全 文 ：当归多糖及其分离组分对小鼠
免疫功能的调节效应
夏雪雁1　彭仁王秀1　王智勇2
1武汉大学医学院药理学教研室;2武汉大学中南医院药剂科 ,武汉 430071
　　摘要　目的:研究当归总多糖(ASP)及其分离组分对小鼠免疫功能的影响。方法:选用正常及大剂量泼尼龙
(PSL)所致免疫缺陷小鼠 ,观察 ASP及其分离组分对补体 C3 含量 、单核吞噬细胞功能 、淋巴细胞转化 、抗体形成功
能及白细胞介素-2分泌功能的影响。结果:ASP、ASP-1 、ASP-3 250 mg kg 口服可提高正常小鼠补体 C3 含量及单核吞
噬细胞功能。ASP 2.0 g kg 可对抗 PSL对细胞及体液免疫功能的抑制 , 体内 、体外试验中均可使 PSL 抑制状态下小
鼠脾淋巴细胞 IL-2 分泌功能改善。结论:ASP 具有广泛免疫调节效应。
主题词　当归;泼尼龙;淋巴细胞;白细胞介素-2
中图分类号　R 967;R 285.5
　　当归是我国传统中药最常用的药物之一 ,近年
来研究显示 ,从当归中提取的多种组分均有免疫药
理作用[ 1, 2] , 其中当归多糖(angelica sinensis polysac-
charide ,ASP)的免疫活性尤为显著 ,日本学者对此报
道甚多[ 3 , 4] 。然而药用植物因产地及制备方法的不
同导致生物学活性差异较大 。为此 ,本文选用产于
我国甘肃岷县当归提取所得的总多糖及其分离组
分 ,观察 ASP 对正常及泼尼龙(prednisolone , PSL)所
致免疫缺陷小鼠免疫功能的影响。
1　材料与方法
1.1　药品与试剂　当归总多糖(ASP)及其分离组分
ASP-1 、ASP-3 ,由武汉大学中南医院制药厂提供当
归 ,产于甘肃岷县。经反复醇沉 ,洗涤 ,低温60 ℃干
燥 ,得到当归总多糖。采用 DEAE-纤维素作为分离
介质 ,分别用去离子水 、酸性洗脱液(冰乙酸∶正丁醇
∶蒸馏水=2∶9∶17)及碱性洗脱液(10%NaOH)将 ASP
洗脱得三种组分 ASP-1 、ASP-2 、ASP-3。低温干燥 ,所
得粉末 ,用生理盐水溶解 ,8磅 20 min 高压灭菌。泼
尼龙 ,湖北制药厂 ,批号:950721。补体 C3测定试剂
盒 ,上海明华体外诊断试剂公司。印度墨汁 ,Schmid
Gmbh+Co.产品。植物血凝素(PHA),上海东风生化
技术公司。RPMI 1640 ,Gibco 产品 。四甲基偶氮唑
盐[ 3-(4 , 5-dimethylthiazolyl)-2 , 5-diphenyl tetrazolium
bromide ,MTT] ,刀豆蛋白 A(ConA), Sigma 产品。余
为市售分析纯产品 。
1.2　实验动物　Balb c 雄性小鼠 ,6 ～ 8周龄 ,体重
(20.0±2.0)g ,昆明种雄性小鼠 ,8 周龄 ,体重(20.0
±2.0)g ,湖北省医学科学院动物中心提供。
1.3　方法
1.3.1　ASP及其分离组分对小鼠血中补体 C3含量
的影响　昆明种小鼠分为 4组 ,分别给予ASP、ASP-1
及ASP-3(灌胃 ,1次 d)250 mg kg ,给药 10 d ,对照组
给于等量生理盐水 。10 d 后动物断头处死取血清 ,
参照补体 C3测定试剂使用说明 ,在岛津 CL-7200全
自动生化分析仪上用比浊度法测定补体C3含量。
1.3.2　ASP 及其分离组分对小鼠单核吞噬细胞功
能的影响　动物分组及给药同上 , 10 d后小鼠称重 ,
按 18 mg kg 经尾静脉注射印度墨汁 ,参照文献方法
测定单核吞噬细胞功能 ,并计算吞噬系数α值[ 5] 。
1.3.3　ASP 对 PSL 所致免疫缺陷小鼠免疫器官及
PHA刺激淋巴细胞转化功能的影响　昆明种小鼠分
为3组 ,一组给予 ASP(灌胃 , 1次 d)2.0 g kg ,给药
10 d ,该组及 PSL 组均于第 6 d 起给予 PSL(皮下注
射 ,1次 d)15 mg kg ,给药 5 d。对照组给于等量生
理盐水。各组动物均于处死前3 d给予PHA(肌注 ,1
次 d)10 mg kg ,连续给 3 d。10 d 后动物断头处死取
血 ,参照文献方法测定并计算胸腺 、脾脏指数及淋巴
第 22卷　第3 期 武汉大学学报(医学版) Vol.22 , No.3
　 2001年 7 月 Medical Journal of Wuhan University July , 2001
湖北省教委资助项目 ,批准号:130290;本文获第六届全国生物药理学术讨论会青年优秀论文三等奖
DOI :10.14188/j.1671-8852.2001.03.003
细胞转化率[ 5] 。
1.3.4　ASP 对PSL所致免疫缺陷小鼠抗 SRBC-抗体
形成功能的影响　昆明种小鼠分为 4 组 ,ASP+PSL
组分别给予ASP(皮下注射 , 1次 d)0.25 g kg及(灌
胃 , 1次 d)2.0 g kg ,给药 10 d ,上述两组及 PSL 组
均于第 6 d 起给予 PSL (皮下注射 , 1次 d)15 mg
kg ,给药 5 d。对照组给于等量生理盐水 。采用定量
溶血分光光度法测定并计算小鼠血清半数溶血值
HC50
[ 5] 。
1.3.5　ASP 对小鼠体内脾淋巴细胞 IL-2 分泌功能
的影响　昆明种小鼠分为 5组 ,ASP 组及 ASP +PSL
组给予 ASP(灌胃 , 1次 d)1.0 ,2.0 g kg ,后者及 PSL
组均于第 6 d 起给予 PSL (皮下注射 , 1次 d)15 mg
kg ,给药 5 d。对照组给于等量生理盐水 。取小鼠制
备脾细胞悬液 ,将此悬液分装于试管中 ,每管含 Co-
nA 8μg ml , 1×107 ml 的细胞悬液 1 ml。置 37 ℃,
5%CO2培养箱中培养 24 h 后 ,取上清液-30 ℃冻
存待测 。另取 Balb c 小鼠脾脏制成淋巴细胞悬液 ,
作为检测细胞。采用MTT 比色法在 DG-3022A 型酶
联比色仪上测定样品中 IL-2含量[ 6] ,结果以“A”值表
示。
1.3.6　ASP 对小鼠体外脾淋巴细胞 IL-2 分泌功能
的影响　昆明种小鼠制备脾细胞悬液 ,将此悬液分
装于试管中 ,每管含 ConA 8μg ml ,1×107 ml的细胞
悬液 1 ml。加入不同浓度的 ASP 液(5 , 10 ,50μg ml)
及终浓度为0.025μg ml的 PSL ,并设置空白对照 ,每
组设 6管 。同方法 1.3.5制备并检测 IL-2 含量 ,结
果以“A”值表示。
显著性分析采用“两样本均数的 t检验”。
2　结果
2.1　ASP 及其分离组分对小鼠血中补体 C3含量 、
单核吞噬细胞功能的影响结果见表 1。同等剂量
(250 mg kg)的当归总多糖 ASP 及其分离组分 ASP-
1 、ASP-3 ,均能提高正常小鼠血中补体 C3含量 ,其中
以ASP-3组的作用最强 , 上升为对照组的 2.5 倍 ,
ASP组与 ASP-1组次之 ,分别较对照组升高 92%(P
<0.01)和 31%。ASP-1能明显提高正常小鼠吞噬细
胞功能 ,吞噬系数较对照组上升 20%(P<0.05),而
ASP组与 ASP-3组对此无明显作用 ,可见 ASP 不同
分离组分免疫活性存在差异 。
表 1　ASP及其分离组分对小鼠血中补体 C3含量 、单核
吞噬细胞功能的影响( x±s , n=7)
药物 剂量(mg kg) 补体 C3(mg L) 吞噬系数α值
生理盐水 - 23.4±0.02 19.3±2.16
ASP 250 44.9±0.06＊＊ 21.1±1.53
ASP-1 250 30.7±0.05 23.1±0.87＊
ASP-3 250 82.1±0.09＊＊ 19.8±1.08
　＊＊P<0.01 , ＊P<0.05 ,与生理盐水组比
2.2 　ASP 对 PSL 所致免疫缺陷小鼠免疫器官及
PHA刺激淋巴细胞转化功能的影响　结果见表 2。
泼尼龙 15 mg kg 造成小鼠免疫功能低下 ,胸腺指数
及脾脏指数均明显下降 ,分别降低为对照组的 22%
和 40%(P <0.01),且使得淋巴细胞转化率下降 ,与
对照组比较差异有显著性(P <0.05)。ASP 对 PSL
所致免疫抑制有明显保护作用 ,使脾脏指数较 PSL
组上升 48%(P <0.01),使淋巴细胞转化率明显升
高 ,为PSL组的 158%(P <0.01),并超过正常水平 ,
但对于 PSL所造成的胸腺损害却无明显恢复作用。
表 2　ASP对 PSL所致免疫缺陷小鼠免疫器官及 PHA刺激淋巴细胞转化功能的影响( x±s , n=6～ 8)
药物 剂量(g kg) 胸腺指数(mg g) 脾脏指数(mg g) 淋巴细胞转化率(%)
生理盐水 - 4.07±1.51 6.20±1.20 57± 8
PSL 0.015 0.91±0.58＊＊ 2.45±0.06＊＊ 45± 6＊
ASP+PSL 2.0 0.87±0.41＊＊ 3.62±0.80＊＊■■ 75±12＊＊■■
　　　　＊＊P<0.01, ＊P<0.05 ,与生理盐水组比;■■P<0.01与PSL组比
2.3　ASP 对PSL所致免疫缺陷小鼠抗 SRBC-抗体形
成功能的影响　结果见表 3。可见 PSL显著降低小
鼠抗 SRBC-抗体形成功能 、半数溶血值 HC50较对照
组下降 22%(P <0.05),抑制小鼠的体液免疫功能。
当归多糖不论是口服(2.0 g kg)或皮下注射(0.25 g
kg)均可对抗 PSL 的抑制作用 ,使半数溶血值HC50较
PSL组分别提高 44%和68%(P<0.05),上述结果提
示ASP 皮下注射给药作用较强。
2.4　ASP 对小鼠体内脾淋巴细胞 IL-2分泌功能的
影响　结果见表 4。ASP 对正常状态下小鼠 IL-2分
泌功能无明显影响 。大剂量 PSL 使小鼠 IL-2分泌功
能明显降低 ,为对照组的85%(P<0.05)。对于 PSL
所致 IL-2分泌功能的降低 ,ASP 剂量为 2.0 g kg 时
可使之较 PSL组升高 20%左右 ,统计学分析显示与
200 武汉大学学报(医学版) 第 22卷
表 3　ASP对 PSL所致免疫缺陷小鼠抗 SRBC-
抗体形成功能的影响( x±s , n=10～ 13)
药物 剂量(g kg) 半数溶血值 HC50
生理盐水 - 400±70
PSL 0.015 313±76＊
ASP+PSL 2.0 451±113■
0.25 525±219■
　　＊P<0.05 ,与生理盐水组比;■P<0.05 ,与PSL组比
对照组比较差异无显著性(P >0.05),表明 IL-2 分
泌功能基本恢复至正常水平。
表 4　ASP 对小鼠体内脾淋巴细胞 IL-2分泌
功能的影响( x±s , n =6)
药物 剂量(g kg) 白细胞介素-2
生理盐水 - 0.39±0.02
ASP 2.0 0.36±0.03
PSL 0.015 0.33±0.04＊
ASP+PSL 1.0 0.35±0.03＊
2.0 0.36±0.02■
　　＊P<0.05 ,与生理盐水组比;■P>0.05 ,与PSL组比
2.5　ASP对小鼠体外脾淋巴细胞 IL-2 分泌功能的
影响 　结果见表 5。可见终浓度为 0.025 μg ml 的
PSL对小鼠体外脾淋巴细胞 IL-2分泌水平有明显抑
制作用(P <0.01)。而终浓度为 5μg ml的ASP在体
外能对抗 PSL 所致的 IL-2 分泌水平的降低(P <
0.01),但 ASP 的对抗作用在 5 ～ 50 μg ml 浓度范围
内未见明显量效关系 。
表 5　ASP 对小鼠体外脾淋巴细胞 IL-2分泌
功能的影响( x±s , n =6)
药物 剂量(μg ml) 白细胞介素-2
ConA 8 0.29±0.04
PSL 0.025 0.16±0.01 ＊＊
ASP±PSL 5 0.21±0.02 ■■
10 0.18±0.03
50 0.17±0.02
　＊＊P<0.01 ,与ConA 组比 , ■■P<0.01 ,与PSL组比
3　讨论
经测定当归总多糖及其分离组分 ASP-1 、ASP-3
的多糖含量分别为 65.5%, 72.14%和 63.53%。上
述多糖经硫酸水解为单糖 ,用纸色谱法测定其单糖
成分 ,显示 ASP 主要含有 D-半乳糖和 D-阿拉伯糖;
ASP-1主要含有 D-阿拉伯糖和α-葡萄糖醛酸;ASP-3
主要含有 D-半乳糖和D-阿拉伯糖(未发表资料),与
文献报道当归多糖的组分基本相符[ 4] 。从中药中提
取获得的多糖类化合物在量效关系上 ,多呈现出“全
或无”现象 ,即只存在某一最适剂量。本文结果显
示 ,小剂量ASP 、ASP-1 、ASP-3(250 mg kg)使正常小鼠
血中补体 C3含量 、单核吞噬细胞功能有不同程度升
高 ,而给予2.0 g kg ASP 时对正常小鼠体内脾淋巴细
胞 IL-2分泌水平无明显改变 ,该浓度下主要表现出
对泼尼龙所致小鼠免疫功能低下状态的调节作用 ,
说明 ASP 免疫作用的发挥与剂量的选择关系密切 ,
我们结果所见无明显量效关系存在。
糖皮质激素类药物的免疫抑制作用 ,据认为与
诱导免疫细胞的程序性死亡有关。大剂量泼尼龙体
内 、体外试验中不仅造成小鼠免疫器官(胸腺 、脾脏)
萎缩 ,且导致免疫细胞功能受损 ,使淋巴细胞转化功
能 、抗体分泌水平及细胞因子的生成均明显下降 ,充
分证实其毒性作用 。ASP对 PSL所造成的免疫功能
低下状态表现出一定对抗作用 ,使小鼠细胞及体液
免疫功能均明显改善 ,基本恢复至正常水平 ,显示出
广泛的免疫调节活性。
研究显示多糖类化合物具有调节免疫 、抗肿瘤 、
抗感染 、抗放射 、抗氧化 、抗衰老 、降血糖及降血脂等
多种作用[ 7, 8] ,其药理作用主要是通过调节机体免疫
功能来发挥。而越来越多的疾病被认为与机体的免
疫功能紊乱有关 ,为此 ,寻找出具有双向免疫调节作
用的药物更为重要 。本文结果为从传统中药中提取
有效单体成分 、开发研究新药提供有益参考 。
参考文献
1　周金黄 , 刑善田主编.中药免疫药理学.北京:人民军医出
版社 , 1994 , 374～ 385
2　夏雪雁 , 彭仁王秀.当归醇沉物对体外小鼠脾 、胸腺淋巴细
胞增殖的影响.中草药 , 1999 , 30(2):112
3　清原宽章.当归的多糖成分研究(30):抗当归果胶抗体糖
链抗原决定基的解析.国外医学中医中药分册 , 1996 , 18
(3):51
4　张永文.当归的多糖成分研究(31):补体活性果胶阿拉伯
糖半乳聚糖的活性产生糖链的研究.国外医学中医中药
分册 , 1996 , 18(3):51
5　李仪奎.中药药理实验方法学.上海:上海科学技术出版
社 , 1991 , 6
6　朱慧芬 , 张悦 ,王晓林 , 等.MTT 比色法检测 LI-2 和杀伤细
胞活性的研究.免疫学杂志 , 1994 , 10(1):48
7　王兵 , 蒋建敏 ,许东晖 , 等.鲍鱼多糖对荷人鼻咽癌裸鼠抗
(下转第 207页)
201第 3期 夏雪雁 ,等.当归多糖及其分离组分对小鼠免疫功能的调节效应
An Immunohistochemical Study of P16 and MDM2 in Gastric Carcinoma
Liu Li-min , Wu Jian-ping , Mao Yong-rong , et al
Pathology Research Section , Medical College , Wuhan Science and Technical University , Wuhan 430062 , China
Abstract
Objective:To detect the expression of P16 and MDM2 in gastric tumors (including both benign and malignant
ones), and explore their relationship in the cell apoptosis of gastric carcinoma.Methods:The immunohistochemical
method (SABC method)was applied.Results:The positive rate of P16 was 69%and MDM2 75%.There was a signifi-
cant difference in these two antibodies between gastric benign tumors and malignant tumors (P <0.05).Conclusion:
During the cell apoptosis of gastric carcinoma ,both P16 andMDM2 play their role , and this provides theoretical basis for
clinical detection of gastric carcinoma.Our data also supports the multi-gene synergetic action during the genesis of gas-
tric carcinoma.
MeSH　stomach neoplasms;gene expression;oncogene proteins
(上接第 201页)
　 癌作用的研究.中草药 , 2000 , 31(8):597
8　杨艳燕 ,李小明 , 李顺意.魔芋低聚糖对小鼠血糖含量和抗
氧化能力的影响.中草药 , 2001 , 32(2):142
(2000-09-21 收稿)
The Effect of Angelica Sinensis Polysaccharide and
Its Ingredients on Mice s Immunocompetence
Xia Xue-yan , Peng Ren-xiu , Wang Zhi-yong
Department of Pharmacology , Medical College , Wuhan University , Wuhan 430071 , China
Abstract
Objective :To study the effect of Angelica Sinensis Polysaccharide(ASP)and its ingredients on mice s immunocom-
petence.Method:The regulations of ASP and its ingredients on immunofunctions of normal and Prednisolone(PSL)-in-
duced immunodeficient mice was measured.Results:250 mg kg of ASP ,ASP-1 andASP-3 enhanced the alexin C3 cont-
ent and the activity of mononucleophaga.When treated with 2.0 g kg of ASP in vivo , the PSL-induced inhibition of the
cytoimmunity and humoral immunity was improved.ASP elevated the PSL-induced decline of interleukin-2 (IL-2)pro-
duction both in vivo and in vitro.Conclusion:The results suggest that ASP has an extensive effect on immunocompe-
tence.
MeSH　angelica;prednisolone ;lymphocytes;interleukin-2
207第 3期 刘俐敏 , 等.胃癌中 P16 与MDM2 的免疫组化研究