全 文 ：实验研究 ／论著
地锦草水提液对Ｈ２２荷瘤小鼠生长抑制
及其机制探讨
邹志坚１　刘海云２　高增光２　王晓敏２
１．南昌大学第四附属医院肿瘤科，江西 南昌３３０００３
２．江西中医药大学基础医学院，江西 南昌３３０００４
【摘要】　目的：研究地锦草对 Ｈ２２荷瘤小鼠的抑瘤作用并探讨其对肿瘤组织血管内皮生长因子（ｖａｓｃｕｌａｒ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ
ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ，ＶＥＧＦ）和基质金属蛋白酶－３（ｍａｔｒｉｘ　ｍｅｔａｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ－３，ＭＭＰ－３）蛋白表达的影响。方法：建立Ｈ２２荷瘤小鼠
模型，随机分为模型对照组、地锦草２６４ｍｇ／（ｋｇ·ｄ）高剂量组、地锦草１３２ｍｇ／（ｋｇ·ｄ）中剂量组、地锦草６６ｍｇ／（ｋｇ·ｄ）低
剂量组和环磷酰胺组５０ｍｇ／（ｋｇ·ｄ）。灌胃给药１４ｄ后处死小鼠，剥离瘤组织，测量肿瘤体积大小。采用 ＨＥ染色其形
态学变化；免疫组化法观察肿瘤组织ＶＥＧＦ和 ＭＭＰ－３蛋白表达情况。结果：地锦草高剂量组的肿瘤体积为（３．１２５±
１．７１１）ｍｍ３，模型对照组为（５．０８１±１．９３６）ｍｍ３；地锦草高剂量组肿瘤质量为（１．７８４±１．７６５）ｇ，模型对照组为
（４．４１８±２．７２０）ｇ。与模型组比较，地锦草高剂量组肿瘤体积明显缩小，ｔ＝２．１８４，Ｐ＝０．０３７；且其瘤质量减轻，ｔ＝
２．１４５，Ｐ＝０．０４１。地锦草和环磷酰胺组小鼠瘤体组织切片可见癌细胞聚积成巢，肿瘤细胞数量减少，多处组织坏死，瘤
体与周围组织界限清楚，且未侵犯周围组织。免疫组化结果显示，模型组ＶＥＧＦ和 ＭＭＰ－３蛋白表达增强。地锦草高剂
量组ＶＥＧＦ蛋白表达（０．１６０±０．００４）下降，与模型对照组（０．２２８±０．０２０）比较差异有统计学意义，ｔ＝５．０１１，Ｐ＜０．００１。
地锦草高、中、低剂量组 ＭＭＰ－３蛋白表达分别为０．３１６±０．０６２、０．３０３±０．０５７和０．３０２±０．０５８，与模型组比较差异均
有统计学意义，ｔ值分别为６．３２２、６．８４５和６．５３４，Ｐ值均＜０．００１。各组肿瘤组织的 ＶＥＧＦ与 ＭＭＰ－３蛋白表达无直接
相关性，ｒ＝０．０６９，Ｐ＝０．７０９。结论：地锦草可抑制 Ｈ２２荷瘤小鼠肿瘤的生长，其抗肿瘤机制可能与抑制 Ｈ２２荷瘤小鼠
的肿瘤组织ＶＥＧＦ和 ＭＭＰ－３蛋白的表达有关。
【关键词】　地锦草；血管内皮生长因子；基质金属蛋白酶－３；Ｈ２２荷瘤小鼠
中华肿瘤防治杂志，２０１４，２１（１２）：９０３－９０８
Ａｎｔｉｔｕｍｏｒ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｅｕｐｈｏｒｂｉａｅ　ｈｕｍｉｆｕｓａｅ　ｈｅｒｂ　ｏｎ　Ｈ２２ｔｕｍｏｒ－ｂｅａｒｉｎｇ　ｍｉｃｅ
ａｎｄ　ｉｔｓ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ
ＺＯＵ　Ｚｈｉ－ｊｉａｎ１，ＬＩＵ　Ｈａｉ－ｙｕｎ２，ＧＡＯ　Ｚｅｎｇ－ｇｕａｎｇ２，ＷＡＮＧ　Ｘｉａｏ－ｍｉｎ２
１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｆｏｕｒｔｈ　Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　Ｎａｎｃｈａｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｃｈａｎｇ３３０００３，Ｐ．Ｒ．Ｃｈｉｎａ
２．Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｂａｓｉｃ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｊｉａｎｇｘｉ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，
Ｎａｎｃｈａｎｇ３３０００４，Ｐ．Ｒ．Ｃｈｉｎａ
［ＡＢＳＴＲＡＣＴ］　ＯＢＪＥＣＴＩＶＥ：Ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ａｎｔｉｔｕｍｏｒ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｅｕｐｈｏｒｂｉａｅ　ｈｕｍｉｆｕｓａｅ　ｈｅｒｂ（ＥＨＨ）ａｎｄ　ｔｈｅ　ｉｎｆｅｒｅｎｃｅｓ　ｏｎ
ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｖａｓｃｕｌａｒ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ（ＶＥＧＦ），ｍａｔｒｉｘ　ｍｅｔａｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ－３（ＭＭＰ－３）ｏｎ　Ｈ２２ｃｅｌｓ　ｂｅａｒｉｎｇ
ｍｉｃｅ．ＭＥＴＨＯＤＳ：Ｈ２２ｌｉｖｅｒ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌｓ　ｗｅｒｅ　ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒｉｇｈｔ　ａｘｉｌａ　ｔｏ　ｐｒｅｐａｒｅ　ｓｏｌｉｄ　ｔｕｍｏｒ　ｍｏｄｅｌｓ．Ｆｉｖｅ　ｇｒｏｕｐｓ
ｗｅｒｅ　ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ　ｉｎ　ｅａｃｈ　ｂａｔｃｈ，ｎａｍｅｄ　ｍｏｄｅｌ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ；ａｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ；ａ　ｈｉｇｈ－ｄｏｓｅ　ｇｒｏｕｐ　２６４ｍｇ／（ｋｇ·ｄ）；
ａ　ｍｉｄｄｌｅ　ｄｏｓｅ　ｇｒｏｕｐ　１３２ｍｇ／（ｋｇ·ｄ）ａｎｄ　ａ　ｌｏｗ－ｄｏｓｅ　ｇｒｏｕｐ　６６ｍｇ／（ｋｇ·ｄ）．Ｔｈｅ　ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎ　ｗａｓ　ｇｉｖｅｎ　ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓｌｙ　ｆｏｒ
１４ｄａｙｓ．Ｔｈｅ　ｔｕｍｏｒ　ｗａｓ　ｗｅｉｇｈｔｅｄ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｔｕｍｏｒ　ｓｉｚｅ　ｗａｓ　ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ．Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｕｍｏｒ　ｗｅｒｅ　ｏｂ－
ｓｅｒｖｅｄ　ｕｎｄｅｒ　ｏｐｔｉｃａｌ　ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ．Ｕｓｉｎｇ　ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ｍｅｔｈｏｄ，ｔｈｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＶＥＧＦ　ａｎｄ　ＭＭＰ－３ｉｎ
ｔｕｍｏｒ　ｔｉｓｓｕｅｓ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ．ＲＥＳＵＬＴＳ：Ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｍｏｄｅｌ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ　ｓｉｚｅ　ｏｆ　ｔｕｍｏｒ　ｉｎ　ＥＨＨ　ｔｒｅａｔ　ｇｒｏｕｐｓ
ｗａｓ　ｓｍａｌｅｒ（３．１２５±１．７１１）ｍｍ３　ｖｓ（５．０８１±１．９３６）ｍｍ３（ｔ＝２．１８４，Ｐ＝０．０３７）ａｎｄ　ｔｈｅ　ｗｅｉｇｈｔ　ｏｆ　ｔｕｍｏｒ　ｗａｓ　ｄｅｃｒｅａｓｅｄ
（１．７８４±１．７６５）ｇ　ｖｓ（４．４１８±２．７２０）ｇ（ｔ＝２．１４５，Ｐ＝０．０４１）．Ｔｕｍｏｒ　ｃｅｌｓ　ｗａｓ　ａｃｃｕｍｕｌａｔｅｄ　ｉｎｔｏ　ａ　ｎｅｓｔ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｎｕｍｂｅｒ
【基金项目】　江西省卫生厅科技项目（２０１３１１０４）；江西省自然科学基金（２００８ＧＺＹ００１８）
【第一作者简介】　邹志坚，男，江西高安人，硕士，副主任医师，主要从事肿瘤临床的研究工作。
Ｔｅｌ：８６－７９１－８７０２４５５７　Ｅ－ｍａｉｌ：８５７５２０３６４＠ｑｑ．ｃｏｍ
【通讯作者简介】　王晓敏，女，江西余干人，博士，副教授，硕士生导师，主要从事中医药防治肿瘤的研究工作。
Ｔｅｌ：８６－７９１－８７１１８９２６　Ｅ－ｍａｉｌ：ｗａｎｇｘｍ２００１＠１６３．ｃｏｍ
·３０９·中华肿瘤防治杂志２０１４年６月第２１卷第１２期　　ＣＨＩＮ　Ｊ　ＣＡＮＣＥＲ　ＰＲＥＶ　ＴＲＥＡＴ，Ｊｕｎｅ　２０１４，Ｖｏｌ．２１　Ｎｏ．１２
DOI:10.16073/j.cnki.cjcpt.2014.12.001
ｏｆ　ｃｅｌｓ　ｄｅｃｒｅａｓｅｄ．Ｔｉｓｓｕｅ　ｎｅｃｒｏｓｉｓ　ｗａｓ　ｖｉｓｉｂｌｅ　ａｎｄ　ｎｏｒｍａｌ　ｔｉｓｓｕｅ　ｂｏｕｎｄａｒｙ　ｗａｓ　ｃｌｅａｒ，ｎｏｔ　ｉｎｆｒｉｎｇｅ　ｕｐｏｎ　ｔｈｅ　ｓｕｒｒｏｕｎｄｉｎｇ　ｔｉｓ－
ｓｕｅ．Ｔｈｅ　ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｌｏｗｅｒ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＶＥＧＦ　ｉｎ　ａ　ｈｉｇｈ－ｄｏｓｅ　ｇｒｏｕｐｓ（０．１６０±０．００４）ｖｓ
（０．２２８±０．０２０），ｔ＝５．０１１，Ｐ＜０．００１，ｗｉｔｈ　ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｍｏｄｅｌ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＭＭＰ－３ｉｎ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ
ｄｏｓｅ　ＥＨＨ（０．３１６±０．０６２，０．３０３±０．０５７ａｎｄ　０．３０２±０．０５８）ｗｅｒｅ　ｄｅｃｒｅａｓｅｄ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｃｏｍｐａｒｉｎｇ　ｗｉｔｈ　ｔｈｏｓｅ　ｉｎ　ｍｏｄｅｌ
ｃｏｎｔｒｏｌｓ（ｔ＝６．３２２，６．８４５ａｎｄ　６．５３４，Ｐ＜０．００１）．Ｔｈｅｒｅ　ｗａｓｎ’ｔ　ａ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ＶＥＧＦ　ａｎｄ　ＭＭＰ－３（ｒ＝
０．０６９，Ｐ＝０．７０９）．ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ：ＥＨＨ　ａｃｔｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｌｉｖｅｒ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｉｓ　ｐｒｏｂａｂｌｙ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｔｏ
ｔｈｅ　ｄｅｃｒｅａｓｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ　ｏｆ　ＶＥＧＦ　ａｎｄ　ＭＭＰ－３ｉｎ　Ｈ２２ｔｕｍｏｒ－ｂｅａｒｉｎｇ　ｍｉｃｅ．
［ＫＥＹＷＯＲＤＳ］　Ｅｕｐｈｏｒｂｉａｅ　ｈｕｍｉｆｕｓａｅ　ｈｅｒｂ；ｖａｓｃｕｌａｒ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ；ｍａｔｒｉｘ　ｍｅｔａｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ－３；Ｈ２２ｔｕｍｏｒ－
ｂｅａｒｉｎｇ　ｍｉｃｅ
Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｐｒｅｖ　Ｔｒｅａｔ，２０１４，２１（１２）：９０３－９０８
【中图分类号】　Ｒ７３０．５２　　　【文献标识码】　Ａ　　　【文章编号】　１６７３－５２６９（２０１４）１２－０９０３－０６
　　清热解毒中药地锦草（Ｅｕｐｈｏｒｂｉａｅ　ｈｕｍｉｆｕｓａｅ
ｈｅｒｂａ）具有体内抗肿瘤和体外诱导肿瘤细胞凋亡的作
用，但其具体机制尚不清楚［１］。本实验以 Ｈ２２荷瘤小
鼠移植性实体瘤为模型，观察地锦草对 Ｈ２２荷瘤小鼠
移植性实体瘤增殖的抑制作用及血管生长因子影响，
探讨地锦草的体内抗肿瘤部分机制，以期为临床用药
提供理论依据。
１　材料与方法
１．１　实验动物
Ｈ２２腹水瘤源小鼠由中科院细胞库提供；昆明种
远交系雄性小鼠，ＳＰＦ级，体质量（２８±２）ｇ，江西中医
药大学实验动物中心提供，许可证号：ＳＣＸＫ（赣）２０１１－
０００１。喂小鼠标准饲料，自由摄食，摄水。饲养室室温
为２５℃，相对湿度为４５％，通风良好。
１．２　药品
地锦草购自安微毫州市永刚饮片厂有限公司，批
号：２０１２０８１３；环磷酰胺购自江苏恒瑞医药股份有限公
司，批号：１２０６０１２５。
１．３　试剂与仪器
１．３．１　试剂　抗血管内皮生长因子 （ｖａｓｃｕｌａｒ　ｅｎｄｏ－
ｔｈｅｌｉａｌ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ，ＶＥＧＦ）、基质金属蛋白酶－３
（ｍａｔｒｉｘ　ｍｅｔａｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ－３，ＭＭＰ－３）抗体工作液
（兔源多克隆抗体）购自北京中杉生物试剂公司，批号：
Ｆ０１１２和 Ａ０４１１；ＳＰ 免疫组织化学检测试剂盒及
ＤＡＢ显色盒购自北京中杉生物试剂公司，批号：
Ｋ１３３３１９Ｄ。
１．３．２　仪器　２－６型离心机为德国Ｓｉｍｇａ公司产品；
徕卡 ＲＭ２０１６ 型切片机、ＴＰ１０２０ 型脱水机、徕卡
ＤＬ２５００型显微镜和徕卡ＤＦＣ４２０彩色数码ＣＣＤ图像
采集系统（５００万像素）均为德国徕卡公司产品；Ｉｍ－
ａｇｅ－Ｐｒｏ　Ｐｌｕｓ　６．０为美国冷泉公司产品。
１．４　方法
１．４．１　地锦草水提液制备　地锦草１００ｇ加入１　０００ｍＬ
大烧杯中，加２次水４００ｍＬ，煮沸２０ｍｉｎ，过滤。滤渣
加２次水共２００ｍＬ，煮沸２０ｍｉｎ，过滤。合并２次滤
液浓缩成１．５ｇ／ｍＬ。
１．４．２　Ｈ２２荷瘤小鼠的建立和分组　将接种 Ｈ２２瘤
种７ｄ的腹水瘤小鼠以脱颈法处死，无菌条件下抽取
腹水瘤细胞悬液５ｍＬ，１　５００ｒ／ｍｉｎ，离心１０ｍｉｎ（ｒ＝
１３．５ｃｍ）后，用生理盐水重新悬浮细胞，细胞悬液浓度
为１×１０６　ｍＬ－１。以每只０．２ｍＬ接种于６０只昆明种
小鼠右腋下，建立 Ｈ２２荷瘤小鼠模型［２］。接种２４ｈ
后，随机分成５组，每组１２只。地锦草低、中、高剂量
组、环磷酰胺组和模型对照组。地锦草低、中、高剂量
组分别按照６６、１３２和２６４ｍｇ／（ｋｇ·ｄ）剂量灌胃
１４ｄ，环磷酰胺组按照５０ｍｇ／（ｋｇ·ｄ）尾静脉注射
１次，模型对照组和环磷酰胺组小鼠灌胃给予生理盐
水０．２ｍＬ，连续１４ｄ。
１．４．３　样本采集、制备与检测　实验前、第１周末、第
２周末均称取质量。摘眼球处死小鼠，将右腋下皮下
肿瘤组织严格剥离干净后，游标卡尺测量肿瘤最长径
（Ｌ）、最短径（Ｗ）和高（Ｄ），计算肿瘤体积［３］。
１．５　ＶＥＧＦ和 ＭＭＰ－３蛋白表达
肿瘤组织标本常规石蜡包埋，切片，厚度约２μｍ。
脱蜡、水化后以３％Ｈ２Ｏ２ 室温孵育１０ｍｉｎ，消除内源
性过氧化物酶的活性，热修复抗原５ｍｉｎ。滴加抗体
ＶＥＧＦ（１∶５０）或 ＭＭＰ－３（１∶２００）３７℃孵育２ｈ，
ＤＡＢ室温下显色。苏木精复染，脱水、透明、中性树胶
封片。并设阳性对照和阴性对照，用已知的阳性切片
为阳性对照；以 ＰＢＳ 代替一抗，作为阴性对照。
ＶＥＧＦ和 ＭＭＰ－３蛋白均在胞质中表达，呈现不同程
度的黄色或棕褐色颗粒，每张切片选取５个４００倍视
野，采用Ｉｍａｇｅ－Ｐｒｏ　Ｐｌｕｓ（ＩＰＰ）６．０图像分析系统计算阳
性区域内的光密度平均值（ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ　ｏｐｔｉｃａｌ　ｄｅｎｓｉｔｙ，
ＩＯＤ）／阳性区域的面积（ａｒｅａ）比值为阳性的表达强度。
１．６　统计学方法
采用ＳＰＳＳ　１３．０进行统计学分析，计量资料以
ｘ－±ｓ表示，多组间进行单因素方差分析，两两比较方
差齐时ＬＳＤ检验，方差不齐时用Ｄｕｎｎｅｔｔ’ｓ　Ｔ３检验。
·４０９· 邹志坚，等　地锦草水提液对 Ｈ２２荷瘤小鼠生长抑制及其机制探讨
相关性采用Ｐｅａｒｓａｏｎ相关分析。检验水准α＝０．０５。
２　结果
２．１　地锦草对 Ｈ２２荷瘤小鼠体质量的影响
给药前各组体质量无差别。给药１周后５组动物
体质量均值差异有统计学意义，Ｆ＝４．１１２，Ｐ＝０．００３
（表１）。其中组间两两比较显示，地锦草高剂量组的
体质量减轻，与模型组比较差异有统计学意义，ｔ＝
４．３１３，Ｐ＜０．００１；地锦草中剂量组与模型组比较差异
有统计学意义，ｔ＝３．０１４，Ｐ＝０．００４；阳性对照组与模
型组比较差异有统计学意义，ｔ＝２．９６７，Ｐ＝０．００４；其
他组间比较差异均无统计学意义。给药２周后各组间
体质量均数比较均差异无统计学意义，可能是因肿瘤
所致体质量减轻，同时瘤质量增加，两者的叠加效应使
荷瘤小鼠体质量变化不大。
表１　地锦草对Ｈ２２荷瘤小鼠体质量的影响（ｘ－±ｓ，ｎ＝１０）
组别 剂量（ｍｇ／ｋｇ） ０周（ｇ） １周（ｇ） ２周（ｇ）
模型对照组 － ２８．９３±３．６３　 ３４．４０±５．０２　 ３２．１８±６．５３
环磷酰胺组 ５０　 ２８．３７±２．９９　 ２９．４０±４．１７ａ ３３．０３±４．６２
地锦草组
　高剂量 ２６４　 ２９．４０±２．７６　 ２６．４６±４．６８ａ ３０．８０±５．２４
　中剂量 １３２　 ２８．７６±３．００　 ２９．３９±２．８８ａ ３３．５１±２．９０
　低剂量 ６６　 ３０．３７±４．４８　 ３０．６５±５．９０　 ３４．５１±１．３９
Ｆ值 － ０．７１３　 ４．１１２　 ０．６５６
Ｐ值 － ０．５８６　 ０．００３　 ０．６５９
　　注：ｖｓ模型组，ａＰ＜０．０５
２．２　地锦草对 Ｈ２２荷瘤小鼠瘤质量和瘤体积的影
响
５组瘤质量均数比较差异有统计学意义，Ｆ＝
２．７７２，Ｐ＝０．０４３（表２）。其中组间两两比较显示，高
剂量组质量减轻，与模型组比较差异有统计学意义，
ｔ＝２．１４５，Ｐ＝０．０４１；阳性对照组与模型组比较差异
有统计学意义，ｔ＝２．３２３，Ｐ＝０．０２７；中剂量组与阳性
对照组比较差异有统计学意义，ｔ＝２．３８１，Ｐ＝０．０２３；
其他组间比较差异均无统计学意义。
５组瘤体积均数比较差异有统计学意义，Ｆ＝
４．９７２，Ｐ＝０．００４（见表２）。其中组间两两比较显示，
高剂量组瘤体积明显缩小，与模型组比较差异有统计
学意义，ｔ＝２．１８４，Ｐ＝０．０３７；阳性对照组与模型组比
较差异有统计学意义，ｔ＝２．８５６，Ｐ＝０．００８；中剂量与
阳性组比较差异有统计学意义，ｔ＝３．９５８，Ｐ＜０．００１；
低剂量组与阳性对照组比较差异有统计学意义，ｔ＝
２．７８５，Ｐ＝０．００９。结果提示地锦草高剂量组能抑制
肿瘤生长，减轻瘤质量和大小。
表２　地锦草对Ｈ２２荷瘤小鼠瘤质量与体积的影响（ｘ－±ｓ，ｎ＝１０）
组别 剂量（ｍｇ／ｋｇ） 瘤质量（ｇ） 瘤体积（ｍｍ３）
模型对照组 － ４．４１８±２．７２０　 ５．０８１±１．９３６
环磷酰胺组 ５０　 １．２２８±１．０２７ａ １．７４８±１．０８１ａ
地锦草组
　高剂量 ２６４　 １．７８４±１．７６５ａ ３．１２５±１．７１１ａ
　中剂量 １３２　 ４．０２４±２．６０９ｂ　 ４．７１６±２．７４８ｂ
　低剂量 ６６　 ３．６７２±１．９９７　 ５．３７０±１．８５５ｂ
Ｆ值 － ２．７７２　 ４．９７２
Ｐ值 － ０．０４３　 ０．００４
　　注：ｖｓ模型组，ａＰ＜０．０５；ｖｓ环磷酰胺组，ｂ　Ｐ＜０．０５
２．３　组织形态学变化
模型对照组小鼠瘤体呈不规律的分叶样结节，同
时侵犯周围组织，难剥离。地锦草和环磷酰胺治疗后
小鼠瘤体局限，未向周围组织浸润，界限清楚，较易剥
离。如图１所示，光镜下见模型对照组接种瘤组织切
片内癌细胞聚积成巢，细胞数量多、且排列紊乱，与周
围组织边界不清，坏死组织不明显，癌细胞已向外侵犯
周围脂肪组织，与周围组织分界不清；高倍镜下见癌细
胞异型性明显，局部癌细胞扩散，侵犯到肌肉组织。地
锦草和环磷酰胺组小鼠肿瘤组织中癌细胞聚积成巢，
肿瘤细胞数量明显减少；高倍镜下见癌细胞异型性不
明显，巨核、多核少见，核染色减轻，瘤体与周围组织界
限清楚，未侵犯周围组织，且可见多处组织坏死。
·５０９·中华肿瘤防治杂志２０１４年６月第２１卷第１２期　　ＣＨＩＮ　Ｊ　ＣＡＮＣＥＲ　ＰＲＥＶ　ＴＲＥＡＴ，Ｊｕｎｅ　２０１４，Ｖｏｌ．２１　Ｎｏ．１２
　　注：Ａ．模型对照组；Ｂ．环磷酰胺组；Ｃ．高剂量组；Ｄ．中剂量组；Ｅ．低
剂量组
图１　Ｈ２２荷瘤小鼠肿瘤组织的形态变化（ＨＥ×２００）
２．４　地锦草对ＶＥＧＦ和 ＭＭＰ－３蛋白表达影响
ＶＥＧＦ和 ＭＭＰ－３蛋白表达均定位于细胞质中，
呈棕黄、棕褐及浅黄色（图２和图３）。给药后５组间
肿瘤组织ＶＥＧＦ蛋白表达量比较差异有统计学意义，
Ｆ＝９．００４，Ｐ＜０．００１（表３）。其中组间两两比较显
示，高剂量组 ＶＥＧＦ蛋白表达下降，与对照组比较差
异有统计学意义，ｔ＝５．０１１，Ｐ＜０．００１；环磷酰胺组与
对照组比较差异有统计学意义，ｔ＝４．６６７，Ｐ＜０．００１；
其他组间比较差异均无统计学意义。
　　给药后５组间肿瘤组织 ＭＭＰ－３蛋白表达量比较
差异有统计学意义，Ｆ＝１５．７０１，Ｐ＜０．００１（见表３）。
其中组间两两比较显示，高剂量与对照组比较差异有
统计学意义，ｔ＝６．３２２，Ｐ＜０．００１；中剂量组与对照组
比较差异有统计学意义，ｔ＝６．８４５，Ｐ＜０．００１；低剂量
组与对照组比较差异有统计学意义，ｔ＝６．５３４，Ｐ＜
０．００１；其他组间比较差异均无统计学意义。
２．５　各组ＶＥＧＦ和 ＭＭＰ－３蛋白表达的相关性
经Ｐｅａｒｓａｏｎ相关分析，各组ＶＥＧＦ和 ＭＭＰ－３蛋
白表达水平未见相关性（ｒ＝０．０６９，Ｐ＝０．７０９），提示
血管的生成与转移无直接相关性，肿瘤的生长和转移
受多种因素调控。
３　讨论
ＶＥＧＦ是作用最强的血管生成促进因子，与多种
肿瘤的生长、转移和预后密切相关［４－５］。ＭＭＰ－３能降
解胞外基质蛋白质以及明胶、纤维粘连蛋白、层粘连蛋
白等胞外基质成分，是水解胞外基质最主要的酶类［６］。
在 ＭＭＰ－３的作用下，胞外基质被水解形成孔道，便于
肿瘤细胞向周围组织侵袭或发生转移。因此，抑制肿
瘤血管生长和基质的降解，成为抗肿瘤的主要环节［７］。
中药地锦草为大戟科植物，中国各地均有分布，资
源十分丰富，味苦、平、无毒［８］。其化学成分主要含黄
酮类，如槲皮素及其单糖苷、异槲皮苷、黄芪苷等［９］。
地锦草具有清热解毒作用，许多清热解毒中药有效成
分及中药复方都有抑制肿瘤的生长和转移，其作用机
制与抑制血管内皮细胞生长因子的表达和抑制血管生
成有关［１０］。但地锦草能否抑制 Ｈ２２荷瘤小鼠血管内
皮细胞生长因子和基质的降解尚不清楚。
本研究采用腋下接种 Ｈ２２瘤种建立 Ｈ２２荷瘤小
鼠移植性实体瘤，瘤体增大，且与周围组织粘连，难剥
离，瘤组织中出现周围肌肉组织，瘤组织血管丰富，其
组织的ＶＥＧＦ和 ＭＭＰ－３蛋白表达增高，提示造模成
功。高剂量地锦草能够抑制肿瘤生长，使其体积明显
减小，减少瘤组织的ＶＥＧＦ和 ＭＭＰ－３蛋白表达；中、
低剂量地锦草抑瘤效果不显著，其中以明显降低
ＶＥＧＦ蛋白表达最为显著。给药组后肿瘤组织未出现
肌肉组织等转移形态学变化。
·６０９· 邹志坚，等　地锦草水提液对 Ｈ２２荷瘤小鼠生长抑制及其机制探讨
　　注：Ａ．模型对照组；Ｂ．环磷酰胺组；Ｃ．高剂量组；Ｄ．中剂量组；Ｅ．低
剂量组
图２　地锦草对Ｈ２２荷瘤小鼠肿瘤组织ＶＥＧＦ
蛋白表达的影响（ＳＰ×４００）
　　注：Ａ．模型对照组；Ｂ．环磷酰胺组；Ｃ．高剂量组；Ｄ．中剂量组；Ｅ．低
剂量组
图３　地锦草对Ｈ２２荷瘤小鼠肿瘤组织ＭＭＰ－３
蛋白表达的影响（ＳＰ×４００）
·７０９·中华肿瘤防治杂志２０１４年６月第２１卷第１２期　　ＣＨＩＮ　Ｊ　ＣＡＮＣＥＲ　ＰＲＥＶ　ＴＲＥＡＴ，Ｊｕｎｅ　２０１４，Ｖｏｌ．２１　Ｎｏ．１２
表３　地锦草对Ｈ２２荷瘤小鼠肿瘤组织ＶＥＧＦ和ＭＭＰ－３蛋白表达的影响（ｘ－±ｓ，ｎ＝１０）
组别 剂量（ｍｇ／ｋｇ） ＶＥＧＦ（ＩＯＤ／Ａｒｅａ） ＭＭＰ－３（ＩＯＤ／Ａｒｅａ）
模型对照组 － ０．２２８±０．０２０　 ０．４５９±０．１００
环磷酰胺组 ５　 ０．２２１±０．０２１　 ０．３２８±０．０３７ａ
地锦草组
　高剂量 ２６４　 ０．１６０±０．００４ａｂ　 ０．３１６±０．０６２ａ
　中剂量 １３２　 ０．２１７±０．０２５　 ０．３０３±０．０５７ａ
　低剂量 ６６　 ０．１９９±０．０２３　 ０．３０２±０．０５８ａ
Ｆ值 － ９．００４　 １５．７０１
Ｐ值 － ＜０．００１ ＜０．００１
　　注：ｖｓ模型组，ａＰ＜０．０５；ｖｓ环磷酰胺组，ｂ　Ｐ＜０．０５
　　地锦草可能通过抑制肿瘤细胞分泌 ＶＥＧＦ和
ＭＭＰ－３，减少血管生成和抑制基质酶类活性来抑制肿
瘤生长，达到抗肿瘤作用。但具体起作用有效成分起
有待进一步深入研究。
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收稿日期：２０１４－０２－１１　修回日期：２０１４－０４－０６
（编辑：边莉
檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸檸
）
（上接第９０２页）
　　总之，本研究描述的ＰＲＤＸ１是在蛋白酶体抑制
剂癌症治疗中另外一种导致耐药的分子，通过负向调
节ＡＳＫ１活性及ＡＳＫ１－ｐ３８和ＡＳＫ１－ＪＮＫ通路，抑制
ＡＳＫ１介导的细胞凋亡进而消减蛋白酶体抑制剂对甲
状腺癌细胞毒性效应。
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２０１２：４３９５８７．
收稿日期：２０１４－０２－１２　修回日期：２０１４－０４－０９
（编辑：吕莹）
·８０９· 邹志坚，等　地锦草水提液对 Ｈ２２荷瘤小鼠生长抑制及其机制探讨