全 文 ：中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第2期2005年2月·239·
想方法之一。大脑中动脉区是脑梗死的好发部位，因
此，对猫、大鼠等动物用手术阻断一侧大脑中动脉，
即可形成局灶性脑缺血模型。大鼠脑血管解剖特点
与人类比较类似，并且损伤部位恒定，实验重复性
好。因此本研究采用大鼠线栓法MCAO局灶性脑
缺血模型来研究补阳还五汤4类有效部位的作用。
在制备模型中，选择直径为0．26mm尼龙线，可避
免烧灼使线栓线头大小不均匀对实验结果的影响；
线栓前端涂poly—L—lysine可增加缺血程度的稳定
性[51；且插入时蘸取肝素可防止线栓部位血栓形成。
作为评价抗脑缺血效应的指标，脑梗死体积测
定是最直接的指标。TTC水溶液是一种无色溶液，
它是呼吸链中吡啶一核苷结构酶系统的质子受体，是
脂溶性光敏感的复合物，还原后在正常组织中呈现
红色，而缺血组织不产生此变化而呈苍白色。故
TTC染色用于测定梗死灶大小具有快速、直观地确
定梗死范围的优点，且境界清楚。有文献报道，脑组
织在缺血6h时，TTC染色显色的范围才与HE染
色显示的缺血区域一致。故本研究选择了线栓法
MCAO局灶性脑缺血模型，观察大脑中动脉闭塞后
6h脑组织梗死体积的变化，并观察补阳还五汤4
类有效部位生物碱、多糖、苷、苷元对脑缺血的保护
作用。结果表明，由补阳还五汤中提取的4类有效部
位均有缩小梗死灶体积的作用，对照药尼莫地平也
可使梗死灶体积缩小。提示该方中生物碱、多糖、苷、
苷元具有确切的抗脑缺血作用，这4类有效部位可
能为该方治疗缺血性脑血管病的主要物质基础。这
4类有效部位中，以生物碱作用最强，苷次之，而苷
元和多糖缩小梗死体积的作用较弱。这与以往的研
究基本相似嘲。神经功能积分也表明，4类有效部位
均可使缺血后神经功能行为积分下降，其中以生物
碱和苷的作用较强，这也佐证了生物碱和苷可能为
该方中重要的抗脑缺血作用的有效部位。对补阳还
五汤抗脑缺血有效部位及其机制的深入研究，必将
对阐明该方作用的物质基础及揭示脑缺血的治疗效
果具有重要的理论意义和应用价值。
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龙葵碱对H22荷瘤小鼠细胞膜流动性和膜蛋白水平的影响
季宇彬，王胜惠，高世勇，汲晨锋，邹翔
(哈尔滨商业大学药物研究所博士后科研工作站，黑龙江哈尔滨 150076)
摘 要：目的 观察龙葵碱对H。。荷瘤小鼠肿瘤细胞膜流动性和膜蛋白水平的影响。方法 采用荧光探针DPH标
记法测定肿瘤细胞膜流动性，考马斯亮蓝法测定肿瘤细胞膜蛋白水平。结果龙葵碱可显著降低H。。荷瘤小鼠肿瘤
细胞膜流动性，降低H：。小鼠肿瘤细胞膜蛋白水平。结论 龙葵碱是通过影响肿瘤细胞膜的流动性和肿瘤细胞膜上
的蛋白水平恢复细胞的正常生理活性而达到抗肿瘤作用。
关键词：龙葵碱；H。。荷瘤小鼠；膜流动性；膜蛋白水平
中图分类号：R286．91 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2005)02—0239—03
收稿日期：2004—06—15
基金项目：国家自然科学基金资助项目(30400591)；黑龙江省自然科学基金资助项目(D0024--13)；哈尔滨市青年科学基金资助项目
(2004AFQXJ035)
作者简介：季宇彬(1956一)，男，博士，教授，博士生导师，多年来一直致力于中药药理、肿瘤药理及分子药理学研究。
万方数据
·240· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第2期2005年2月
EffectofSolanumigrumalkaloidonmembranefluidityandmembraneproteinlevel
oftumorcellsinH22tumor-bearingmice
JIYu—bin，WANGSheng—hui，GAOShi—yong，JIChen—feng，ZOUXiang
(PostdoctoralPr gramme，InstituteofMateriaMedica，HarbinUniversityofCommerce，Harbin150076，China)
Abstract：ObjectiveTostudytheffectsofalkaloidofSolanumigrumon embranefluidityand
membraneproteinleveloftumorcellsinH22tumor—bearingmice(H22mice)．MethodsThemembrane
fluidityof umorcellsinH22micewasobservedbyDPHfluorescentprobemarkermethod，andthelevelof
membraneproteinsoftumorcellsinH22miceweredeterminedbyCoomassiebrilliantblue．ResultsThe
alkaloidofS．nigrumcouldmakethemembranefluiditydeclinea dthe1evelofmembraneproteinsoftu—
morcellsinH。miced crease．ConclusionThealkaloidfS．nigrumshowstheantitumoractivity
throughdecreasingthemembranefluidityandthemembraneproteinleveloftumorcellsinH2zmice．
Keywords：alkaloidofSolanumigrumL．；H22tumor—bearingmice(H22mice)；membranefluidity；
membraneproteinlevel
龙葵SolanumigrumL．别名苦菜、苦葵、老
鸦眼、天茄子，为茄科一年生草本植物。分布于全国
各地，以东北、华北为多。主要成分为生物碱，另外含
有维生素及多种微量元素。有记载民间使用龙葵治
疗肿瘤效果良好的报道。前期抗肿瘤实验结果表明
龙葵碱能够明显延长H。。荷瘤小鼠的生存时间[1]。
本实验进一步观察其对H。。荷瘤小鼠细胞膜流动性
和膜蛋白水平的影响，从而揭示其抗肿瘤作用机制。
1材料
1。1 药品及试剂：龙葵碱(纯度为99．5％)，由黑
龙江省药品检验所提供；环磷酰胺，江苏恒瑞医药股
份有限公司，批号03081321；DPH(1，6-diphenyl一
1，3，5一hexatriene)，FlukeAG产品。
1．2 动物与瘤株：昆明种小鼠，雌雄各半，体重
(20±2)g，由哈尔滨市兽医研究所动物室提供；H：：
瘤株，购于哈尔滨市肿瘤医院肿瘤研究所。
1．3仪器：RF一540荧光分光光度计，日本岛津；
紫外721分光光度计，山东高密分析仪器厂；水平
高速离心机，北京医用离心机厂；低温超速离心机，
美国贝克曼公司。
2方法
2．1分组：小鼠随机分为5组，每组10只，雌雄各
半，分别为阴性对照(生理盐水)组，环磷酰胺(30
mg／kg)组，龙葵碱低、中、高剂量(9．375、18．750、
37．500mg／kg)组。
2．2模型的建立及给药：无菌条件下抽取生长良好
的H。。荷瘤小数腹水，按腹水一生理盐水(1：4)稀
释后，于每只小鼠腹腔接种0．2mL，接种24h后各
组SC给药。
2．3对肿瘤细胞膜流动性的影响：从已接种腹水癌
细胞1周后的小鼠腹腔中，取腹水约1mL，用生理
盐水约10mL洗涤1次，1000r／min离心10min，
用约10mLPBS溶液洗涤1次。若腹水中有红细
胞，应多洗2次，将红细胞除去。然后将腹水癌细胞
悬浮在含有10％小牛血清的Eagle液中，调细胞浓
度1×107／mL。台盼蓝染色检查，95％以上细胞是
活细胞。取已准备好的细胞2mL，离心，用PBS洗
涤1次，离心，加2x10．6mol／LDPH2mL，25℃
温育30min，再用PBS洗涤1次，悬浮在4mL
PBS溶液中。在标准管中加入2mLDPH标记液，
空白管中加入等量、等渗的PBS缓冲液，混匀后于
25℃温育30min，3000r／min离心10min，弃去
残留DPH标记液，用等渗PBS缓冲液洗涤2次，
再用等渗PBS缓冲液稀释成4mL细胞混悬液，立
即进行荧光偏振度(P)测定。用RF一540荧光分
光光度计，采用氙灯光源，荧光激发波长为362nm，
发射波长为432am，在25℃下分别测定与激发偏
振光振动方向平行、垂直时的P[2]，计算微黏
度(节)。
哼一南
2．4对肿瘤细胞膜蛋白水平的影响：肿瘤细胞膜影
泡的制备参照文献方法口]，取H：：腹水，分别适当处
理。用4倍量3mol／LKCl抽提肿瘤膜蛋白，对
0．01mol／L、pH7．4的磷酸盐缓冲液透析，透析前
后分别在4℃条件下以17000r／min离心30
min，然后用考马斯亮蓝法测定蛋白质水平。
2．5数据处理：用SPSSl2．0软件处理，各组数据
以x+s表示。
3结果
3．1龙葵碱对H。。荷瘤小鼠肿瘤细胞膜流动性的
影响：实验结果表明，龙葵碱可显著降低H：。小鼠肿
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第2期2005年2月·241·
瘤细胞膜流动性，其中高、中剂量组与生理盐水组比
较叩显著升高，差异显著(P
表1龙葵碱对H：：小鼠肿瘤细胞膜流动性及膜蛋白水平的影响(；±s，席一10)
Table1 AlkaloidofS．nigrumonmembranefluidityandmembraneproteinleveloftumorcellsinH2,mice(z土s，一一10)
与生理盐水组比较：。P
3．2 龙葵碱对H。：荷瘤小鼠肿瘤细胞膜蛋白水平
的影响：结果表明，龙葵碱可降低H：。小鼠肿瘤细胞
膜蛋白水平，其中以高剂量组最为明显(P
膜质流动性的变化是膜组成成分变化的体现，
膜流动性的改变将影响细胞的正常生理功能。膜质
流动性的变化会影响到膜蛋白的构象与功能。膜脂
适合的流动性是膜蛋白正常功能表现的必要条件。
如果超出正常范围，生物膜就会产生异常的变化。已
经发现很多疾病患者的病变细胞膜或红细胞膜的流
动性异常。例如，急性淋巴细胞白血病患者淋巴细胞
膜的流动性明显高于正常人。本实验的结果表明，龙
葵碱可显著降低H：：荷瘤小鼠肿瘤细胞膜流动性，
其中高、中剂量组与生理盐水组比较1显著升高
(P
肿瘤细胞膜的流动性，从而恢复细胞的正常生理功
能，达到抗肿瘤的作用。
膜蛋白是膜的重要组成部分，其与肿瘤密切相
关‘4’5]。膜的流动性的改变受膜蛋白水平的影响，膜
蛋白的变化将导致膜的通透性、渗透压、膜电位、跨
膜转运能力、外信号向内传导的变化，导致细胞丧失
正常的细胞内环境，使得细胞核内信息指令异常，导
致细胞分裂速度、细胞恶性行为的获得异常。本实验
在观察细胞膜流动性变化的同时，进一步观察了龙
葵碱对H：。荷瘤小鼠肿瘤细胞膜蛋白水平的影响，
发现龙葵碱各组膜蛋白含量较生理盐水组显著降
低，其中以高剂量组最为明显(P<0．01)，中剂量和
低剂量差异显著(P
类的变化而恢复细胞的正常生理活性而达到抗肿瘤
的目的的，从而恢复了肿瘤细胞膜的流动性。至于龙
葵碱是通过影响肿瘤细胞膜上蛋白的数量还是种类
而发挥疗效的，还有待于进一步的实验研究。
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声 明尸
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《中草芮》杂志编辑部
万方数据
龙葵碱对H22荷瘤小鼠细胞膜流动性和膜蛋白水平的影响
作者： 季宇彬， 王胜惠， 高世勇， 汲晨锋， 邹翔， JI Yu-bin， WANG Sheng-hui， GAO Shi-
yong， JI Chen-feng， ZOU Xiang
作者单位： 哈尔滨商业大学药物研究所,博士后科研工作站,黑龙江,哈尔滨,150076
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(2)
被引用次数： 19次
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