全 文 ：·中药及天然药物·
荜澄茄 RP-HPLC指纹图谱研究
张　加 ,陈晓辉 ,杨　晨 ,蒋玲燕 ,毕开顺＊(沈阳药科大学药学院 ,辽宁 沈阳 110016)
摘要:目的　建立荜澄茄药材 RP-H PLC 指纹图谱研究方法。方法　采用 C18色谱柱(250 mm ×4.6 mm , 5 μm),流动相为乙腈-
0.05 %磷酸水溶液进行梯度洗脱 ,流速为 1.0 mL·min-1 , 检测波长 254和 268 nm ,柱温 35 ℃, 分析时间 70 min。结果　在 HPLC
指纹图谱中 ,确定了 14 个共有峰 ,并对 16 批不同产地荜澄茄药材相似度进行了比较。结论　荜澄茄药材指纹图谱特征性 、专属性
强, 为荜澄茄的质量控制提供了依据。
关键词:荜澄茄;指纹图谱;RP-HPLC
中图分类号:R917　　　文献标识码:A　　　文章编号:1004-2407(2009)04-0256-03
Study on HPLC fingerprint chromatogram of Litsea cubeba
ZHANG Jia, CHEN Xiaohui , YANG Chen , JIANG Lingyan , BI Kaishun ＊(School of Pharmacy , Shenyang Pharmaceutical University ,
Shenyang 110016 , China)
Abstract:Objective To establish RP-HPLC fingerprint of Litsea cubeba (Lour.)per s.Method The determination was carried out on C18
column(4.6 mm×250 mm , 5 μm), with a mixture of acetonitrile and 0.05 % pho sphoric acid aqueous solution as mobile phase in a g ra-
dient mode.The flow rate was 1 mL·min-1 , and detection waveleng th was set at 254 nm before 45 min and 268 nm after 45 min.Re-
sults The HPLC chromatog raphic fingerprinting of Litsea cubeba(Lour.)pers., showing 14 characteristic peaks were established from 16
batches of Litsea cubeba(Lour.)per s.products.The results of similarity analy sis was the same as that of herarchical cluster analy sis.
Conclusion The chromato graphic fing erprinting of Litsea cubeba(Lour.)pers.with high specificity can be used for the quality control of
Litsea cubeba .
Key words:Litsea cubeba(Lour.)Per s.;chromatographic fingerprint;RP-H PLC
作者简介:张加 ,女 , 硕士研究生
＊通讯作者:毕开顺 , 男, 教授 , 博士生导师
　　荜澄茄是樟科植物山鸡椒 Litsea cubeba (Lour.)
Pers.的干燥成熟果实 ,收载于中国药典 2005年版(一
部),有温中散寒 、行气止痛之功效[ 1] 。现代药理研究
表明荜澄茄有抗菌 、抗炎作用 ,在治疗心血管疾病方
面有较好效果[ 2] 。
目前 ,中国药典对荜澄茄的质量控制仍停留在
“性状” 、“鉴别” 、“检查”和“浸出物”上[ 1] ,并无全面 、
系统的质量控制方法研究。人们对荜澄茄的研究大
部分集中在挥发油 、脂肪油类成分[ 3-5] ,其它化学成分
的研究少见报道 。笔者对荜澄茄其它化学成分进行
了初步研究 ,首次建立了荜澄茄药材的高效液相色谱
指纹图谱 ,为荜澄茄药材全面质量控制提供依据。
1　仪器与试药
1.1　仪器　日本岛津 LC-2010A 高效液相色谱仪 ,
岛津 CLASS-VP 色谱工作站;AB135-S 十万分之一
天平(瑞典 MET TLER TOLEDO 公司);SZ-96 自动
纯水蒸馏器(上海亚荣生化仪器厂);SK250H 型超声
波清洗器(上海科导超声仪器有限公司)。
1.2　试药　对照品柠檬醛(含量>98.5 %)购于北
京百灵威化学技术有限公司;芦丁和异东莨菪内酯由
本实验室自制 ,纯度大于 98.5 %;乙腈为色谱纯 ,磷
酸为优级纯 ,水为自制重蒸水;16 批荜澄茄药材购于
江苏 、福建 、广西等省市 ,经沈阳药科大学药用植物教
研室孙启时教授鉴定为正品 ,药材来源见表 1。
表 1　荜澄茄样品来源
样品编号 产地
1 四川
2 云南
3 江西
4 广东
5 江苏
6 福建
7 湖南Ⅰ
8 湖南Ⅱ
　
样品编号 产地
9 广西Ⅰ
10 广西Ⅱ
11 广西Ⅲ
12 湖北Ⅰ
13 湖北Ⅱ
14 浙江Ⅰ
15 浙江Ⅱ
16 浙江Ⅲ
2　方法与结果
2.1　色谱条件与系统适用性　色谱柱:Promasil C18
(250 mm×4.6 mm , 5μm);流动相:乙腈(A)-0.05%
磷酸水溶液(B),梯度洗脱:0 ～ 15 min时 A 为 8%～
20%, 15 ～ 30 min时A 为 20%～ 37%, 30 ～ 45 min时
A 为 37%～ 65%, 45 ～ 60 min 时 A 为 65%～ 95%,
60 ～ 70 min时 A持续为 95%;流速:1 mL·min-1 ;检
测波长:0 ～ 45 min为 254 nm ,45 ～ 70 min为 268 nm;
柱温:35 ℃;进样量:20 μL。在上述色谱条件下 ,以芦
丁(3号峰 ,内参比峰)计算理论板数不低于5 000。
2.2　溶液的配制
2.2.1　对照品溶液配制　分别称取对照品柠檬醛 、
芦丁 、异东莨菪内酯适量 ,精密称定 ,甲醇溶解并定容 ,
配成质量浓度分别为 15.7 ,18.2和 21.4 mg ·L-1的
对照品混合溶液 ,用于确定峰位 。
2.2.2　供试品溶液配制　取荜澄茄药材粉末约 1.0
g ,精密称定 ,置于 50 mL 具塞三角瓶中 ,加体积分数
70%甲醇15 mL ,超声提取20 min ,放冷 ,补质量 ,0.45
μm微孔滤膜滤过 ,取续滤液备用。
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2.3　指纹图谱方法学考察
2.3.1　精密度试验　取同一供试品溶液 ,在上述色谱
条件下重复进样 6次 ,记录色谱图 。各峰的相对保留
时间和相对保留峰面积基本一致 , RSD均小于 5.0 %。
2.3.2　重现性试验　取同一批样品 6份 ,制备供试
品溶液 ,在上述色谱条件下进行测定 ,记录色谱图 ,各
峰的相对保留时间和相对峰面积基本一致 , RSD 均
小于 5.0 %。
2.3.3　稳定性试验　取同一供试品溶液 ,分别于 0 ,
2 ,4 , 8 ,12 和 24 h 在上述色谱条件下进行测定 ,记录
色谱图 ,各峰的相对保留时间和相对峰面积基本一
致 , RSD均小于 5.0 %。
2.4　荜澄茄药材 HPLC 指纹图谱中的特征峰　以
经形态学鉴定的 16批荜澄茄药材为研究对象 ,进行
指纹图谱研究。以芦丁为内参照物 ,确定了 14个共
有峰 ,通过比对保留时间和对照品加入法[ 6] 指认了 4
个色谱峰 ,分别为芦丁(3 号峰)、异东莨菪内酯(4号
峰)、柠檬醛 a和 b(9号峰和 10号峰),色谱图见图 1。
图 1　荜澄茄色谱图
3-芦丁;4-异东莨菪内酯;9-柠檬醛a;10-柠檬醛b
2.5　荜澄茄药材质量评价方法的建立
2.5.1　系统聚类分析　将 14个色谱峰面积相对于
内参比峰的峰面积量化 , 得到 16 ×14 矩阵 ,应用
S PSS软件对其进行系统聚类分析 ,采用组间均联法
(be tw een-g roups linkage),以余弦(cosine)作为样品
相似性的测度。聚类分析将 16批样品分为 2 类 ,结
合形态学鉴定结果 ,可判断第 Ⅰ类为推荐品 ,第 Ⅱ类
为一般品 。聚类结果见图 2 。
图 2　荜澄茄聚类分析结果
2.5.2　共有模式建立　结合聚类分析结果 ,将 14批
第 Ⅰ类推荐药材(1 , 3 , 4 , 5 , 7 , 8 , 9 , 10 , 11 , 12 , 13 ,14 ,
15和 16号样品)色谱图导入国家药典委员会提供的中
药色谱指纹图谱相似度评价系统A版 ,经多点校正和数
据匹配 ,以中位数法生成对照指纹图谱 ,色谱图见图3。
图 3　14 批荜澄茄药材色谱图
2.5.3　指纹图谱相似度评价　采用国家药典委员会
的中药色谱指纹图谱相似度评价系统对上述 16批药
材的指纹图谱进行相似度分析 ,相似度计算结果见表
2 。试验分析结果表明 ,相似度分析结果与系统聚类
结果一致 , 2种方法得到了相互验证。
表 2　相似度计算结果
样品编号 产地 相似度
1 四川 0.994
2 云南 0.955
3 江西 0.997
4 广东 0.994
5 江苏 0.992
6 福建 0.888
7 湖南Ⅰ 0.993
8 湖南Ⅱ 0.993
　
样品编号 产地 相似度
9 广西Ⅰ 0.977
10 广西Ⅱ 0.986
11 广西Ⅲ 0.993
12 湖北Ⅰ 0.995
13 湖北Ⅱ 0.995
14 浙江Ⅰ 0.981
15 浙江Ⅱ 0.984
16 浙江Ⅲ 0.996
3　讨论
①提取溶剂与方法的考察　以色谱峰的多少和
大小为考察指标 ,首先以甲醇 、乙醇和水为提取溶剂
考察了超声提取和加热回流提取的提取效率 ,结果表
明甲醇超声提取效率较好 ,进而考察了不同比例甲
醇-水(50%, 70%,90%和 100%)作为提取溶剂和不
同提取时间(10 , 20和 30 min)的提取效率 ,选择提取
效率最佳的 70%甲醇超声提取 20 min 。
②色谱条件的优化
a 本研究考察了不同厂家的(中汇达公司 、迪马
公司和艾杰尔公司)色谱柱 ,结果表明艾杰尔公司的
色谱柱 Promasil C18(250 mm×4.6 mm , 5 μm)分离
度好 ,效果最佳。
b 考察了甲醇-水溶液 、甲醇-磷酸水溶液 、乙腈-
水溶液和乙腈-磷酸水溶液作为流动相 ,结果表明甲
醇-水溶液和甲醇-磷酸水溶液分离效果不佳 ,乙腈-磷
酸水溶液分离效果好 ,峰形佳 ,故选用乙腈-磷酸水溶
液作为流动相系统。
c考察了 210 ,230 ,254 ,268 , 300和 365 nm 不同
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检测波长 ,由于荜澄茄中化学成分的结构 、极性差异
较大 ,发现无法通过单一检测波长满足色谱峰信息最
大化原则 ,选择 0 ～ 45 min为 254 nm , 45 ～ 70 min为
268 nm 进行检测分析 ,转换检测波长时基线平稳 ,检
测到的色谱峰信息量大 ,不同成分的响应值较为均
匀 ,特征性强。
③荜澄茄化学成分复杂 ,但其质量控制方面研究尚
少 ,目前仅有通过气相色谱分析其挥发油和脂肪油类成
分的研究 ,因此有必要建立其液相色谱指纹图谱进行更
全面的质量控制。本研究以 14个色谱峰为量化指标进
行聚类分析 ,将 16批不同产地的荜澄茄样品分为推荐
品和非推荐品 2类 ,相似度评价结果与聚类分析结果基
本一致 ,2种检验方法之间得到了相互认证。比较不同
产地的荜澄茄指纹图谱 ,14个共有峰的相对保留时间符
合程度较好 ,发现仅福建和云南产地的荜澄茄药材色谱
峰面积与其它产地差异较明显。本研究方法的建立 ,为
荜澄茄的全面质量控制提供了依据。
参考文献:
[ 1] 　中国药典 2005年版[ S] .一部.2005:163.
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况[ J] .中药材 , 1990 , 13(9):43-44.
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科大学学报 , 2007 , 7(4):509-510.
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[ J] .化学世界 , 1998 , 50(2):99-100.
[ 5] 　周永红 , 王立升 , 刘雄民.广西产山苍子油的 GC-MS 分
析[ J] .林产化工通讯 , 2003 , 37(1):19-20.
[ 6] 　谭晓杰 , 贾英 , 毕开顺 , 等.野菊花 RP-H PLC 色谱指纹
图谱的建立及其质量研究[ J] .药物分析杂志 , 2007 , 27
(1):29-32.
(收稿日期:2009-03-03)
白芷和栀子中重金属 、砷盐的形态
分析
王　芳1 ,王歆君1 ,刘进疆2 ,贾新岳3(1.新疆制药厂 , 新
疆 乌鲁木齐 830032;2.新疆药业有限公司 ,新疆 乌鲁木齐
830002;3.新疆中药民族药研究所 ,新疆 乌鲁木齐 830002)
摘要:目的　了解白芷 、栀子中的重金属和砷盐存在的化学形
态及其分布。方法　采用 Tessier 的连续提取法制备样品 ,
铅 、镉 、铬 、铜 、砷采用原子吸收分光光度法测定 , 汞采用原子
荧光光度法测定。 结果　白芷样品中各形态铜以残渣态为
主;各形态铅以有机结合态为主;各形态镉以离子交换态为
主;样品中汞含量较低 , 主要为残渣态;砷盐各形态以有机结
合态为主。栀子样品中各形态铜除碳酸盐结合态未检出外 ,
其它各态含量相近;各形态铅以有机结合态为主;各形态镉以
离子交换态和碳酸盐结合态为主;样品中汞含量较低;砷盐各
形态主要为水溶态和残渣态。结论　研究结果表明 , 以有害
元素总量做指标评价药材的安全性有失偏颇。
关键词:白芷;栀子;重金属;砷盐;化学形态
中图分类号:R927.2　　　文献标识码:A　　　
文章编号:1004-2407(2009)04-0258-03
　　中药材中重金属 、砷盐污染是人们长期关注的热
点问题之一 。国内对中药材重金属 、砷盐的研究多集
中在药材重金属 、砷盐的含量测定方面 ,而有关其化
学形态方面的研究则少有报道 。重金属 、砷盐在中药
材中的不同形态反映了其进入人体的难易程度 。因
此 ,进行中药材中重金属形态的研究很有必要 。
一般对重金属的形态普遍分为 5种:①离子可交
换态;②碳酸盐结合态;③铁锰氧化物结合态;④有机
结合态;⑤残渣态 。也有人将形态分为 6 种 ,即在可
交换态前加上水溶态。重金属形态分析大多数都采
用连续提取法测定分析样品中不同形态重金属含
量[ 1-5] ,其中著名地球化学家 Tessier[ 3] 的连续提取法
是大家普遍认同并被接受的形态分析方法。
本研究按样品中重金属 、砷盐活性由大到小顺序
依次划分为:水溶态 、离子交换态 、碳酸盐结合态 、铁
锰氧化物结合态 、有机结合态和残渣态。
1　仪器与试药
1.1　仪器　日立 Z-2000原子吸收分光光度计(日本
日立公司);AFS-640型双道原子荧光光度计(北京瑞
利分析仪器公司);KQ3200型超声波清洗器(昆山市
超声仪器有限公司);TDL-40C 型低速台式离心机
(上海安亭科学仪器厂);DK-S24 型电热恒温水浴锅
(上海申贤仪器厂)。
1.2　试药　白芷 、栀子药材(每个样品 1 kg)由新疆
制药厂提供 。30%H 2O 2 、硝酸为优级纯;盐酸羟胺 、
醋酸铵 、醋酸钠 、氯化镁 、盐酸 、硫酸 、醋酸 、高氯酸 、氢
氟酸等试剂均为分析纯;试验用水为去离子水 。
2　方法
2.1　分析方法　铜(Cu)、铅 (Pb)、镉 (Cd)、砷(A s)
采用《中国药典》2005版一部附录 Ⅸ B原子吸收分光
光度法[ 6] ,汞(Hg)采用原子荧光光度法[ 7] 。每个样
品平行测定 3次 。
2.2　样品的制备
2.2.1　重金属的形态　将重金属分为以下 6 种形
态:水溶态 、离子交换态 、碳酸盐结合态 、铁锰氧化物
结合态 、有机结合态以及残渣态 。采用著名地球化学
家 Tessier 的连续提取法[ 3] 进行样品制备 。
2.2.2　各种形态的样品制备
2.2.2.1　水溶态　取一定量的样品 ,加入 10倍的去
离子水 ,调 pH7 ,摇匀;置于超声波清洗器中间歇超
声 1 h(超声 10 min , 歇 5 min),离心;取上清液于量
瓶中 ,残渣用去离子水洗后 ,离心;上清液并入上述量
瓶中并定容 ,待测 。残渣Ⅰ待用 。
2.2.2.2　离子交换态　在残渣Ⅰ中加入1 mol·L-1的
pH7的氯化镁溶液 ,摇匀;放入超声波清洗器中 ,间歇
超声 1 h(超声 10 min , 歇 5 min),离心;取上清液于
量瓶中 ,残渣用去离子水洗后 ,离心;上清液并入上述
量瓶中并定容 ,待测。残渣 Ⅱ待用。
258 西北药学杂志　2009 年 8 月　第 24 卷　第 4 期