全 文 ：＊吉林省延边朝鲜族自治州科技发展计划项目 (2003YBKJ027)
珍珠梅提取物抗衰老作用的研究 ＊
张学武1　刘　超2 　张伟力3
1.延边大学医学院生物化学与分子生物学教研室 (吉林延吉 133000)　2.延边大学医学院附属医院神经内科
3.吉林省人民医院病理科
提要:目的:探讨珍珠梅提取物对 D-半乳糖所致衰老大鼠的保护作用 。方法:60 只Wistar
大鼠随机分为正常组 、模型组 、 人参皂甙组 、珍珠梅大 、 中 、小剂量组 , 连续 40d 。用比色分析
法测定大脑皮质超氧化物歧化酶 (SOD)、 单胺氧化酶 (MAO)的活性及丙二醛 (MDA)的含量 ,
用免疫组织化学方法观察琥珀酸脱氢酶 (SDH)、 乳酸脱氢酶 (LDH)、 脂褐素 (LPF)的变化 ,
同步观察电子显微镜下的组织学变化。结果:珍珠梅提取物可提高 D -半乳糖所致大鼠脑组织
SOD活性 、 降低 MDA 含量 , 抑制 MAO 活性;对衰老大鼠的大脑皮质神经元的 SDH 活性下降 、
LDH 活性升高及 LPF 含量增多有明显的抑制作用;电子显微镜观察珍珠梅提取物可以减轻 D-半
乳糖导致的线粒体等超微结构的改变 。结论:珍珠梅提取物可延缓 D-半乳糖所致的大鼠衰老 ,
抑制脂质过氧化物的形成 , 提高 SOD的活性 , 这可能是珍珠梅抗衰老的作用机理之一 。
关键词:珍珠梅　抗衰老　药用　大鼠
　　珍珠梅 (Sorbaria sorbifolia)属蔷薇科植物 , 又称 “山高
粱” 、 “八木条” , 广泛分布于云南、 贵州、 四川、 湖北、 甘肃 、
宁夏及东北, 有活血化瘀、 消肿止痛 、 治骨折及跌打损伤的作
用, 从中分离出胡萝卜苷、 甲基黄酮类化合物、 大黄素、 原儿
茶酸等化学成分[ 1 ,2];其药理作用主要有保护肝脏[ 3] 、 清除氧
自由基、 抑制脂质过氧化[ 4] 、 抗肿瘤等[ 5] 。
本实验用 D-半乳糖致大鼠衰老模型 , 通过生化指标
检测 、 免疫组织化学及电子显微镜的观察 , 阐明珍珠梅对
衰老大鼠的保护作用 , 探讨珍珠梅的抗衰老作用 , 为进一
步开发应用珍珠梅提供一些实验依据。
1　材料与方法
1.1　材料　珍珠梅茎 、 叶 、 花 , 采集于吉林省延吉市市
郊 , 经延边大学药学院刘永镇教授鉴定为正品。 乙醇提取
物:乙醇分 3 次浸泡珍珠梅 , 温度为 40℃, 每次 12h , 合
并 3 次滤液 , 用旋转蒸发器减压浓缩 , 获珍珠梅乙醇提取
物粉末 (1g 珍珠梅有效成分相当于 6.6g 生药)。 D-半乳
糖系上海试剂二厂产品 (批号为 980218), 人参总皂甙系
吉林省白山市靖宇县黄封参药业公司产品 , SOD、 MAO、
M DA 试剂盒购自南京建成生物工程研究所。 JEM -1200
透射电镜 , UV-2501PC 型紫外分光光度计 , 722 型分光
光度计 , 旋转蒸发仪 , 电热恒温水浴箱。Wistar 大鼠 (雌
雄各半), 体重为 180g ～ 210g , 由延边大学医学院动物科
提供。
1.2　方法
1.2.1　衰老大鼠模型的制备及药物投入　将 60 只 Wistar
大鼠随机分为正常组 , 模型组 , 珍珠梅大 、 中 、 小剂量组 ,
人参皂甙组。各组动物在实验前禁食 12h 进行实验。模型
组皮下注射 D-半乳糖 48mg/ kg/d , 同时生理盐水灌胃
10ml/kg/ d。珍珠梅大 、 中 、 小剂量组每天皮下注射 D-半
乳糖并分别灌胃珍珠梅提取物 200mg/ kg、 150mg/ kg 、
100mg/ kg , 人参皂甙组每天皮下注射 D-半乳糖同时灌胃
人参总皂甙 100mg/ kg , 连续 40d。 第 41d 处死大鼠 , 迅速
取出大脑 , 取左侧中央回皮质 1mm×1mm×1mm 小块作电
镜观察。
1.2.2　观察指标
1.2.2.1　超微结构观察 　左侧小块中央回皮质 , 用
0.1mol/ L磷酸缓冲液冲洗 3 次 , 经 3%戊二醛固定 2h ,
1%锇酸后固定 1h , 梯度丙酮脱水 , Epon-812 环氧树脂包
埋 , 做超薄切片 , 铀铅双重染色后 , 在 JEM-1200 透射电
镜下观察。
1.2.2.2　组化指标观察　取完组织块后 , 立即进行冰冻切
片 , 并以陈啸梅等的方法[ 6]显示 SDH 、 LDH , Glenner氏反
应法显示 LPF , 然后在万能相差显微镜下观察。
1.2.2.3　生化指标检测　剩余脑组织除去丘脑 、 小脑和延
髓 , 以 pH7.4 的磷酸缓冲液冰浴下制成匀浆液后 , 2000r/
min 离心 10min , 取上清液 , 用比色分析法检测 SOD、
MAO的活性及 MDA 的含量。
1.3　统计学处理　数据以x±s 表示 , 应用 SPSS -10.0 统
计软件进行方差分析。
2　结　果
2.1　超微结构观察　正常组细胞器形态基本正常;模型组
线粒体出现肿胀变性和空泡样变 , 且核膜不规则;珍珠梅
2004 年第 22 卷第 8 期 四　川　中　医
Vol.22 , No.8 , 2004 Journal of Sichuan of T raditional Chinese Medicine 9　
组线粒体轻度肿胀 , 核膜较规则。
2.2　组化指标观察　酶组织化学按反应颜色的深浅不同 ,
分别对照观察:分为弱阳性 (±)、 阳性 (+)、 中等阳性
(++)、 强阳性 (+++)、 最强阳性 (++++)四个等
级。结果见表 1。
表 1 各组神经元内酶组织化学变化表
组　别 动物数 SDH LDH LPF
正　常　组 10 +++ + +
模　型　组 10 ± ++++ +++
珍 珠梅 组 10 ++ ++ +
人参皂甙组 10 ++ ++ +
2.3　生化指标检测　结果可见表 2。珍珠梅对 D-半乳糖
所致的大鼠神经元内 SOD 活性的降低有明显的回升作用
(P<0.05), 而对 MAO 活性 、 MDA 含量的升高有明显的
降低作用 (P<0.05)。
表 2　珍珠梅提取物对 D-半乳糖致衰老大鼠脑组织
SOD、 MAO 活性 , M DA 含量的影响 (x±s)
组　别　 动物数(只) SOD(U/mg) M DA(nmol/ml) MAO(U/g组织.pr重)
正　常　组　　 10 3.7±0.7＊ 96.6±14.9＊ 228.4±60.1＊
模　型　组　　 10 2.4±0.4　 131.6±25.5 373.9±76.7
珍珠梅大剂量组 10 5.2±1.2＊ 87.3±19.3＊ 245.5±22.1＊
珍珠梅中剂量组 10 4.1±0.7＊ 85.4±9.7＊ 243.1±16.5＊
珍珠梅小剂量组 10 3.6±0.7＊ 97.3±27.0＊ 216.4±26.8＊
人参皂甙组　　 10 3.9±0.7＊ 95.7±17.6＊ 183.1±21.8＊
　　与模型组比较 , ＊P<0.05
3　讨　论
衰老是生命过程中正常而又复杂的生物过程 , 近年来
自由基学说认为引起人体衰老的主要原因是人体细胞代谢
过程中不断产生的自由基 , 可使生物膜脂质结构中的不饱
和脂肪酸发生脂质过氧化反应 , 引起膜结构和生理功能的
紊乱 , 这是引起衰老的主要原因。 SOD 作为体内重要的抗
氧化酶 , 它能促使超氧化物阴离子自由基变为过氧化氢和
氧离子 , 从而减少脂质过氧化反应 , 使机体细胞和组织免
受损害[ 7] 。MDA是过氧化脂质的分解产物之一 , 通过测定
M DA 可以间接反应体内自由基产生和老化程度[ 8] 。 MAO
定位于线粒体外膜及线粒体嵴 , 可催化单胺氧化脱氨基 ,
参与神经元去甲肾上腺素 、 5 -羟色胺等递质的分解[ 9] 。
SDH 存在于所有的有氧呼吸的细胞内 , 是线粒体的标志
酶 , SDH 活性变化与线粒体的损伤同时出现 , 与线粒体的
数目平行升降其活性能反应三羧酸循环情况[ 10] 。 LDH 是
细胞内无氧糖酵解途径重要的酶 , 对糖酵解起关键作用。
既往研究表明:D-半乳糖可致 SOD 活性降低 , MAO
活性增高等 , 从而引起大脑功能衰退。本实验研究结果表
明:模型组与正常组 、 珍珠梅组 、 人参皂甙组锥体细胞
SOD 活性 、 M DA 含量 、 MAO 活性均有显著差异。说明珍
珠梅能使衰老大鼠的脑组织的 SOD 活性增强 , 降低 MDA
含量 , 且抑制 MAO活性。
本研究超微结构观察表明 , 模型组锥体细胞内溶酶体 、
脂褐素大小和形态不规则 , 线粒体出现肿胀变性和空泡样
变 , 且核膜不规则;而珍珠梅组锥体细胞内线粒体轻度肿
胀 , 核膜较规则 , 且使 SDH 活性明显降低 , LDH 的活性
则明显增强。珍珠梅能使 SDH 活性增强 , 抑制 LDH 活性 ,
说明珍珠梅能够改善细胞的能量代谢 , 使细胞处于功能活
跃状态。
LPF是一种代谢废物 , 是由于自由基使细胞膜发生脂
质过氧化作用 , 产生的脂质过氧化物与蛋白质结合而形成
的 , 此种色素在细胞中的大量积累被看作是衰老的一项重
要指标。本实验提示珍珠梅组神经元内的 LPF 含量明显减
少 , 其作用机理可能是通过提高 SOD 活性 , 抑制脂质过氧
化过程 , 减少脂质过氧物 M DA 的形成 , 从而减少 LPF 的
形成和蓄积。
总之 , 珍珠梅与已证明的人参茎叶皂甙[ 11]同样具有抗
衰老作用。提示 , 珍珠梅作为一种抗衰老的药物 , 具有广
泛的开发前景 , 对其确切的作用机理今后应从其有效成分
中进一步研究。
参考文献
[ 1] 李孝栋 , 吴立军 , 臧晓燕 , 等.东北珍珠梅化学成分的
研究 [ J] .中国中药杂志, 2002 , 27 (11):841
[ 2] 张学武 , 尤昕 , 孙权 , 等.长白山珍珠梅化学成分的研
究 [ J] .天津药学 , 2003 , 15 (5):1
[ 3] 张学武 , 金海玲 , 赵红 , 等.珍珠梅提取物对四氯化碳
所致大鼠急性肝损伤的保护作用 [ J] .世界华人消化杂志 , 2002 ,
10 (7):783
[ 4] 张学武 , 金海玲 , 赵红 , 等.珍珠梅对四氯化碳致肝损
伤大鼠自由基的影响 [ J] .中国中医药科技 , 2001 , 8 (6):373
[ 5] Zhang XW , Zhang XB, Quan JS , et al.Inhibitory effect of
Sorbaria sorbifolia on DEN -induced precancerous hepat ic foci and its
ant ioxidat ive activies in rat s [ J] .肿瘤防治杂志 , 2003 , 10 (11):
1137
[ 6] 陈啸梅主编.组织化学手册 [ M ] .北京:人民卫生出版
社 , 1982:224
[ 7] Giardino R , Giavaresi G , Fini M , Torricelli P , Guzzardella
GA.The role of diff erent chemical modif icat ions of superoxide dismu-
tase in preventing a prolonged muscular ischemia/ reperfusion injury
[ J] .Artif Cells Blood S ubstit Immobil Biotechnol , 2002 , 30 (3):
189～ 198
[ 8] Fcher J.Cellular enzymatic defence against f ree radicals of
molecular oxygen.In:Free radical React ions in Medicine [ J] .Fcher
J.et al (eds)Spring-Verlag , 1987:14～ 16
[ 9] 曹国华 , 陈吉棣 , 刘小鹏 , 等.缺锌及补锌对鼠脂质过
氧化与超氧化物歧化酶的影响 [ J] .中华医学杂志 , 1991 , 71
(11):623
[ 10] Wu Y , Liu C , Chen Q.Effect of acupuncture on enzymol-
ogy of motor neu ron anterior horn of experimental spinal cord injury in
rat s [ J] .Zhonhguo Zhong Xi Yi Jiehe zazhi , 1999;19 (10):740-
742
[ 11] 吴春福.依据自由基学说研究人参茎叶皂甙的抗衰老作
用 [ J] .沈阳药学院学报, 1992 , 9 (1):37～ 40
(收稿日期 2004-04-29)
四　川　中　医 2004 年第 22 卷第 8 期
10　 Journal of Sichuan of T raditional Chinese Medicine Vol.22 , No.8 , 2004