全 文 ：中国药房 2008年第 19卷第 9期 Ch ina Pharmacy 2008 V ol.19 No.9 · 683·
紫苏梗挥发油的GC -MS 定性分析
任淑清 1 *,孙长海 1 ,方洪壮 1 ,赵晨曦 2(1.佳木斯大学化学与药学院 ,佳木斯市 154007;2.长沙大学应用化学
与环境科学系 ,长沙市 410003)
中图分类号 R927.2R657.72 文献标识码 A 文章编号 1001-0408(2008)09-0683-03
摘 要 目的:定性分析紫苏梗中的挥发油 。方法:采用超临界流体 CO 2(S FE-CO 2)萃取紫苏梗挥发油 ,用气相色谱-质谱(GC-
M S)法分离鉴定 ,同时用化学计量学方法解析重叠色谱峰的二维色谱MS 数据 。结果:共分离解析出 81种组分 ,其中 26种组分在
紫苏的相关 GC-MS分析中未见报道 。结论:紫苏梗挥发油 SFE-CO 2萃取物中有多个正构烷烃存在 。GC-MS 结合化学计量学
方法分析紫苏梗挥发油可获取更多的信息 。
关键词 紫苏梗;挥发油;气相色谱-质谱联用技术;超临界 CO 2萃取;化学计量学
Qualitative Analysis of the Volatile Components of Peril la Stem by GC-MS
REN Shu -qing , SUN Chang-hai , FANG Hong -zhuang(College o f Chemis t ry and Pharmaceuti cal Sciences ,
Jiamusi Universi ty , Jiamusi 154007 , China)
ZHAO Chen-xi(College o f Chemist ry and Chemical Engineering , Changsha U niversi ty , Changsha 410003 ,
China)
ABSTRACT OBJECTIVE:To conduc t a quantitative analysis on the vo la tile oil in Perilla Stem.METHODS:The volatile
o il of Perilla Stem was ex trac ted with supercritical CO 2 , separa ted and identified by gas chromatog raphy -mass spect rom etry
(GC -M S).The 2-D ch rom atog raphic mass spectra da ta of t he overlapped peaks w ere analyzed w ith chemometrics resolution
m ethod.RESULTS:Among the to tal 81 constituent s isolated , 26 had no t been repor ted in t he re lative GC-M S analysis of
Perilla f rutescens.CONCLUS ION :There w ere several normal alkanes in the volatile oil o f Perilla Stem ex tracted by super-
critica l flow CO 2.More information o f volatile oil can be obtained by GC-MS com bined with chemometeics resolution method.
KEY WORDS Perilla Stem ;Vola tile oil;GC-MS ;Supercr itical CO 2 ex t raction;C hemometrics
*副教授。研究方向:药物分析、药品质量控制。电话:0454-
8611274。E-mail:rsq540306@163.com
紫苏梗为唇形科紫苏属植物紫苏 Peri lla f rutescens(L.)
Br it的干燥茎 , 是临床常用中药 , 具有理气宽中 、止痛 、安胎等
功效 [1 ] 。紫苏中的挥发油不仅可供药用 ,而且是重要的香料 。有
关紫苏的全草及叶、籽挥发油的研究较多 [2 ] ,采用气相色谱(GC)
分离 、用质谱 (MS)联用仪获取MS 、经M S库定性已鉴定出
50余种化学物质 ,其中以紫苏醛及紫苏酮的含量为最高 [3 , 4 ] 。超
临界流体萃取 (SFE)是一种适用于热不稳定和易氧化物质的
提取技术 , 具有萃取效率高 、时间短 , 低温 、低氧条件下可操作
等特点 ,已用于紫苏叶挥发油和其它挥发油的提取 [ 5 ,6 ]。正交投
影分辨(OPR)法是一种联用色谱仪多维数据解析的化学计量
学方法 [7 ] ,已成功地用于羌活及鱼腥草挥发油成分的 GC-MS
重叠色谱峰的分辨 [8 , 9 ] 。鉴于紫苏梗挥发油单独的定性试验尚
未进行 , 笔者采用 SFE -CO 2萃取紫苏梗的挥发油 , 经 GC -
M S分离测定 ,再用 OPR法解析重叠色谱峰的数据 。共分离解
析出 81种组分 , 其中有 26种组分在紫苏的相关 GC-MS 分
析中未见报道 ,结果令人满意 。
1 仪器与试药
6890/5973型 GC -MS 仪 、 G 1701DA 型M S 工作站 、
N IS T02版MS 数据库(美国安捷伦公司);HA 221-50-06型
S FE 装置(南通华安超临界萃取有限公司)。紫苏梗药材购自黑
龙江佳木斯市大仁堂药店 , 经佳木斯大学刘娟教授鉴定为唇
形科紫苏属植物紫苏 Perilla fr utescens(L.)Brit 的干燥茎;
所用试剂均为分析纯 。
2 方法与结果
2.1 挥发油的提取
称取经粉碎过 5号筛((180±7.6)μm)的紫苏梗 120 g ,装
入 1 L 萃取罐中 , 进行 S FE-CO 2萃取 。萃取温度:40 ℃, 压
力:15 Mpa;分离釜 Ⅰ的压力:8 M Pa ,温度:50 ℃;分离釜Ⅱ的
压力:5 MPa , 温度:25 ℃;萃取 CO 2流速:30 L ·h -1;萃取时
间:75 min ,每 15 min收集提取物 。
2.2 挥发油的测定条件
色谱柱:SE54石英毛细管(30 m×0.25 mm×0.25μm);
载气:氦气(He);流速:1 mL ·min -1;程序升温为:起始温度
60 ℃, 以 4 ℃·min -1升温至 280 ℃, 保留至 65 min;进口温
度:260 ℃;溶剂切断时间:3 min;标准 EI 源 ,离子源温度:230
℃, 接口温度:280 ℃;电子能量:70 eV ;扫描质量范围:20 ～
500 amu;扫描速度:3.12次 ·s -1;分离比:20∶1。将 S FE 提取
物溶于正己烷 ,进样量为 0.1 μL 。
2.3 数据分析
按上述测定条件对供试品进样测定 , 得到紫苏梗挥发油化
学成分的 GC-MS总离子流图 。对获取的 GC -M S数据 , 在
色谱工作站上进行分析鉴定 , 用MS 数据库直接检索 , 共鉴别
出相似度>0.9的化学成分 32种 。提取紫苏梗挥发油化学成分
GC-MS 全部的二维数据 ,按 OPR 原理和方法 [7 ] ,按照各色谱
峰的起止点 , 将测得的数据矩阵分割成若干个子矩阵 , 依据秩
图确定重叠峰 。在计算机上对重叠峰去噪及背景扣除 , 并对基
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线漂移进行校正 , 利用秩图估
计出它们的主成分数 (组分数)
和组分的流入 、 流出点 , 进行
GC和M S的解析 。将解析得到
的组分纯 MS 通过MS 数据库
进行相似性检索 ,对组分进行定
性和相似度比对 ,确定物质的名
称 ,共鉴别出 49种化学成分 。对
测得的供试品的 GC -M S 数
据 , 采用直接检索和 OPR法共
分析出 81种化学成分 , 其中有
26种未见报道 。紫苏梗挥发油
的总离子流图见图 1;紫苏梗挥发油中的化学成分详见表 1 。
表 1 紫苏梗挥发油中的化学成分
Tab 1 Chemical components in volat ile oil of per illa stem
序号化合物名称 分子式 分子量 保留时间/m in 匹配度
1 2, 4-二甲基庚烯 C 9H 18 126 4.83 0.90
2 对二甲苯 C 8H 8 106 5.12 0.95
3 苯乙烯 C 8H 8 106 5.63 0.97
4 2, 4-烯庚醛 C 7H 10 110 8.42 0.93
5 邻伞花烃 C 1 0H1 4 134 9.13 0.95
6 双环 [ 3.1.0] -
5-异丙基-3-烯-2-己酮
C 9H 12O 136 13.66 0.97
7 孟酮 C 1 0H1 8O 154 14.45 0.98
8 侧柏醛 C 1 0H1 4O 150 14.50 0.99
9 2-二甲基-3-苯基-丙醛 C 1 0H1 2O 148 16.57 0.98
10 正十三烷 C 1 3H2 8 184 17.98 0.95
11 别香树烯 C 1 5H2 4 204 23.48 0.99
12 正十五烷 C 1 5H3 2 212 24.35 0.96
13 己二酸二异丁酯 C 1 4H2 6O 4 258 29.80 0.91
14 十八烷 C 1 8H3 8 254 32.87 0.97
15 6, 10, 14-三甲基
2-十五烷酮 C 1 8H3 6O 268 34.14 0.98
16 十九烷 C 1 9H4 0 268 35.47 0.97
17 邻苯二甲酸丁酯 C 1 6H2 2O 4 278 37.30 0.90
18 9, 17-十八二烯醛 C 1 8H3 2O 264 40.32 0.95
19 亚油酸 C 1 8H3 2O 2 280 42.69 0.99
20 植醇 C 2 0H4 0O 296 42.83 0.91
21 正二十三烷 C 2 3H4 8 324 46.89 0.95
22 正二十四烷 C 2 4H5 0 338 48.88 0.95
23 角鲨烯 C 3 0H5 0 410 54.96 0.97
24 1-氯二十七烷 C 2 7H5 5C l 414 52.71 0.98
25 二十九烷 C 2 9H6 0 408 56.38 0.99
26 三十三烷 C 3 3H6 8 465 61.29 0.98
由图 1可知 , 紫苏叶挥
发油中的化学成分是一个复
杂的分析体系 , 部分色谱峰
发生了重叠 。重叠色谱峰中
化学成分的 MS与 MS数据
库的匹配程度很低 , 难以准
确定性 。例如 , 从总离子流
图中 14.36 ～ 14.83 min 保
留时间段的色谱峰簇 E(图
2)直观判断 , 此色谱峰簇可
能由 2种物质构成 , 经直接
检索 , 前半部分为桃金娘烯醛 ,相似度为 0.72;后半部分为4 ,
7-环氧三环[ 4.1.0.0(3 , 5)] -庚烷 ,匹配度为 0.56。可见 ,定
性结果的可靠程度与准确度很低 。按 OP R法对该峰簇去噪和
背景扣除后 ,用固定尺寸移动窗口渐进因子分析法获取 E峰簇
的秩图(图 3),从中可知该峰簇由 4个组分构成 ,进而进行分辨
即可得到这 4个组分的纯色谱曲线和 MS 。OPR法解析出的色
谱曲线见图 4。据图 4 , 按保留时间的先后顺序分别是孟酮
(C10H 18O)、 侧柏醛 (C10H14O)、 龙脑 (C 10H18O)和薄荷醇
(C10H 20O), 与标准MS的匹配度分别为 0.98 、 0.99 、 0.96和
0.96。孟酮及侧柏醛的解析 MS与标准 MS见图 5及图 6。
3 讨论
由表 1可知 ,采用 SFE-CO 2萃取紫苏梗挥发油可提取出
多个正构烷烃 。与曾进行过的水蒸气蒸馏法提取紫苏梗挥发油
的分析结果比较 , SFE-CO 2萃取紫苏梗挥发油有利于正构烷
烃的提取 ,并可增加大分子物质的提取量 。
由文中试验可知 , 采用化学计量学方法解析紫苏梗挥发油
化学成分 GC-MS 的重叠色谱峰簇的二维数据 , 可增加定性
的准确度 ,并可获取更多信息 。
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中国药房 2008年第 19卷第 9期 Ch ina Pharmacy 2008 V ol.19 No.9 · 685·
苯酚-硫酸法测定围乐颗粒中总多糖的含量
李 辉* ,罗佳波 #(南方医科大学中医药学院 ,广州市 510515)
中图分类号 R283.627;R927.2 文献标识码 A 文章编号 1001-0408(2008)09-0685-02
摘 要 目的:建立以苯酚-硫酸法测定围乐颗粒中总多糖含量的方法 。方法:样品经 Sevag 法脱蛋白 ,以苯酚-硫酸法显色(60
℃水浴加热 30 min), 以葡萄糖为对照品 , 测定围乐颗粒中总多糖的含量 。结果:葡萄糖的检测浓度在 20.47 ～ 102.36 μg ·mL -1
范围内与吸光度呈良好的线性关系(r =0.999 4);平均回收率为 99.09%, RSD =0.92%(n=6)。围乐颗粒中总多糖的平均含量
为 41.63%。结论:本方法简单 、准确 、重现性好 ,可用于围乐颗粒的质量控制 。
关键词 围乐颗粒;总多糖;苯酚-硫酸法;含量测定
Determination of Total Polysaccharides in Weile Granules by Phenol-sulfuric Acid Method
LI Hui , LUO Jia-bo(Schoo l of T radi tional Chinese Medicine , South Medical Universi ty , Guangzhou 510515 ,
China)
ABSTRACT OBJECTIVE:To establish phenol-sulfuric acid m ethod fo r the determination of the content o f t otal polysac-
charides in Weile g ranules.M ETHODS:The samples w ere depro teinized by Sevag method , co lo red by phenol-sulfuric acid
m ethod (w ater bat h at 60 ℃ fo r 30 min), and the content of to tal polysaccharides in Weile g ranules w as de term ined with
Glucose as contro l.RESULTS:The linear range o f Glucose w as 20.47 ～ 102.36 μg ·mL -1(r =0.999 4), w ith an average re-
covery of 99.09%(RSD =0.92%, n =6).T he conten t of to tal polysaccharides in Weile g ranules w as 41.63%.CONCLU-
S ION :This method w as sim ple , accurate and reproducible , and suitable fo r quality cont rol of Weile g ranules.
KEY WORDS Weile g ranules;Total po lysaccharides;Pheno l-sulfuric acid m ethod;Conten t de termina tion
*硕士研究生。研究方向:中药制剂。电话:020-62789112。E-
mail:lihui816@126.com
#通讯作者:教授。研究方向:中药制剂、药物剂型改革。电话:
020-61648266
围乐颗粒是根据治疗更年期综合征的经验方 (主含赤芍 、
当归 、牡丹皮等药材), 结合现代药理研究 , 提取精制其中的芍
药总苷 、当归多糖等有效部位(成分)制备而成的新制剂 。当归
多糖可促进造血细胞的形成 , 加快血细胞的分化与成熟 ,促进血
虚动物外周血细胞数量恢复正常 [1 ]。其机制可能是通过诱导造
血微环境的成纤维细胞分泌某些造血生长因子 , 从而促进造血
祖细胞的增殖分化[2 ];另外 ,当归多糖还有免疫调节作用[3 ～ 5 ] 。由
于当归多糖是与疗效有关的主要有效部位之一 , 且在方中的比
例最大 , 故为了控制该制剂的质量与疗效 , 笔者把多糖含量作
为质控指标 ,采用苯酚-硫酸法进行了含量测定。
1 材料
1.1 仪器
UV -8453型紫外可见分光光度计 (美国惠普公司);
CP225D 型十万分之一分析天平 (德国 S arto rius 公司);
LG10-2.4A 型台式离心机 (北京医用离心机厂);DK -S 26
型电热恒温水浴锅 (上海精宏实验设备有限公司);XW -80A
型漩涡混合器(上海精科实业有限公司)。
1.2 试药
D -无水葡萄糖对照品(中国药品生物制品检定所 ,批号:
110833-200503);围乐颗粒(南方医科大学中医药学院新药开
发实验室);水为重蒸馏水 ,其它试剂均为分析纯 。
2 方法与结果
2.1 溶液的制备
2.1.1 5%苯酚液的制备:称取苯酚 100 g , 加铝条 0.1 g 、硫
酸氢钠 0.05g ,用套式电热器加热蒸馏 ,收集(180±2)℃馏份 ,
称取 2.5 g ,加少量水 ,搅拌使溶解 ,置于棕色容量瓶中 ,加水定
容至 50 mL ,冷藏 ,备用 。
2.1.2 对照品溶液的制备:精密称取经五氧化二磷减压干燥
48 h的葡萄糖对照品 25.59 mg , 置于 250 mL 容量瓶中 ,加水
溶解并稀释至刻度 , 摇匀 , 得 102.36μg m L -1的葡萄糖对照
品溶液 。
2.1.3 供试品溶液的制备:称取本方颗粒约 1.5 g , 乙醚超声
2次 ,每次 5min ,滤过 ,残渣加适量水溶解 ,离心 ,取上清液 ,定容
于 100 mL 容量瓶中 ,精密量取 4mL ,用 Sevag 法 [6 ,7 ](氯仿∶正
46.
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(收稿日期:2007-08-22 修回日期:2008-01-02)