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反相液相色谱法测定芦荟制品中芦荟苷的含量



全 文 :349※分析检验 食品科学 2005, Vol. 26, No. 8
反相液相色谱法测定芦荟制品中芦荟苷的含量
龙洲雄,万春花,胡海山,王 凯,张云伟
(江西省分析测试研究所,江西 南昌 330029)
摘 要:采用甲醇直接超声提取、反相液相色谱法测定芦荟制品中芦荟苷的含量。使用Kromasil C18柱,乙腈:
水(体积比25:75)为流动相,流速1.0ml/min,波长359nm。方法平均回收率97.8%,RSD在0.75~3.8%(n=5)之间。
本法简便、快速、准确可靠。
关键词:反相液相色谱法;芦荟制品;芦荟苷
Determination of Aloin in Aloe Products by RP-HPLC
LONG Zhou-xiong,WAN Chun-hua,HU H i-shan,WANG Kai,ZHANG Yun-wei
(Jiangxi Institute of Analysing and Testing, Nanchang 330029, China )
Abstract :This paper reported a method for determining aloin in aloe products by RP-HPLC. After being extracted with methanol
by ultrasonic, aloin was separated on a Kromasil C18 column with acetonitrile-water(25:75 by volume) as a mobile phase at a flow
rate of 1.0ml/min and detected at 359nm. The average recovery was 97.8% and the relative standard deviations(n=5) was 0.75~
3.8%. This method was proved to be simple,rapid,accurate and reliable.
Key words:RP-HPLC;aloe product;Aloin
中图分类号:TS207.3 文献标识码:A 文章编号:1002-6630(2005)08-0349-03
收稿日期:2005-06-15
作者简介:龙洲雄(1963-),男,高级工程师,主要从事食品医药检验研究工作。
芦荟具有增强人体免疫功能,抗肿瘤,抗菌,保
肝,通便,保护皮肤等作用[ 1 ],在中药上用于便秘、
小儿疳积、惊风,外治湿癣[ 2 ]。芦荟系百合科植物,
其品种繁多,大概有300~500种之多,主要品种有库
拉索芦荟,好望角芦荟及产于我国的中华芦荟,又称
斑纹芦荟[1][6]。作为中药制剂,早已在中成药中得到了
广泛的应用。近年来,随着芦荟药用价值的开发,在
市场上芦荟产品越来越多,芦荟化妆品、口服液、饮
料、排毒胶囊、含片等,均受人们的喜爱。因此识
别和检测芦荟产品中有效成分的存在和多少是衡量其质
量好坏的一项主要指标,对开拓市场有着积极的意义。
作为芦荟主要药用成分的芦荟苷(Aloin),又称芦荟
素,主要提取于芦荟叶。已见报道的芦荟苷含量测定
方法有比色法[2]、紫外分光光度法[3]、荧光法[4]、薄层
扫描法[5]、高效液相色谱法[6~10],上述方法主要是用于
芦荟原料及中药中芦荟苷分析。用于芦荟胶囊片剂、化
妆品等芦荟制品中芦荟苷的分析方法很少。本文通过实
验建立了甲醇超声提取后,反相液相色谱法直接测定芦
荟制品中芦荟苷含量的方法,直接采用乙腈-水做流动
相,方法简单、可靠。已应用于芦荟制品及化妆品中
芦荟苷的检测分析。
1 材料与方法
1.1主要仪器与试剂
美国Waters 高效液相色谱系统,包括1525泵,2487
紫外双波长检测器,7725i进样器(带20μl定量环),
BREEZE软件系统。
芦荟苷对照品(中国药品生物制品检定所);甲醇、
乙腈为色谱纯,其余均为分析纯;二次蒸馏水;蔬果
生态胶囊、芦荟干粉、芦荟片剂样品由南昌福德高科
技有限责任公司等提供,美肤浴袋为市场上购得。
1.2色谱条件
色谱柱Kromasil C18柱(250(4.6mm,5μm);柱温为
室温;流动相为乙腈:水(25:75);流速:1.0ml/min;检
测波长359nm;进样量20μl。
1.3对照品溶液制备
精密称取芦荟苷对照品10mg于25ml容量瓶中,加
甲醇溶解定容,摇匀,配成0.4mg/ml的溶液,分别吸
取上述溶液0.5、1.0、2.0、3.0、5.0ml置于10ml容量
瓶中,加甲醇稀释到刻度,摇匀即得对照品上机液,
2005, Vol. 26, No. 8 食品科学 ※分析检验350
其浓度分别为20、40、80、120、200及40μg/ml。
1.4供试品溶液的制备
取胶囊20粒,倾出其内容物研匀或将片剂研碎,
称取1~2.5g于50ml容量瓶中(芦荟干粉直接称取0.1g),
加甲醇35ml超声提取30min,用蒸馏水定容,取上层
清液过0.45μm滤膜,上机测定。
2 结果与讨论
2.1检测波长的选择
据文献[7,8]报导,测定芦荟苷的波长有359nm和
293nm,我们取一芦荟苷对照品上机液于紫外分光光度
计上以甲醇为参比在250~500nm波长范围内扫描,发
现359、293、268nm处均有吸收峰,其中359nm为最
大吸收波长,再结合液相色谱双波长检测功能,分别
在359、293、268nm处测定标准品及样品,考虑到268、
293nm样品杂质峰较多(见图4),最终选择359nm为HPLC
检测波长(见图2、3)。
2.2提取方法的选择
以甲醇为提取溶剂,对采用超声波提取3 0~
90min和索氏提取器回流提取1~2h进行了试验比较,
结果表明超声波处理30min即可提取完全,而加热回
流提取结果约偏低20%~30%,可能是加热导致了部
分芦荟苷的损失,最后本实验选定甲醇超声提取
30min。
2.3流动相的选择
文献[7]、[9]采用甲醇-水作流动相测定;文献[8]使
用了乙腈-0.01mol/L三氟乙酸为流动相,本文实验比较
了上述几种流动相,并直接实验了乙腈-水作流动相的
情况,建立了乙腈-水作流动相的测定条件。结果发
现:除甲醇-水作流动相时,杂质峰较多较高外(见图
5),乙腈-水(见图2)与乙腈-0.01mol/L三氟乙酸(见图6)
所得图形基本一致。考虑到三氟乙酸难以购得,有毒
且腐蚀性强,不易保存,最终本实验选择乙腈-水25:
75作为实验条件。所得结果准确,芦荟苷和其它杂质
成分可以有效分离。
2.4芦荟苷对照品溶液放置稳定性实验
取同一浓度的芦荟苷对照品甲醇溶液三份,分别放
置于25、20、2~4℃三种条件下,按本实验选定的色
谱条件,每间隔1h进样一次,2~4℃的溶液在24h后,
每隔一天测定三次。实验结果表明,芦荟苷甲醇溶液
在25℃时放置6h含量下降约20%;20℃时放置9h含量
下降约20%;2~4℃储存的甲醇溶液在4d以后含量开始
下降,一个星期下降约20%。因此,配置的对照品溶
液放置于2~4℃冰箱中,最多也只能保存4d。
2.5标准曲线的制备
将1.3项下对照品上机液注入液相色谱仪,按实验
1 2 3 4 5 6 7 8 9 1011 12 13
0.10
0.09
0.08
0.07
0.06
0.05
0.04
0.03
0.02
0.01
0.00
图3 2# 样品色谱图(359nm)
Fig.3 Chromatograms of the sample

1
1 2 3 4 5 6 7 8 9 1011121314
0.06
0.05
0.04
0.03
0.02
0.01
0.00
图2 1# 样品色谱图(359nm)
Fig.2 Chromatograms of the sample

1
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
0.12
0.10
0.08
0.06
0.04
0.02
0.00
图1 芦荟苷对照品色谱图
1
方法分别测定峰面积,以峰面积(X)与对照品含量(Y:μ
g/ml)求得线性回归方程为:Y=3.257×10-5X-0.3 9,r=0.
9998(n=5),结果表明:芦荟苷在20~400μg/ml内呈现
良好线性关系(对照品色谱图见图1)。
2.6精密度实验
分别吸取120μg/ml芦荟苷对照品溶液,重复进样
6次,测定峰面积,RSD=0.38%,可见精密度良好。
2.7回收率实验
精密称取已知含量的果蔬胶囊内容物约1.250g五
份,分别准确添加一定量的芦荟苷对照品,按实验方
法项下处理、进样、测定,计算回收率。结果回收
率分别为98.1%、95.7%、99.4%、97.9%、97.8%,其
平均回收率为97.8%,RSD=1.36%。
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10111213 14
1.4
1.2
1.0
0.8
0.6
0.4
0.2
0.0
图4 1# 样品色谱图(293nm)
Fig.4 Chromatograms of the sample (293nm)
1
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1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 111213 14
0.08
0.07
0.06
0.05
0.04
0.03
0.02
0.01
0.00
图6 1# 样品三氟乙酸色谱图(359nm)
Fig.6 Chromatograms of the sample by trifluoroacetic acid as a
mobile phase

1
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
图5 1# 样品甲醇-水色谱图(359nm)
Fig.5 Chromatograms of the sample by Methanol-water as a
mobile phase

1
2.8样品测定
每批样品分别称取5份,照实验方法测定,以外
标法、线性回归方程、计算所得结果如下(见表1)。四
种类型芦荟制品的RSD在0.75%~3.8%之间,说明方法
准确可行。
3 结 论
本文建立了反相液相色谱法测定芦荟苷含量的方
法,高效、准确、分析时间较短,可用于芦荟原料
样品名称 编号 结果(mg/100g) RSD(%)
蔬果生态胶囊 1# 19.2 18.8 18.5 19.3 19.72 4
芦荟片剂 2# 25.1 24.5 22.7 24.1 23.63 8
芦荟原粉 3# 4780 4735 4720 4765 48100.75
美肤浴袋 4# 13.5 13.6 13.1 13.9 12.90
表1 样品测定结果 (n=5)
Table 1 Results of determination in samples
及其制品中芦荟苷的定性及定量分析。
参考文献:
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信 息
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西班牙发明抗老化面包
西班牙公司推出了一种富含浓缩橄榄油的面包,加入抗老化食品大军。
这种面包由西班牙公司Genosa R & D制造、烘焙食品供应商Puraots负责供货,含有浓缩羟基酪醇
Hytolive 2成分。这种成分也是首次进入市场,被添加在Puraots公司Nostrum品牌面包当中,由对心脏有
益的谷物如燕麦、小麦和大麦混合加工而成,目前已经在西班牙市场出售。
该公司指出羟基酪醇是由中从橄榄中提取出来的抗氧化剂,能防止老化。Genosa希望以心脏健康为卖
点销售这种成分,因为橄榄油同地中海饮食的益处密切相关,包括长寿和心血管病的低发生率等。