全 文 ：[ 基金项目] 江苏省 135 工程重点人才资助项目(编号:65RC2002065)　[ 作者简介] 陈红霞 ,女 , 硕士 ,讲师 , 电话:13805288341 , E-m ail:
chhx2005@s ohu.com　[ 通讯作者] 贾晓斌 ,男 ,博士 ,研究员 , E-mail:jxiaobin@yahoo.com.cn
当归补血微丸对环磷酰胺所致小鼠贫血的影响
陈红霞1 , 2 , 贾晓斌1 , 陈彦1 ,傅海珍2 　(1.江苏省中医药研究院 , 江苏 南京 210028;2.江苏大学药学院 , 江苏 镇江
212001)
[ 摘要] 　目的:探讨当归补血微丸对血虚模型小鼠造血功能的影响及机制。方法:选用环磷酰胺(CY)造小鼠血虚模型 , 同时
灌服不同剂量的药物 ,测定小鼠的外周血象 、血清红细胞生成素(EPO)含量及脾脏中 EPO 样造血生长因子的水平。结果:当
归补血微丸各剂量均能增加血虚小鼠的红细胞 、白细胞 、血小板和血红蛋白数 , 对 CY 致贫血诱发的 EPO 增殖有拮抗作用 ,并
能显著促进脾脏中 EPO 样生长因子的水平。结论:当归补血微丸能有效抑制 CY 所诱发的贫血。
[ 关键词] 　当归补血微丸;血虚;外周血象;红细胞生成素
[中图分类号] R285.5　　[ 文献标识码] A　　[文章编号] 1001-5213(2007)05-0588-03
Experimental study on the influence of Dangui Buxue pellets on inhibiting anemia induced by cy-
clophamide
CHEN Hong-xia1 , 2 , JIA Xiao-bin1 , CHEN-Yan1 , FU Hai-zhen2(1.Jiangsu P rovincial Academy of T raditional Chi-
nese Medicine , Jiang su Nanjing 210028 , China;2.Schoo l o f Pharmacy , Jiang su Univer sity , Jiang su Zhenjiang 212001 , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To study the effect and mechanism of hemopo ietic function o f Dangui Buxue pellets on blood-defi-
cient model mice.METHODS　Anemia w as induced in mice by cyclophamide(CY), at the same time the drug s w ere drenched
to mice with different do se s , the periphery hemogram 、ery thropoietin (EPO)level o f serum and ery thropoietin-like(EPO-like)
gr ow th fac to r level in spleen we re determined.RESULTS　The Dangui Buxue pellets could significantly improve RBC 、WBC 、
PLT and HB o f model mice , rivalry EPO multiplication caused by anemia w hich w as induced by CY , markedly pr omo te ery th-
ropoie tin- like(EPO-like)g rowth facto r leve l in spleen.CONCLUSION　The Dangui Buxue pellets could effectiv ely inhibit ane-
mia induced by CY.
KEY WORDS:Danggui Buxue pe lle ts;blood-defficient;periphery hemog ram;EPO
　　当归补血汤系金元时代李东垣所创造的益气补
血经典名方 ,全方由当归与黄芪按生药量 1∶5组成 ,
主治劳倦内伤 、气弱血虚等症状 ,在临床上应用广
泛[ 1] 。实验研究表明 ,当归补血汤补血的主要活性
部位为多糖类 、黄芪皂苷类及当归酚酸类成分 ,目前
关于全方及单个有效组分对造血功能的影响已多有
报道[ 2-8] ,但对其各有效组分分别提取再重新组方后
的药效研究目前还未见报道。本研究将当归补血汤
各有效组分分别提取后组成有效部位 ,以此为原料
制成微丸 ,考察微丸有效部位的补血作用机制 。
1　材料
环磷酰胺(CY ,江苏恒瑞医药股份有限公司 ,规
格粉针剂 ,6 mg/瓶 ,批号 04090321);红细胞生成素
(EPO)试剂盒(上海西堂生物科技有限公司 ,进口分
装);按原方剂量分别提取当归与黄芪各有效组分后
干燥 ,粉碎 ,混合均匀 ,加纯化水制成不同浓度的悬
液(用于不同剂量组),低温暗处保存 ,备用;对照药
物复方阿胶浆(山东东阿阿胶股份有限公司 ,批号
20040824);清洁级昆明种小鼠 ,体质量 18 ～ 22 g , ♀
♂兼用(江苏大学实验动物中心 ,合格证号:苏动质
95040)。
2　方法
2.1　当归补血微丸有效部位对血虚小鼠外周血象
的影响　取小鼠 ,随机分为正常组 、模型组 、试验组
及复方阿胶浆组(阳性对照组),试验组按有效部位
剂量不同分为低剂量组 、中剂量组和高剂量组。试
验组小鼠按剂量分别灌胃给药 ,正常组与模型组小
鼠同时灌服等容量生理盐水 ,阳性对照组灌服复方
阿胶浆 , qd ,连续 15 d。从第 13天起模型组与给药
组小鼠腹腔注射环磷酰胺 80 mg·kg-1 ,连续 2 d ,正
常组小鼠同时注射等体积生理盐水。于第 15天末
次给药1.5 h 后小鼠行摘眼球取血 ,计数红细胞 、白
细胞 、血小板 ,测血红蛋白数 。
2.2　当归补血微丸有效部位对血虚小鼠血清 EPO
·588· 中国医院药学杂志 2007年第 27卷第 5期 Chin H osp Pharm J , 2007 May , Vol 27 , No.05
含量和脾脏 EPO样生长因子水平的影响　小鼠按
“2.1”项下的方法随机分为 6组 ,阳性对照组和试验
组小鼠灌胃给药 ,正常组和模型组小鼠灌服等体积
生理盐水 , bid ,连续 10 d 。于给药日始第 3 , 6 ,9天 ,
除正常组外 ,按小鼠体质量 80 mg·kg -1·d-1的剂量
分别灌服 CY 1次 ,致骨髓造血功能损伤 ,造成血虚
模型 。
2.2.1　供试血清采集　小鼠于末次给药 1.5 h 后
摘眼球采血 ,按常规方法分离和收集血清 , -20 ℃
保存备用 。
2.2.2　脾悬液制备　采血后小鼠立即脱颈椎处死 ,
快速取脾 ,称重后置已盛有 2 mL 生理盐水的小杯中 ,
剪碎 ,匀浆 ,离心 ,吸取上清液 。-20 ℃保存备用。
2.2.3　EPO 标准曲线制备和含量测定　血清中
EPO 含量和脾悬液中 EPO样生长因子的水平采用
双抗体夹 ABC-ELISA 法测定 。小鼠 EPO 按 0 , 2 ,
4 ,8 ,16 , 32 ,64 ,128 mIU·mL -1稀释 ,按试剂盒要求
进行操作 ,测定和计算小鼠血清中 EPO含量和脾脏
中 EPO 样生长因子的水平 。
3　结果
3.1　当归补血微丸有效部位对血虚小鼠外周血象
的影响　结果见表 1。从表 1可看出 ,与正常组比
较 ,模型组小鼠白细胞 、血小板和血红蛋白均有显著
下降(P<0.01),红细胞明显下降 ,提示环磷酰胺造
血虚模型成功 。与模型组比较 ,低剂量组 、中剂量组
和高剂量组小鼠的白细胞 、血小板和血红蛋白的量
均有显著升高(P<0.01),红细胞数明显回升 ,趋于
正常 。
表 1　当归补血微丸有效部位对血虚小鼠外周血象的影响( x±s , n=10)
Tab 1　Effects o f Danggui Buxue pelle ts on peripher al hemog ram of hemopenia model mice( x±s , n=10)
组别 剂量/ g·k g -1 RBC/ ×1012·L-1 WBC/ ×109·L -1 PLT/×1012·L-1 H b/ g·L -1
正常组 8.8±0.5 9.7±0.9 239.1±16.6 151.4±8.2
模型组 8.3±0.5a 2.2±0.4b 105.4±13.5 b 134.4±8.8b
低剂量组 20 8.8±0.4c 5.6±1.2d 227.2±20.4 d 145.1±2.9d
中剂量组 30 8.8±0.5c 5.6±1.0d 270.5±25.4 d 145.7±8.6d
高剂量组 40 8.8±0.6c 5.4±1.3d 414.7±37.2 d 146.6±7.2d
阳性对照组 20(mL) 8.7±0.6c 5.9±1.1d 178.5±10.4 d 147.9±11.8d
注:与正常组比较 , a P<0.05 , bP<0.01;与模型组比较 , cP<0.05 , dP<0.01
3.2　当归补血微丸有效部位对血虚小鼠血清 EPO
含量和脾脏中 EPO 样生长因子的影响　结果见表
2。从表 2看出 ,与正常组比较 ,模型组小鼠血清中
EPO含量和脾脏中 EPO样生长因子水平显著升高
(P<0.01);与模型组比较 ,各试验组小鼠血清中
EPO含量显著下降(P<0.01),逐渐接近正常水平;
而各试验组脾脏中 EPO 样生长因子水平显著升高
(P<0.01),远高于正常组水平。
表 2　当归补血微丸有效部位对小鼠血清和脾中 EPO 水平
的影响( x±s)
Tab 2　Effects of Danggui Buxue pellets on EPO leve l in
mice se rum and spleen( x±s)
组别 动物数/ n
剂量
/ g·kg -1
血清中 EPO 含量
/mIU·mL -1
脾中 EPO 水平
/mI U·g -1
正常组 6 1.45±0.06 34.8±1.5
模型组 8 1.69±0.10b 58.1±10.9b
低剂量组 8 20 1.48±0.06d 82.8±4.4d
中剂量组 8 30 1.47±0.14d 81.1±13.5d
高剂量组 8 40 1.46±0.08d 75.2±10.0d
阳性对照组 6 20(mL) 1.45±0.05d 48.2±6.5c
注:与正常组比较 , a P<0.05 , bP <0.01;与模型组比较 , c P <0.05 ,
dP <0.01
4　讨论
CY具有细胞毒性 ,能抑制细胞分裂 ,致骨髓造
血功能损坏 ,引发多系血细胞数量减少[ 9] 。本实验
选用环磷酰胺造小鼠血虚模型 。注射环磷酰胺并灌
服当归补血微丸有效部位的小鼠外周血象较模型组
小鼠有明显提高 ,说明该药物能有效改善血虚症状 ,
即对 CY所致骨髓造血功能损伤有拮抗作用。
本实验中 ,模型组小鼠血清中 EPO含量显著高
于正常组 ,其原因一是环磷酰胺诱发了小鼠贫血 ,贫
血促进了 EPO[ 9] 的产生;二是环磷酰胺抑制了红系
祖细胞的产生 ,使得 EPO 反应受体减少 ,从而使
EPO 含量相对增多 。随着当归补血微丸有效部位
使用剂量的增加 ,小鼠血清中 EPO 含量逐渐下降 ,
趋于正常 ,说明药物促进了机体红系祖细胞的产生 ,
使 EPO 受体增加 ,从而使 EPO 消耗量增加 ,导致血
清中 EPO相对含量降低。由此可见当归补血微丸
有效部位促进机体造血祖细胞的增殖是其补血的作
用机制之一。
实验中模型组小鼠脾脏中 EPO 样造血生长因
子水平显著高于正常组 ,其原因:一是环磷酰胺诱发
的小鼠贫血促进了 T 淋巴细胞分泌 EPO[ 10] 样生长
因子;二是环磷酰胺抑制了脾脏中红系祖细胞的产
生 ,进而使 EPO含量相对增多。各试验组小鼠脾脏
中 EPO 样生长因子显著高于正常组和模型组 ,说明
当归补血微丸有效部位在促进脾脏红系祖细胞增殖
的同时 ,能更大幅度地提高脾脏中 EPO样造血生长
因子的水平。
·589·中国医院药学杂志 2007年第 27卷第 5期 Chin H osp Pharm J , 2007 May , Vol 27 , No.05
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[收稿日期] 2006-04-11
[ 基金项目] 教育部留学回国人员科研启动基金[ 编号:教外司留(2003)14号] 　[ 作者简介] 马利 ,男 ,博士 ,主治医师 ,电话:027-62749770 , E-
m ail:mali831410@yahoo.com.cn
乙酰半胱氨酸对不同病程糖尿病大鼠心肌缺血再灌注后心功能的影响
马利 ,杨艳 ,姚尚龙 ,李克忠 　(华中科技大学同济医学院附属协和医院麻醉学教研室 , 湖北 武汉 430022)
[ 摘要] 　目的:观察乙酰半胱氨酸(NAC)对不同病程糖尿病(DM)大鼠心肌缺血再灌注(I/ R)后心功能的影响。方法:72 只
糖尿病大鼠随机分为假手术组(DS组 , n=24)、I/ R组(DI/R组 , n=24)和 I/ R+NAC 治疗组(DN组 , n=24)。每组再随机分为 2
组(n=12), 分别在 2 周(DS2 、DI/R2和 DN2)和 8 周(DS8 、 DI/ R8和DN8)时进行实验。记录左心室发展压(LVDP)、收缩期和舒张期
左心室内压的最大变化速率(±dp/ dtmax),检测肌酸激酶同工酶(CK-MB)活性和丙二醛(MDA)含量。结果:(1)基础状态下 ,
DS8和 D I/R8组大鼠各项心功能参数低于对应的 DS2和 DI/R2组(P<0.05)。 DN8组心功能参数高于 DI/R8组 , 但低于 DN2组(P<
0.05)。(2)缺血/再灌注后 , DI/R8组 LVDP 和±dp/ dtmax%的恢复百分率低于 DI/ R2组和 DN8组(P<0.01), CK-MB 和 MDA 高
于 DI/ R2组和 DN8组(P<0.01);DN8组心功能参数恢复百分率低于 DN2组(P<0.01)。结论:8 周 DM 鼠基础心功能低于 2 周
DM 鼠 , I/ R后心功能受损程度比 2 周 DM 鼠严重 , 补充 NAC 可改善 8 周 DM 鼠基础心功能 ,但防治 I/ R损伤效果不如 2 周
DM 鼠。
[ 关键词] 　N-乙酰半胱氨酸;糖尿病;心肌缺血;心肌再灌注损伤
[中图分类号] R965　　[ 文献标识码] A　　[ 文章编号] 1001-5213(2007)05-0590-03
Effect of N-acetylcysteine on ischemia/reperfusion-induced cardiac dysfunction in different pha-
ses of diabetic rats
MA Li , YANG Yan , YAO Shang-long , LI Ke-zhong(Depa rtment of Anesthesiolog y , Union Hospital , Tong ji Med-
ical College , H uazhong Unive rsity of Science and Technology , Hubei Wuhan 430022 , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To evaluate the effect o f N-acetylcysteine on ischemia/ repe rfusion(I/ R)-induced changes o f ca rdiac
function in different pha ses of diabe te s mellitus(DM).METHODS　72 diabe tic rats induced by str epto zo tocin(S TZ)we re ran-
domly seperated into 3 g r oups:sham opera tion gr oup(DS , n=24), diabetic I/ R group(DI/R , n=24), diabetic rats g roup trea-
ted with NAC(DN , n=24).Following 2 w eeks (DS2 , DI/R2 and DN2 , n=12)and 8 w eeks(DS8 , DI/ R8 and DN8 , n=12), experi-
ments were ca rried out.1 w eek af te r the experimental diabetes induced , animals in DN g roup were treated w ith NAC 100 mg·
kg -1 by intr agastric administr ation(two times per day).Left ventricular developed pressure(LVDP)and dp/dtmax were measured
and reco rded using computerized data acquisition sy stem throughout the experiment.Creatine kina se isoenzyme-MB(CK-MB)
and myoca rdial malondialdehyde(MDA)w ere measured.RESULTS　(1)Unde r basal conditions , the values of HR , LVDP ,
and dp/ dtmax w ere lower in DS8 and DI/R8 gr oup than in DS2 and DI/ R2 g roup re spectively , and the above indices w ere higher in DN8
gr oup than in DI/ R8 g roup but low er than in DN2 g roup.(2)The recovery o f cardiac function w as better in DN8 g roup than in
DI/R8 g roup but wo r se than in DN2 g roup after I/ R , and the ca rdiac function recovered better in DI/R2 g roup than in D I/R8 g roup.
CONCLUSION　The hear ts from 8 weeks diabetic ra ts are mo re susceptible to I/ R induced cardiac dy sfunction than those from
2 w eeks diabe tic rats , and NAC can no t only improve the dec reased basic ca rdiac function but also attenuate ca rdiac dysfunction
·590· 中国医院药学杂志 2007年第 27卷第 5期 Chin H osp Pharm J , 2007 May , Vol 27 , No.05