全 文 ：收稿日期:2010-01-19　修订日期:2010-04-30
基金项目:山东省中医管理局科研项目(No.2005-107)
作者简介:张奉梅(1967-),女(汉族),山东桓台人 ,现任滨州医学院讲师 ,
硕士学位 ,主要从事肿瘤免疫研究工作.
＊通讯作者简介:龚继勇(1973-), 男(汉族),山东兖州人 , 现任山东省肿
瘤医院副主任医师 ,硕士学位 ,主要从事中药制剂检验工作.
加味当归补血汤对荷瘤小鼠
血液流变学及免疫功能的影响
张奉梅 1 ,龚继勇 2＊ ,龚继梅3 ,王兴武 2
(1.滨州医学院烟台校区 ,山东 烟台　 264003;　2.山东省肿瘤医院 ,山东 济南　250117;
3.山东省济南市槐荫区人民医院　250021)
摘要:目的 通过加味当归补血汤(简称中药)对荷瘤小鼠血液流变学及免疫功能的影响 , 探讨中药在肿瘤转移中的作用
及其机制。方法 昆明种小鼠随机分为空白组 、模型组和中药组 , 空白组为健康小鼠 , 给予生理盐水灌胃;模型组和中药
组为 H22荷瘤小鼠动物模型 , 分别给予中药(中药组)和生理盐水(模型组)灌胃 ,喂养 10 d和 20d后 , 检测各组小鼠全血
粘度 、血小板最大聚集率 、T细胞亚群 ,计算抑瘤率 、胸腺及脾脏指数。结果 中药组小鼠的血液黏度(高切变 、低切变)、
血小板最大聚集率均较模型组降低 ,差异有显著性(P<0.05),灌胃 20 d时血小板最大聚集率变化更明显(P<0.01);而
胸腺和脾脏指数 、T淋巴细胞亚群(CD3 +、CD4 +),中药组较模型组均增高(P<0.05);中药组的抑瘤率高达 32.6%。结
论 加味当归补血汤对荷瘤小鼠具有改善血液流变学及增强免疫功能的作用 ,这可能是其抑制肿瘤生长和转移的机制之
一。
关键词:加味当归补血汤;　H22荷瘤小鼠;　血液流变学;　免疫功能
DOI标识:doi:10.3969 /j.issn.1008-0805.2010.09.057
中图分类号:R285.5　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2010)09-2247-02
　　肿瘤的发生发展与血液流变学及机体免疫状态密切相关。
恶性肿瘤患者血液呈高凝状态 , 血流缓慢 , 脱落的肿瘤细胞不易
被冲刷而附壁 , 产生的血栓也易产生涡流 , 为分散的癌细胞提供
了整合 、黏附机会。人体的免疫系统能监视机体内出现的突变细
胞及早期肿瘤 , 并予以清除 , T淋巴细胞亚群在人体细胞免疫反
应中有着重要的作用。研究显示加味当归补血汤用来辅助放化
疗 , 具有升白 、保肝 、提高免疫功能的作用 [ 1 ～ 3] 。本实验通过观察
加味当归补血汤对荷瘤小鼠血液流变学及免疫功能的影响 ,探讨
中药在肿瘤生长和转移中的作用及其机制。
1　材料与仪器
1.1　动物及药品 健康昆明种小鼠 60只 , 4 ～ 6周龄 , 雄性 , 体质
量 18 ～ 22 g, 由山东鲁抗实验动物中心提供(合格证书号:SDXK
鲁 20070145)。加味当归补血汤(黄芪 、当归 、灵芝 、鸡血藤 、补骨
脂等),相当于生药 1.5 g/ml, 由山东省肿瘤医院制剂中心生产 ,
批号:070318。大鼠抗小鼠 T细胞表面标记单克隆抗体(抗 CD
3
、
抗 CD4)购于 steroetc公司。
1.2仪器　 LBY-NJ6型旋转式血液粘度计 , LBY-NJ2型血小
板聚集仪 , F-820血液分析仪 , BECKMAN流式细胞分析仪。
1.3　瘤细胞株 小鼠肝癌 H
22
细胞株 , 由山东省肿瘤医院基础研
究中心提供。
2　方法
2.1　荷瘤小鼠模型建立 取小鼠肝癌 H22细胞株制成细胞悬液 ,
计数活细胞数后培养传代两次 ,将培养液离心得到肿瘤细胞。将
肿瘤细胞稀释成 2 ×107 /ml浓度后接种到小鼠腹腔内 , 0.2 ml/
只 , 瘤株在动物体内传代 2次后 , 选择接种 8 d腹部明显膨大的
小鼠 , 抽取腹水 ,镜下进行细胞分类计数 , 瘤细胞数 >95%, 腹水
用无菌 PBS液稀释至 2×107 /ml, 接种于小鼠背部近中线处 , 共
40只 , 0.2 ml/只 。
2.2　分组及给药 肿瘤接种 24h后随机分为两组 , 荷瘤 H22小鼠
20只(模型组), 加味当归补血汤组 20只(中药组);另外未造模
的 20只健康小鼠为空白对照组(空白组)。给予空白组和模型
组小鼠每日灌胃生理盐水 0.5 ml/只 ,中药组给予加味当归补血
汤灌胃 0.5 ml/只。给药后分别于 10 d, 20 d每组各取 10只小
鼠 , 末次给药前禁食 16 h,自由饮水 , 称重。
2.3　观察指标 眶后静脉丛取血 , 肝素抗凝 ,腹腔注射麻醉 ,剥取
肿瘤称重。测定各组小鼠全血黏度 , 包括低切变率和高切变率 ,
测定血小板最大聚集率;按说明书操作应用流式细胞分析仪测定
T细胞亚群(CD3 +, CD4 +)。取脾脏和胸腺称重 , 计算脾脏指数
及胸腺指数。脏器指数和抑瘤率计数公式:脏器指数(mg/g)=
脏器重量(mg)/体质量(g);抑瘤率 =(模型组平均瘤重 -中药
组平均瘤重)/模型组平均瘤重 ×100%。
2.4　统计学处理 采用 SPSS11.5软件进行分析 , 计量资料用 x±
s表示 ,多组间比较采用单因素方差分析 , 以 P<0.05为差异有
显著性意义。
3　结果
3.1　中药对荷瘤小鼠血液流变学的影响 结果见表 1。表 1显
示分组给药 10 d和 20d后 , 中药组全血黏度(高切 、低切)和血
小板最大聚集率均较模型组降低(P<0.05), 20 d时血小板最大
聚集率变化更明显(P<0.01);而模型组较空白组全血黏度和血
小板最大聚集率升高(P<0.05);中药组和空白组各项指标比较
差异无统计学意义(P>0.05)。
3.2　中药对荷瘤小鼠免疫功能的影响 结果见表 2。结果显示
灌胃 20d后 , 中药组 T细胞亚群(CD3 +、CD4 +)较模型组升高 ,
差异有显著性(P<0.05);胸腺指数 、脾脏指数中药组较模型组
也升高(P<0.05);而中药组和空白组比较差异无统计学意义。
灌胃 10d各项指标变化不明显(P>0.05)。
4　讨论
全血黏度增高往往导致全身和局部微循环障碍 ,组织缺氧诱
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2010VOL.21NO.9 时珍国医国药 2010年第 21卷第 9期
发肿瘤转移。在恶性肿瘤发生侵袭 、转移过程中 ,脱落于血液循
环中的肿瘤细胞能引起血小板聚集 ,血小板的聚集可促进肿瘤细
胞向血管内皮接近 , 并为穿过血管壁进入周围组织形成转移灶提
供条件。全血黏度的高切变率主要反映红细胞的变形性 ,而低切
变率则主要反映红细胞的聚集性。本研究显示模型组较空白组
全血粘度(高切 、低切)及红细胞最大聚集率均升高 , 说明恶性肿
瘤普遍存在血液高凝状态。研究显示血管内凝血是肿瘤形成的
前奏 , 对血栓形成通路任何形式的干预 , 都可有效地抑制肿瘤发
展 [ 4] 。本结果显示中药的抑瘤率达 32.6%,中药组小鼠的全血
粘度 、血小板最大聚集率均较模型组降低(P<0.05), 说明加味
当归补血汤能降低肿瘤小鼠升高的血黏度 ,具有抑制肿瘤转移及
改善血液流变学作用。
表 1　各组小鼠血液流变学的变化( x±s)
组别
全血粘度 /mPa· S
低切
10d 20d
高切
10d 20d
血小板量大聚集率(%)
10d 20d
空白 5.02±0.32 5.24±0.46 2.36±0.43 3.32±0.54 25.82±3.32 26.94±4.17
模型 8.48±0.64# 9.12±0.58# 3.58±0.75# 4.12±0.80 37.82±5.71# 59.23±5.22#
中药 6.12±0.72＊ 7.03±0.97＊ 2.62±0.84＊ 2.32±0.78＊ 30.03±4.93＊ 29.12±6.72＊＊
　　与模型组比较 , ＊P<0.05, ＊＊P<0.01;与空白组比较 , #P<0.05;n=20
表 2　各组小鼠免疫功能的变化
组别 CD3
+T(%)
10d 20d
CD4+T(%)
10d 20d
胸腺指数 /mg· g-1
10d 20 d
脾脏指数 /mg· g-1
10d 20d
空白 39.2±4.5 37.7±3.6 43.2±4.1 41.8±5.3 5.28±2.12 6.27±1.81 4.03±0.92 5.72±1.15
模型 37.4±5.7 36.2±6.5 42.3±6.4 36.7±6.9# 4.62±2.45 5.02±2.83 3.58±2.01 4.13±1.71
中药 40.5±6.3 47.2±7.2＊ 53.7±7.3 51.2±4.1＊ 5.37±2.84 7.42±2.91＊ 4.21±2.72 6.22±1.85＊
　　与模型组比较 , ＊P<0.05;与空白组比较, #P<0.05
机体的免疫应答能力与肿瘤的发生发展有密切的联系 , 免疫
系统具有限制肿瘤细胞生长能力。肿瘤细胞进入血液循环后 , 只
有极少数能够逃脱宿主免疫细胞如 NK细胞 、巨噬细胞的杀伤 ,
到达远处组织形成新的转移灶。 参与抗肿瘤的免疫细胞包括 T
细胞 、NK细胞 、巨噬细胞等 。T淋巴细胞不仅是细胞免疫的主要
效应细胞 , 而且是主要的免疫调节细胞 , 其免疫调节作用是通过
其亚群细胞实现的。 T细胞亚群可以反映整个机体免疫功能的
状态 , CD3 +T细胞代表成熟淋巴细胞总数 , CD4 +T细胞具有增强
和扩大免疫细胞的功能。CD4 +T细胞往往协助 B细胞进行分化
和产生抗体 , 参与促进细胞介导的免疫应答 [ 5] 。胸腺和胰腺为机
体免疫器官 , 是免疫细胞产生的场所 , 因此其指数也可反映机体
免疫功能。本研究显示中药组 T淋巴细胞亚群(CD3 +, CD4 +)、
胸腺指数 、脾脏指数均明显高于模型组。说明加味当归补血汤能
提高机体免疫功能 , 增强免疫细胞对肿瘤的杀伤作用。
加味当归补血汤是在补血汤的基础上添加灵芝 、补骨脂 、鸡
血藤组成。黄芪 、灵芝补气;当归养血活血。该方具有益气养阴 、
活血化淤的功效。中医认为 , 肿瘤的形成是机体正气不足而后邪
气踞之所致 , “正气虚”伴随着肿瘤发生 、发展 、治疗和预后的全
过程。高凝状态属中医血淤证范畴。血液流变学所表现出来的
浓 、粘化是肿瘤血淤症本质的客观反映 , 因此淤血与血液流变学
之间有着内在联系 , 化瘀治法与西医降低血粘度的治疗一致。
现代药理研究表明当归 、灵芝中的有效成分具有免疫增强 、
抗肿瘤的作用 [ 6, 7] 。当归多糖(ASDP)是一种新型的生物反应调
节剂 , 高浓度的 ASDP能明显增强荷瘤小鼠中 ConA诱导的 T淋
巴细胞增殖作用和 NK细胞对靶细胞(K562)的杀伤作用。 此外
当归中提取的果胶多糖能够增强机体 B细胞和巨噬细胞的免疫
功能 , 抑制肿瘤细胞的转移 [ 8] 。黄芪能扩张血管 、改善血液循环 ,
黄芪作用于肿瘤后能激活抗氧化解毒酶 SOD, 消除超氧离子发挥
抗肿瘤作用 [ 9, 10] 。
肿瘤的发生发展是一个多环节 、多步骤 、复杂的级联过程 , 受
多种因素调控。中药及其成分干预肿瘤转移的机制表现为多靶
点 、多效应作用。加味当归补血汤可以降低荷瘤小鼠血液粘度 ,
降低血小板聚集率 , 升高 CD3 +、CD4 +,对肿瘤细胞的转移具有抑
制作用 ,其抗肿瘤机制可能是改善血液流变学 、增强免疫功能 , 确
切的作用机制和作用环节还有待深入的研究。
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