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高效液相色谱法测定山楂中
芦丁、金丝桃苷和槲皮素的含量
王 珍，李秀霞，李 娇，励建荣*
(渤海大学化学化工与食品安全学院，辽宁省食品安全重点实验室，辽宁省高校重大科技平台
“食品贮藏加工及质量安全控制工程技术研究中心”，辽宁锦州 121013)
摘 要:旨在建立 HPLC－DAD测定山楂总黄酮提取物中芦丁、金丝桃苷和槲皮素含量的方法。以 70%乙醇为提取溶剂，
采用 Develosil C30色谱柱(250mm ×4.6 mm，5μm)分离，以乙腈和 0.4%磷酸水溶液为流动相，流速 1.0mL/min，检测波长
360nm，采用峰面积和保留时间对 3 种黄酮进行定性定量分析。结果表明:芦丁、金丝桃苷和槲皮素这 3 种黄酮在
30min内较好分离，其质量浓度分别为 0.0050～0.1600mg /mL、0.0016～0.0500mg /mL 和 0.0005～0.0150mg /mL 时与峰面
积线性关系良好，相关系数分别为 0.9999、0.9996 和 0.9997;该检测方法精密度的相对标准偏差(ＲSD)为 0.48% ～
0.78%，回收率为 92.36% ～98.64%，说明该 HPLC检测方法适用于山楂果粉等干植物原料中芦丁等 3 种黄酮类化合物
的精确定量。
关键词:山楂，金丝桃苷，芦丁，槲皮素，高效液相
Determination of rutin，hyperoside and quercetin in extract
from Crataegus pinnatifida Bge.by HPLC
WANG Zhen，LI Xiu－xia，LI Jiao，LI Jian－rong*
(College of Chemistry，Chemical Engineering and Food Safety，Bohai University，Food Safety Key Lab
of Liaoning Province，Engineering and Technology Ｒesearch Center of Food Preservation，Processing
and Safety Control of Liaoning Province，Jinzhou 121013，China)
Abstract:A gradient high performance liquid chromatography(HPLC)coupled with UV－ vis photodiode array
detection(DAD)was developed for the separation of rutin，hyperoside，and quercetin from the flavoind extracts
from hawthorn powder. The flavoinds were extracted using the solvent of 70% ethanol (by volume).
Chromatographic separation was performed in DevelosilC30 column(250mm × 4.6mm ID，5μm)with an eluent
consisting of acetonitrile and 0.4% Phosphate at a flow rate of 1.0mL/min，the eluate was monitored at 360nm.The
result showed that separation and identification of rutin，hyperoside，quercetin，and other components were
completed in 30min.The linear ranges of rutin，hyperoside，and quercetin were 0.0050～0.1600mg /mL(Ｒ2 = 0.9999) ，
0.0016～0.0500mg /mL(Ｒ2 = 0.9996)and 0.0005～0.0150mg /mL(Ｒ2 = 0.9997) ，respectively.This method was precise
and accurate(ＲSD 0.48%～0.78%) ，the average recoveries ranged from 92.36% to 98.64%，and can be used for
the precise quantification of the three flavoinds and other flavoinds of dry plant material such as hawthorn power.
Key words:hawthorn;hyperoside;rutin;quercetin;HPLC
中图分类号:TS207.3 文献标识码:A 文 章 编 号:1002－0306(2013)09－0302－04
收稿日期:2012－11－08 * 通讯联系人
作者简介:王珍(1986－) ，女，硕士研究生，主要从事水产品贮藏加工
与质量安全控制方面的研究。
基金项目:“十二五”国家科技支撑计划(2012BAD29B06) ;辽宁省食
品安全重点实验室开放课题(LNSAKF20110XX)。
山楂(Crataegus pinnatifida Bge.)为药食同源性
药材，根据药效学研究，具有扩冠、强心、降压、降脂
作用，临床广泛用于治疗冠心病(如舒血宁)及高脂
血症［1］。近年来国内外学者针对黄酮物质的检测方
法进行了很多研究，彭全才等［2－3］研究利用反相高效
液相法同时检测包括芦丁、金丝桃苷和槲皮素在内
多种物质含量的检测方法，分离效果好，但是耗时在
一个小时之内;张永超等［4］用高效液相检测山楂中各
种黄酮的含量，单标分别检测;王光忠［5－6］等在 30min
内同时检测出芦丁和金丝桃苷的含量。据国内外研
究成果表明［7－9］，山楂果实中含量最多的黄酮属槲皮
素类，包括芦丁、金丝桃苷和槲皮素。鉴于此，笔者
研究一种耗时短、重复性好、适合槲皮素类黄酮含量
的快速检测方法。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
芦丁标准品 中国药品生物制品检定所;槲皮
素标准品 中国药品生物制品检定所;金丝桃甙标
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准品 宝鸡市辰光生物科技有限公司;高效液相色
谱检测所用试剂均为色谱纯，水为超纯水。
高效液相色谱仪 P680 美国戴安公司;电子天
平 FA2004 上海恒平科学仪器有限公司;旋转蒸发
仪 ＲE－2000 上海亚荣生化仪器厂;超纯水机
PS02－AD－DI 上海讯辉环保科技有限公司。
1.2 实验方法
1.2.1 待测样品的提取 原料的处理 山楂→去核→
50℃烘干→磨粉→过筛→成品→密封包装
黄酮的提取方法:称取山楂粉 5g，用滤纸包好，
放入索氏提取器，100mL 70% 乙醇［10］，回流提取
5～8h，直至回流液无色为止。70℃减压旋蒸浓缩，用
甲醇定容于 25mL容量瓶中，待测。
1.2.2 高效液相色谱条件 色谱柱 Develosil C30;
流动相:A相为乙腈，B 相为 0.4%磷酸水溶液，梯度
洗脱。B 相随时间变化:80% ～60.5% (0 ～ 26min) ，
60.5% ～80% (26 ～26.1min) ，80% (26 ～ 30min)流速
1mL /min;柱温 40℃，进样 20μL;检测波长:360nm。
1.2.3 标准溶液的配制与曲线绘制 称取适量各标
准品，置于 10mL的容量瓶中，分别加入色谱级甲醇，
超声波助溶并定容至刻度，分别配成以下 6 个浓度
梯度的混合标准品溶液(见表 1) ，封口保存备用。按
照上述色谱条件进行 HPLC测定，做峰面积对浓度的
标准曲线，求出直线回归方程。
1.2.4 样品分析 在相同的液相色谱条件下，分别
将标准溶液和样品溶液注入液相色谱仪中，以保留
时间定性，以试样峰面积与标准比较定量。
2 结果与分析
2.1 样品前处理条件的选择
称取山楂粉 5g，用滤纸包好，放入索氏提取器，
加入 100mL 70%乙醇，回流 5～8h，直至回流液无色
为止。70℃减压旋蒸浓缩，用甲醇定容于 25mL容量
瓶中，0.45μm膜过滤，待测。
2.2 色谱条件的选择
本研究发现芦丁、金丝桃苷和槲皮素在 360nm
处有最大吸收波长，且杂质峰值小，流动相为乙腈和
0.4%磷酸水溶液，流速为 1mL /min;柱温 40℃，进样
20μL;检测波长:360nm。山楂黄酮标准品色谱分离
图见图 1，山楂黄酮样品色谱分离图见图 2。图 1 中
芦丁、金丝桃苷和槲皮素三种物质的光谱扫描图像
于图的右侧表示出，标准品的最大吸收波长能够大
致确定该标准品，图 2 样品图中，三种目标峰的出峰
时间与标准品的出峰时间有所出入，但是借助光谱
扫描图谱能够确定样品中的三种峰确实是三种被测
物质。
2.3 标准曲线的建立
在规定的色谱条件下，将标准溶液进样 20μL
进行测定，结果表明芦丁在 0.0005 ～0.16mg(Ｒ2 =
0.9999)范围内线性关系良好，回归方程为 y =
538.31x－0.3226;金丝桃苷在 0.0016～0.05mg(Ｒ2 =
0.9996)范围内线性关系良好，回归方程为 y =
828.86x。槲皮素在 0.0005～0.015mg(Ｒ2 = 0.9997)
范围内线性关系良好，回归方程为 y = 550.85x
图 1 黄酮标准品色谱分离图
Fig.1 Standard chromatographic separation
of figure of flavonoids from hawthorn
+ 0.044。
表 1 混合标准溶液中各标准品的浓度表
Table 1 The table of the concentration
of standard substance in the mixed standard solution
1 2 3 4 5 6
芦丁
(mg /mL)
0.005 0.01 0.02 0.04 0.08 0.16
金丝桃苷
(mg /mL)
0.0016 0.0032 0.0063 0.0125 0.025 0.05
槲皮素
(mg /mL)
0.0005 0.001 0.0019 0.0037 0.0075 0.015
2.4 方法学考察
2.4.1 精密度实验 精密吸取对照品溶液，重复进
304
图 2 山楂黄酮样品色谱分离图
Fig.2 Sample chromatographic separation
of figure of flavonoids from hawthorn
样 6 次，按上述色谱条件进行测定，芦丁、金丝桃苷、
槲皮素的峰面积的 ＲSD 分别为 0.78%、0.48%、
0.69%，表明该检测方法精密度良好。结果见表 2。
表 3 重现性测定结果
Table 3 Ｒesult of reproducibility experiment
实验号 1 2 3 4 5 平均值 ＲSD(%)
芦丁(mg /mL) 1.878 1.898 1.870 1.887 1.898 1.886 1.10
金丝桃苷(mg /mL) 1.157 1.143 1.170 1.140 1.130 1.148 1.40
槲皮素(mg /mL) 0.672 0.637 0.679 0.656 0.678 0.664 1.60
2.4.2 重现性实验 取同一批号样品按供试品溶
液的制备方法平行制备 5 份，按上述色谱条件进行
测定，芦丁的平均含量为 1.886mg /g，金丝桃苷的平
均 含 量 为 1.148mg /g，槲 皮 素 的 平 均 含 量 为
0.664mg /g。ＲSD 分别为 1.1%、1.4%、1.6%，表明该
方法重复性良好。
表 2 精密度测定结果
Table 2 Ｒesult of accuracy experiment
实验号
芦丁
(mg /mL)
金丝桃苷
(mg /mL)
槲皮素
(mg /mL)
1 40.6606 19.8971 4.1554
2 40.6808 20.0205 4.1064
3 40.4759 20.0492 4.1410
4 40.9426 19.7867 4.0765
5 40.1215 19.9792 4.1100
6 40.1815 19.9620 4.1031
ＲSD(%) 0.78 0.48 0.69
2.4.3 回收率实验 称取已知各黄酮成分含量的山
楂样品 5g，准确加入芦丁、金丝桃苷和槲皮素标准
品，按照 2.1 样品液制备方法制备供试液。此测试液
中黄酮成分的理论含量分别为:芦丁 1.886mg /g、金
丝桃苷 1.148mg /g、槲皮素 0.664mg /g，重复测定 3
次，计算样品的加样回收率，实验结果见表 4。
2.5 样品含量的测定
对样品提取液检测结果表明，山楂中芦丁的含
量为 1.886mg /g，金丝桃苷的含量为 1.148mg /g，槲皮
素的含量为 0.664mg /g。
3 结论
本实验目的建立高效液相色谱法测定山楂总黄
酮提取物中芦丁、金丝桃苷和槲皮素的含量的方法。
方法采用 HPLC 法，色谱柱 DevelosilC30;流动相:A
相为乙腈，B相为 0.4%磷酸水溶液，梯度洗脱。B 相
随时间变化:80% ～60.5%(0～26min) ，60.5% ～80%
(26～26.1min) ，80%(26.1～30min)流速 1mL /min;柱
温 40℃，进样 20μL;检测波长:360nm。结果芦丁在
0.005～0.16mg(Ｒ2 = 0.9999)范围内线性关系良好，回
归方程为 y = 538.31x－0.3226，平均回收率为 98.65%
(ＲSD = 0.383%) ;金丝桃苷在 0.0016～0.05mg(Ｒ2 =
0.9996)范围内线性关系良好，回归方程为 y =
828.86x，平均回收率为 94.15%(ＲSD = 0.685%)。槲
皮素在 0.0005～0.015mg(Ｒ2 = 0.9997)范围内线性关
系良好，回归方程为 y = 550.85x + 0.0443，平均回收
率为 92.36%(ＲSD =0.306%)。
本实验对山楂黄酮的分析方法进行了改进，三
种黄酮标准品的色谱峰得到了很好的分离且出峰
时间短，三种黄酮均为槲皮素类黄酮，这为今后其
它槲皮素类黄酮物质的高效液相检测提供理论
依据。
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表 4 山楂黄酮回收率测定结果
Table 4 Ｒesult of the recovery experiment of hawthorn flavone
样品含量(mg) 对照品(mg) 实测值(mg) 回收率(%) 平均回收率(%) ＲSD(%)
芦丁
1.8980 0.364 2.258 98.900
1.8760 0.728 2.591 98.2143
1.8820 1.456 3.321 98.8324
98.6493 0.3834
金丝桃苷
1.1480 0.312 1.4420 94.2308
1.1480 0.624 1.7310 93.4295
1.1470 1.248 2.3300 94.7917
94.1506 0.6846
槲皮素
0.6640 0.164 0.8150 92.0732
0.6650 0.328 0.9690 92.6829
0.6630 0.756 1.3610 92.3280
92.3614 0.3062
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