全 文 ：收稿日期:2009-07-28;　修订日期:2009-12-10
基金项目:广东省中医药局项目(No.2007161, 2009277);
广东食品药品职业学院院级项目(No.2008Z011)
作者简介:高瑞英(1971-),女(汉族),河北沧州人 ,现为广东食品药品职
业学院副教授 ,广东省中药研究所副主任药师 ,博士学位 , 主要从事环境
健康与安全评价研究工作.
当归提取物抗皮肤衰老及美白功效体外实验研究
高瑞英1, 2, 3 ,党　志3 ,邹颖楠 1, 2 ,傅　中 1
(1.广东食品药品职业学院 ,广东 广州　510520;　
2.广东省中药研究所 ,广东 广州　510520;　
3.华南理工大学环境科学与工程学院 ,广东 广州　510006)
摘要:目的 验证中药材当归提取物抗皮肤衰老能力和美白功效 。方法 对当归提取物的自由基清除 、亚铁离子络合及酪
氨酸酶活性抑制能力进行体外实验。结果 各项功效指标与溶剂浓度及提取物浓度有一定的关联 ,其中当归 50%醇提液
自由基清除率最高达到 80.2%, 铁离子络合率最高达到 41.4%,酪氨酸酶抑制率最高达到 25.1%。结论 当归提取物具
有较好的抗皮肤老化和美白双重功效 ,可用作美白和抗衰老化妆品的天然原料。
关键词:当归;　抗衰老;　美白;　体外实验
中图分类号:R168　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2010)04-0874-02
　　皮肤衰老是人体机体的自然发展规律。随着对皮肤衰老机
理的深入研究 , 人们不断的研究和总结预防和延缓皮肤衰老的有
效途径和方法。中草药因其独特机理和美容效果已被广泛应用
于护肤类化妆品中。
当归为伞形科植物当归 Angelicasinensis(Oliv.)Diels的干
燥根 , 是临床常用药 , 素有 “十方九归”之称。性味甘 、辛 、温 , 归
肝 、心 、脾经。内服有补血活血 , 调经止痛 ,润肠通便的功效 [ 1] 。
现代药理学研究进一步发现 ,当归还具有抗炎 、清除氧自由
基 、增强免疫功能等作用 [ 2] 。 动物实验研究已表明含复方当归
提取物水剂型护肤品具有增加小鼠表皮含水量和提高小鼠皮肤
细胞 SOD活性;人体试验研究显示它具有改善人体皮肤颜色 ,增
加皮肤白皙 、透明效果 [ 3] 。这些新的功效在护肤化妆品研发当
中得到了重视和应用 。
本研究主要通过体外实验 , 从自由基捕捉效应 、络合亚铁离
子能力及酪氨酸酶活性抑制三方面对当归提取物抗皮肤老化与
美白能力进行评估 , 并对体内实验结果进行检验和佐证。
1 　材料与仪器
当归购自广州市清平药材市场 ,经广东省中药研究所药物研
究室鉴定。
DPPH(1, 1-diphenyl-2-2 -picrylhydrazylradical)、菲咯
嗪(5 mmol/L)、酪氨酸酶(用 PBS配制成相应浓度单位)均为
sigma公司生产。
甲醇 、FeCl2· 4H2O(2mmol/L)、熊果苷 , EDTA, VitE, 磷酸二
氢钠 , 磷酸氢二钠等试剂均为国产分析纯 , 配制水均为双蒸水。
752型紫外分光光度计 ,旋转蒸发仪 , 恒温水浴锅 ,真空减压
泵 、中药粉碎机 、离心机。
2　方法
2.1　中药的提取
2.1.1　水提法 当归 100g※破碎※烘干(80℃)※粉碎(40目)
※用双蒸水浸提(分 3次进行 , 3次加水量分别是当归重的 10, 6,
4倍;每次浸提温度为 100℃,时间 30 min)※合并 3次浸提液※
离心(1 500 r/min, 30min)※滤液※离心(10 000 r/min, 15 min)
※滤液※旋转蒸发※当归浓缩液※定容。
取定容液配制成 0.5%, 1.0%, 2.0%等 3种不同浓度。
2.1.2　醇提法 将浸提液调整为 50%乙醇或 95%乙醇进行萃
取 , 方法同 “ 2.1.1”项。
2.2　抗老化能力的测定
2.2.1　DPPH自由基清除能力测定 DPPH为含有奇数电子的稳
定自由基 ,本方法的原理是利用其甲醇溶液在 517 nm可见光下
具有极强的吸光度 ,但当其与任一自由基结合或被抗氧化剂还原
时 , 其吸光度会下降;吸光度越低 ,表示样品清除 DPPH的能力越
强。
取 0.2 ml萃取物 、3.8 ml甲醇溶液与 1 ml(DPPH)radical甲
醇溶液(2×10-4mol/L), 充分混和均匀 , 静置 30 min后 , 以分光
光度计测 517 nm处吸光度 , 并以公式计算其自由基清除率 [ 4] 。
自由基清除率(%)=[ (Ac-As/Ac)] ×100%
As:含有待测物的样品在 517 nm处的吸光度;
Ac:不含待测物的样品在 517nm处的吸光度。
2.2.2　络合亚铁离子能力 Fe2+通常为较好的促氧化剂 ,可以促
使脂质氧化作用的进行。本方法利用 Fe2+与 Ferrozine(菲咯嗪)
的复合物在 562nm处有呈色反应 , 可测得样品对 Fe2+的络合能
力。当样品络合 Fe2+会造成吸光度降低 , 吸光度越高表示络合
能力越好 [ 5] 。
络合率(%)=[ 1-AsAc] ×100%
As:含有待测物的样品在 562 nm处的吸光度;
Ac:不含待测物的样品在 562nm处的吸光度。
取不同浓度的萃取液加入 0.1 ml的 FeCl2· 4H2O(2mmol/L)30 s后再加入 0.2 mlFerozine(5mmol/L), 反应 10min后 , 使
用分光光度计检测吸光度 , 空白试验(Blank)以样品溶剂取代样
品。
2.3　美白有效性试验—当归提取物对酪氨酸酶活性抑制的影响
2.3.1　处理组(萃取液)探讨不同萃取物对抑制酪氨酸酶形成
Dopaquinone的能力 ,并以维生素 E(VitE)作对照组。取 1 ml的
中药萃取液 ,加入 0.9 mlpH6.8的缓冲液及 1ml0.03%的酪氨
酸溶液于试管中混和 , 并置于 37℃的恒温槽中 10 min, 再加入
0.1ml的酪氨酸酶(350units/ml)水溶液 , 将溶液混和均匀 ,置于恒
温槽中反应 25 min后 , 以紫外分光光度计测定 475 nm时的吸光
度(B)[ 6, 7] 。
2.3.2　空白组 步骤与处理组相同 , 但以等体积的磷酸缓冲液取
代酪氨酸酶溶液(B0)。
2.3.3　对照组 步骤与处理组相同 , 但以等体积萃取液所使用的
溶剂取代萃取液(A)。
2.3.4　总空白组 步骤与处理组相同 , 但以等体积萃取液所使用
的溶剂取代萃取液 , 以等体积的磷酸缓冲液取代酪氨酸酶溶液
(A0)。
抑制率(%)=(A-A0)-(B-B0)(A-A0) ×100%
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时珍国医国药 2010年第 21卷第 4期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2010VOL.21NO.4
A:处理组样品在 475nm处的吸光度;
A0:空白组样品在 475 nm处的吸光度;B:对照组样品在 475 nm处的吸光度;
B0:总空白组样品在 475nm处的吸光度。
3　结果与讨论
3.1　中药萃取物抗氧化 、抗老化功效评估
3.1.1　当归提取物清除自由基效果 自由基是生命活动过程中
生物化学反应的中间产物。在正常情况下 ,机体内自由基的产生
和清除处于动态平衡之中 , 但它若在体内产生过多或清除过慢 ,
就会在分子水平 、细胞水平以及器官水平给机体造成损伤 , 并可
加快机体的衰老过程。与生命老化有关的生物自由基主要是一
些含氧的自由基 , 如活性氧自由基(O2-· )、过氧化氢自由基(HO2· )、羟基自由基(· OH)等。抗氧化剂可提供质子给过氧
化物自由基 , 因而能够抑制脂质自氧化的连锁反应。 (DPPH· +
AH(抗氧化剂)※DPPH+HA· )通常使用 DPPH· (C18 H12N6O5)来检验抗氧化剂提供质子的能力。 DPPH·是一种很稳定
的自由基 , 其甲醇溶液在 517nm处有极强的吸光度 , 但当被氧化
剂(AH)或自由基(R· )还原时 , 其吸光度会降低或消失。由此 ,
可利用样品在 517nm处的吸光度来判定样品是否有清除自由基
的能力。
图 1　当归提取物清除自由基实验(n=3)
本实验以纯水 、50%乙醇 、95%乙醇萃取当归 ,以 VitE做参
照 , 比较不同浓度的提取液清除 DPPH自由基的能力。见图 1,
以纯水萃取时 , 萃取液浓度低时清除自由基的能力反而较好 , 2%
浓度不但没有清除效果反而有促进自由基生成作用;50%乙醇和
95%乙醇萃取时 , 萃取液浓度越高清除自由基能力越强。萃取的
2%浓度当归以 50%乙醇提取物自由基清除率可达到 80.2%。
水提与醇提组的结果正好相反。 推测原因可能是因为当归中的
清除自由基有效成分在极性溶剂中溶出较多 ,所以实践中最好采
用醇提方式 , 50%乙醇的提取液优于 95%乙醇提取液清除自由
基效果。
3.1.2　当归提取物络合亚铁离子能力
金属离子在自由基连锁反应中具有促进脂质氧化的作用 ,通
常与 Fenton反应及 Harber-Weiss反应有关 。络合剂没有抗氧
化能力 , 但有一对未共用电子对 , 可与过渡金属(Fe2+, Cu2+)结
合 , 因而能够减少氧化反应进行。如萃取物中含有络合亚铁离子
的成分 , 就可减少紫外线照射皮肤所引起的自由基生成反应。
图 2　当归提取物络合亚铁离子能力比较(n=3)
本实验以纯水 、 50%乙醇 、95%乙醇萃取当归 ,以 EDTA做参
照 , 比较不同浓度的提取液络合亚铁离子的能力。 见图 2, 当归
提取物具有络合亚铁离子的能力;不同溶剂萃取的各种浓度萃取
液 , 在较高浓度时有较好的络合能力 , 其中以 50%乙醇萃取的
2%浓度当归提取物络合能力最强 , 络合率为 41.4%。
3.2　当归提取物美白功效评价 -酪氨酸酶抑制实验 黑色素的
形成过程中 , 酪氨酸酶起了关键酶的作用 , 黑色素产生的多少与
酪氨酸酶的活性有直接的关系。因此 ,皮肤美白剂就是通过作用
于皮肤黑色素生成 ,代谢过程中 , 抑制黑色素生成且符合安全规
范的物质 [ 8, 9]。
由于酪氨酸酶分别作用于酪氨酸转化为 DoPa和 Dopaqui-
none两个过程 , 目前的皮肤美白剂就是通过抑制酪氨酸酶活性
或者阻断酪氨酸生成黑色素的氧化途径 ,从而减少黑色素的生成
达到美白皮肤的效果。
本实验以纯水 、50%乙醇 、95%乙醇萃取当归 , 以熊果苷做参
照 , 在 37℃、pH6.8的条件下反应 30min比较不同浓度的提取液
抑制酪氨酸酶活性能力。见图 3, 当归水提液抑制酪氨酸酶活性
较低 , 甚至在较高浓度时有激活作用。醇提液具有抑制酪氨酸酶
活性作用 ,并均表现为浓度高时有较高的抑制效果。水提液与醇
提液酪氨酸酶抑制与激活能力的不同 ,同样可考虑为对酶氨酸酶
有抑制作用的阿魏酸 、当归多糖等有效物质在极性醇溶液中溶出
较多的原因。 50%乙醇萃取的 2.0%浓度当归提取物酪氨酸酶
抑制率达到 25.1%。
图 3　当归提取物抑制酪氨酸酶活性能力比较(n=3)
本研究从当归提取物具有清除自由基和络合亚铁离子能力
两方面来验证其具有抗老化能力 ,从当归提取物对酪氨酸酶的抑
制能力方面来验证其美白作用。
综上所述 ,当归提取液有望作为美白化妆品和抗衰老化妆
品的天然原料 , 此研究为当归在化妆品方面的开发利用提供了实
验数据 。
参考文献:
[ 1 ] 　国家药典委员会.中国药典 , Ⅰ 部 [ S] .北京:化学工业出版社 ,
2005:1.
[ 2 ] 　邹志东 陆　胡.复方当归提取物皮肤美白作用机理实验研究
[ S] .首届中国中医药美容学术交流大会论文汇编 , 2000:62.
[ 3 ] 　陆　绮 , 赵　晖 , 穆　阳.复方当归提取物对皮肤抗氧化作用实
验研究 [ J] .中国美容医学 , 2007, 16(11):1574.
[ 4 ] 　ShimadaK., Fujikawa, K., Yahara, K.andNakamura, T.Antioxi-
dativepropertiesofxanthanontheautoxidationofsoybeanoilincyclo-
dextrin[ J] .JournalofAgriculturalandFoodChemistry., 1992, 40:
945.
[ 5 ] 　DinisT.C.P., MadeiraV.M.C., AlmeidaL.M.Actionofphe-
nolicderivatives(Acetaminophen, salicylate, and5-aminosalicylate)
asinhibitorsofmembrancelipidperoxidationandasperoxylradical
scavengers[ J] .ArchivesofBiochemistryandBiophysics.1994, 1:161.
[ 6 ] 　范元鹄.川芎 、细辛 、白术及杏仁萃取物之美白与抗老化效果与含
此等萃取物之化妆品的有效性 [ D] .国立台湾海洋大学 , 2006.
[ 7 ] 　郭香吟.中药复方萃取物之抗老化与美白有效性评估 [ D] .国立
台湾海洋大学 , 2003.
[ 8 ] 　邱　凌 , 钟　雪 , 庄江兴 , 等.芦荟皮酪氨酸酶抑制剂有效成分的
提取与分析 [ J] .厦门大学学报(自然科学版), 2008, 47(2):227.
[ 9 ] 　刘　铮 , 肖　艳 , 邓　燕.中药对黑素细胞及酪氨酸酶双向调节
作用的研究进展 [ J] .新中医 , 2008, 40(4):117.
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