, 5μm), mobilephase:acetonitrileandwater(gradi-
entelution), flowrate:1.0 ml/min, columntemperature:25℃, detectionwavelength:210 nm.Results:WeestablishedtheHPLC
fingerprintcommonmode, andcomparedCurcumaephaeocauliswhichwereproducedindifferenthabitats.Conclusion:Eachcompo-
nentofRhizomaCurcumaeiswelisolated, andcanbeaspecificityfingerprintofCurcumaephaeocaulis.
Keywords　Curcumaephaeocaulis;HPLC;Fingerprint
　　莪术来源于姜科植物蓬莪术 Curcumaphaeo-
caulisVal.、广西莪术 CurcumakwangsiensisS.G.Lee
etC.F.Liang或温郁金 CurcumawenyujinY.H.Chen
etC.Ling的干燥根茎。其味辛 、苦 ,性温 ,归肝 、脾
·1806· JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 31卷第 12期 2008年 12月