全 文 ：4　讨论
糖尿病是慢性疾病 ,需长期服药治疗 ,临床上的口服降糖药
(二甲双胍和格列齐特等 )久服易致胃肠不适、中枢症状及肝肾损
伤等不良反应产生。 本实验采用拟成人日服临床剂量 ( 0. 5g·
kg- 1 )的 10, 30和 50倍的超大剂量脂糖舒灌胃大鼠为期 14周的
长期毒性实验 ,结果显示该方剂量≥ 15 g· kg- 1的中、高剂量组
C T, PT , TT和 APT T显著延长 , Fbg降低 ,表明脂糖舒在剂量增
高时出现抗凝作用增强 ,有利于改善糖尿病及其心、肾、脑并发症
的血液高粘滞性 [9, 10] ,疏通微循环 ,促进组织供血供氧。但各剂量
组大鼠停药前后的一般外观体征、行为活动、体重增长、血常规、
血小板数、血液生化指标和器官系数及病理组织学检查均与对照
组差异无显著性意义 ,而且各组大鼠在试验期内无一例死亡和出
现中毒症状 ;停药 2周后凝血指标逆转 ,未因药物长期应用而导
致凝血障碍或溶血及其它毒性反应和迟发性毒性反应出现。推论
临床拟用剂量应是安全的。
参考文献:
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收稿日期: 2004-05-13;　修订日期: 2004-08-09
作者简介:胡　杰 ( 1975-) ,男 (汉族 ) ,湖北通城人 ,现为在读硕士研究
生 ,主要从事药物制剂的研究工作 .
当归川芎中阿魏酸提取的研究
胡　杰 , 冯丽莉 , 崔福德
(沈阳药科大学 ,辽宁 沈阳　 110016)
摘要:目的 :研究当归、川芎中阿魏酸提取的最佳工艺条件。 方法:以提取液中阿魏酸含量为指标 ,比较了阿魏酸提取的
水煎和醇提工艺 ,并用正交设计将醇提工艺条件进行优化。结果与结论: 醇提工艺更有利于阿魏酸的提取 , 8倍量 70%乙
醇提取两次 , 1. 5 h /次为醇提最佳工艺条件。
关键词: 当归 ;　川芎 ;　阿魏酸 ;　正交设计 ;　提取
中图分类号: R284. 2　　文献标识码: A　　文章编号: 1008-0805( 2004) 11-0732-02
The Extraction Techrology for Ferulic Acid for Angelica s inens is ( Oliv. ) Diels and
Ligustium chuanxiong Hort.
HU Jie, FEN G Li-li , CUI Fu-de
( Shenyang Pharmaceut ical University , 110016,China )
Abstract: Object ive: To optimize the ex traction pro cesses fo r ferulic a cid from Angelica sinensis ( O liv . ) Diels and
Ligusticum chuanx iong Hor t.Methods: By determining ferulic acid( FA) in the ex trac ted so lution, the ex trac tion pr ocesses
of FA with w ater and alcoho l w ere studied r espectiv ely, and the latte r pr ocess w as optimized with o r thogonal design.
Results and Conclusion: The ex t raction pro cesses of FA with a lcoho l w as pr efer to tha t w ith w ater; the optimum
ex trac tion pr ocesses wa s adding 8 times amount o f 70% a lcoho l, r efluxing and ex tracting fo r tw o tim es, 1. 5 hour each
time.
Key words: Angelica sinensis ( Oliv. ) Diels;　 L igusticum chuanx iong Hor t. ;　 Fe rulic Acid;　 Orthogonal design;　
Ex trac tion
　　复方佛手散出自《普济本事方》 ,仅由当归 Angelica sinensis
( O liv ) Diels和川芎 L igusticum Chuanx iong Hort两味中药组
成 ,属于活血化瘀、止血止痛类药对。 古时用于补血活血 ,活血行
气 ,以及胎前产后头晕、头痛、难产出血和胎死腹中等证。当归、川
芎中含量较高的水溶性活性成分均含阿魏酸 ( ferulic acid, FA)。
现代药理学研究表明 , FA具有抑制血小板聚集 ,促进血小板解
聚 ,抗血栓形成 ,解除血管平滑肌痉挛 ,抗氧化 ,提高膜稳定性 ,调
节免疫功能 ,以及抗炎、镇痛和抗生育等药理作用。笔者以提取液
中活性指标成分 FA的含量为指标 ,对复方当归、川芎中 FA的
提取进行了研究 ,并用正交实验对 FA的醇提工艺条件进行了优
化。
1　仪器与试药
SPD- M10A VP高效液相色谱仪 (日本岛津公司 ) ; SPD-
M10A V P二极管阵列检测器 (日本岛津公司 ) ; C TO- 10AS VP
柱温箱 (日本岛津公司 ) ; 98- 1- B型电子调温电热套 (天津市泰
斯特仪器有限公司 ) ; FW- 100高速万能粉碎机 (天津市泰斯特
仪器有限公司 ) ; FA对照品 (中国药品生物制品检定所 0773-
9910) ;当归、川芎饮片购于沈阳中药饮片厂 ;甲醇为色谱纯 ,其余
试剂均为分析纯。
2　方法与结果
2. 1　阿魏酸的含量测定
2. 1. 1　色谱条件 保护柱为 ODS C18柱 ( 4. 6 mm× 10 mm× 5
μm,依利特公司 ) ;分析柱为 ODS C18柱 ( 4. 6 mm× 200 mm× 5
μm,迪马公司 );流动相为甲醇 -水 -乙酸 ( 40∶ 59. 6∶ 0. 4) ;检测波
长: 323 nm;柱温 30℃ ;流速 1. 0 ml /min。
2. 1. 2　对照品溶液制备及标准曲线 精密称取 FA对照品
0. 005 0 g ,于 100 ml量瓶中 ,加入甲酸 5 ml,用 50%乙醇溶解并
稀释至刻度 ,摇匀 ,作为标准贮备液。分别精密吸取贮备液 0. 20,
2. 0, 4. 0, 6. 0, 8. 0, 10. 0 ml于 10 ml量瓶中 ,用 50%乙醇稀释至
刻度 ,摇匀 ,作为标准供试液。 精密取各供试液 20μl,进样 ,按上
述色谱条件测定 ,重复操作 3次 ,以浓度 (C )对峰面积 (A )进行线
性回归 ,得标准曲线方程 A= 92 500C+ 41 774, r= 0. 999 9,表明
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时珍国医国药 2004年第 15卷第 11期 LISHIZHEN M EDICIN E AND M ATERIA MEDICA RESEARCH 2004 V OL. 15 NO. 11　
FA在 20～ 1 000 ng范围内 ,峰面积与浓度比呈良好线性关系。
2. 1. 3　供试液的制备与测定 精密吸取当归川芎提取液 2 ml,
50%乙醇定容至 10 ml量瓶中 , 0. 45μm滤膜滤过 ,取续滤液作
为供试液 ,进样 20μl,按 2. 1. 1色谱条件测定 FA的含量。
2. 2　水回流提取及其影响因素考察
2. 2. 1　加水量的影响 将当归、川芎饮片粉碎过 20目筛 ,按复方
处方称取 40 g ,置 500 ml圆底烧瓶中 ,加入 8倍量体积的水 ,回
流提取 2次 , 2 h /次 ,滤过 ,合并两次滤液 ,得提取液。按 2. 1. 3所
述方法测定提取液中 FA的含量 ,并将所得结果折算为单位饮片
中含有的 FA的量 ,结果为 572. 11μg· g- 1。另取 40 g ,加 6倍量
体积水 ,同样操作后 ,测定 ,提取液中所含 FA浓度为 510. 76μg
· g- 1。
2. 2. 2　提取时间的影响 按处方取饮片 40 g ,加水 320 ml,按
2. 2. 1所述方法回流提取 ,于 0. 15, 0. 5, 0. 75, 1. 5, 2. 0, 3. 0, 4. 0 h
分别取样 3 ml,同时补加 3 ml水 , 3 000 r /min离心 5 min后 ,取
2 ml,测定 FA的含量。 结果见表 1和图 1。
表 1　水煎时间考察结果
时间 t /h FA浓度 C /μg· ml- 1 时间 t /h FA浓度 C /μg· ml- 1
0. 15 78. 18 1. 5 76. 12
0. 5 84. 36 2. 0 57. 26
0. 75 80. 49 3. 0 56. 35
1. 0 78. 25 4. 0 58. 3
图 1　水煎时间考察图
由图 1可知 ,在水回流液中阿魏酸含量 0. 5 h时最高 ,之后
开始下降 , 1. 5 h后降解加快 , 2. 0～ 4. 0 h间维持在较稳定的水
平 ,故水回流时间 30 min为最佳。
2. 2. 3　提取次数的影响 按处方取饮片 40 g ,分 3次回流提取 ,
时间 0. 5 h,水加量为 8, 8, 6倍量 ,提取后测定 ,提取液中所含 FA
浓度为 796. 52μg· g- 1。
2. 3　乙醇回流提取及其影响因素考察
2. 3. 1　乙醇浓度的影响 按处方取饮片 40 g ,共 6份 ,分别加入
8倍量 20% , 40% , 50% , 70% , 85% , 100%浓度的乙醇 ,回流提取
两次 , 2 h /次 ,据 2. 2. 1同样操作后测定 ,结果表见 2。
表 2　醇提浓度考察结果
乙醇浓度
C (% )
FA浓度
C /μg· g- 1
乙醇浓度
C (% )
FA浓度
C /μg· g- 1
20 531. 73 70 862. 81
40 711. 30 85 859. 29
50 834. 41 100 608. 86
2. 3. 2　溶剂加量、时间和次数的影响 按处方取饮片 40 g , 加入
6倍量体积 70%乙醇 ,按 2. 3. 1所述方法 ,提取后测定 ,提取液中
所含 FA浓度为 806. 20μg· g- 1。 再取饮片 40 g , 8倍量 70%乙
醇提取两次 ,时间分别为 2, 1 h ,合并滤液后测定 ,提取液中所含
FA浓度为 886. 37μg· g- 1。另取饮片 40 g , 8倍量 70%乙醇提取
3次 , 2 h /次 , 结果提取液中所含 FA浓度为 917. 41μg· g- 1。
2. 4　正交设计醇提当归、川芎中的 FA 由水回流提取实验结果
可知 ,加水量 8倍量较 6倍量好 ,提取时间最佳为 0. 5 h,提取次
数 3次较佳。 由醇提结果可知 ,乙醇浓度、溶剂加量、提取时间和
提取次数均对提取效果有影响 ,最佳乙醇浓度在 50% ～ 85%间。
水煎和乙醇提取法比较 ,醇提效果更好 ,因此选择醇提工艺进行
优化。
2. 4. 1　实验设计 本实验采用正交设计方法 ,以提取液中 FA含
量作为评判指标 ,乙醇浓度、溶剂加量、提取次数和时间为考察因
素 ,各因素的水平设计见表 3,其中 D因素用拟水平 ,用 L9 ( 34 )表
安排实验 ,结果见表 4。
2. 4. 2　实验安排与结果 按处方取当归、川芎饮片 9份 , 40g /份 ,
按表 3安排加入不同浓度的乙醇 ,回流提取 ,合并各实验号提取
滤液 ,作为提取液 ,测定各提取液中 FA的浓度。实验结果见表 4。
表 3　正交实验因素水平表
水
平
A
提取时间 t /h
B
乙醇浓度 (% )
C
溶剂用量
D
提取次数
1 1. 0 50 6 2
2 1. 5 70 8 2
3 2. 0 85 10 3
表 4　正交试验安排及结果
实验号 A B C D 结果 C /mg· g- 1
1 1 1 1 1 0. 863
2 1 2 2 2 1. 032
3 1 3 3 3 0. 786
4 2 1 2 3 0. 940
5 2 2 3 1 1. 155
6 2 3 1 2 0. 862
7 3 1 3 2 0. 758
8 3 2 1 3 1. 012
9 3 3 2 1 1. 007
K1j0. 894 0. 854 0. 912 1. 008
K2j 0. 986 1. 066 0. 993 0. 884
K3j 0. 926 0. 885 0. 900 0. 913
Rj 0. 092 0. 212 0. 093 0. 124
2. 4. 3　结果的分析与验证 从直观分析可以看出 ,四因素 A, B,
C和 D影响大小从大到小顺序为 B> D> C> A,即乙醇浓度为最
大影响因素 ,其他依次为提取次数、加量和提取时间 ,其中溶剂加
量和提取时间对结果的影响程度无明显差别 ,最佳组合为
B2D1C2 A2 ,即 8倍量 70%乙醇提取 2次 , 1. 5 h /次为醇提最佳工
艺条件。 按此配方提取 3次 ,提取液浓度依次为 1. 162, 1. 098,
1. 173 mg· g- 1 ,平均 1. 144. 80 mg· g- 1。 说明结果可靠。
3　讨论
关于当归、川芎中 FA的提取 ,近来报道的有双提取、醇提及
超临界流体萃取等工艺 [1, 2, 3 ] ,《中国药典》 2000版中复方当归注
射液用水醇法 ,其中水煎时间为 2次 , 2 h /次。笔者对 FA的提取
进行了研究 ,发现水煎时间对 FA提取影响特别大 ,原因是水回
流提取时温度太高 , FA不耐热 ;另外 ,鉴于水煎所得提取液中
FA浓度较乙醇提取液中低 ,且水煎液中含糖量较醇提液中要
高 ,不利于后续工序的处理 ,故本实验采用并优化了 FA的醇提
工艺。 通过实验笔者发现 ,以 70%乙醇提取效果最佳 ,与文献所
报道的结果一致。 实验结果为复方中酸、酚性有效部位的提取奠
定了基础。
参考文献:
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